窦房结细胞裂解液对大鼠骨髓间充质干细胞的诱导分化作用 被引量：9

1

作者 蒋伟 法宪恩 李晓召 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2011年第1期79-82,共4页

目的:观察不同浓度的窦房结细胞裂解液对骨髓间充质干细胞(MSCs)的诱导分化作用。方法:体外分离乳鼠窦房结细胞并制备窦房结细胞裂解液。密度梯度离心法分离成年SD大鼠骨髓MSCs,分别加入含1、2、4和8倍浓度的窦房结细胞裂解液培养基诱... 目的:观察不同浓度的窦房结细胞裂解液对骨髓间充质干细胞(MSCs)的诱导分化作用。方法:体外分离乳鼠窦房结细胞并制备窦房结细胞裂解液。密度梯度离心法分离成年SD大鼠骨髓MSCs,分别加入含1、2、4和8倍浓度的窦房结细胞裂解液培养基诱导培养,普通培养基培养作对照,观察细胞形态变化,并通过免疫荧光染色法检测MSCs心肌特异性肌钙蛋白I(cTnI)的表达,免疫细胞化学染色检测超极化激活的环核苷酸门控的离子通道蛋白HCN2和HCN4的表达。结果:经1、2、4和8倍浓度窦房结细胞裂解液诱导1周后的骨髓MSCs均表达cTnI和HCN2;5组间HCN2阳性细胞率比较,差异有统计学意义(F=93.113,P<0.001),且在一定浓度下随着裂解液浓度的升高而增高(P<0.05)。结论:窦房结细胞裂解液能够体外诱导骨髓MSCs分化为具有起搏功能的心肌样细胞。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 窦房结细胞裂解液 大鼠 体外 心肌特异性肌钙蛋白 hcn2 hcn4

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大鼠骨髓间充质干细胞移植梗死心肌HCN2及HCN4基因的表达 被引量：6

2

作者 王庆志 包巍 +2 位作者 周立 王志勇 张丽 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期86-90,共5页

背景:研究表明在多种心脏疾病后的心室肌中HCN2和HCN4表达异常,且与室性心律失常密切相关。骨髓间充质干细胞移植可修复受损心肌,但对梗死后心室离子通道重构的影响仍不清楚。目的:检测大鼠骨髓间充质干细胞移植入梗死心肌后左心室HCN2... 背景:研究表明在多种心脏疾病后的心室肌中HCN2和HCN4表达异常,且与室性心律失常密切相关。骨髓间充质干细胞移植可修复受损心肌,但对梗死后心室离子通道重构的影响仍不清楚。目的:检测大鼠骨髓间充质干细胞移植入梗死心肌后左心室HCN2和HCN4的表达变化。方法:取3周龄SD大鼠5只,Percoll法分离培养骨髓间充质干细胞。成年健康雄性SD大鼠30只,随机分为4组:DMEM组、细胞移植组大鼠建立急性心肌梗死模型,假手术组只穿线不结扎,正常对照组不进行任何干预。造模后4周,DMEM组在梗死边缘区和中心区分5点注入DMEM培养液,细胞移植组同法注入第3代骨髓间充质干细胞悬液200μL,细胞数5×106个。采用RT-PCR及Western-blot法检测左心室HCN2,HCN4在mRNA及蛋白水平的表达。结果与结论:正常心肌区:各组HCN2,HCN4 mRNA及蛋白的表达基本相似(P>0.05)。梗死边缘区:DMEM组HCN2,HCN4 mRNA及蛋白的表达明显多于正常对照组、假手术组(P<0.05);细胞移植组HCN2,HCN4 mRNA及蛋白的表达明显少于DMEM组(P<0.05)。梗死中心区:DMEM组HCN2,HCN4 mRNA及蛋白的表达明显少于正常对照组、假手术组(P<0.05);细胞移植组HCN2,HCN4 mRNA及蛋白的表达与DMEM组基本相似(P>0.05)。提示急性心肌梗死后梗死边缘区HCN2,HCN4基因在mRNA和蛋白水平的表达升高,骨髓间充质干细胞移植可能通过下调梗死边缘区HCN2,HCN4的表达来降低心律失常。 展开更多

关键词 心肌梗死 hcn2 hcn4 骨髓间充质干细胞 细胞移植 干细胞

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心律失常中HCN4突变与功能改变和表型的相关研究 被引量：6

3

作者 王红蕊 崔冰 +1 位作者 周建业 汪一波 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2019年第4期3015-3019,共5页

