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极端嗜热菌Thermus thermophilus HB8中天冬氨酸转氨酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质研究 被引量：3
1
作者 周华 洪媛 +1 位作者 严明 许琳 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期278-283,共6页
为获得具有热稳定性的天冬氨酸转氨酶,从极端嗜热细菌Thermus thermophilus HB8中克隆得到天冬氨酸转氨酶基因aspC,并在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中进行表达,发现在Rosetta(DE3)中具有较高的表达量。重组酶的最适反应pH是7.0,37... 为获得具有热稳定性的天冬氨酸转氨酶,从极端嗜热细菌Thermus thermophilus HB8中克隆得到天冬氨酸转氨酶基因aspC,并在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中进行表达,发现在Rosetta(DE3)中具有较高的表达量。重组酶的最适反应pH是7.0,37℃下在pH8～10的缓冲液中保温1h酶活几乎不改变。重组酶反应的最适温度为75℃,酶活稳定的温度范围为25～55℃。重组酶在65℃时半衰期为3.5h,75℃时为2.5h。重组酶的KmKG为7.559mmol/L,VmaxKG为0.086mmol/(L·min),KmAsp为2.031mmol/L,VmaxAsp为0·024mmol/(L·min)。Ca2+、Fe3+、Mn2+等金属离子对酶活性有微弱抑制作用。 展开更多
关键词 天冬氨酸转氨酶 THERMUS THERMOPHILUS hb8 表达 纯化 酶学性质
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嗜热菌Thermus thermophilus HB8铁硫簇合成途径中IscA和IscU蛋白的表达、纯化和功能研究
2
作者 吴琦 谭菲 刘晓晴 《首都师范大学学报（自然科学版）》 2014年第2期49-56,共8页
Fe-S簇可参与电子传递和基因调节等过程.实验以嗜热菌Thermus thermophilus HB8基因组为模板,通过PCR扩增获得Fe-S簇ISC系统生物合成途径中的IscA和IscU基因,并克隆连接到表达载体pET-28a(+)上.重组质粒转化E.coli Rosetta(DE3)进行表达... Fe-S簇可参与电子传递和基因调节等过程.实验以嗜热菌Thermus thermophilus HB8基因组为模板,通过PCR扩增获得Fe-S簇ISC系统生物合成途径中的IscA和IscU基因,并克隆连接到表达载体pET-28a(+)上.重组质粒转化E.coli Rosetta(DE3)进行表达,用亲和层析纯化得到浓度和纯度都较高的IscA和IscU蛋白.SDS-PAGE分析,证实其分子量大小分别为13.7KD和14.8KD.实验确定IscA是单聚体,IscA上能形成铁硫簇,IscU上不能形成铁硫簇.在厌氧条件下,RNA的量能提高1.5倍,但是IscA和IscU的表达量都会降低,说明厌氧对这两个基因有损伤. 展开更多
关键词 嗜热菌Thermus THERMOPHILUS hb8 克隆 体外重组.
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嗜热栖热菌HB 8耐热α-葡萄糖苷酶的提纯和性质 被引量：4
3
作者 杨寿钧 张树政 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第1期23-29,共7页
嗜热栖热菌 HB 8(Thermus thermophilus HB 8)的耐热α-葡萄糖苷酶(α-glucosidaseEC.3.2.1.20)经硫酸铵分步沉淀、DEAE-纤维素柱层析和垂直板制备凝胶电泳提纯,经盘状凝胶电泳鉴定为单一区带,比活提高17倍。酶作用最适温度80℃,最适 pH... 嗜热栖热菌 HB 8(Thermus thermophilus HB 8)的耐热α-葡萄糖苷酶(α-glucosidaseEC.3.2.1.20)经硫酸铵分步沉淀、DEAE-纤维素柱层析和垂直板制备凝胶电泳提纯,经盘状凝胶电泳鉴定为单一区带,比活提高17倍。酶作用最适温度80℃,最适 pH5.8,分子量67000,等电点 pI 为4.5。该酶能够水解对硝基酚-α-D-葡萄糖苷(PNPG)、蔗糖和麦芽糖,但不水解纤维二糖、蜜二糖、可溶性淀粉。酶作用于 PNPG 的米氏常数(K_m)为0.4mmol/L,最大反应速度 V_(max)为0.29umol·min^(-1)·mg^(-1)。金属离子 Mg^(2+)、Mn^(2+)、Ca^(2+)和 Ba^(2+)对酶有激活作用,Hg^(2+)和 Cu^(2+)有强烈抑制作用。酶表现出极好的热稳定性,在90℃保温10小时后,仍保留90%的原始酶活力,在95℃的失活半寿期(t_(1/2)为108分钟,经蛋白质侧链化学修饰研究表明,羧基和组氨酸残基为其表现活力所必需。 展开更多
