鲍曼不动杆菌通过活化血小板激活因子受体引起感染人支气管上皮细胞的氧化应激和细胞凋亡 被引量：6

1

作者 张怡敏 张宏方 +6 位作者 周雪宁 徐洋洋 王媛媛 叶峥嵘 史琳娜 环诚 寇静 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期421-426,共6页

目的探讨血小板激活因子受体(PAFR)在鲍曼不动杆菌(A.baumannii)感染人支气管上皮(HBE)细胞过程中的作用。方法 HBE细胞分为对照组、银杏内酯B(GB)处理组、A.baumannii感染组、A.baumannii感染联合GB处理组。使用临床分离的A.baumannii... 目的探讨血小板激活因子受体(PAFR)在鲍曼不动杆菌(A.baumannii)感染人支气管上皮(HBE)细胞过程中的作用。方法 HBE细胞分为对照组、银杏内酯B(GB)处理组、A.baumannii感染组、A.baumannii感染联合GB处理组。使用临床分离的A.baumannii感染HBE细胞,GB处理组分别用1×10~3CFU/m L、1×10~5CFU/m L和1×10~7CFU/m L的A.baumannii感染HBE细胞,A.baumannii感染联合GB处理组则先用10μmol/L GB阻断PAFR活性而后进行1×10~3CFU/m L A.baumannii感染。采用Western blot法检测HBE细胞PAFR、磷酸化的Janus激酶1(p-JAK1)、磷酸化的信号转导子与转录激活子1(p-STAT1)的蛋白水平,使用CCK-8法检测细胞增殖能力,使用超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒检测各组细胞氧化应激水平;异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)染色结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果与对照组相比,A.baumannii感染的HBE细胞中PAFR蛋白水平显著升高,细胞活力显著下降,细胞内MDA水平和细胞凋亡明显增加,p-JAK1和p-STAT1蛋白水平增加。结论 A.baumannii感染的HBE细胞PAFR活化,激活JAK1/STAT1信号通路促进HBE细胞的氧化应激和细胞凋亡。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 血小板激活因子受体(PAFR) hbe细胞 银杏内酯B(ginkgolide B)

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γH2AX和53BP1蛋白在肺正常上皮细胞DNA氧化损伤反应中的表达 被引量：5

2

作者 王竹 杨丽艳 +1 位作者 刘圆圆 徐克前 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2018年第2期142-147,共6页

目的探讨肺正常上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBE)中磷酸化组蛋白H2AX(phosphorylated H2AX,γH2AX)和p53结合蛋白1(p53-Binding protein 1,53BP1)在DNA氧化损伤反应中的表达。方法用0、25、50、100、200、400μmol/L过... 目的探讨肺正常上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBE)中磷酸化组蛋白H2AX(phosphorylated H2AX,γH2AX)和p53结合蛋白1(p53-Binding protein 1,53BP1)在DNA氧化损伤反应中的表达。方法用0、25、50、100、200、400μmol/L过氧化氢(H2O2)处理HBE细胞1 h,对其造成氧化损伤引起DNA双链断裂(double strand breaks,DSBs);CCK-8比色法检测H2O2对HBE细胞活性的影响,流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光显微镜检测HBE细胞核内γH2AX和53BP1蛋白的聚集情况,western blot检测γH2AX、53BP1、BRCA1蛋白的表达水平。结果与对照组比较,25μmol/L H2O2处理组细胞活性(1.07±0.01)升高,50、100、200、400μmol/L H2O2处理组细胞活性(分别为0.97±0.01,0.96±0.01,0.95±0.01和0.94±0.01)降低,差异具有统计学意义(F=50.35,P<0.01)。细胞凋亡检测结果显示,与对照组[(4.65±0.32)%]比较,50、100、200、400μmol/L H2O2处理组细胞凋亡率[分别为(7.54±0.57)%、(7.84±0.68)%、(8.40±0.50)%和(14.03±1.03)%]升高(F=35.879,P<0.01)。与对照组比较,经25、50、100、200、400μmol/L H2O2处理后γH2AX的平均荧光强度升高(F=223.97,P<0.01),而经50、100、200、400μmol/L H2O2处理后53BP1的平均荧光强度降低(F=117.78,P<0.01);western blot结果显示,随着H2O2浓度升高,γH2AX蛋白表达水平升高,BRCA1和53BP1的表达水平下降,差异均具有统计学意义(F分别为96.20,11.55,21.92,P均<0.01)。结论在H2O2导致HBE细胞的氧化损伤中,γH2AX可作为DNA氧化损伤标志物,但53BP1的表达下降提示HBE细胞可能通过其他途径进行DNA氧化损伤的修复。 展开更多