目的HCN通道(超极化激活的环核昔酸门控通道)激活起搏电流(If),促进并调节心脏节律。在人类窦房结中,HC7V4功能缺失与窦房结功能障碍相关。假设体外电生理功能参数及预测软件分值可以作为突变是否致病的参考项。方法根据检索的文献可知... 目的HCN通道(超极化激活的环核昔酸门控通道)激活起搏电流(If),促进并调节心脏节律。在人类窦房结中,HC7V4功能缺失与窦房结功能障碍相关。假设体外电生理功能参数及预测软件分值可以作为突变是否致病的参考项。方法根据检索的文献可知,对于心律失常家系的调查,确定多个特异性〃C7V4通道突变与窦性心动过缓、病态窦房结综合征、房室传导阻滞等相关。在COS-7、CHO和HEK-293细胞中,全细胞膜片钳实验表明,HCN4突变通道的表达和动力学发生变化。使用不同软件在线预测并整理突变的致病性,比较不同预测软件之间的准确率。结果通过比较电生理参数发现,半数激活电压数与电流密度可以作为HGV4突变通道功能缺失的电生理指标。对于截短突变适合使用PROVEAN进行预测,对于点突变需要结合多种预测软件的结果。结论HCN4突变与病态窦房结综合征、房室传导阻滞及房颤的发病风险密切相关。半数激活电压数与电流密度两个电生理参数与HCN4突变通道功能缺失密切相关。另外,比较不同预测软件之间的准确率,为预测HUV4突变的功能提供一定的参考。 展开更多

关键词 hcn4 IF 心律失常 全细胞膜片钳 预测软件

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1型糖尿病大鼠左心室HCN2和HCN4重构 被引量：3

4

作者 王庆志 周立 +1 位作者 王志勇 郭志坤 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2011年第3期321-324,共4页

目的探讨1型糖尿病大鼠左心室肌HCN2和HCN4的表达时空变化。方法 60只大鼠随机分为正常对照组(N组,n=20)和1型糖尿病组(T1DM组,n=40):腹腔注射链脲佐菌素制作大鼠1型糖尿病模型。90 d后,取左心室肌通过免疫荧光法检测HCN2、HCN4的定位;W... 目的探讨1型糖尿病大鼠左心室肌HCN2和HCN4的表达时空变化。方法 60只大鼠随机分为正常对照组(N组,n=20)和1型糖尿病组(T1DM组,n=40):腹腔注射链脲佐菌素制作大鼠1型糖尿病模型。90 d后,取左心室肌通过免疫荧光法检测HCN2、HCN4的定位;Western-blot、RT-PCR技术检测HCN2、HCN4在蛋白质及mRNA水平的变化。结果免疫荧光结果显示HCN2在心室肌细胞膜上呈点状或短线状不连续表达;HCN4未见表达。Western-blot、RT-PCR结果显示T1DM组大鼠HCN2、HCN4在蛋白及mRNA水平表达升高。结论 1型糖尿病大鼠左心室出现离子通道HCN2、HCN4表达升高,导致糖尿病心脏电重构,可能与糖尿病引起的室性心律失常有关。 展开更多

关键词 hcn2 hcn4 左心室 1型糖尿病 大鼠

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原代培养乳鼠窦房结细胞的形态学及表面抗原研究 被引量：5

5

作者 管思彬 马爱群 蒋文慧 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期288-291,310,共5页

目的建立乳鼠窦房结细胞(SNC)的体外分离纯化培养方法,了解SNC的形态结构特点,观察表面抗原超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因4(HCN4)和缝隙连接蛋白45(Cx45)的细胞表达特点,为细胞生物起搏的深入研究提供一定实验依据。方法取新生S... 目的建立乳鼠窦房结细胞(SNC)的体外分离纯化培养方法,了解SNC的形态结构特点,观察表面抗原超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因4(HCN4)和缝隙连接蛋白45(Cx45)的细胞表达特点,为细胞生物起搏的深入研究提供一定实验依据。方法取新生SD乳鼠的窦房结组织,胰酶逐次消化,并予差速贴壁及5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-BrdU)纯化处理进行原代窦房结细胞的培养。结果在培养的窦房结细胞中可观察到3种形态的细胞,即梭形细胞、三角形细胞和多边形细胞,其中梭形细胞所占比例最大,搏动频率最快,细胞器不发达,肌原纤维稀少,表达HCN4和Cx45;三角形细胞微量表达Cx45。结论①胰酶消化法结合差速贴壁及5-BrdU处理,是可靠的窦房结细胞纯化培养技术;②搏动频率最快、HCN4和Cx45表达阳性的梭形细胞可能系窦房结起搏细胞。 展开更多

关键词 窦房结细胞 细胞培养 hcn4

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以HCN4为靶向的参仙升脉口服液治疗窦性心动过缓机制探究 被引量：5

