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PcDNA3-hBMP2转染骨髓基质细胞及其稳定表达 被引量:11
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作者 郑德宇 秦书俭 姚素艳 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2004年第2期210-213,共4页
目的 :通过观察转染hBMP 2基因的骨髓基质细胞的生长特性的变化和检测目的基因在受体细胞中表达 ,探讨骨髓基质细胞用作hBMP 2基因的受体细胞的可能性。方法 :在脂质体介导下将hBMP 2基因导入体外培养的骨髓基质细胞中 ,用G418筛选获... 目的 :通过观察转染hBMP 2基因的骨髓基质细胞的生长特性的变化和检测目的基因在受体细胞中表达 ,探讨骨髓基质细胞用作hBMP 2基因的受体细胞的可能性。方法 :在脂质体介导下将hBMP 2基因导入体外培养的骨髓基质细胞中 ,用G418筛选获得阳性细胞 ,分别应用原位杂交技术和酶联免疫吸附方法检测目的基因在受体细胞内的存在与表达。结果 :在mRNA水平可检测到目的基因在阳性细胞中进行了转录 ,在培养基中 ,用ELISA的方法能检测到目的基因在骨髓基质细胞中进行了表达 ,并分泌到培养基中。从细胞的生长曲线上 ,可知细胞的倍增时间并没有因为目的基因的导入而改变 ,其生长时间也与正常的细胞相近。结论 :骨髓基质细胞可以用作hBMP 2基因的受体细胞 ,表达并分泌hBMP 2蛋白质 ,也可作为骨组织工程学中的种子细胞。 展开更多
关键词 人骨形态发生蛋白-2 转染 骨髓基质细胞
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腺病毒介导BMP-2和EGFP基因转染兔骨髓基质干细胞及种植脱钙骨的体外观察 被引量:9
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作者 陈佳滨 李强 +3 位作者 茹嘉 武成聪 宁寅宽 蔡伟良 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期869-874,共6页
目的用腺病毒载体介导人骨形态发生蛋白-2及EGFP基因转染兔骨髓基质干细胞(rBMSC),种植DBM(脱钙骨)支架体外构建组织工程骨。方法兔髓基质干细胞(rBMSC)的分离、培养;流式细胞仪检测细胞表面标记;转染后,荧光显微镜观察细胞最适感染复数... 目的用腺病毒载体介导人骨形态发生蛋白-2及EGFP基因转染兔骨髓基质干细胞(rBMSC),种植DBM(脱钙骨)支架体外构建组织工程骨。方法兔髓基质干细胞(rBMSC)的分离、培养;流式细胞仪检测细胞表面标记;转染后,荧光显微镜观察细胞最适感染复数(MOI)及蛋白印迹检测外源基因的表达情况;采用Urist提供的方法制备脱钙骨(DBM),用细胞计量法测定BMSCs与DBM复合培养的黏附率。然后将转染后细胞接种到DBM支架上,用荧光显微镜观察细胞是否成功粘附于支架材料上,扫描电镜观察细胞贴附、生长状况。结果 BMSCs细胞表型鉴定:CD44表达阳性,CD45表达阴性;转染后,蛋白印迹试验检测到BMP-2表达增高;骨髓间充质干细胞与脱钙骨基质的平均粘附率为(72.74±1.99)%;扫描电镜见转染细胞生长良好,伸出丝状突起,相互连接。结论成功培养及鉴定兔BMSCs,Ad-BMP-2/EGFP可高效转染兔BMSCs,转染后的细胞种植于DBM支架材料后生长状况良好,组织工程骨构建成功。 展开更多
关键词 腺病毒 骨形态发生蛋白 骨髓基质干细胞 组织工程骨 脱钙骨
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鹿瓜多肽联合hBMP-2基因对软骨细胞增殖和Ⅱ型胶原分泌的影响 被引量:6
3
作者 王丽红 何英 +1 位作者 徐永柱 赖国旗 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1577-1580,共4页
目的观察鹿瓜多肽联合hBMP-2基因对软骨细胞的增殖和软骨细胞分泌Ⅱ型胶原是否有协同作用。方法分离培养原代兔软骨细胞,用第3代细胞为模型,实验分为未转染组、腺病毒-绿色荧光蛋白(Ad-GFP)组、Ad-hBMP2-GFP组、鹿瓜多肽+Ad-hBMP2-GFP组... 目的观察鹿瓜多肽联合hBMP-2基因对软骨细胞的增殖和软骨细胞分泌Ⅱ型胶原是否有协同作用。方法分离培养原代兔软骨细胞,用第3代细胞为模型,实验分为未转染组、腺病毒-绿色荧光蛋白(Ad-GFP)组、Ad-hBMP2-GFP组、鹿瓜多肽+Ad-hBMP2-GFP组,培养48 h后,RT-PCR检测hBMP-2mRNA的表达,流式细胞仪检测软骨细胞的周期。培养48、72 h后,MTT法检测软骨细胞的增殖,W estern印迹检测hBMP-2蛋白和Ⅱ型胶原的表达。结果培养48 h后,Ad-hBMP2-GFP组和鹿瓜多肽+Ad-hBMP2-GFP组hBMP-2 mRNA呈阳性,而未转染组、Ad-GFP组表达呈阴性;与未转染组、Ad-GFP组、Ad-hBMP2-GFP组比较,鹿瓜多肽+hBMP-2基因组能使软骨细胞S-G2/M期细胞比例增加,软骨细胞数量增加(P<0.05),软骨细胞hBMP-2蛋白表达和Ⅱ型胶原分泌增加(P<0.01);培养48与72 h比较,鹿瓜多肽联合hBMP-2基因对软骨细胞增殖和Ⅱ型胶原分泌无显著性差异(P>0.05)。结论鹿瓜多肽能促进hBMP-2基因在软骨细胞中合成hBMP-2蛋白,鹿瓜多肽联合hBMP-2基因对软骨细胞增殖和分泌Ⅱ型胶原的功能有协同作用。 展开更多