关键词 磷酸化组蛋白H2AX P53结合蛋白1 DNA双链断裂 氧化应激 hbe细胞

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分次低剂量辐射诱导HBE细胞衰老中mRNA差异表达分析

3

作者 张灵钰 黄伟旭 +6 位作者 蔡雅诗 李慧娴 张敏 闻昌勇 杨萍 邹剑明 陈慧峰 《中国辐射卫生》 2024年第2期116-122,共7页

目的利用高通量mRNA测序和生物信息学技术探讨分次低剂量电离辐射(low dose ionizing radiation,LDIR)诱导人支气管上皮(human bonchial epithelial,HBE)细胞衰老中差异表达mRNA及相关生物学过程与通路。方法分别采用0、50、100、200 mG... 目的利用高通量mRNA测序和生物信息学技术探讨分次低剂量电离辐射(low dose ionizing radiation,LDIR)诱导人支气管上皮(human bonchial epithelial,HBE)细胞衰老中差异表达mRNA及相关生物学过程与通路。方法分别采用0、50、100、200 mGy剂量辐照HBE细胞7次结束后24和48 h收集细胞,检测衰老相关β-半乳糖苷酶活性和衰老相关分泌表型基因mRNA和蛋白表达水平,采用高通量测序筛选差异表达基因进行基因本体学(GO)和京都基因与基因组大百科全书(KEGG)分析。结果分次低剂量辐照HBE细胞衰老阳性面积呈剂量依赖性增加(P<0.05)。与对照组相比,辐照结束后24和48 h,100 mGy×7和200 mGy×7组转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)与基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)基因mRNA水平与蛋白表达均增加。高通量测序显示,与对照组相比各剂量组差异表达mRNA分别有882个、475个和1205个。GO分析表明,各剂量组差异表达mRNA主要富集在细胞周期调节、氮化合物代谢过程的调控、对刺激反应的调节和细胞分裂等生物过程。KEGG分析显示,差异表达mRNA主要富集在细胞周期、细胞衰老、铁死亡等通路。结论分次LDIR可诱导HBE细胞衰老,衰老细胞中差异表达mRNA相关生物学过程和通路与细胞周期、细胞衰老等有关。 展开更多

关键词 低剂量电离辐射 hbe细胞 衰老

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橄榄苦苷抑制丙烯醛诱导的HBE细胞内质网应激的机制研究 被引量：4

4

作者 徐朝琪 许玉宇 +1 位作者 姜盼 冯晴 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第9期1124-1130,共7页

目的:探讨橄榄苦苷(oleuropein,OP)和丙烯醛(acrolein,ACR)对人支气管上皮样细胞(human bronchial epithelial cells,HBE)内质网应激(endouplasmic reticulum stress,ERS)相关的增殖与凋亡影响的可能机制。方法 :OP与ACR联合处理HBE细胞... 目的:探讨橄榄苦苷(oleuropein,OP)和丙烯醛(acrolein,ACR)对人支气管上皮样细胞(human bronchial epithelial cells,HBE)内质网应激(endouplasmic reticulum stress,ERS)相关的增殖与凋亡影响的可能机制。方法 :OP与ACR联合处理HBE细胞,MTT比色法检测细胞存活率,Hoechst33258染色法和流式细胞检测细胞凋亡,Western blot检测ERS相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)和CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)的表达,Real-time PCR法检测GRP78和CHOP mRNA表达;雄性Sprague-Dawley大鼠经ACR腹腔注射和(或)橄榄叶提取物(olive leaf extract,OLE)灌胃处理,取大鼠肺组织,Western blot法检测ERS相关蛋白GRP78和CHOP的表达,Real-time PCR法检测GRP78和CHOP mRNA表达。结果:体外实验证实ACR可以抑制HBE细胞的增殖,诱导其凋亡;联合OP处理后,ACR抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用明显受到抑制;同时,ACR上调HBE细胞中ERS相关蛋白GRP78和CHOP的表达,联合OP可抑制GRP78和CHOP的表达;在mRNA水平上,ACR单独处理上调了ERS相关分子GRP78和CHOP的mRNA表达水平,而联合OP处理,GRP78和CHOP的mRNA水平未见明显变化;Sprague-Dawley大鼠体内实验结果与体外细胞实验基本一致。结论:ACR抑制HBE细胞增殖,促发ERS,进而诱导HBE细胞凋亡。在蛋白质翻译水平上,OP可以通过抑制ERS途径,拮抗ACR诱导的细胞凋亡效应。 展开更多

关键词 橄榄苦苷 丙烯醛 hbe细胞 内质网应激

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人肺腺癌细胞系与支气管上皮细胞系差异蛋白质组学研究 被引量：3

5

作者 李丽萍 陈智鹏 +3 位作者 贾海涛 王炜 贾红玲 卢春花 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期917-921,共5页

目的:通过对肺腺癌细胞系A549细胞和正常上皮细胞系HBE蛋白组成差异的分析,寻找与肺癌发生、发展相关的差异蛋白,为进一步阐明肺癌发病机制提供更多有价值的信息;为诊断或者预后提供候选分子标记物。方法:运用固相pH梯度双向电泳和基质... 目的:通过对肺腺癌细胞系A549细胞和正常上皮细胞系HBE蛋白组成差异的分析,寻找与肺癌发生、发展相关的差异蛋白,为进一步阐明肺癌发病机制提供更多有价值的信息;为诊断或者预后提供候选分子标记物。方法:运用固相pH梯度双向电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI/TOF/TOF/MS)分析技术筛选出A549细胞和支气管上皮细胞系HBE间表达水平显著差异的蛋白,并且利用免疫印迹方法对筛选的标记物蛋白进行验证。结果:筛选出21个差异蛋白,涉及到细胞的代谢、蛋白质修饰、细胞运动,通道蛋白和信号转导调控等方面。鉴定并且验证在A549细胞中显著高表达热休克蛋白27(HSPB1)。结论:肺腺癌细胞系与正常支气管上皮细胞系蛋白质表达存在显著差异,其中肺腺癌中高表达HSPB1可能在肺腺癌癌变过程中发挥重要作用,本结果为进一步寻找肺腺癌癌变蛋白标志物奠定了基础。 展开更多

