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中国历年H_3N_2亚型人流行性感冒病毒血凝素基因的序列测定及分析 被引量：13
1
作者 王勇 陈淑霞 +3 位作者 薛颖 董杰 金奇 侯云德 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期118-125,共8页
测定了 2 7株中国 196 8～ 2 0 0 0年的人H3 N2 亚型流行性感冒 (流感 )病毒分离株HA1基因的核苷酸全序列 ,其中包括 7株流行代表株 :A3/Beijing/ 1/ 6 8、A3/Guangdong/ 2 4 3/ 72、A3/Beijing/ 39/ 75、A3/Guangdong/ 38/ 77、A3/Beij... 测定了 2 7株中国 196 8～ 2 0 0 0年的人H3 N2 亚型流行性感冒 (流感 )病毒分离株HA1基因的核苷酸全序列 ,其中包括 7株流行代表株 :A3/Beijing/ 1/ 6 8、A3/Guangdong/ 2 4 3/ 72、A3/Beijing/ 39/ 75、A3/Guangdong/ 38/ 77、A3/Beijing/ 2 6 6 / 85、A3/Beijing/ 30 / 95、A3/Shanghai/ 1/ 98。阐明了这些流感病毒分离株的基因结构、变异本质、进化发展过程以及这些毒株与其它分离株之间的遗传进化亲缘关系 ,为应用生物信息学研究流感病毒基因组变异规律等打下了基础。初步的进化分析表明 ,历年来的人流感病毒H3 N2 亚型的起源和进化分为两个分支谱系 ,并在 1984 /1985年进行了交替转换 ;且有一部分人的H3 N2 展开更多
关键词 中国 H3N2亚型 人流行性感冒病毒 血凝素基因 序列测定 基因序列 ha1基因
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北京地区2005—2006年流感病原监测结果与乙型流感病毒HA1序列分析 被引量：13
2
作者 彭晓旻 王晓梅 +2 位作者 梁慧杰 郭婧 刘医萌 《中国卫生检验杂志》 CAS 2007年第3期431-432,共2页
目的：分析2005～2006年冬春季北京地区流感病原监测及乙型流感病毒种系分布情况。方法：采用狗肾传代细胞（MDCK）和鸡胚培养分离流感病毒，经血清学试验鉴定分型。选取部分乙型流感提取病毒RNA，经RT—PCR扩增得到HA1基因片段并进行... 目的：分析2005～2006年冬春季北京地区流感病原监测及乙型流感病毒种系分布情况。方法：采用狗肾传代细胞（MDCK）和鸡胚培养分离流感病毒，经血清学试验鉴定分型。选取部分乙型流感提取病毒RNA，经RT—PCR扩增得到HA1基因片段并进行核苷酸序列测定，用信息软件进行种系发生树分析。结果：共采集流感样病例标本1874份，经MDCK细胞分离到510株流感病毒。其中H1N1亚型244株（47．84％）；H3N2亚型57株（11．18％）；B型209株（40．98％），208株为Victoria系，1株为Yamagata系。对210份细胞分离阳性标本进行鸡胚培养，共分离到流感病毒9株，全部为H1N1亚型。28株B型优势流行株与当年疫苗株不属于同一谱系，相差较远；与新预测（2006～2007年）的疫苗株亲缘关系最近。结论：北京地区2005～2006年冬春季节存在H1N1、H3N2、B型3种流感病毒流行，以H1N1、B型为优势毒株。B型Victoria系优势株正在通过变异逐步在流行中占据主导地位。新预测流感疫苗可对人群产生良好的保护效果。 展开更多
关键词 流感病毒 监测 ha1基因
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2009年深圳新甲型H1N1流感病毒分离鉴定及分离株特征分析 被引量：11
3
作者 刘涛 吴春利 +5 位作者 房师松 黄运美 吕星 王昕 邱亚群 程小雯 《实用预防医学》 CAS 2010年第8期1528-1532,共5页
目的比较新甲型H1N1流感病毒对MDCK细胞和鸡胚的敏感性差异,了解病毒分离株特征,为疫苗制备和开展实验室常规监测等奠定基础。方法用MDCK细胞和鸡胚进行流感病毒分离[1],收获病毒后提取病毒RNA,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增,阳性... 目的比较新甲型H1N1流感病毒对MDCK细胞和鸡胚的敏感性差异,了解病毒分离株特征,为疫苗制备和开展实验室常规监测等奠定基础。方法用MDCK细胞和鸡胚进行流感病毒分离[1],收获病毒后提取病毒RNA,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增,阳性扩增产物纯化后测序,测序结果使用Clustal和MEGA4.1软件进行比较分析,通过与NCBI数据库中不同时间和地区的流感病毒H1N1株同源比对后,绘制种系发生树。