关键词 鹿瓜多肽 hbmp-2 软骨细胞 增殖 Ⅱ型胶原
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人骨形态发生蛋白-2基因转染人脂肪源性基质细胞的异位成骨作用 被引量:7
4
作者 李慧武 戴尅戎 +4 位作者 汤亭亭 郁朝锋 严孟宁 李旭 楼觉人 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期588-590,i003,共4页
目的探讨腺病毒介导的人骨形态发生蛋白-2(Adv-hBMP-2)基因转染人脂肪源性基质细胞(ADSCs)的可行性及其成骨作用。方法从人脂肪组织中提取间充质细胞,分别转染β-半乳糖苷酶(β-gal)基因和hBMP-2基因,通过X-gal染色明确转染效率,免疫沉... 目的探讨腺病毒介导的人骨形态发生蛋白-2(Adv-hBMP-2)基因转染人脂肪源性基质细胞(ADSCs)的可行性及其成骨作用。方法从人脂肪组织中提取间充质细胞,分别转染β-半乳糖苷酶(β-gal)基因和hBMP-2基因,通过X-gal染色明确转染效率,免疫沉淀+Westernblot法和ELISA法检测BMP-2表达,确定BMP-2表达量、表达时间及其相互关系,流式细胞仪观察基因转染对细胞凋亡的影响,并将转基因细胞注入裸鼠股部肌内行X线及组织学检查。结果X-gal染色显示转染效率达91%。免疫沉淀+Westernblot法和ELISA法显示转染hBMP-2的ADSC具有较高且稳定的BMP-2的表达,20d内表达量无明显减退。流式细胞表明腺病毒转染后细胞凋亡率上升,但上升幅度不大。裸鼠肌内注射转基因细胞后2周即显示有异位骨形成,4周明显增多,对照组无骨组织形成。结论ADSC是较好的基因治疗载体细胞,转染hBMP-2后可以诱导裸鼠体内骨形成。 展开更多
关键词 人骨形态发生蛋白-2 基因转染 成骨作用 基质细胞 源性 ELISA法检测 hbmp-2 BMP-2基因 β-半乳糖苷酶 X-gal BLOT法 转基因细胞 免疫沉淀 转染效率 ADSC 腺病毒介导 间充质细胞 流式细胞仪 组织学检查 细胞凋亡率 异位骨形成
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BMSCs胶原刮膜对松质骨缺损的修复 被引量:4
5
作者 周健 戴尅戎 汤亭亭 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第8期627-631,共5页
目的 研究成骨蛋白-2(hBMP-2)基因转染骨髓间充质千细胞(BMSCs)胶原刮膜对兔股骨髁松质骨缺损的修复能力。方法 应用影像学、组织学、形态计量学和生物力学等方法,观察未经诱导、OS液诱导和hBMP-2基因转染BMSCs胶原刮膜植入兔股骨髁部直... 目的 研究成骨蛋白-2(hBMP-2)基因转染骨髓间充质千细胞(BMSCs)胶原刮膜对兔股骨髁松质骨缺损的修复能力。方法 应用影像学、组织学、形态计量学和生物力学等方法,观察未经诱导、OS液诱导和hBMP-2基因转染BMSCs胶原刮膜植入兔股骨髁部直径6 mm、深12 mm松质骨缺损后的修复情况。结果 未经处理的兔股骨髁缺损不能自行愈合;细胞刮膜植入对股骨髁松质骨缺损的修复能力,在8和12周时hBMP基因转染BMSCs组>OS液诱导BMSCs组>未诱导BMSCs组(P<0.05),12周时hBMP基因转染BMSCs组的骨缺损区生物力学强度接近正常松质骨。结论 hBMP基因转染BMSCs胶原刮膜是治疗大块松质骨缺损的理想修复材料。 展开更多
关键词 BMSCS 胶原刮膜 松质骨缺损 骨蛋白-2 hbmp-2 间充质干细胞
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转染人骨形态发生蛋白-2基因的羊骨髓间充质干细胞的异位成骨研究 被引量:6
6
作者 汤亭亭 徐小良 +3 位作者 戴鮨戎 郁朝锋 朱六龙 楼觉人 《中华骨科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期489-492,共4页
