目的运用构建好的重组慢病毒载体系统PLVX-MIR21-RNAi分别感染高、低侵袭性肝癌细胞HCCLM3和HepG2,并观察miR-21下调对其生长增殖和侵袭转移特性的影响及其分子机制研究。方法采用qPCR、CCK-8、Transwel肿瘤侵袭和Westermn blot 实验分...目的运用构建好的重组慢病毒载体系统PLVX-MIR21-RNAi分别感染高、低侵袭性肝癌细胞HCCLM3和HepG2,并观察miR-21下调对其生长增殖和侵袭转移特性的影响及其分子机制研究。方法采用qPCR、CCK-8、Transwel肿瘤侵袭和Westermn blot 实验分别检测干扰miR-21表达对HCCLM3和HepG2细胞miR-21表达量、增殖抑制率、侵袭转移特性和PTEN、PDCD4和TPM1蛋白的表达量影响。结果HCCLM3转染组miR-21的表达量低于HepG2转染组(P<0.05);24 h 36 h、48 h时,HCCLM3未处理组增殖能力均明显高于HepG2未处理组(P<0.01),而HCCLM3转染组增殖抑制率均高于HepG2转染组(P<0.05);HCCLM3转染组细胞侵袭抑制率高于HepG2转染组(P<0.05);HCCLM3未处理组PTEN、PDCD4和TPM1蛋白表达低于HepG2未处理组(P<0.01)。此外,下调miR-21后,HCCLM3转染组PTEN PDCD4和TPM1蛋白表达水平均高于HepG2转染组(P <0.01)。结论miR-21 下调能有效抑制HCCLM3和HepG2细胞生长增殖和侵袭转移能力,且与其靶向调控PDCD4、PTEN、TPM1基因有关。展开更多
文摘目的:探讨靶向血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)的超声造影在裸小鼠HCCLM3肝癌移植瘤模型中早期评价贝伐单抗抑制肿瘤血管生成的可行性。方法:采用"生物素-亲和素"桥接法制备携VEGFR2单克隆抗体的靶向超声微泡,建立裸小鼠HCCLM3肝癌皮下移植瘤模型。将荷瘤鼠随机分为治疗组(n=6,贝伐单抗10 mg/kg每周2次,治疗1周)和对照组(n=6,等体积0.9%NaCl溶液给药)。治疗前(第0天)、治疗第2天、治疗第7天行超声造影检查,绘制时间-强度曲线(time-intensity curve,TIC),比较相关定量参数的组间差异及组内各参数的变化,同时采用CD31免疫组织化学染色比较2组间微血管密度(microvessel density,MVD)。结果:治疗第7天,治疗组达峰时间(time to peak,TTP)、平均渡越时间(mean transit time,MTT)较治疗前缩短,曲线下面积(area under curve,AUC)较治疗前减小,差异均有统计学意义(P<0.05);组间比较发现,治疗第7天治疗组流入相曲线下面积(area under wash-in curve,WiAUC)低于对照组[(36.4±11.6) dB·s vs (61.9±12.4) dB·s,P=0.010];免疫组织化学结果显示,治疗组MVD值低于对照组(8.3±2.1 vs 18.4±7.6,P=0.039)。结论:靶向VEGFR2的超声造影可用于早期无创监测裸小鼠HCCLM3肝癌皮下移植瘤模型中抗血管生成治疗反应,TTP、MTT、AUC及WiAUC等定量参数是有效的参考指标。
文摘目的运用构建好的重组慢病毒载体系统PLVX-MIR21-RNAi分别感染高、低侵袭性肝癌细胞HCCLM3和HepG2,并观察miR-21下调对其生长增殖和侵袭转移特性的影响及其分子机制研究。方法采用qPCR、CCK-8、Transwel肿瘤侵袭和Westermn blot 实验分别检测干扰miR-21表达对HCCLM3和HepG2细胞miR-21表达量、增殖抑制率、侵袭转移特性和PTEN、PDCD4和TPM1蛋白的表达量影响。结果HCCLM3转染组miR-21的表达量低于HepG2转染组(P<0.05);24 h 36 h、48 h时,HCCLM3未处理组增殖能力均明显高于HepG2未处理组(P<0.01),而HCCLM3转染组增殖抑制率均高于HepG2转染组(P<0.05);HCCLM3转染组细胞侵袭抑制率高于HepG2转染组(P<0.05);HCCLM3未处理组PTEN、PDCD4和TPM1蛋白表达低于HepG2未处理组(P<0.01)。此外,下调miR-21后,HCCLM3转染组PTEN PDCD4和TPM1蛋白表达水平均高于HepG2转染组(P <0.01)。结论miR-21 下调能有效抑制HCCLM3和HepG2细胞生长增殖和侵袭转移能力,且与其靶向调控PDCD4、PTEN、TPM1基因有关。