关键词 A549细胞 hbe细胞 蛋白质组 热休克蛋白质27

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三乙胺对HBE细胞的氧化损伤作用 被引量：2

6

作者 谢金明 肖卫 付文磊 《工业卫生与职业病》 CAS 2016年第3期182-185,共4页

目的探讨三乙胺对永生化人支气管上皮细胞(HBE)的氧化损伤作用。方法体外培养HBE细胞,在6个不同染毒浓度(0、5、7.5、10、15、20mmol/L)和4个不同染毒时间段(6、12、24、48h)的条件下染毒HBE细胞,CCK-8试剂盒检测三乙胺对HBE细胞存活率... 目的探讨三乙胺对永生化人支气管上皮细胞(HBE)的氧化损伤作用。方法体外培养HBE细胞,在6个不同染毒浓度(0、5、7.5、10、15、20mmol/L)和4个不同染毒时间段(6、12、24、48h)的条件下染毒HBE细胞,CCK-8试剂盒检测三乙胺对HBE细胞存活率的影响;收集细胞后装载探针检测细胞活性氧(ROS)的含量;同时通过单细胞凝胶电泳试验(SCGE)检测细胞DNA链断裂情况。结果在相同染毒时间段内,HBE细胞的存活率随着染毒浓度的增加而下降,各浓度组与对照组的差异有统计学意义(P<0.05),且呈明显的剂量-效应关系;随着染毒浓度的增加,HBE细胞ROS含量明显上升,与相同染毒时间段对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);SCGE实验结果表明,各组HBE细胞Olive尾距随染毒浓度增加明显增加,呈现明显的剂量—反应关系,与相同染毒时间段对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论三乙胺可降低HBE细胞存活率,诱导HBE细胞产生自由基从而引起DNA损伤。 展开更多

关键词 三乙胺 hbe细胞 氧化损伤 DNA损伤

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氡对HBE细胞氧化损伤的研究 被引量：2

7

作者 刘星 聂继华 +6 位作者 陈志海 金洹宇 陈秋 周新文 焦旸 童建 安艳 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 2013年第2期19-22,共4页

探讨不同浓度氡对永生化人支气管上皮细胞(HBE)氧化损伤的影响。体外培养HBE细胞,在氡浓度一定的条件下以不同染毒时间(20000Bq/m3,10min、20min、40min)染毒HBE细胞,检测氡对HBE细胞活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的... 探讨不同浓度氡对永生化人支气管上皮细胞(HBE)氧化损伤的影响。体外培养HBE细胞,在氡浓度一定的条件下以不同染毒时间(20000Bq/m3,10min、20min、40min)染毒HBE细胞,检测氡对HBE细胞活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量的影响,同时通过单细胞凝胶电泳(SCGE)检测细胞DNA链断裂情况。结果表明:随染毒时间延长,MDA和ROS含量明显上升(p<0.05),SOD活力明显下降(p<0.05),SCGE研究发现,各组HBE细胞Olive尾距随染毒时间延长显著增加,且均呈现明显的剂量反应关系。氡可诱导HBE细胞产生大量自由基造成DNA损伤,从而对HBE细胞产生毒效应。 展开更多

关键词 氡 hbe细胞 氧化应激 DNA损伤

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亚砷酸钠对人支气管上皮细胞的氧化损伤作用 被引量：3

8

作者 刘星 聂继华 +6 位作者 陈志海 金洹宇 陈秋 周新文 焦旸 童建 安艳 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期870-872,共3页

目的探讨不同浓度亚砷酸钠对永生化人支气管上皮细胞氧化损伤的影响。方法体外培养永生化人支气管上皮(HBE)细胞,加入终浓度为0～50 000μmol/L的亚砷酸钠溶液暴露24 h,测定细胞活性;加入终浓度为0～6μmol/L的亚砷酸钠溶液暴露24 h,测... 目的探讨不同浓度亚砷酸钠对永生化人支气管上皮细胞氧化损伤的影响。方法体外培养永生化人支气管上皮(HBE)细胞,加入终浓度为0～50 000μmol/L的亚砷酸钠溶液暴露24 h,测定细胞活性;加入终浓度为0～6μmol/L的亚砷酸钠溶液暴露24 h,测定活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力及细胞DNA链断裂情况。结果与对照组比较,各浓度亚砷酸钠染毒组HBE细胞内ROS、MDA含量和Olive尾矩均显著升高,细胞存活率和SOD活力均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,HBE细胞内MDA、ROS含量和Olive尾矩均呈明显的上升趋势(P<0.05),细胞存活率和SOD活力均呈明显的下降趋势(P<0.05)。结论亚砷酸钠可以诱导HBE细胞氧化损伤增加,提示氧化应激可能是亚砷酸钠致HBE细胞毒作用机制之一。 展开更多