6

作者 姚茜 杜群群 +3 位作者 王泰一 解微微 崔英 朱彦 《中南药学》 CAS 2017年第3期264-267,共4页

目的通过观察参仙升脉口服液(SXSM)对人源超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型4(HCN4)编码的离子通道If的影响,探讨SXSM治疗缓慢性心律失常的药理机制。方法进行大鼠离体心脏灌流实验,从功能上检测SXSM对心率(HR)和冠脉压(CPP)的... 目的通过观察参仙升脉口服液(SXSM)对人源超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型4(HCN4)编码的离子通道If的影响,探讨SXSM治疗缓慢性心律失常的药理机制。方法进行大鼠离体心脏灌流实验,从功能上检测SXSM对心率(HR)和冠脉压(CPP)的影响。全自动膜片钳Ionworks方法记录SXSM对If电流的影响。结果 SXSM用药前后,HR分别为(199±19)BPM和(284±27)BPM,CPP分别为(127.7±37.9)mm Hg和(107.8±28.9)mm Hg。与空白对照相比,差异有统计学意义(P<0.05);10 m L·L-1的SXSM能够使HCN4编码的If电流增加至(126.55±35.65)%,与空白组比差异有统计学意义(P<0.01)。结论 SXSM对HCN4编码的If电流有明显提升作用,提示SXSM治疗窦性心动过缓可能是通过影响If电流发挥其药效。 展开更多

关键词 参仙升脉口服液 窦性心动过缓 药理机制 IF hcn4 全自动膜片钳

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HCN2与HCN4在风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者并发心房颤动中的协同表达 被引量：5

7

作者 刘文洲 周华富 +5 位作者 孙宇 王俊龙 赵春鹤 冯旭 杨涛 钱俊 《临床心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期198-200,共3页

目的:分析超极化激活环核苷酸调控通道基因家族-2(HCN2)基因及超极化激活环核苷酸调控通道基因家族-4(HCN4)基因在风湿性心脏病二尖瓣狭窄(风心二狭)患者并发心房颤动中的协同表达作用,探讨其并发心房颤动的机制。方法:收集43例风心二... 目的:分析超极化激活环核苷酸调控通道基因家族-2(HCN2)基因及超极化激活环核苷酸调控通道基因家族-4(HCN4)基因在风湿性心脏病二尖瓣狭窄(风心二狭)患者并发心房颤动中的协同表达作用,探讨其并发心房颤动的机制。方法:收集43例风心二狭患者右心耳组织,实验组为并发心房颤动患者(AF组),对照组为窦性心律患者(SR组)。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及荧光定量PCR(FQ-PCR)检测HCN2及HCN4的表达,分析两者的相关性。结果:RT-PCR及FQ-PCR结果均显示,AF组HCN2及HCN4表达量均高于SR组(P<0.01),AF组HCN2与HCN4表达上调率均呈现正相关(r1=0.697,P1<0.01;r2=0.659,P2<0.01)。结论:HCN2与HCN4的协同表达作用在风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者并发心房颤动的发生发展中起重要的作用。 展开更多

关键词 风湿性心脏病 二尖瓣狭窄 心房颤动 超级化激活环核苷酸调控通道基因家族-2 超级化激活环核苷酸调控通道基因家族-4 协同作用

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HCN4与心律失常相关性及其抑制剂研究进展

8

作者 李一菲 祝新宇 +2 位作者 殷婕 刘丽萍 郭毅飞 《中文科技期刊数据库（文摘版）医药卫生》 2024年第7期0001-0008,共8页

超级化激活环核苷酸门控通道4(HCN4)与心脏起搏运动有关,它可以通过控制心率来调节人体正常的生理功能。研究发现,心律失常的原因之一是HCN4通道功能丧失或获得。该综述总结了关于HCN4通道突变的一些研究,旨在进一步证实HCN4与心律失常... 超级化激活环核苷酸门控通道4(HCN4)与心脏起搏运动有关,它可以通过控制心率来调节人体正常的生理功能。研究发现,心律失常的原因之一是HCN4通道功能丧失或获得。该综述总结了关于HCN4通道突变的一些研究,旨在进一步证实HCN4与心律失常之间的相关性。此外,一种新兴的HCN4抑制剂伊伐布雷定(Ivabradine)在临床上有着广泛的研究,主要用途是稳定心绞痛或心力衰竭患者的心率,该综述也将对Ivabradine的临床研究做一阐述。 展开更多

关键词 hcn4 心律失常 IVABRADINE 抑制剂 临床研究

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心源性猝死者窦房结病理学观察和HCN4、Cx45的表达及其意义(英文) 被引量：4