目的评价腺病毒介导的人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)基因转染羊骨髓间充质干细胞(MSCs)后的成骨活性。方法实验分为3组:(1)hBMP-2转染细胞组,(2)半乳糖苷酶基因(βgal)转染细胞组,(3)未转染细胞组。从羊骨髓中分离培养MSCs,基因转染后利... 目的评价腺病毒介导的人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)基因转染羊骨髓间充质干细胞(MSCs)后的成骨活性。方法实验分为3组:(1)hBMP-2转染细胞组,(2)半乳糖苷酶基因(βgal)转染细胞组,(3)未转染细胞组。从羊骨髓中分离培养MSCs,基因转染后利用免疫沉淀和Westernblot方法检测BMP-2的表达,并在体外进行碱性磷酸酶(ALP)和VonKossa染色、ALP定量测定、透射电镜观察。分别将细胞悬液注入裸鼠股后部肌内,分期进行X线和组织学检查。结果Westernblot检测发现只有hBMP-2转染细胞组的MSCs表达并分泌hBMP-2。该组于转染后第12d,ALP活性达高峰,与其它两组比较,差异有显著性意义;于16d后出现钙结节,而其它两组未见。透射电镜观察见hBMP-2转染细胞组的细胞内粗面内质网、线粒体和溶酶体增多。裸鼠肌内注射细胞悬液后3周,hBMP-2转染细胞组即有异位成骨,6周时明显增多,其它两组仅见纤维组织形成或微量成骨。结论hBMP-2基因转染能诱导羊MSCs分化为成骨细胞,并在裸鼠体内诱导成骨。 展开更多
关键词 hbmp-2 转染细胞 异位成骨 骨形态发生蛋白-2 骨髓间充质干细胞 裸鼠 基因转染 人骨 细胞悬液 内质网
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可诱导表达hBMP-2的慢病毒载体构建及其在人脐血间充质干细胞中的表达 被引量:5
7
作者 周明 石新艳 +7 位作者 田少奇 王丽 张积华 孙康 邢士超 孙伟雪 黄洪杰 吴丹 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期482-487,共6页
目的构建可诱导表达hBMP-2的慢病毒载体,并研究hBMP-2在人脐血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,HUMSCs)中的可诱导性表达。方法以pcDNA-hBMP-2为模板,通过PCR反应获取hBMP-2,运用GATEWAY技术构建pLV/EX... 目的构建可诱导表达hBMP-2的慢病毒载体,并研究hBMP-2在人脐血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,HUMSCs)中的可诱导性表达。方法以pcDNA-hBMP-2为模板,通过PCR反应获取hBMP-2,运用GATEWAY技术构建pLV/EXPN2-Neo-TRE-hBMP-2、pLV/EXPN2-Puro-EF1A-反向反式激活因子(reverse transactivator,rtTA),通过PCR鉴定重组慢病毒载体构建。将重组慢病毒与辅助质粒共同转染293FT细胞,包装成能表达hBMP-2的可控性慢病毒,并测定病毒滴度。用病毒转染HUMSCs,使用强力霉素进行诱导,分别在相同诱导时间(48h)不同诱导浓度(0、10、100ng/mL,1、10、100μg/mL)及不同诱导时间(12、24、48、72h)相同诱导浓度(10μg/mL)两种情况下用ELISA法测定hBMP-2的表达情况。对转染前后的HUMSCs进行成骨诱导,用茜素红染色法观察矿化物结节形成情况。结果成功构建了携带hBMP-2的可控性慢病毒载体pLV/EXPN2-Neo-TRE-hBMP-2、pLV/EXPN2-Puro-EF1A-rtTA,并获得相应的病毒,病毒滴度分别为3.5×108TU/mL和9.5×107TU/mL;病毒转染HUMSCs后,HUMSCs可通过强力霉素的诱导可控性表达hBMP-2。在相同诱导时间情况下,强力霉素10μg/mL时诱导表达最强;而在相同诱导浓度下,hBMP-2的表达在诱导48h达峰值。HUMSCs成骨诱导培养2周后,茜素红染色示胞浆中有大量红色的钙化基质沉积。结论通过GATEWAY技术可以建立携带hBMP-2目的基因的可控性慢病毒载体,为进一步研究hBMP-2诱导HUMSCs成骨分化治疗骨坏死模型奠定实验基础,并提供了一种新的实验思路。 展开更多
关键词 可诱导慢病毒载体 hbmp-2 Tet-on系统 人脐血间充质干细胞 强力霉素
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骨髓基质细胞作为人骨形态发生蛋白-2基因受体细胞的可行性研究 被引量:4
8
作者 郑德宇 秦书俭 张玉华 《中国临床康复》 CSCD 2003年第32期4344-4345,共2页