结果从334份患者呼吸道标本中,用MDCK细胞分离法分离出134株新甲型H1N1病毒,分离率为40.12%,用鸡胚分离法分离出150株新甲型H1N1病毒,分离率为44.91%;所测10株新甲型H1N1毒株HA1区的344个氨基酸,与2009年新甲型H1N1国际代表株A/California/07/2009相比,只有少数位点发生氨基酸替换,并且这些位点都不在抗原决定簇上;种系发生树显示,10株新甲型H1N1和国际代表株同源性较大,形成一簇,与A/Swine/guangxi/13/2006较为接近。结论新甲型H1N1病毒对MDCK细胞和鸡胚的敏感性相差不大;新甲型H1N1病毒未发生变异,短期内不会产生新变种。 展开更多
关键词 新甲型H1N1流感 病毒分离 ha1基因
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北京市1998-2004年婴幼儿A3型流感病毒分离株HA1基因序列分析 被引量：12
4
作者 朱汝南 钱渊 +3 位作者 王芳 邓洁 赵林清 刘成贵 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期241-244,共4页
目的 了解1998-2004年北京地区婴幼儿中流行的A3（H3N2）亚型流感病毒血凝素基因HA1区的基因变异特点。方法 提取该期间采集的呼吸道标本中H3N2亚型流感病毒的RNA，经逆转录多聚酶链反应扩增得到HA1区基因片段。通过目的基因的克隆、测... 目的 了解1998-2004年北京地区婴幼儿中流行的A3（H3N2）亚型流感病毒血凝素基因HA1区的基因变异特点。方法 提取该期间采集的呼吸道标本中H3N2亚型流感病毒的RNA，经逆转录多聚酶链反应扩增得到HA1区基因片段。通过目的基因的克隆、测序或PCR产物直接测序，进行序列分析。结果 19982004年问北京地区婴幼儿中流行的H3N2亚型流感病毒血凝素HA1区基因均为987bp，编码一个含329个氨基酸的蛋白质。这些H3N2亚型流感病毒血凝素HA1区的核苷酸和氨基酸同源性分别在95．5％～100．0％和93．0％～100．0％之间，分离年份越近同源性越高。在HA1区有7个糖基化位点非常保守，分别位于8、22、38、63、126、165和285位氨基酸。与1997年以前的毒株相比，1997年以后的毒株均在122和133位增加了一个糖基化位点。自1999年以后的毒株均在144位增加了一个糖基化位点。每年流行的毒株都较前一年的毒株出现了位于不同抗原决定簇或者受体结合位点的氨基酸替换。进化分析显示，每年分离的毒株均与以前的毒株出现了不同程度的变化，不断出现新的进化分支。结论 1998—2004年间北京地区婴幼儿中流行的H3N2亚型流感病毒持续不断地发生着点突变，导致抗原性不断发生漂移。加强监测和密切关注其变异动向对防控流感流行有极其重要的意义。 展开更多
关键词 流感病毒 血凝素基因 序列分析
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北京地区2009-2010年乙型流感病毒的流行特征及HA1基因片段特性分析 被引量：10
5
作者 何翠 张磊 +4 位作者 恩特马克.布拉提白 李科 刘运喜 刘刚 吾鲁木汗.那孜尔别克 《中国预防医学杂志》 CAS 2010年第10期995-999,共5页
目的了解2009年5月-2010年4月间北京地区乙型流感的流行特征及血凝素（HA1）变异情况。方法采用real-time RT-PCR法对流感样疑似病人咽拭子进行乙型流感病毒检测,采用DNA Star软件对HA1基因片段核苷酸和氨基酸序列进行系统进化分析。结... 目的了解2009年5月-2010年4月间北京地区乙型流感的流行特征及血凝素（HA1）变异情况。方法采用real-time RT-PCR法对流感样疑似病人咽拭子进行乙型流感病毒检测,采用DNA Star软件对HA1基因片段核苷酸和氨基酸序列进行系统进化分析。结果 2009年5月-2010年4月共收集并检测流感样疑似病例咽拭子样本2 138份,乙型流感病毒阳性169例,总阳性率为7.9%,且以2010年2月阳性率最高。乙型流感病毒阳性者平均年龄为（35±24）岁,显著高于对照组中的（28±19）岁（P〈0.001）;女性组中乙型流感病毒阳性率为11.8%,显著高于男性组的7.9%（P〈0.015）。HA1片段序列分析显示本地区的乙型流感病毒属于Victoria系,与参考株B/Brisbane/60/2008相比,其核苷酸、氨基酸的同源性分别为93.4%-99.2%和99.3%-99.7%;2个氨基酸发生改变。结论 2009年5月-2010年4月期间北京地区乙型流感病毒的流行高峰为2010年1、2月,主要累及的人群为35岁以上的女性。本地区的优势流行株仍属于Victoria系,其抗原性未发生明显改变,提示以往流感疫苗仍有较好的保护效果。 展开更多