9

作者 张洪涛 于建宪 +1 位作者 张七一 赵永刚 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第23期4480-4483,F0002,共5页

目的:研究心源性猝死者窦房结病理学改变和超级化激活环核苷酸门控阳离子通道基因4(HCN4)、缝隙连接蛋白45(Cx45)的表达。方法:实验组为21例心源性猝死者,对照组18例(交通事故损伤致死9例,心脏破裂4例,肝破裂3例,脾破裂2例)。经HE染色... 目的:研究心源性猝死者窦房结病理学改变和超级化激活环核苷酸门控阳离子通道基因4(HCN4)、缝隙连接蛋白45(Cx45)的表达。方法:实验组为21例心源性猝死者,对照组18例(交通事故损伤致死9例,心脏破裂4例,肝破裂3例,脾破裂2例)。经HE染色观察窦房结的形态学变化;应用免疫组化检测HCN4和Cx45在窦房结的表达。结果:心源性猝死组HCN4的表达高于对照组(P<0.05),心源性猝死者窦房结Cx45的表达明显低于对照组(P<0.01)。结论:窦房结病理改变是引起心源性猝死的重要原因之一,HCN4表达的增高和Cx45表达的减少与心源性猝死的发生有一定的相关性。 展开更多

关键词 心源性猝死 窦房结 hcn4 CX45 免疫组织组织化学

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CREB激活促进神经痛大鼠脊髓背角HCN4转录的实验研究 被引量：1

10

作者 王蓉 万琪 +3 位作者 谢晔 徐陶 曾俊伟 刘晓红 《遵义医科大学学报》 2023年第1期7-13,共7页

目的探讨CREB激活促进神经痛大鼠脊髓背角HCN4转录的信号机制。方法雄性成年SD大鼠随机分为6组:Sham组,Sham+Vehicle组,CCI+Vehicle组,CCI+H-89(PKA抑制剂),CCI+KN-93(CaMKⅡ抑制剂),CCI+Naphthol AS-E(CREB抑制剂)。各组大鼠在CCI术后... 目的探讨CREB激活促进神经痛大鼠脊髓背角HCN4转录的信号机制。方法雄性成年SD大鼠随机分为6组:Sham组,Sham+Vehicle组,CCI+Vehicle组,CCI+H-89(PKA抑制剂),CCI+KN-93(CaMKⅡ抑制剂),CCI+Naphthol AS-E(CREB抑制剂)。各组大鼠在CCI术后分别注射0.005%DMSO、H-89、KN-93或Naphthol AS-E,在CCI术前,术后1、3、5、7 d检测各组大鼠给药1 h后的机械刺激缩足反射阈值(MWT);实时荧光定量PCR检测HCN4 mRNA表达;Western blot检测脊髓(L_(4)~L_(6))背角HCN4、PKA、p-PKA、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、CREB和p-CREB表达;EMSA检测CREB与HCN4启动子的DNA结合活性。结果与Sham组相比,CCI+Vehicle组在1、3、5、7 d的MWT显著降低(P<0.05),脊髓背角HCN4 mRNA表达明显上调(P<0.05),HCN4、PKA、p-PKA、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、CREB和p-CREB蛋白表达明显上调(P<0.05);与CCI+Vehicle组相比,H-89、KN-93或Naphthol AS-E抑制剂组MWT显著上调(P<0.05),HCN4、PKA、p-PKA、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、CREB和p-CREB蛋白表达显著下降(P<0.05),HCN4 mRNA表达显著减少(P<0.05);与Sham组相比,CCI+Vehicle组背角CREB与HCN4启动子的DNA结合活性升高,但H-89、KN-93或Naphthol AS-E处理后CREB与HCN4启动子的DNA结合活性减弱。结论神经痛大鼠脊髓背角PKA和CaMKII激活,导致转录因子CREB与HCN4基因启动子结合,促进HCN4转录和蛋白表达。 展开更多

关键词 脊髓背角 环磷腺苷效应元件结合蛋白 疼痛 超极化激活环核苷酸门控的阳离子通道4 电泳迁移率实验

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窦房结细胞起搏基因HCN4的研究进展 被引量：3

11

作者 王妮娜 刘如秀 《医学综述》 2011年第10期1441-1444,共4页

HCN即超级化激活的环核苷酸门控阳离子通道,其激活后产生的If/Ih离子流是窦房结起搏细胞动作电位正常形成的分子基础。随着对窦房结细胞起搏机制和HCN基因家族研究的不断深入,人们对HCN亚型HCN4的结构、分布、特性已有了较深入的了解。... HCN即超级化激活的环核苷酸门控阳离子通道,其激活后产生的If/Ih离子流是窦房结起搏细胞动作电位正常形成的分子基础。随着对窦房结细胞起搏机制和HCN基因家族研究的不断深入,人们对HCN亚型HCN4的结构、分布、特性已有了较深入的了解。近年来有较多研究表明,人窦房结起搏基因HCN4突变与病态窦房结综合征密切相关。现就窦房结细胞起搏基因HCN4的特性及其与窦房结功能之间的关系作进一步研究和探讨。 展开更多