目的:通过检测hBMP-2基因在受体细胞中瞬时表达水平,探讨骨髓基质细胞作为hBMP-2基因受体细胞的可行性。方法:应用脂质体介导的方法将携带hBMP-2基因的重组载体PcDNA3-hBMP-2导入体外培养的骨髓基质细胞中,分别应用原位技术和酶联免疫... 目的:通过检测hBMP-2基因在受体细胞中瞬时表达水平,探讨骨髓基质细胞作为hBMP-2基因受体细胞的可行性。方法:应用脂质体介导的方法将携带hBMP-2基因的重组载体PcDNA3-hBMP-2导入体外培养的骨髓基质细胞中,分别应用原位技术和酶联免疫吸附方法检测目的基因在受体细胞内mRNA和蛋白质的存在与表达状况。结果:在mRNA水平,可检测到hBMP-2基因在阳性细胞进行了转录;在蛋白质水平,从细胞的培养基中可检测到hBMP-2蛋白质。结论:骨髓基质细胞可以作为hBMP-2基因的受体细胞,基因表达可分泌hBMP-2蛋白质。 展开更多
关键词 骨髓基质细胞 骨形态发生蛋白-2 基因 受体细胞 hbmp-2 抗体
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重组PcDNA3.1-hBMP-2转染骨髓基质干细胞及复合异种骨支架体外构建组织工程骨 被引量:5
9
作者 卜丽莎 李建军 +4 位作者 韩东 景元海 王宏 王玲 徐莘香 《中国骨伤》 CAS 2004年第8期449-451,共3页
目的 :构建人骨形态发生蛋白 2 (humanbonemorphogeneticprotein ,hBMP 2 )真核表达载体PcDNA3 1 hBMP 2 ,转染兔骨髓基质干细胞 (bonemarrowstromalcells ,BMSCs) ,种植去抗原牛松质骨(bovinecancellousbone ,BCB)支架体外构建组织工... 目的 :构建人骨形态发生蛋白 2 (humanbonemorphogeneticprotein ,hBMP 2 )真核表达载体PcDNA3 1 hBMP 2 ,转染兔骨髓基质干细胞 (bonemarrowstromalcells ,BMSCs) ,种植去抗原牛松质骨(bovinecancellousbone ,BCB)支架体外构建组织工程骨。方法 :蛋白印迹法检测转染后细胞BMP 2的表达 ,碱性磷酸酶 (ALPase)活性检测分析基因转染对细胞分化的影响。然后将转染后细胞接种到BCB支架上 ,扫描电镜观察细胞贴附、生长状况。结果 :转染后 ,BMSCs表达BMP 2 ,ALP活性明显增高。扫描电镜见转染细胞分布均匀 ,伸展良好。结论 :在脂质体介导下 ,BMP 2基因可导入细胞且稳定表达基因产物促进自身增殖分化 ,转染后细胞在支架材料上贴附生长良好 ,为进一步应用携带BMP 展开更多
关键词 转染 hbmp-2 组织工程骨 体外 骨髓基质干细胞 PCDNA3 骨支架 重组 构建 目的
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hBMP-2基因转染骨髓基质细胞及效果检测 被引量:3
10
作者 郑德宇 秦书俭 +1 位作者 郑国顺 姚素艳 《解剖科学进展》 CAS 2004年第2期136-139,143,共5页
目的 通过观察转染hBMP 2基因在骨髓基质细胞生物学性状变化和检测hBMP 2基因在受体细胞中表达水平 ,探讨骨髓基质细胞作为hBMP 2基因受体细胞的可行性。方法 应用脂质体介导的方法将携带hBMP 2基因的重组载体PcDNA3 hBMP2导入体外培... 目的 通过观察转染hBMP 2基因在骨髓基质细胞生物学性状变化和检测hBMP 2基因在受体细胞中表达水平 ,探讨骨髓基质细胞作为hBMP 2基因受体细胞的可行性。方法 应用脂质体介导的方法将携带hBMP 2基因的重组载体PcDNA3 hBMP2导入体外培养的骨髓基质细胞中 ,用G4 18筛选获得阳性细胞 ,分别应用PCR技术、原位杂交技术和ELISA检测目的基因DNA、mRNA和蛋白质的存在与表达状况 ,并绘制细胞的生长曲线。结果 PCR方法显示实验组可见约 36 0bp的基因条带 ,原位杂交方法显示实验组约有 15~ 2 0 %的阳性细胞 ,ELISA方法显示培养第 1~ 4天时hBMP 2的含量为 37ng/3× 10 5细胞 ,培养第 11~14天和第 2 5~ 2 8天均约 5 4ng/3× 10 5细胞。转染后阳性细胞的倍增时间和生长时间没有因为目的基因的导入而改变 ,与正常培养的细胞相比差异不显著。结论 骨髓基质细胞可以作为hBMP 2基因的受体细胞 ,基因表达可分泌hBMP 2蛋白质 ,可作为骨组织工程学中的种子细胞。 展开更多
关键词 hbmp-2 基因转染 骨髓基质细胞 检测 种子细胞 骨缺损
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Ad-hBMP-2对促进软骨细胞分泌Ⅱ型胶原影响的实验研究 被引量:3
11
作者 王丽红 何英 赖国旗 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第18期2631-2634,共4页