关键词 亚砷酸钠 hbe细胞 氧化应激 DNA损伤

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人支气管永生化HBE细胞形态计量学分析

9

作者 江闰德 申洪 《数理医药学杂志》 2010年第3期266-269,共4页

目的:探索人支气管永生化HBE细胞超微结构的三维形态结构特征并与人肺腺癌A549细胞进行比较分析。方法:按常规方法制备HBE细胞与A549细胞的透射电镜样品。用Image-ProPlus图像分析软件设计网格测试系统,应用体视学原理和方法,分别测算HB... 目的:探索人支气管永生化HBE细胞超微结构的三维形态结构特征并与人肺腺癌A549细胞进行比较分析。方法:按常规方法制备HBE细胞与A549细胞的透射电镜样品。用Image-ProPlus图像分析软件设计网格测试系统,应用体视学原理和方法,分别测算HBE细胞和A549细胞核的体视学参数包括核体密度(VVn)、核表面积密度(SVn)、核表面积与体积比(RSVn)、核数密度(NVn)、核平均体积(vn)、核平均表面积(sn)和核浆比(Rnp);核仁的体视学参数包括核仁体密度(VVnu)、核仁表面积密度(SVnu)、核仁表面积与体积比(RSVnu)、核仁数密度(NVnu)、核仁平均体积(vnu)、核仁平均表面积(snu)等共13种体视学参数的数值。结果:①HBE细胞核平均体积(vn)和核平均表面积(sn)分别为206.74μm3和184.75μm2,明显小于A549细胞;②HBE细胞核及核仁的表面积与体积比(RSVn)分别为0.9192和2.3536,均大于A549细胞;③HBE细胞核浆比为0.3829,小于A549细胞。结论:HBE细胞核及核仁的形态与肺腺癌A549细胞有差异,其核和核仁的表面积、体积及形态大小均小于A549细胞。 展开更多

关键词 hbe细胞 A549细胞 形态计量学 图象分析

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铀矿尘对人正常支气管上皮细胞株细胞凋亡相关蛋白表达的影响

10

作者 李躲 王守凤 +2 位作者 宋凤梅 彭媛娇 贺性鹏 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期480-482,共3页

目的探讨铀矿尘对人正常支气管上皮细胞株HBE细胞凋亡相关蛋白表达的影响及凋亡的可能机制。方法体外培养HBE细胞,分为对照组、铀矿尘组（12.5、25、50、100、200μg/ml）。细胞染毒12 h后,用MTT法检测HBE细胞存活率,流式细胞仪检测细... 目的探讨铀矿尘对人正常支气管上皮细胞株HBE细胞凋亡相关蛋白表达的影响及凋亡的可能机制。方法体外培养HBE细胞,分为对照组、铀矿尘组（12.5、25、50、100、200μg/ml）。细胞染毒12 h后,用MTT法检测HBE细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）蛋白、Bcl-2相关X蛋白（Bax）及细胞色素C（CytC）、半胱天冬酶-3（caspase-3）和半胱天冬酶-9（caspase-9）的蛋白表达。结果当铀矿尘浓度为25~200μg/ml时,HBE细胞存活率均低于对照组,细胞凋亡率和坏死率均高于对照组,差异均有统计学意义（P〈0.01）。随着铀矿尘浓度的升高,HBE细胞Bax、Bcl-2、CytC、caspase-3、caspase-9蛋白表达量逐渐增加,均高于对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论铀矿尘对HBE细胞的凋亡作用可能是通过线粒体途径实现的。 展开更多

关键词 铀矿尘 hbe细胞 细胞凋亡 线粒体

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姜黄素通过调控PPARγ/NF-κB信号通路减轻CSE诱导的人气道上皮细胞氧化应激反应 被引量：10

11

作者 朱涛 施婵妹 +8 位作者 李鹤 何婧 杨艳丽 王勤 邓欣雨 吴砚樵 王静 赵燕 邓火金 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1209-1214,共6页

目的探讨姜黄素对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的人气道上皮16HBE细胞氧化应激和炎症反应的抑制作用及相关的分子机制。方法使用shRNA-PPARγ(shPPARγ)转染人气道上皮16HBE细胞下调PPARγ表达。将16HBE细胞分为5组即对照组、姜黄素组、CSE... 目的探讨姜黄素对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的人气道上皮16HBE细胞氧化应激和炎症反应的抑制作用及相关的分子机制。方法使用shRNA-PPARγ(shPPARγ)转染人气道上皮16HBE细胞下调PPARγ表达。将16HBE细胞分为5组即对照组、姜黄素组、CSE组、CSE+姜黄素组和CSE+姜黄素+shRNA-PPARγ组。在0 h和24 h时使用MTT法对细胞活性进行检测;干预24 h后使用q PCR对细胞TNF-α、iNOS和PPARγm RNA表达进行检测,采用western blot检测16HBE细胞中iNOS、PPARγ蛋白表达以及NF-κB p65磷酸化水平。结果 16HBE细胞在干预24 h后各组之间细胞活性未有明显统计学差异(P>0.05)。与对照组相比较,CSE干预24 h后PPARγ表达水平明显降低,TNF-α、iNOS表达及NF-κB p65磷酸化水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。但CSE组较CSE+姜黄素组和CSE+姜黄素+shPPARγ组PPARγ表达水平下降以及TNF-α、iNOS表达和NF-κB p65磷酸化水平升高更显著,差异均有统计学意义(P<0.05);且CSE+姜黄素+shPPARγ组较CSE+姜黄素组PPARγ表达水平下降以及TNF-α、iNOS表达和NF-κB p65磷酸化水平升高更明显,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论姜黄素可以通过抑制PPARγ/NF-κB信号通路减轻CSE诱导的人气道上皮16HBE细胞的炎症反应及氧化应激。为姜黄素应用于慢性阻塞性肺疾病等疾病的临床治疗奠定了理论基础。 展开更多

关键词 CSE 16hbe细胞 氧化应激 PPARΓ NF-ΚB

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甲基丙烯酸缩水甘油酯通过ERK/MMP14信号通路影响16HBE细胞恶性转化的研究