关键词 hcn4 超级化激活 离子通道 病态窦房结综合征 If/Ih离子流

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HCN4在缺血诱导乳兔窦房结细胞损伤中的作用 被引量：4

12

作者 滕林 周飞 +4 位作者 曹春雨 贺超 李松 丁家望 杨俊 《临床心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1218-1222,共5页

目的:观察乳兔窦房结细胞在缺血条件下HCN4的表达变化及其对窦房结功能及细胞凋亡的影响。方法:将原代培养的乳兔窦房结细胞分为正常对照组和模拟单纯缺血组(缺血1h、3h、6h);采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中HCN1-4的表达;采用细... 目的:观察乳兔窦房结细胞在缺血条件下HCN4的表达变化及其对窦房结功能及细胞凋亡的影响。方法:将原代培养的乳兔窦房结细胞分为正常对照组和模拟单纯缺血组(缺血1h、3h、6h);采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中HCN1-4的表达;采用细胞免疫荧光方法检测窦房结细胞内HCN4蛋白的亚细胞分布;采用RT-qPCR检测Bax和Bcl-2的表达;采用全细胞膜片钳记录单个窦房结细胞的If电流,并运用HCN通道抑制剂伊伐布雷定观察抑制HCN4对乳兔窦房结细胞电活动的影响。结果:原代乳兔窦房结细胞主要表达HCN4,少量表达HCN1和HCN2,HCN3 mRNA未检出,Western blot仅检测出HCN4,未检测出HCN1、HCN2、HCN3的蛋白水平,HCN4蛋白广泛分布于细胞质内;膜片钳可记录到单一窦房结细胞自发起搏电流,伊伐布雷定可通过特异性的降低窦房结舒张期去极化速率来延缓自发活动,伊伐布雷定可持续抑制窦房结细胞的If电流产生,使If明显减小;与正常对照组相比,随着缺血时间的延长(1h、3h、6h),HCN4mRNA表达及蛋白水平逐渐减少,同时Bax mRNA表达及蛋白水平明显上调,Bcl-2mRNA表达及蛋白水平明显下降;急性缺血处理显著抑制了窦房结细胞的电活动,与正常对照组相比,随着时间的延长,窦房结细胞的起搏电流If也逐渐减少。结论:HCN4蛋白参与调控乳兔窦房结细胞的起搏功能。急性缺血可引起窦房结细胞凋亡,导致HCN4的表达下降,使得通道If电流密度减少导致窦房结功能障碍。 展开更多

关键词 心肌缺血 hcn4 窦房结细胞 细胞凋亡

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质粒shRNA体内干扰Klotho基因对窦房结通道基因表达的影响

13

作者 蔡盈盈 汪汉 +2 位作者 田鹏 房晨鹂 邓珏琳 《中华全科医学》 2015年第6期887-889,913,共4页

目的通过质粒shRNA体内干扰,研究Klotho基因与窦房结起搏通道相关基因HCN4及HCN2之间的关系,为病窦综合征的研究提供新思路。方法取C57BL/6J小鼠25只,分为5组,每组5只:未处理组、质粒shRNA 12 h组、质粒shRNA 24 h组、生理盐水12 h组、... 目的通过质粒shRNA体内干扰,研究Klotho基因与窦房结起搏通道相关基因HCN4及HCN2之间的关系,为病窦综合征的研究提供新思路。方法取C57BL/6J小鼠25只,分为5组,每组5只:未处理组、质粒shRNA 12 h组、质粒shRNA 24 h组、生理盐水12 h组、生理盐水24 h组。质粒shRNA组为尾静脉注射质粒shRNA50μl(1μg/μl),生理盐水组为尾静脉注射生理盐水50μl,未处理组不予任何处理。分别于注射12 h及24 h后取窦房结周围组织,行Western blotting检测各组小鼠的Klotho、HCN2、HCN4基因的蛋白表达水平。结果质粒shRNA 12 h组(0.24±0.09)的Klotho蛋白水平表达量较低,与未处理组(3.19±0.42)及生理盐水12 h组(2.34±0.41)Klotho蛋白表达量相比,差异均存在统计学意义(P值均为<0.001)。质粒shRNA 12 h组(1.55±0.89)的HCN4蛋白水平表达量与未处理组(2.56±0.54)及生理盐水12 h组(3.05±0.46)HCN4蛋白表达量相比差异均存在统计学意义(P值分别为0.015及0.001)。结论小鼠Klotho基因通过其蛋白表达可能会干扰窦房结起搏基因的蛋白表达。 展开更多