目的观察腺病毒-人骨形态发生蛋白-2-绿色荧光蛋白(Ad-hBMP-2-GFP)转染兔软骨细胞后,hBMP-2蛋白的表达和其对软骨细胞分泌Ⅱ型胶原功能的影响。方法包装hBMP-2-GFP腺病毒载体,测定病毒滴度。分离培养并鉴定原代兔软骨细胞,通过基因转染... 目的观察腺病毒-人骨形态发生蛋白-2-绿色荧光蛋白(Ad-hBMP-2-GFP)转染兔软骨细胞后,hBMP-2蛋白的表达和其对软骨细胞分泌Ⅱ型胶原功能的影响。方法包装hBMP-2-GFP腺病毒载体,测定病毒滴度。分离培养并鉴定原代兔软骨细胞,通过基因转染技术,转染Ad-hBMP-2-GFP至兔第三代软骨细胞,RT-PCR检测hBMP-2mRNA的表达,细胞免疫荧光法和Western印迹检测软骨细胞中hBMP-2蛋白的表达和Ⅱ型胶原的变化情况,用未转染组和空病毒组(Ad-GFP)做对照。结果转染后,hBMP-2的mRNA在48h有明显阳性条带表达,对照组呈阴性,hBMP-2蛋白在48、72h的表达量随时间而逐渐增强(P<0.05),同时,软骨细胞分泌Ⅱ型胶原的量也逐渐增加(P<0.05)。结论Ad-hBMP-2-GFP能成功转染兔软骨细胞,并能促进软骨细胞分泌Ⅱ型胶原,为软骨组织工程提供功能良好的种子细胞,且为hBMP-2基因治疗骨性关节炎提供实验依据。 展开更多
关键词 软骨细胞 人骨形态发生蛋白2 基因 转染
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人骨形成蛋白-2的cDNA探针的实验合成 被引量:3
12
作者 黄宏杰 平飞云 《浙江创伤外科》 2004年第1期9-11,共3页
目的利用分子生物学实验技术合成并标记人骨形成蛋白-2(hBMP-2)的cDNA探针。方法从人髁状突骨折标本中提取总RNA,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,扩增出hBMP-2成熟肽编码区基因的cDNA片段,将其插入pGEM-T质粒中,并转化到大肠杆菌;... 目的利用分子生物学实验技术合成并标记人骨形成蛋白-2(hBMP-2)的cDNA探针。方法从人髁状突骨折标本中提取总RNA,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,扩增出hBMP-2成熟肽编码区基因的cDNA片段,将其插入pGEM-T质粒中,并转化到大肠杆菌;挑选阳性克隆培养,提取重组质粒,并作核苷酸序列分析;用限制性内切酶单酶切后,再经地高辛标记检测试剂盒随机引物法标记,合成地高辛标记的BMP-2cDNA探针;利用这一探针作人颌骨成骨性骨肉瘤标本中BMP-2mRNA表达的原位杂交研究,以鉴定探针的可靠性。结果通过实验方法合成了hBMP-2cDNA探针,利用这一探针的原位杂交研究证实颌骨成骨性骨肉瘤中有BMP-2mRNA表达。结论自行合成并标记的人BMP-2cDNA探针,性状稳定、可靠,能够应用于BMP-2mRNA表达的原位杂交研究。 展开更多
关键词 人骨形成蛋白-2 CDNA探针 实验合成 基因克隆 原位杂交 骨肉瘤
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Ad-hBMP-2转染体外培养人退变腰椎间盘细胞的研究 被引量:1
13
作者 顾海伦 吕刚 +3 位作者 李建军 刘莉 黄涛 原泉 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第17期1331-1333,共3页
[目的]研究人骨形态发生蛋白-2腺病毒表达载体(Ad-hBMP-2)转染体外培养人退变腰椎间盘细胞,分析其对腰椎间盘细胞影响。[方法]成人退变腰椎间盘细胞体外培养,通过免疫组化和染色体分析鉴定椎间盘细胞。利用免疫荧光和蛋白印迹法检测不... [目的]研究人骨形态发生蛋白-2腺病毒表达载体(Ad-hBMP-2)转染体外培养人退变腰椎间盘细胞,分析其对腰椎间盘细胞影响。[方法]成人退变腰椎间盘细胞体外培养,通过免疫组化和染色体分析鉴定椎间盘细胞。利用免疫荧光和蛋白印迹法检测不同转染剂量对细胞BMP-2表达的影响。[结果]体外培养成人退变腰椎间盘细胞第2代鉴定具有其结构功能。转染后通过免疫荧光和蛋白印迹法可见随转染剂量增加BMP-2表达量逐渐增加。[结论]Ad-hBMP-2可高效转染体外培养人退变椎间盘细胞,同时随转染剂量增加BMP-2表达量逐渐增加。 展开更多
关键词 腺病毒 骨形态蛋白2 椎间盘细胞 基因转染 退变椎间盘细胞 退变腰椎间盘 细胞体外培养 转染 hbmp-2 蛋白印迹法
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人骨形态发生蛋白-2/人胰岛素样生长因子-1对钛种植体表面细胞的成骨效率的影响 被引量:3
14
作者 张迪 邓甜 +5 位作者 罗震 朱安棣 杨勃 钟惠兰 李少萍 杨晓喻 《南方医科大学学报》 CSCD 北大核心 2021年第8期1277-1282,共6页
