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质粒shRNA体内干扰Klotho基因对窦房结通道基因的影响 被引量：2
1
作者 蔡盈盈 汪汉 +5 位作者 侯言彬 房晨鹂 田鹏 王贵华 李璐 邓珏琳 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第3期588-591,共4页
通过质粒shRNA体内干扰,研究Klotho基因与窦房结起搏通道相关基因HCN4及HCN2之间的关系,为病窦综合征的研究提供新思路。取C57BL/6J小鼠20只,分为4组,每组5只,分别为:质粒shRNA 24h组、质粒shRNA 12h组、生理盐水24h组、生理盐水12h组... 通过质粒shRNA体内干扰,研究Klotho基因与窦房结起搏通道相关基因HCN4及HCN2之间的关系,为病窦综合征的研究提供新思路。取C57BL/6J小鼠20只,分为4组,每组5只,分别为:质粒shRNA 24h组、质粒shRNA 12h组、生理盐水24h组、生理盐水12h组。质粒shRNA组经尾静脉注射质粒shRNA 50μL(1μg质粒/μL),生理盐水组经尾静脉注射生理盐水50μL。分别于注射12h及24h后取窦房结周围组织,行RT-PCR检测各组小鼠的Klotho、HCN2、HCN4基因的mRNA水平。RT-PCR结果显示:与生理盐水12h组比较,shRNA 12h组的klotho、HCN4和HCN2的mRNA表达量明显降低,均有统计学差异(P<0.05)。以上结果提示,小鼠Klotho基因和窦房结起搏基因可能存在一定关系。 展开更多
关键词 SHRNA KLOTHO基因 窦房结 衰老 hcn4基因 hcn2基因
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人HCN2真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达 被引量：2
2
作者 左广锋 陈绍良 +1 位作者 徐艳 肖杭 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第6期1068-1071,共4页
目的:构建含有人HCN2基因的真核表达载体,并观察在人胚胎肾细胞(HEK293)中的表达情况。方法:对人HCN2基因全序列进行分析,进行oligo设计,通过PCR,扩增HCN2全长cDNA,通过双酶切(XhoI和BamHI)装入真核表达载体pIRES2-EGFP中,脂质体法转染... 目的:构建含有人HCN2基因的真核表达载体,并观察在人胚胎肾细胞(HEK293)中的表达情况。方法:对人HCN2基因全序列进行分析,进行oligo设计,通过PCR,扩增HCN2全长cDNA,通过双酶切(XhoI和BamHI)装入真核表达载体pIRES2-EGFP中,脂质体法转染入HEK293细胞中,利用真核表达载体中带有绿色荧光蛋白GFP报告基因,对转染效率进行监测,采用反转录-聚合酶链反应检测HCN2 mRNA表达,全细胞膜片钳技术检测HCN2通道电流。结果:测序及酶切结果表明HCN2基因正确,荧光显微镜下,转染细胞观察到绿色荧光,反转录-聚合酶链反应检测到HCN2 mRNA表达,膜片钳检测到hHCN2基因编码的通道电流。结论:成功地构建了HCN2真核表达载体并进行了起搏通道HCN2基因的异源性表达。 展开更多
关键词 hcn4基因 真核表达载体 转染 异源性表达
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单纯性家族性热性惊厥与HCN2基因的相关研究 被引量：1
3
作者 马祎楠 陈志越 +6 位作者 邹丽萍 张英 钮淑兰 许玉凤 裴佩 卜定方 戚豫 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期663-666,共4页