关键词 SHRNA KLOTHO基因 窦房结 hcn4 hcn2

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心房颤动大鼠心房肌HCN2、HCN4表达及青山健心片的干预作用 被引量：2

14

作者 焦华琛 郑书敏 +3 位作者 李运伦 高金超 张辛欣 钟霞 《中西医结合心脑血管病杂志》 2020年第14期2230-2233,共4页

目的分析心房肌超极化激活环核苷酸门控阳离子通道2(HCN2)及超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4(HCN4)基因在心房颤动大鼠心肌中的表达,观察青山健心片对HCN2、HCN4 mRNA及蛋白表达的干预作用,揭示其治疗心房颤动的机制。方法取阵发性... 目的分析心房肌超极化激活环核苷酸门控阳离子通道2(HCN2)及超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4(HCN4)基因在心房颤动大鼠心肌中的表达,观察青山健心片对HCN2、HCN4 mRNA及蛋白表达的干预作用,揭示其治疗心房颤动的机制。方法取阵发性心房颤动大鼠心房组织,采用蛋白免疫印迹法(Western-Blot)及荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测HCN2、HCN4的表达,分析青山健心片的干预作用。结果阵发性心房颤动大鼠HCN2、HCN4 mRNA及蛋白表达量均高于对照组,青山健心片及美托洛尔均能降低HCN2、HCN4 mRNA及蛋白表达。结论青山健心片通过下调HCN2、HCN4表达,影响超极化激活阳离子电流(If),从而减少心房颤动发作。 展开更多

关键词 心房颤动 超极化激活环核苷酸门控阳离子通道2 超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4 青山健心片 蛋白表达

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螺内酯对大鼠心肌梗死后梗死周边区超极化活化环核苷酸门控通道表达的影响 被引量：2

15

作者 余华东 《四川医学》 CAS 2017年第7期749-752,共4页

目的了解大鼠急性心肌梗死后梗死周边区心肌中HCN2、HCN4的mRNA和蛋白表达变化,探讨螺内酯对心肌梗死后梗死周边区心肌中HCN2、HCN4表达的影响。方法通过开胸结扎冠状动脉左前降支的方法成功建立大鼠心肌梗死模型,心梗后24h存活的12只... 目的了解大鼠急性心肌梗死后梗死周边区心肌中HCN2、HCN4的mRNA和蛋白表达变化,探讨螺内酯对心肌梗死后梗死周边区心肌中HCN2、HCN4表达的影响。方法通过开胸结扎冠状动脉左前降支的方法成功建立大鼠心肌梗死模型,心梗后24h存活的12只大鼠随机分为心梗组及螺内酯组,6只假手术组的大鼠仅穿线通过左冠状动脉前降支而不结扎动脉。心肌梗死后一周取心梗大鼠的梗死周边区心肌组织,而假手术组取相对应的心肌组织,用荧光定量PCR方法检测HCN2、HCN4的mRNA水平,用Western blot方法检测HCN2、HCN4的蛋白水平。结果心梗组和螺内酯组较假手术组HCN2、HCN4的mRNA和蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05),而螺内酯组较心梗组HCN2、HCN4的mRNA和蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论急性心肌梗死后1周梗死周边区心肌组织中HCN2和HCN4通道蛋白的表达明显升高,而螺内酯能明显减少急性心肌梗死后梗死周边区心肌组织中HCN2和HCN4通道蛋白的表达。 展开更多

关键词 心肌梗死 hcn2 hcn4 螺内酯

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PDK1-Akt信号通路干预对心肌细胞HCN4离子通道的影响 被引量：2

16

作者 韩钟霖 吴翔 +4 位作者 刘雪华 陈诤 白剑 陈鑫 徐伟 《中华心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期954-961,共8页