目的制备人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)/人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)涂层钛(Ti)片,探索其作为牙种植体的功效与机制。方法将hBMP-2与hIGF-1两个生长因子涂覆到具有光滑表面的Ti上,比较两种生长因子包被的Ti与原始Ti在增强骨形成和骨整... 目的制备人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)/人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)涂层钛(Ti)片,探索其作为牙种植体的功效与机制。方法将hBMP-2与hIGF-1两个生长因子涂覆到具有光滑表面的Ti上,比较两种生长因子包被的Ti与原始Ti在增强骨形成和骨整合的功效。通过扫描电子显微镜SEM和接触角测量,分别测定金属样品的表面特性。将MG63细胞种植于Ti上,MTT实验检测细胞增殖,茜素红实验检查细胞钙化结节,Elisa实验检测碱性磷酸酶,Western blot实验检测骨钙素与骨调素的表达。结果SEM检测显示,包被了hBMP-2/hIGF-1的Ti,表面呈雪花辐射样。与原始Ti相比,hBMP-2/Ti、hIGF-1/Ti和hBMP-2/hIGF-1/Ti显示出较低的接触角(P=0.032,0.029,0.028),样本呈现良好的亲水性。MTT实验结果显示,MG63细胞能在hBMP 2/hIGF-1加持的钛片表面良好生长。茜素红实验显示,hBMP-2/hIGF-1的加持能提高MG63细胞的成骨效率(P<0.05)。Elisa实验显示,hBMP-2/hIGF-1能促进碱性磷酸酶的分泌(P=0.021,0.014)。Western blot实验显示,hBMP-2/hIGF-1的加持能诱导骨钙素与骨调素的表达(P<0.05)。结论以hBMP-2和hIGF-1两种生长因子涂覆的Ti,能提高其表面细胞的成骨效率,可以作为一种种植材料进一步用于牙科实验。 展开更多
关键词 hbmp-2 HIGF-1 肝素 骨形成 骨整合
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Ad—hBMP-2基因修饰对兔脂肪干细胞向成骨细胞分化的影响 被引量:2
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作者 方忠 李锋 +2 位作者 游洪波 熊伟 李光辉 《中华创伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期147-149,共3页
2001年,Zuk等首次报告从人体脂肪组织提取物(processed lipoaspirate,PLA)中发现有一群具有向多种组织分化潜能的多能干细胞,称之为脂肪干细胞(adipose—derived stem cells,ADSCs);并成功地在体外增殖、分化。目前已证实,AD... 2001年,Zuk等首次报告从人体脂肪组织提取物(processed lipoaspirate,PLA)中发现有一群具有向多种组织分化潜能的多能干细胞,称之为脂肪干细胞(adipose—derived stem cells,ADSCs);并成功地在体外增殖、分化。目前已证实,ADSCs在外来生长因子的诱导下可分化为成骨细胞、软骨细胞、肌源性细胞等多种组织细胞;骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2, 展开更多
关键词 成骨细胞分化 脂肪干细胞 hbmp-2 基因修饰 骨形态发生蛋白 组织提取物 AD 多能干细胞
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钛网表面含hBMP-2的复合涂层制备及hBMP-2的释放研究
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作者 付亚康 翁杰 +1 位作者 刘耀文 张科宏 《无机材料学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2020年第2期173-178,共6页
为提高骨接合钛网的骨整合性和生物活性,本研究采用碱热处理法在钛网表面构建出具有多孔结构的钛酸盐纳米纤维,利用电化学沉积技术在钛酸盐纳米纤维表面制备磷酸钙涂层,并采用不同方法将人骨形态发生蛋白(hBMP-2)引入涂层,制备了三种含h... 为提高骨接合钛网的骨整合性和生物活性,本研究采用碱热处理法在钛网表面构建出具有多孔结构的钛酸盐纳米纤维,利用电化学沉积技术在钛酸盐纳米纤维表面制备磷酸钙涂层,并采用不同方法将人骨形态发生蛋白(hBMP-2)引入涂层,制备了三种含hBMP-2分子的复合涂层(TmhB、TmHedhB和TmHhBed)。实验对各复合涂层的表面形貌、化学成分、相组成和hBMP-2的含量与释放性能进行了表征。研究发现:各涂层都具有多孔纤维结构,TmHedhB和TmHhBed中的磷酸钙相为羟基磷灰石(HA),呈“串珠”状包裹在钛酸盐纳米纤维表面,“串珠”状HA的引入促进了复合涂层对hBMP-2的吸附。电化学共沉积技术在钛酸盐纳米纤维表面制备的HA/hBMP-2复合涂层中hBMP-2的含量最大,达886 ng/mg,在6~48 h内具有明显的hBMP-2缓释性能。 展开更多
