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题名HBoV VP1-U蛋白抗原的表达纯化
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作者
漆正宇
龚英浩
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机构
北京大学深圳医院中心实验室
病毒基因工程国家重点实验室
贵州大学生命科学院
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出处
《中国实验诊断学》
2014年第8期1226-1229,共4页
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文摘
目的人博卡病毒(HBoV)是近几年发现的一种导致人支气管炎的病原体,本研究旨在表达纯化其VP1衣壳蛋白独有区(VP1-U)抗原,为免疫学诊断治疗奠定基础。方法优化HBoV VP1-U DNA密码子,以适应大肠杆菌原核表达密码子亲嗜性。将密码子优化改造的DNA序列克隆到pET30a(+)原核表达载体,C末端融合表达组氨酸亲和纯化标签。LB培养基增菌,IPTG诱导表达。采用自行设计的纯化缓冲液体系,镍株亲和纯化,超滤浓缩。结果VP1-U蛋白表达效率约为50%,纯化活性蛋白浓度为3.3mg/ml。结论经过密码子优化,合理设计工艺流程,原核表达系统可以高效表达纯化VP1-U活性蛋白抗原。
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关键词
hbov
vp1-u
抗原
纯化
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Keywords
hbov vp1-u
antigen
puri cation
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分类号
R392.1
[医药卫生—免疫学]
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题名人博卡病毒2型VP1U突变对sPLA2活性的影响
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作者
庄著伦
杨静
闫坤龙
程卫霞
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机构
南京医科大学附属儿童医院
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出处
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第4期501-504,共4页
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基金
江苏省自然科学基金青年基金(项目号:BK2012069)
题目:HBOV2VP1独有区氨基酸突变对PLA2活性及细胞因子分泌的影响研究
+1 种基金
国家自然科学基金青年基金(项目号:81300296)
题目:HBoV2VP1U突变对PLA2活性及免疫反应的影响~~
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文摘
对HBoV2 VP1U蛋白进行原核表达并检测其sPLA_2活性,对其关键氨基酸进行突变,检测突变对sPLA_2活性的影响。构建重组质粒pMD18T-VP1U,选取VP1U蛋白4个关键氨基酸为突变点,分别进行原核表达,蛋白纯化后用sPLA_2试剂盒检测sPLA_2活性,对比突变前后VP1U蛋白sPLA_2活性有无变化。野生型HBoV2VP1U蛋白的sPLA_2活性为0.243μmol/min/mL,具有sPLA_2活性;突变体L19P、P21R、D42H及Y45N蛋白的sPLA_2活性分别为野生型蛋白的1.2%、1.2%、0.82%、0.41%。野生型HBoV2VP1U蛋白具有sPLA_2活性,突变体蛋白均几乎完全丧失了sPLA_2活性,提示19、21、42、45位4个氨基酸是维持sPLA_2活性的关键氨基酸。该研究为靶向抗病毒药物的研究提供了理论基础。
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关键词
人博卡病毒(hbov)
hbov2
vp1u
突变体
sPLA2活性
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Keywords
Human bocavirus 2（hbov2） vp1u Mutant sPLA2 activity
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分类号
R373.2
[医药卫生—病原生物学]
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