12

作者 崔旭芳 王全凯 +5 位作者 金惠萍 李昕苇 顾轶婷 乌瀚宝栎尔 康同影 许建宁 《癌变．畸变．突变》 CAS 2024年第4期261-267,共7页

目的:探讨甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)是否通过ERK/MMP14信号通路影响人支气管上皮(16HBE)细胞的恶性转化,为进一步探究GMA诱导16HBE细胞恶性转化的可能分子机制提供线索。方法:8μg/mL的GMA重复染毒16HBE细胞为GMA处理组,等体积二甲基亚... 目的:探讨甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)是否通过ERK/MMP14信号通路影响人支气管上皮(16HBE)细胞的恶性转化,为进一步探究GMA诱导16HBE细胞恶性转化的可能分子机制提供线索。方法:8μg/mL的GMA重复染毒16HBE细胞为GMA处理组,等体积二甲基亚砜(DMSO)处理细胞作为溶剂对照组,处理后的细胞传代培养。收获第40代恶性转化16HBE细胞,采用软琼脂集落形成实验确证细胞的恶性转化程度;细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验检测细胞的迁移能力;Western blot实验用于验证MMP14蛋白在恶性转化16HBE细胞中的表达情况,并检测ERK1/2及其磷酸化蛋白的表达水平;采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测两组细胞中MMP14和ERK通路关键信号分子ERK1、ERK2的mRNA表达水平。结果:GMA处理组细胞在软琼脂中形成的集落数显著多于DMSO对照组(P<0.05)。细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验结果显示,GMA诱导的恶性转化16HBE细胞的整体和个体迁移能力均显著大于DMSO对照组细胞(P<0.05)。与DMSO对照组相比,恶性转化16HBE细胞中MMP14 m RNA和蛋白的表达水平升高;p-ERK1/2蛋白和ERK1 mRNA的表达水平亦升高,差异具有统计学意义(P<0.05),而ERK2 mRNA的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:GMA诱导16HBE细胞的恶性转化过程可能与ERK/MMP14信号通路的激活相关,本研究结果为GMA诱导16HBE细胞恶性转化的致癌机制研究提供了新的线索。 展开更多

关键词 甲基丙烯酸缩水甘油酯 16hbe细胞 基质金属蛋白酶14 细胞外调节蛋白激酶1/2

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miR-15a-5p调控Wnt通路在百草枯致肺纤维化中的机制

13

作者 王静 姬晓航 +7 位作者 王蒙蒙 张炜 丁伟超 陈娟 冯靖 孟健康 孙兆瑞 聂时南 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1128-1133,共6页

目的探讨miR-15a-5p调控Wnt信号通路对PQ致肺纤维化的影响及分子机制。方法构建PQ诱导的16HBE细胞模型,采用高通量miRNA芯片技术和RT-qPCR筛选表达差异明显的miR-15a-5p进行实验。实验分组为:NC组(对照组):无特殊处理;PQ组:50μmol/L P... 目的探讨miR-15a-5p调控Wnt信号通路对PQ致肺纤维化的影响及分子机制。方法构建PQ诱导的16HBE细胞模型,采用高通量miRNA芯片技术和RT-qPCR筛选表达差异明显的miR-15a-5p进行实验。实验分组为:NC组(对照组):无特殊处理;PQ组:50μmol/L PQ处理细胞72 h;miR-15a-5p组:转染miR-15a-5p过表达慢病毒的16HBE稳转株;miR-15a-5p+PQ组:50μmol/L PQ处理稳转株细胞72 h。RT-qPCR和Western blot检测Wnt通路相关基因Wnt3α和β-catenin、成纤维细胞标记基因Collagen I、Vimentin和αSMA,上皮细胞标记基因Occludin和CK18表达情况。构建PQ诱导的肺纤维化小鼠模型,采用Western blot、HE染色和免疫组织化学检测蛋白表达及肺组织损伤情况。数据以均数±标准差(x±s)表示,采用独立样本t检验分析两组间数据。结果细胞损伤模型中,Wnt3α、β-catenin、成纤维细胞标记基因Collagen I、Vimentin和αSMA表达显著上调(P<0.05),上皮细胞标记基因Occludin和CK18显著下调(P<0.05),过表达miR-15a-5p可靶向抑制Wnt3α表达并缓解PQ诱导的EMT进程。动物模型中,Wnt3α、β-catenin、成纤维细胞标记基因Collagen I、Vimentin和αSMA蛋白水平显著升高(P<0.01),肺组织结构紊乱并发生纤维化,过表达miR-15a-5p可抑制Wnt3α蛋白表达水平(P<0.05)且改善肺组织损伤。结论miR-15a-5p可通过调控Wnt3α/β-catenin信号通路改善PQ导致的肺损伤,从而抑制肺纤维化的发生发展。 展开更多

关键词 miRNA miR-15a-5p 百草枯 肺纤维化 16hbe细胞 Wnt信号通路 Wnt3α β-catenin EMT

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表皮生长因子受体在苯并（a）芘致肺肿瘤中的表达变化 被引量：5

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作者 古盼 刘海龙 +5 位作者 邓燕霞 高玮 刘建军 黄新凤 李习艺 黄海燕 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期257-261,共5页