关键词 乙型流感病毒 REAL-TIME RT-PCR ha1基因 流行特征
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湖南省2007-2008年A/H3N2亚型流感病毒血凝素基因特性研究 被引量：9
6
作者 刘运芝 王大燕 +7 位作者 黄一伟 赵翔 张红 陈长 李芳彩 高立冬 王媛 胡世雄 《实用预防医学》 CAS 2010年第3期460-462,共3页
目的了解2007-2008年湖南省流感病毒优势流行毒株A(H3N2)亚型的基因变异特征。方法取病原学监测中分离到的29株A(H3N2)亚型流感病毒毒株,对其血凝素基因进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),扩增产物纯化后测序;测序结果与WHO全球流感疫苗... 目的了解2007-2008年湖南省流感病毒优势流行毒株A(H3N2)亚型的基因变异特征。方法取病原学监测中分离到的29株A(H3N2)亚型流感病毒毒株,对其血凝素基因进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),扩增产物纯化后测序;测序结果与WHO全球流感疫苗株序列进行同源比对,绘制种系发生树。结果2007年的分离株与2007-2008年北半球疫苗株A/Wisconsin/67/05比较,变异位点主要为G50E,S138A,K140I,R142G以及N144D。2008年分离株与北半球疫苗株A/Wisconsin/67/05比较,变异位点主要为G50E,S138A,K140I,L157S;而与2008-2009年北半球疫苗株A/Brisbane/10/07比较显示,变异位点主要为K140I,L157S。结论湖南省2007-2008年A(H3N2)亚型流感流行毒株的HA1基因发生了变异,可能是导致其流行的重要原因。 展开更多
关键词 流感病毒 ha1基因 氨基酸序列
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聚集性感染甲型H1N1流感病毒的HA1基因特征分析 被引量：8
7
作者 杨鹏飞 燕清丽 +7 位作者 马雪征 张丽萍 甄维 刘纯成 邢亚东 姚海波 何南江 胡孔新 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2017年第1期42-46,共5页
目的 了解淮安市某中学一起引起聚集性感染的流感病毒HA1基因特征.方法 采用实时荧光RT-PCR方法进行病原体的快速检测,对分离的毒株进行HA1基因扩增、测序及构建系统发生树并进行HA1基因特征分析.结果 从流感样病例中检测出11份甲型H1N... 目的 了解淮安市某中学一起引起聚集性感染的流感病毒HA1基因特征.方法 采用实时荧光RT-PCR方法进行病原体的快速检测,对分离的毒株进行HA1基因扩增、测序及构建系统发生树并进行HA1基因特征分析.结果 从流感样病例中检测出11份甲型H1N1流感病毒阳性,与疫苗株A/California/07/2009核苷酸及氨基酸同源性分别为97.7％-98.1％及96.6％-97.4％.引起本次疫情的甲型H1N1流感病毒株与2014年分离的毒株聚集在一起.序列分析提示淮安分离株受体结合位点及糖基化位点的氨基酸序列均未发生变异,在抗原决定簇Ca1区均发现变异,为S220T.结论 引起本次聚集性疫情的病原体为甲型H1N1流感病毒,尽管淮安株在抗原决定簇Ca1区存在氨基酸突变,但其抗原性未发生改变. 展开更多
关键词 聚集性病例 甲型H1N1流感病毒 ha1基因 进化分析 氨基酸变异
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湖南省2004年流感病毒优势流行毒株甲3亚型基因特性分析 被引量：8
8
作者 龙智钢 刘运芝 +4 位作者 张烨 张红 温乐英 李梓 黄一伟 《中国卫生检验杂志》 CAS 2006年第2期164-166,共3页