目的探讨3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1-蛋白激酶B(PDK1-Akt)信号通路干预对心肌细胞超极化激活环核苷酸门控离子通道4(HCN4)转录、表达及功能的影响。方法使用酶解法从健康雄性野生型C57小鼠和心脏特异性敲除PDK1小鼠获得心房肌细胞,分别... 目的探讨3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1-蛋白激酶B(PDK1-Akt)信号通路干预对心肌细胞超极化激活环核苷酸门控离子通道4(HCN4)转录、表达及功能的影响。方法使用酶解法从健康雄性野生型C57小鼠和心脏特异性敲除PDK1小鼠获得心房肌细胞,分别为空白对照组和PDK1-KO组;另外,对急性分离自C57小鼠的心房肌细胞进行培养,将其分为药物对照组[予二甲基亚砜(DMSO)干预)]、PDK1敲低组[予1μg/ml PDK1的短发夹状RNA(shRNA)干扰质粒干预]、SC79组[予Akt激动剂SC79(8μmol/ml)干预]、GSK2334470组[予PDK1抑制剂GSK2334479(10 nmol/ml)干预]和PDK1敲低+SC79组(予8μmol/ml SC79和1μg/ml PDK1的shRNA干扰质粒干预)。为进一步减少药物脱靶的可能,故运用PDK1的shRNA质粒转染培养的心肌细胞,并在此基础上加用SC79干预。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测相应组心房肌细胞PDK1及HCN4的mRNA表达水平,Western blot检测PDK1、Akt及HCN4蛋白表达水平,全细胞膜片钳检测HCN的电流密度,免疫荧光技术检测HCN4蛋白表达情况。结果(1)PDK1-KO组的HCN4的mRNA(1.46±0.03比0.99±0.01,P<0.001)及蛋白(1.14±0.02比1.00±0.06,P=0.017)表达水平高于空白对照组。全细胞膜片钳结果显示,PDK1-KO组的HCN电流密度大于空白对照组[(-17.47±2.00)pA/pF比(-12.15±2.25)pA/pF,P=0.038]。(2)通过比较PDK1敲低组、SC79组和药物对照组细胞,对PDK1 shRNA及Akt特异性激动剂SC79进行功能验证,结果显示PDK1敲低组细胞的PDK1 mRNA及蛋白表达水平低于药物对照组,SC79组细胞的磷酸化-Akt(Thr 308)蛋白表达水平高于药物对照组。(3)GSK2334470组细胞的HCN4 mRNA(3.61±0.46比1.00±0.08,P<0.001)及蛋白(2.33±0.11比1.00±0.05,P<0.001)表达水平高于药物对照组。(4)PDK1敲低组细胞的HCN4 mRNA表达水平高于药物对照组(1.76±0.11比1.00±0.06,P<0.001)及PDK1敲低+SC79组(1.76±0.11比1.33±0.07,P=0.003),PDK1敲低+SC79组的HCN4 mRNA表达水平亦高于药物对照组(1.3 展开更多

关键词 肌细胞 心脏 hcn4 PDK1 AKT

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风湿性心脏病心房颤动HCN4基因mRNA表达的实验研究 被引量：3

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作者 付勇 刘慧 +4 位作者 于风旭 廖斌 毛亮 邓明彬 李新 《临床心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期871-873,共3页

目的:通过对风湿性心脏病心房颤动(房颤)患者右心耳组织HCN4基因mRNA表达的检测,探讨其与房颤的关系。方法:将28例风湿性心脏病患者,根据是否存在房颤分为房颤组(18例)和窦性心律组(10例)。术前对所有患者行心脏彩色多普勒超声检测,术... 目的:通过对风湿性心脏病心房颤动(房颤)患者右心耳组织HCN4基因mRNA表达的检测,探讨其与房颤的关系。方法:将28例风湿性心脏病患者,根据是否存在房颤分为房颤组(18例)和窦性心律组(10例)。术前对所有患者行心脏彩色多普勒超声检测,术中取右心耳组织,应用RT-PCR技术检测HCN4 mRNA表达,并进行分析。结果:房颤组和窦性心律组左房径[(61.89±21.64)mm:(45.10±10.48)mm]、HCN4 mRNA表达水平[(0.775 4±0.685 6):(0.258 4±0.215 7)]均差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:风湿性心脏病房颤的发生中,HCN4 mRNA表达异常增高,左房径增大。 展开更多

关键词 风湿性心脏病 窦性心律 心房颤动 hcn4

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携带人HCN4与Tbx3基因慢病毒的构建 被引量：1

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作者 董皓 王丽君 +1 位作者 程晓曙 李萍 《临床心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期248-253,共6页