目的 探讨表皮生长因子受体（EGFR）在苯并（a）芘（BaP）致肺肿瘤中的表达变化.方法 利用课题组前期构建的BaP诱导的人支气管上皮细胞恶性转化模型（BTC）作为研究对象,采用细胞免疫荧光和Western blot法分析比较恶性转化细胞（BTC细... 目的 探讨表皮生长因子受体（EGFR）在苯并（a）芘（BaP）致肺肿瘤中的表达变化.方法 利用课题组前期构建的BaP诱导的人支气管上皮细胞恶性转化模型（BTC）作为研究对象,采用细胞免疫荧光和Western blot法分析比较恶性转化细胞（BTC细胞）和同期未转化对照组细胞（16HBE细胞）中的EGFR蛋白表达变化.将健康雌性SPF级SD大鼠36只,将其以单纯随机法分为2组,每组18只.染毒组以肺穿刺法注射10 mg/ml玉米油-BaP,每只浓度0.2 ml,构建SD雌性大鼠肺肿瘤模型,收集肺脏组织,利用组织免疫荧光和Western blot法分析肺脏组织中EGFR蛋白的表达变化.采用t检验对EGFR蛋白相对灰度值进行分析.结果 细胞免疫荧光结果显示,与正常16HBE细胞比较,BTC细胞中EGFR蛋白的荧光强度较高;进一步利用Western blot检测EGFR的蛋白表达发现,对照组相对灰度值为1.04±0.13,BTC细胞的相对灰度值为2.32±0.12,BTC细胞的EGFR蛋白的表达水平较高,差异有统计学意义（t=12.39,P〈0.001）.SD大鼠肺肿瘤模型检测发现,染毒组大鼠肺组织存在弥漫性的肺泡间隔增厚、肺泡壁破坏以及肺泡融合等,肺组织内可见较大肿块,病理学分析为未分化细胞癌,提示肺肿瘤模型建立成功.免疫荧光结果显示,与对照组相比,BaP诱导的动物肺癌模型的肺组织中EGFR的荧光强度明显增强;Western blot分析结果证实,对照组和染毒组EGFR蛋白的相对灰度值分别为0.21±0.03、1.30±0.07,染毒组动物肺肿瘤组织中EGFR蛋白的表达水平高于对照组,差异有统计学意义（t=12.84,P〈0.001）.结论 在BaP致癌模型中,EGFR蛋白表达上调,EGFR在BaP致癌中可能发挥重要作用. 展开更多

关键词 苯并芘 肺肿瘤 表皮生长因子受体蛋白 16hbe细胞

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甲基丙烯酸环氧丙酯诱导的恶性转化16HBE细胞中泛素化过程抑制对蛋白质CD44和MMP14的影响 被引量：1

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作者 金惠萍 王全凯 +5 位作者 顾轶婷 乌瀚宝栎尔 李昕苇 崔旭芳 张林媛 许建宁 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期871-876,共6页

目的观察甲基丙烯酸环氧丙酯(glycidyl methacrylate,GMA)诱导的恶性转化人支气管上皮(human bronchial epithelial,16HBE)细胞中泛素化过程抑制对I型跨膜糖蛋白(CD44 antigen,CD44)和基质金属蛋白酶-14(matrix metalloproteinase-14,MM... 目的观察甲基丙烯酸环氧丙酯(glycidyl methacrylate,GMA)诱导的恶性转化人支气管上皮(human bronchial epithelial,16HBE)细胞中泛素化过程抑制对I型跨膜糖蛋白(CD44 antigen,CD44)和基质金属蛋白酶-14(matrix metalloproteinase-14,MMP14)表达的影响。方法成功复苏的16HBE细胞使用终浓度为8μg/mL GMA染毒作为处理组,1μg/mL二甲基亚砜作为溶剂对照组,每次染毒72 h,间隔24 h后再次染毒,重复染毒3次后,分别进行传代培养。取第40代(P40)GMA处理组和同代龄溶剂对照组细胞进行软琼脂克隆形成实验和刀豆凝集素A(concanavalin A,ConA)凝集实验以确定GMA诱导的第40代16HBE细胞已具备恶性转化细胞特征;使用5、10、20、40和60μmol/L漆树酸抑制GMA诱导的恶性转化16HBE细胞的泛素化过程,采用蛋白质免疫印迹技术(Western blotting)检测CD44、MMP14蛋白表达的变化,实时荧光定量PCR技术(qPCR)检测CD44、MMP14、TFAP2A转录水平的变化。结果(1)克隆形成实验中,溶剂对照组细胞形成的克隆数为22个,GMA处理组恶性转化细胞形成的克隆数为208个;ConA凝集实验中,溶剂对照组细胞在ConA溶液中均匀散布,30 min内未发生明显凝集,而GMA处理组细胞在5 min时即发生明显凝集,凝集细胞团块较大且凝集速度较快,凝集敏感性增加;(2)不同程度抑制GMA诱导的恶性转化16HBE细胞泛素化过程后,与未处理组相比,GMA诱导的恶性转化16HBE细胞中CD44、MMP14蛋白表达水平均呈降低趋势(P<0.05);MMP14、CD44的转录水平随抑制剂浓度增加而降低(P<0.05),上游转录因子TFAP2A的转录水平也同时降低(P<0.05)。结论抑制细胞泛素化过程可抑制GMA诱导的恶性转化16HBE细胞中CD44和MMP14的蛋白表达。 展开更多

关键词 甲基丙烯酸环氧丙酯 16hbe细胞 恶性转化 泛素化过程

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人支气管上皮细胞聚-ADP-核糖水解酶缺陷细胞株的构建及鉴定 被引量：5