目的：了解2004年湖南省流感病毒优势流行毒株甲3亚型的基因特性变异特征。方法：取病原学监测中分离到的13株甲3亚型流感病毒毒株，经鉴定后用鸡胚传代，收获尿囊液提取病毒RNA，进行逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR），扩增产物用纯化试... 目的：了解2004年湖南省流感病毒优势流行毒株甲3亚型的基因特性变异特征。方法：取病原学监测中分离到的13株甲3亚型流感病毒毒株，经鉴定后用鸡胚传代，收获尿囊液提取病毒RNA，进行逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR），扩增产物用纯化试剂盒纯化后测序；测序结果使用Flu Sequence DatasetExplorer工具进行比较，通过与NCBI数据库中2000-2005年中国的流感病毒H3N2株同源比对后，绘制种系发生树。结果：所测13株甲3（H3N2）亚型毒株的HA1区的320个氨基酸，与甲3亚型国际疫苗株A／wuhan／359／1995相比，抗原决定簇E区、A区、D区、B区及受体结合位点（RBS）后壁和左壁均有多个位点发生氨基酸替换。与2002年流行的A／Fujian／411／2002甲3亚型代表株相比，抗原决定簇及受体结合位点亦有单个或多个位点氨基酸发生了替换。种系发生树显示，13株甲3亚型人流感病毒中有9株同源性较大，独立形成一簇，与A／Fujiart／52／2004较为接近。另外1株与我省2002年分离的毒株最为接近。最后3株则整合进2003～2004年其他省分离到的毒株所形成的簇中。结论：湖南省2004年流感优势流行毒株甲3亚型流感病毒的HA1基因特性发生了变异，可能是导致其流行的主要原因。在HA1基因进化上，时间比地理分布起着更重要的作用。 展开更多
关键词 流感病毒 ha1基因 氨基酸序列 种系发生树
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2010-2012年福建省H3N2亚型流感病毒血凝素基因特征分析 被引量：8
9
作者 谢剑锋 沈晓娜 +7 位作者 王美爱 杨式芹 修文琼 黄萌 张炎华 翁育伟 严延生 郑奎城 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1157-1161,共5页
目的通过对2010—2012年福建省分离的H3N2亚型流感毒株血凝素HA1基因进行分析，了解2010-2012年福建省H3N2亚型流感病毒的基因特征和变异规律。方法随机选择28株毒株，提取病毒RNA，采用RT-PCR扩增目的片段，纯化PCR产物后进行测序；利... 目的通过对2010—2012年福建省分离的H3N2亚型流感毒株血凝素HA1基因进行分析，了解2010-2012年福建省H3N2亚型流感病毒的基因特征和变异规律。方法随机选择28株毒株，提取病毒RNA，采用RT-PCR扩增目的片段，纯化PCR产物后进行测序；利用DNAstar和Mega4．0等生物信患学软件进行核苷酸整理、拼接、校对、差异性比较以及基因进化树构建等分析研究。结果28株H3N2亚型流感病毒HAl区核苷酸同源性在96．4％～100％之间。基因系统进化分析显示，其进化规律都是沿着树枝主干随着时闻推移向，上延伸，序列的差异和年代成正比。2010—2012年间HAl区共出现43个氨基酸位点的变化，其中有10个氨基酸位点变异累计涉及4个抗原决定簇，2个变异位点发生在受体结合位点（RBS）及其附近，应予高度重视。结论相对于A／Perth／16／2009疫苗代表株，2012年的部分H3N2亚型流感出现了抗原漂移；部分毒株已出现氨基酸位点的改变，并涉及抗原决定簇及受体结合位点，提示2010—2012年福建省人群中流行的H3N2亚型流感正逐渐发生变异，应加强流感病原学监测，以及时发现新的流感变异株，为福建省流感防控提供科学依据。 展开更多
关键词 甲型流感 H3N2亚型 ha1基因 特征 变异
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北京市东城区2017-2018监测年度H3N2亚型流感病毒HA1基因进化分析 被引量：7
10
作者 李艳宇 李姗姗 高鹏 《中国病毒病杂志》 CAS 2019年第2期144-148,共5页
目的了解北京市东城区2017-2018监测年度H3N2亚型流感病毒分离株HA1基因序列变异特征及进化情况。方法对北京市东城区2017年4月1日至2018年3月30日采集的流感样病例咽拭子进行核酸检测及病毒分离,将分离得到的12株H3N2亚型流感病毒进行... 目的了解北京市东城区2017-2018监测年度H3N2亚型流感病毒分离株HA1基因序列变异特征及进化情况。方法对北京市东城区2017年4月1日至2018年3月30日采集的流感样病例咽拭子进行核酸检测及病毒分离,将分离得到的12株H3N2亚型流感病毒进行HA1基因序列测定,通过DNAStar 5.0和MEGA 6.0软件与国际卫生组织(WHO)推荐的北半球2017-2018年流感疫苗株、2018-2019年流感疫苗株进行比对,绘制系统进化树。结果以2017-2018年流感疫苗株[A/HongKong/4801/2014(H3N2)-like virus]为参比序列,12株分离株中共发现HA1基因序列中20个氨基酸位点发生改变;涉及到2个抗原决定簇、受体结合位点(RBS)及附近位置。