关键词 碱热处理 电化学沉积 羟基磷灰石 复合涂层 hbmp-2
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人骨形成蛋白2基因的克隆及序列测定 被引量:1
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作者 华松 贾战生 +3 位作者 武浩 扈苯荃 杨瑞锋 张涌 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2005年第2期9-13,共5页
 为了获得人骨形成蛋白2(hBMP-2)基因,以GeneBank(NM001200)中的hBMP-2基因编码序列为依据设计引物,采用RT-PCR技术从人胎盘中获得hBMP-2基因cDNA,并将其重组到pMD18-T载体中,转化到大肠杆菌JM109后挑选阳性克隆,经双酶切鉴定并进行测...  为了获得人骨形成蛋白2(hBMP-2)基因,以GeneBank(NM001200)中的hBMP-2基因编码序列为依据设计引物,采用RT-PCR技术从人胎盘中获得hBMP-2基因cDNA,并将其重组到pMD18-T载体中,转化到大肠杆菌JM109后挑选阳性克隆,经双酶切鉴定并进行测序。结果表明,获得的基因片断为hBMP-2全编码序列,同源性为99.9%。 展开更多
关键词 人骨形成蛋白2 RT-PCR 克隆
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Bone Formation and Healing Study of hBMP-2 Transfected rMSCs Attached to DBM
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作者 LIJun FANQing-yu +2 位作者 YULan FANDe-gang WENYan-hua 《Journal of Nanjing Medical University》 2004年第5期267-271,共5页
Objective: To detect the effect of hBMP-2 transfected rMSCs on bone repair and the capability of the new biomaterial in enhancing bone repair. Methods: Auto-rMSCs were cultured and transfected with hBMP-2 by liposome.... Objective: To detect the effect of hBMP-2 transfected rMSCs on bone repair and the capability of the new biomaterial in enhancing bone repair. Methods: Auto-rMSCs were cultured and transfected with hBMP-2 by liposome. All the transfected and un-transfected riSCs were attached to Allo-DBMs. These new biomaterials were implanted in muscle bags and segmental radius defects of the New Zealand white rabbits, and some controlled material groups were established for comparison. All the biomaterials and the controlled materials were assessed by gross observation, radiographical and histological methods. Results: The osteoblasts could be seen in the biomaterials with transfected rMSCs, which have been implanted in muscle bags. There was no sign of bone formation in the biomaterials with untransfected rMSCs and the single DBM groups. With the segmental bone defects, all the transfected, untransfected and single DBM biomaterials could work, but the healing of the biomaterial with transfected hBMP-2 was the fastest and most effective. Conclusion: Delivery of rMSCs with transfected hBMP-2 genemay generate osteo.morphogenesis and promote skeletal repair in vivo. 展开更多