目的研究HCN2基因是否为中国儿童单纯性家族性热性惊厥(FC)的易感基因。方法选择60例北方汉族单纯性家族性热性惊厥患儿,对位于染色体19p13.3区域的HCN2基因的外显子进行PCR扩增,PCR产物纯化后进行测序用以寻找可能的突变。对发现突变... 目的研究HCN2基因是否为中国儿童单纯性家族性热性惊厥(FC)的易感基因。方法选择60例北方汉族单纯性家族性热性惊厥患儿,对位于染色体19p13.3区域的HCN2基因的外显子进行PCR扩增,PCR产物纯化后进行测序用以寻找可能的突变。对发现突变的区域,加入101名来自同一地区的正常人作对照。结果3～8外显子均没有发现突变,找到14个单核苷酸多态性位点(SNP),其中8个还没有报道(714T→C、723T→C、858T→C、915C→T、921C→T、963C→T、IVS4+6C→T、IVS5157G→A)。选择9个SNP作为遗传标记,进行相关分析。各SNP的等位基因频率和基因型频率在FC组(60例)和对照组(101名)之间差异无统计学意义。结论HCN2基因可能不是单纯性家族性热性惊厥的易感基因。 展开更多
关键词 单纯性 热性惊厥 家族性 易感基因 突变 SNP 相关研究 外显子 PCR产物 北方汉族
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体外HCN2转染脂肪干细胞构建起搏细胞的实验研究
4
作者 段炼 宋智钢 +2 位作者 龚德军 黄柳明 徐志云 《现代生物医学进展》 CAS 2012年第33期6408-6412,6483,共6页
目的:体外HCN2基因转染人脂肪干细胞(Adipose-derived stem cells,ADSCs)构建起搏细胞。方法:取人脂肪组织分离得到脂肪干细胞并进行体外培养,Ad.HCN2转染后检测HCN2表达情况,检测转染后ADSCs自主产生起搏电流(pacemaker current,If)的... 目的:体外HCN2基因转染人脂肪干细胞(Adipose-derived stem cells,ADSCs)构建起搏细胞。方法:取人脂肪组织分离得到脂肪干细胞并进行体外培养,Ad.HCN2转染后检测HCN2表达情况,检测转染后ADSCs自主产生起搏电流(pacemaker current,If)的能力。结果:RT-PCR结果显示实验组HCN2基因表达。Western-blot可检测到实验组HCN2蛋白表达。流式细胞仪检测可见实验组HCN2阳性比例明显升高。免疫荧光检测可见转染的ADSCs发出红色荧光。膜片钳可记录到起搏电流,其激活电位约为-60 mV,完全激活电位140mV,呈电压依赖性。结论:ADSCs被Ad.HCN2转染后可表达目的基因HCN2,并自主产生起搏电流。 展开更多
关键词 脂肪干细胞 hcn2基因 基因转染 起搏细胞
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腺病毒介导HCN2基因转染对人脂肪干细胞生物学特性的影响 被引量：1
5
作者 段炼 宋智钢 +2 位作者 龚德军 黄柳明 徐志云 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期431-435,共5页
目的：研究腺病毒介导的HCN2基因（Ad．HCN2）转染对人脂肪干细胞（ADSCs）生物学特性的影响。方法：取人脂肪组织分离得到脂肪干细胞并进行体外培养，腺病毒绿色荧光蛋白转染测定最佳感染倍（MOI）值，Ad．HCN2转染后测量HCN2表达情况... 目的：研究腺病毒介导的HCN2基因（Ad．HCN2）转染对人脂肪干细胞（ADSCs）生物学特性的影响。方法：取人脂肪组织分离得到脂肪干细胞并进行体外培养，腺病毒绿色荧光蛋白转染测定最佳感染倍（MOI）值，Ad．HCN2转染后测量HCN2表达情况，并检测转染后细胞生物学特性的变化。结果：MOI=50为最佳MOI，Ad．HCN2转染后，ADSCs可表达HCN2，且其细胞活力、细胞周期、生长曲线、表面标志及诱导分化能力无明显变化。结论：ADSCs被Ad．HCN2转染后可表达目的基因HCN2，并可保持其生物学特性。 展开更多
关键词 脂肪干细胞 hcn2基因 基因转染 生物学特性
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