关键词 Α-葡萄糖苷酶 嗜热栖热菌
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嗜热菌HB8 Fe-S簇生物合成相关酶SufS与SufE重组酶的体外复合体功能
4
作者 张宗棋 田甜 +1 位作者 王妮莎 刘晓晴 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期496-502,共7页
Fe-S簇在细胞的生物学过程中发挥重要作用，参与电子传递和基因调节等过程．以嗜热菌HB8基因组为模板，通过PCR扩增获得Fe—S簇SUF系统生物合成途径中的sufS与sufE两个基因．将目的基因分别连接到表达载体pET28a和pGEX-6P-1上，构建重... Fe-S簇在细胞的生物学过程中发挥重要作用，参与电子传递和基因调节等过程．以嗜热菌HB8基因组为模板，通过PCR扩增获得Fe—S簇SUF系统生物合成途径中的sufS与sufE两个基因．将目的基因分别连接到表达载体pET28a和pGEX-6P-1上，构建重组质粒,CS-pET28a和sufE-pGEX-6P-1．重组质粒转化E．coli BL21（DE3）菌株进行蛋白质表达及亲和层析纯化．研究证明，sufS具有脱硫酶活性，而SufE的存在可增强其活性．体外重组实验表明，在60℃孵育SufS和SufE1．0～2．5h，其复合体脱硫酶活性约是单体sufS的2倍，但两者相互作用时间短暂．若通过交联剂Mts—Aft-Biotin使SufS与sufE共价连接，此时SufsE酶活性是SufS的6倍左右，并可持续72h． 展开更多
关键词 嗜热菌hb8 FE S簇 交联剂 重组
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利用重组嗜热栖热菌尿苷-胞苷激酶生产尿苷酸 被引量：1
5
作者 范晓光 贾子樊 +5 位作者 李国梁 韩洪军 高立栋 张顺棠 李燕军 陈宁 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期7-12,共6页
尿苷-胞苷激酶(Uridine/cytidine kinase,UCK)作为生物体核苷酸代谢补偿途径中的重要催化剂,可以催化尿苷和胞苷磷酸化成为尿苷酸(5'-uridine monophosphate,5'-UMP)和胞苷酸(5'-cytidine monophosphate,5'-CMP)。利用... 尿苷-胞苷激酶(Uridine/cytidine kinase,UCK)作为生物体核苷酸代谢补偿途径中的重要催化剂,可以催化尿苷和胞苷磷酸化成为尿苷酸(5'-uridine monophosphate,5'-UMP)和胞苷酸(5'-cytidine monophosphate,5'-CMP)。利用大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)分别成功克隆表达了来源于嗜热栖热菌(Thermus thermophilus HB8)以及枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 168)的尿苷-胞苷激酶。对比分析了不同重组尿苷-胞苷激酶的催化特性发现,来源于嗜热栖热菌的尿苷-胞苷激酶能以鸟苷三磷酸(Guanosine 5'-triphosphate,GTP)或者腺苷三磷酸(Adenosine 5'-triphosphate,ATP)作为磷酸供体催化尿苷生成尿苷酸,而来源于枯草芽孢杆菌的尿苷-胞苷激酶只有以GTP作为磷酸供体时的催化效果较好。在优化的反应条件下,使用来源于嗜热栖热菌的尿苷-胞苷激酶,6 h可催化10 mmol/L的尿苷和10 mmol/L的ATP生成8.74 mmol/L尿苷酸。研究结果表明,以ATP作为磷酸供体的尿苷-胞苷激酶可作为一种新型的催化剂用于尿苷酸的研制与生产。 展开更多
关键词 尿苷酸 尿苷-胞苷激酶 嗜热栖热菌 枯草芽孢杆菌 大肠杆菌
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