目的:构建携带人环核苷酸门控离子通道基因(HCN4)、发育调控相关转录因子基因(Tbx3)及增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的慢病毒载体,获得可供转染的滴度,为进一步研究Tbx3对HCN4异位表达及细胞起搏功能的影响提供高效的慢病毒转基因平台... 目的:构建携带人环核苷酸门控离子通道基因(HCN4)、发育调控相关转录因子基因(Tbx3)及增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的慢病毒载体,获得可供转染的滴度,为进一步研究Tbx3对HCN4异位表达及细胞起搏功能的影响提供高效的慢病毒转基因平台。方法:应用聚合酶链反应(PCR)方法,扩增HCN4及Tbx3基因,利用Gateway技术分别构建出HCN4-Tbx3-EGFP、HCN4-EGFP、Tbx3-EGFP、EGFP 4种慢病毒表达载体。经PCR及基因测序鉴定后,脂质体法转染293FT包装细胞,产生相应慢病毒,测定其滴度,荧光显微镜下观察EGFP的表达。结果:PCR和测序证实,构建出携带有HCN4-Tbx3-EGFP、HCN4-EGFP、Tbx3-EGFP及EGFP基因的慢病毒表达载体。分别转染293FT细胞后,荧光显微镜下可见大量绿色荧光,病毒滴度测定结果分别为4.7×107TU/ml、5.2×107TU/ml、4.5×107TU/ml、6.65×107TU/ml。结论:成功构建同时携带HCN4、Tbx3基因及EGFP基因的慢病毒载体并包装出具高效感染力的慢病毒颗粒,为通过HCN4联合Tbx3基因长期稳定的表达来构建窦房结细胞的实验研究提供高效稳定的转基因技术平台。 展开更多

关键词 hcn4 Tbx3 慢病毒

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pHCN4-DsRed Express2慢病毒载体的构建和鉴定 被引量：1

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作者 李颖 高飞 +1 位作者 蔡军 秦选光 《中国心血管病研究》 CAS 2010年第8期593-596,共4页

目的构建超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型4启动子（HCN4）重组慢病毒载体并进行鉴定。方法采用Gateway克隆技术，通过attBxattP反应，构建穿梭质粒pup—HCN4，而后将pLV／Des2-Puro、pUP—HCN4、pDown—DsRed Express2三个质... 目的构建超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型4启动子（HCN4）重组慢病毒载体并进行鉴定。方法采用Gateway克隆技术，通过attBxattP反应，构建穿梭质粒pup—HCN4，而后将pLV／Des2-Puro、pUP—HCN4、pDown—DsRed Express2三个质粒通过attLxattR反应，构建成pLV／EXPN2-Puro-HCN4-DsRed Express2质粒，再转染感受态细胞stb13，孵育扩增，离心纯化。采用PCR方法对重组慢病毒载体进行鉴定。结果基于位点特异性重组原理，应用Gateway克隆技术构建了多基因共表达的pHCN4-DsRed Express2慢病毒载体，通过提取DNA测序，证明该序列与理论值一致。结论应用Gateway克隆技术成功构建了pHCN4-DsRed Express2慢病毒载体。 展开更多

关键词 hcn4 慢病毒载体 Gateway克隆技术

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HCN4表达变化对兔窦房结缺血再灌注时电生理功能的影响 被引量：1

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作者 滕林 曹春雨 +3 位作者 周飞 杨伟 李松 丁家望 《巴楚医学》 2020年第4期18-23,共6页

目的:观察缺血再灌注条件下兔窦房结组织HCN4的表达变化,探讨其对窦房结电生理功能的影响。方法:将成年新西兰兔随机分为对照组、缺血30 min、60 min、120 min组及缺血再灌注60 min、120 min、240 min组,每组10只。采用结扎及放松右冠... 目的:观察缺血再灌注条件下兔窦房结组织HCN4的表达变化,探讨其对窦房结电生理功能的影响。方法:将成年新西兰兔随机分为对照组、缺血30 min、60 min、120 min组及缺血再灌注60 min、120 min、240 min组,每组10只。采用结扎及放松右冠状动脉起始部制备兔窦房结缺血再灌注模型,各组同步记录体表心电图及心腔内电图,观察AA、AH及HV间期变化及心律失常发生情况,采用RT-PCR和Western blot法检测窦房结组织HCN4 mRNA和蛋白表达。结果:对照组均无心律失常发生,窦房结组织HCN4 mRNA及蛋白水平较高。与对照组相比,缺血可显著降低窦房结组织中HCN4 mRNA及蛋白水平,且随着缺血时间的延长逐渐降低;再灌注后,随着再灌注时间的延长,HCN4 mRNA及蛋白水平逐渐升高。49只兔缺血后心腔内电图出现AA及AH间期延长,且随缺血时间延长,心律失常发生率及死亡率明显增加;再灌注60 min、120 min及240 min后AA及AH间期均有不同程度的缩短。结论:HCN4表达降低可能是急性心肌缺血时窦房结电生理功能障碍的重要原因,而早期再灌注可诱导HCN4表达上调,有利于窦房结功能恢复,并减少心律失常的发生。 展开更多

关键词 心肌缺血再灌注 hcn4 窦房结 心内电生理 心律失常

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