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作者 蔡剑锋 黄海燕 +8 位作者 刘建军 杨淋清 吴德生 夏菠 毛吉炎 胡恭华 刘庆成 李习艺 庄志雄 《毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期415-419,共5页

目的建立高效、稳定的人支气管上皮细胞(16HBE)的聚-ADP-核糖水解酶(PARG)缺陷细胞株,为研究PARG在环境毒物诱导细胞损伤中的作用及了解聚-ADP-核糖基化反应的功能奠定基础。方法设计并合成能编码特异靶向人PARG基因的短发夹RNA(shRNA)... 目的建立高效、稳定的人支气管上皮细胞(16HBE)的聚-ADP-核糖水解酶(PARG)缺陷细胞株,为研究PARG在环境毒物诱导细胞损伤中的作用及了解聚-ADP-核糖基化反应的功能奠定基础。方法设计并合成能编码特异靶向人PARG基因的短发夹RNA(shRNA)的oligo DNA,将之插入到真核表达载体plko.1-puro中构建重组质粒,鉴定成功后转染至正常的16HBE细胞中,RT-PCR及western blot检测完成筛选细胞株的PARG基因及蛋白水平的表达,并使用流式细胞仪分析构建成功细胞株的生长周期变化。结果重组质粒测序鉴定正确;RT-PCR及western blot检测显示最终选定的缺陷细胞株干扰效率达80%以上,效果显著(与正常细胞相比,P<0.05);且缺陷细胞株的生长周期未见明显变化(P>0.05)。结论该研究成功构建了高效、稳定的人支气管上皮细胞的PARG缺陷细胞株,为阐明ADP-核糖基化反应的作用机制及其生物学效应提供了可靠的平台。 展开更多

关键词 聚-ADP-核糖基化 聚-ADP-核糖水解酶(PARG) RNA干扰 慢病毒载体 人支气管上皮细胞(16hbe细胞)

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ALDH3A1通过IL-6/STAT3信号通路激活GMA诱导的恶性转化16HBE细胞上皮间充质转化

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作者 王全凯 金惠萍 +5 位作者 李昕苇 崔旭芳 顾轶婷 乌瀚宝栎尔 康同影 许建宁 《癌变．畸变．突变》 CAS 2023年第6期405-411,共7页

目的:甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)作为一种广泛应用于各种复合材料合成和改性的化学物,已被国际癌症研究机构(IARC)归类为2A类致癌物,但其具体的致癌机制仍不明确。本研究拟探讨GMA诱导16HBE细胞发生恶性转化的关键分子机制是否与醛脱氢... 目的:甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)作为一种广泛应用于各种复合材料合成和改性的化学物,已被国际癌症研究机构(IARC)归类为2A类致癌物,但其具体的致癌机制仍不明确。本研究拟探讨GMA诱导16HBE细胞发生恶性转化的关键分子机制是否与醛脱氢酶3A1(ALDH3A1)的表达变化相关。方法:在课题组前期建立的GMA诱导的恶性转化16HBE细胞模型中使用瞬时转染技术过表达ALDH3A1后,分别通过Western blot和qPCR法分析IL-6/磷酸化转录3激活剂(STAT3)通路及上皮间充质转化(EMT)过程标志物E钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶3(MMP3)、Snail的蛋白和mRNA表达情况。结果:Western blot和qPCR检测结果表明,与对照组相比,ALDH3A1过表达组细胞中E-cadherin表达增加,而IL-6、STAT3、p-STAT3、MMP3及Snail均表达降低(P<0.05),同时MMP3、Snail、Vimentin转录水平下调(P<0.05)。ALDH3A1通过抑制IL-6/STAT3通路激活,减弱了GMA诱导的恶性转化16HBE细胞中EMT过程多个关键蛋白的表达。结论:ALDH3A1与GMA诱导的16HBE细胞恶性转化过程密切相关,并且通过IL-6/STAT3通路激活促使细胞上皮间充质转化能力增强。本研究的结果将有助于阐明GMA的致癌机制,并为GMA暴露的健康效应评估提供了潜在的生物标志物。 展开更多

关键词 甲基丙烯酸缩水甘油酯 16hbe细胞 醛脱氢酶3A1 EMT过程 IL-6/STAT3信号通路

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苦酒汤配方工艺优化及其药效机制

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作者 张众 田乐 +1 位作者 赵莹 潘志 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1506-1511,共6页

目的 优化苦酒汤加工工艺与配方,并探究其药效及作用机制。方法 采用单因素结合正交试验对苦酒汤配方进行优化,以抑菌圈平均直径作为苦酒汤配方优化评价指标。制备空白组,模型组,阳性药组,苦酒汤低、中、高剂量组及苦酒汤古方组大鼠含... 目的 优化苦酒汤加工工艺与配方,并探究其药效及作用机制。方法 采用单因素结合正交试验对苦酒汤配方进行优化,以抑菌圈平均直径作为苦酒汤配方优化评价指标。制备空白组,模型组,阳性药组,苦酒汤低、中、高剂量组及苦酒汤古方组大鼠含药血清,体外培养人支气管上皮细胞(16HBE),以20μg·mL^(-1)的脂多糖及10%含药血清进行干预,CCK-8法检测各组含药血清对脂多糖诱导的16HBE细胞增殖活力的影响,ELISA检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)的含量,PCR检测P65、IκBαmRNA的表达。结果 苦酒汤最优配方为米醋60 mL,鸡蛋清30 g,清半夏10 g,凤凰衣1 g。与空白组比较,模型组16HBE增殖活力下降(P<0.01),TNF-α、IL-6和IL-1β含量升高(P<0.01),P65 mRNA表达上调,IκBα mRNA表达下调(P<0.01)。与模型组比较,苦酒汤中、高剂量组及古方组细胞增殖活力上升(P<0.01),TNF-α、IL-6、IL-1β含量下降(P<0.01),P65 mRNA表达下调,IκBα mRNA表达上调(P<0.01)。与苦酒汤古方组比较,苦酒汤高剂量组TNF-α、IL-1β含量下降(P<0.01),P65 mRNA表达下调(P<0.01)。结论 经工艺优化后的苦酒汤制备方便,用量明确,其含药血清能够减轻脂多糖诱导的16HBE细胞炎症反应,药效优于原方,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。 展开更多