而2018-2019年推荐的疫苗株[A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016(H3N2)-like]氨基酸一些变异位点与12株分离株的氨基酸变异位点一致,差异较小。12株H3N2亚型流感病毒的HA1基因核苷酸同源性为96.35%～100.00%,氨基酸的同源性为94.97%～100.00%,与WHO推荐的2018-2019年疫苗株同源性更高;系统进化树显示,分离到的流感毒株大部分与2018-2019年推荐的疫苗株在一个大分支上,亲缘关系较近,与2017-2018年疫苗株距离较远,差异较大。结论 2017-2018监测年度北京市东城区H3N2亚型流感病毒的HA1基因特性发生了一定改变,与WHO推荐的2018-2019年新疫苗株匹配性更好,将为北京市流感监控发挥更好的保护作用。 展开更多
关键词 流感病毒 H3N2亚型 ha1基因 进化树 疫苗株
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禽流感病毒HA1基因的克隆及原核表达 被引量：3
11
作者 周雪媚 霍惠玲 +2 位作者 张飚 李永清 王连群 《动物医学进展》 CSCD 2006年第1期66-69,共4页
用RT-PCR方法扩增出禽流感病毒A/Muscovyduck/Fujian/2/2000(MF00)株部分HA基因,大小约900bp,将其克隆到pMD18-T载体上,并进行了序列的分析。通过BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点将HA基因亚克隆到原核表达载体pGEX4T-3上,成功构建了阳性重组表达... 用RT-PCR方法扩增出禽流感病毒A/Muscovyduck/Fujian/2/2000(MF00)株部分HA基因,大小约900bp,将其克隆到pMD18-T载体上,并进行了序列的分析。通过BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点将HA基因亚克隆到原核表达载体pGEX4T-3上,成功构建了阳性重组表达质粒,并将阳性重组质粒转化BL21(DE3)菌株。经IPTG诱导表达,结果禽流感HA基因在pGEX4T-3系统中得到高效表达,经Westernblotting检测证实表达产物有生物学活性。 展开更多
关键词 禽流感病毒 ha1基因 克隆 原核表达
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乙型流感病毒Victoria系和Yamagata系HA1基因的分子进化研究 被引量：5
12
作者 金青青 茅海燕 +4 位作者 孙逸 卢亦愚 冯燕 徐昌平 莫世华 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期366-370,共5页
目的探讨乙型流感病毒两大谱系的进化特征和进化规律。方法从GenBank数据库下载1940—2012年乙型流感病毒流行株共126条，采用贝叶斯－马尔科夫链－蒙特卡洛（Bayesian—MCMC）和分子钟方法，对乙型流感病毒的HA1基因进行系统发育学分... 目的探讨乙型流感病毒两大谱系的进化特征和进化规律。方法从GenBank数据库下载1940—2012年乙型流感病毒流行株共126条，采用贝叶斯－马尔科夫链－蒙特卡洛（Bayesian—MCMC）和分子钟方法，对乙型流感病毒的HA1基因进行系统发育学分析，计算乙型流感病毒两大谱系可能的起源时问与分化时间。结果1978—2010年乙型流感病毒Victoria系与Yamagata系的aa平均差异率为5．4％～10．2％，两谱系的aa差异和组间遗传距离随时问推移呈逐渐增大的趋势。与Victoria系毒株相比，Yamagata系全部毒株的163位aa及部分毒株的166位aa缺失，但是这些年来的乙型流感病毒HA1基因除个别位点外，尚未受到明显的正向选择压力。每年乙型流感病毒HA1基因的碱基替换速率为2．138×10^-3（95％HPD：1．833×10^-3～2．437×10^-3）替代／位点，推算乙型流感病毒Victoria系和Yamagata系的最近共同祖先出现在1971年（95％HPD：1969—1972年），两大谱系的分化时间点分别为1973年（95％HPD：1971—1974年）和1977年（95％HPD：1975—1978年）。结论乙型流感Victoria系和Yamagata系均较以往发生大的变异，且两大谱系的差异日趋增大，将来有可能分化为不同的亚型，在流感监测中应密切关注这一变化及其流行病学意义。 展开更多
关键词 乙型流感病毒 ha1基因 贝叶斯-马尔科夫链-蒙特卡洛方法 分子钟方法 进化
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H5亚型禽流感病毒HA1基因在Sf9昆虫细胞中的表达及其抗原性检测 被引量：5