关键词 骨形成 康复研究 hbmp-2 基因转染 rMSCs DBM 生物材料
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重组人骨形态发生蛋白-2成熟肽在大肠杆菌中的表达及其诱导成骨活性 被引量:79
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作者 赵明 王会信 周廷冲 《生物化学杂志》 CSCD 1994年第3期319-324,共6页
报告了人骨形态发生蛋白-2(BMP-2)成熟肽的基因克隆,及其在大肠杆菌中的表达。用AflⅡ酶剪除BMP-2cDNA中的信号肽及前肽部分的序列,将编码成熟肽的cDNA3′端0.36kb基因片段克隆于大肠杆菌表达载体p... 报告了人骨形态发生蛋白-2(BMP-2)成熟肽的基因克隆,及其在大肠杆菌中的表达。用AflⅡ酶剪除BMP-2cDNA中的信号肽及前肽部分的序列,将编码成熟肽的cDNA3′端0.36kb基因片段克隆于大肠杆菌表达载体pMX-1质粒的ATG下游,受控于PLPR启动子。重组子以大肠杆菌DH5α为宿主细胞进行温度诱导表达。工程菌经42℃6h诱导后,在SDS-PAGE上出现一条新蛋白带,分子量约为12kD,约占菌体总蛋白的20%。主要以包涵体形式存在的表达产物经初步纯化后,可获得纯度较高的重组人骨形态发生蛋白-2成熟肽(rhBMP-2m)。小鼠肌肉植入试验发现。rhBMP-2m植入后的不同时间,在局部出现间质细胞的聚集和增生、软骨细胞及软骨基质的生成和硬质骨的形成,证明rhBMP-2m具有明显的诱导新骨形成的作用。 展开更多
关键词 骨形态发生 蛋白 DNA 重组 表达
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人骨形态发生蛋白-2基因转染兔骨髓基质干细胞及其表达 被引量:7
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作者 邹德波 周东生 +3 位作者 王永会 王来城 武兴国 黄涛 《中华创伤骨科杂志》 CAS CSCD 2006年第2期148-152,共5页
目的探讨含有人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)cDNA的真核表达载体在兔骨髓基质干细胞(MSCs)中的转录及表达情况,为进一步进行多基因转染MSCs复合纳米仿生骨治疗骨缺损实验提供材料。方法用电穿孔方法将真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP2转染至... 目的探讨含有人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)cDNA的真核表达载体在兔骨髓基质干细胞(MSCs)中的转录及表达情况,为进一步进行多基因转染MSCs复合纳米仿生骨治疗骨缺损实验提供材料。方法用电穿孔方法将真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP2转染至兔MSCs中,荧光显微镜及流式细胞学检查观察转染效果、检测转染效率,定量RT-PCR方法观察hBMP-2cDNA在兔MSCs中的转录情况,免疫组织化学及westernblot方法检测hBMP-2蛋白表达情况,ALP活性定量测定检测hBMP-2蛋白功能。结果电穿孔方法将重组质粒转染至兔MSCs中,荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白表达,流式细胞仪检测转染效率为(42.7±2.1)%,转染24h后定量RT-PCR方法检测到hBMP-2cDNA在兔MSCs中的转录片断,免疫组织化学观察到hBMP-2蛋白呈强阳性表达,westernblot方法可见18KDhBMP-2蛋白条带,转染组细胞ALP活性明显提高(P>0.05)。结论pIRES2-EGFP-hBMP2通过电穿孔方法导入兔MSCs,并在其中有效表达,发挥生物学作用。 展开更多
关键词 人骨形态发生蛋白-2 骨髓基质干细胞 基因转染 表达
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