关键词 苦酒汤 工艺优化 16hbe细胞 慢性咽炎

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基于网络药理学和体外实验验证大蒜含硫化合物蒜氨酸抑制慢性气道炎症的作用机制研究

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作者 王秋雨 李新霞 +2 位作者 兰怡 毛新民 马红梅 《中南药学》 CAS 2023年第5期1170-1176,共7页

目的通过网络药理学、分子对接模拟和体外细胞实验探讨蒜氨酸治疗慢性气道炎症的相关作用机制。方法运用数据库整理分析蒜氨酸与疾病共同靶点,进行KEGG通路富集分析,构建可视化药物-靶点-通路-疾病网络图。利用分子对接技术模拟获得相... 目的通过网络药理学、分子对接模拟和体外细胞实验探讨蒜氨酸治疗慢性气道炎症的相关作用机制。方法运用数据库整理分析蒜氨酸与疾病共同靶点,进行KEGG通路富集分析,构建可视化药物-靶点-通路-疾病网络图。利用分子对接技术模拟获得相关通路蛋白与蒜氨酸结合能。通过MTT实验检测蒜氨酸对16HBE细胞活性的影响,并利用流式细胞术观察蒜氨酸对细胞氧化应激的保护作用,采用ELISA法检测蒜氨酸对细胞上清液中IL-6、TNF-α表达的影响、Western blot法检测各组中IL-6、TGF-β1、PPARα蛋白表达水平。结果蒜氨酸与疾病关键潜在靶点有EGFR、MMP9、AKT1、MAPK1、PPARα等,KEGG通路富集分析得到主要信号通路有MAPK信号通路和PPAR信号通路等,分子对接实验中蒜氨酸与MMP9、AKT1、STAT、PPARα结合能稳定,小于-20.92 kJ·mol^(-1)。体外细胞实验结果表明蒜氨酸对细胞无明显毒性作用,结果显示蒜氨酸可以明显降低炎症状态下细胞内过多的活性氧水平,上调PPARα表达,并显著下调炎症因子IL-6、TNF-α与TGF-β1的表达。结论蒜氨酸能改善因香烟烟雾与脂多糖刺激下16HBE细胞的氧化应激和炎症反应,可能通过调控PPARα信号通路改善细胞炎症损伤状态,从而恢复细胞内正常的抗氧化、炎症反应。 展开更多

关键词 16hbe细胞 网络药理学 分子对接 活性氧 炎症因子 蒜氨酸

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苯并[a]芘恶性转化细胞T-16HBE-C1与非转化细胞16HBE基因表达谱差异分析 被引量：1

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作者 郝明媚 王裕 +7 位作者 李璐迪 付大维 陈洁 周川 付娟玲 赵鹏 常兵 周宗灿 《毒理学杂志》 CAS CSCD 2019年第6期460-464,共5页

目的比较苯并[a]芘(BaP)恶性转化细胞T-16HBE-C1与非转化细胞16HBE全基因组表达谱差异,为进一步阐明BaP致癌机制和筛选BaP致癌生物学标志提供线索。方法选择BaP恶性转化细胞T-16HBE-C1与非转化细胞16HBE作为BaP致癌机制研究模型,利用人... 目的比较苯并[a]芘(BaP)恶性转化细胞T-16HBE-C1与非转化细胞16HBE全基因组表达谱差异,为进一步阐明BaP致癌机制和筛选BaP致癌生物学标志提供线索。方法选择BaP恶性转化细胞T-16HBE-C1与非转化细胞16HBE作为BaP致癌机制研究模型,利用人全基因组表达谱芯片Human mRNA OneArray?HOA v7 Microarrays筛选细胞间差异表达基因。继而对差异表达基因进行生物信息学分析,包括利用DAVID数据库对差异表达基因进行GO分析和KEGG通路分析。结果人全基因组表达谱芯片共发现689个基因在T-16HBE-C1和16HBE细胞中表达差异在2倍以上(P<0.05),其中339个基因在T-16HBE-C1细胞中的表达高于16HBE细胞,350个基因在T-16HBE-C1细胞中的表达低于16HBE细胞。差异表达基因涉及多种生物学改变,主要包括肿瘤信号转导、细胞增殖与凋亡、细胞代谢和细胞黏附等。结论人支气管上皮16HBE细胞经BaP恶性转化后基因表达谱发生明显改变,差异表达基因可能在BaP致癌中发挥作用,并可能作为BaP致癌的潜在生物学标志。 展开更多

关键词 苯并[A]芘 全基因表达谱 T-16hbe-C1细胞 16hbe细胞

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