13
作者 齐岩 孙凌霜 +3 位作者 王彬 孙进华 王君伟 师东方 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期352-356,共5页
利用pBlueBacHis2杆状病毒载体在昆虫细胞Sf9中表达H5亚型禽流感病毒(AIV)的 HA1基因。Western-blotting证明HA1在昆虫细胞中得到了表达,其产物具有抗原性;且不与 H7、H9 AIV的抗血清发生交叉反应,具有良好的特异性。Dot-ELISA结果显示... 利用pBlueBacHis2杆状病毒载体在昆虫细胞Sf9中表达H5亚型禽流感病毒(AIV)的 HA1基因。Western-blotting证明HA1在昆虫细胞中得到了表达,其产物具有抗原性;且不与 H7、H9 AIV的抗血清发生交叉反应,具有良好的特异性。Dot-ELISA结果显示,表达蛋白可以在非变性条件下与相应抗体作用,同样具有良好的抗原性。试验结果证明,表达的H5亚型AIV的 HA1蛋白,为检测禽类体内是否感染H5亚型AIV和监测免疫禽类血清H5抗体水平提供了优良的检测抗原。 展开更多
关键词 禽流感病毒 ha1基因 杆状病毒 真核表达
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H3N2亚型猪流感病毒HA1、HA2基因的原核表达及抗原性分析 被引量：3
14
作者 宋玉慧 王翔宇 +4 位作者 王洁琼 潘梦梦 张剑 刘琳 李新生 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第10期2762-2767,共6页
血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白是猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)的一个重要蛋白,在疾病预防和治疗中具有重要作用。本试验旨在克隆和表达H3N2亚型猪流感病毒A/swine/Henan/1/2010(H3N2)的HA1和HA2基因。用含有H3N2亚型SIV的鸡... 血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白是猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)的一个重要蛋白,在疾病预防和治疗中具有重要作用。本试验旨在克隆和表达H3N2亚型猪流感病毒A/swine/Henan/1/2010(H3N2)的HA1和HA2基因。用含有H3N2亚型SIV的鸡胚尿囊液提取RNA,RT-PCR扩增后将目的基因定向克隆到pET-28a(+)原核表达载体上,并将其转入宿主菌BL21(DE3)pLyS进行表达,IPTG诱导后经SDS-PAGE检测并用该病毒重组HA蛋白制备的特异性单克隆抗体1C10作为一抗对两种蛋白进行Western blotting分析。SDS-PAGE结果显示,得到HA1和HA2大小分别为34.8、23.2ku的重组蛋白,Western blotting结果表明,HA1蛋白与1C10单克隆抗体具有良好的反应原性,且1C10单克隆抗体表位在HA1蛋白上。本试验结果为进一步研究血凝素蛋白的结构和功能,以及建立快速诊断方法和基因工程疫苗提供材料。 展开更多
关键词 H3N2亚型猪流感病毒 ha1基因 ha2基因 原核表达
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北京市西城区2009年-2011年H3N2甲型流感病毒HA1基因特性分析 被引量：4
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作者 张晶波 张家淮 +4 位作者 胡晓芬 李达 苗芳 王永全 吉彦莉 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2013年第3期661-663,共3页
目的:了解2009年6月-2011年6月期间北京市西城区H3N2甲型流感病毒HA1基因的变异情况。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增分离到的H3N2甲型流感病毒HA1基因,对基因片段进行测序,获得的序列与WHO推荐的疫苗株进行基因进化特性分析... 目的:了解2009年6月-2011年6月期间北京市西城区H3N2甲型流感病毒HA1基因的变异情况。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增分离到的H3N2甲型流感病毒HA1基因,对基因片段进行测序,获得的序列与WHO推荐的疫苗株进行基因进化特性分析。结果:HA1基因进化树分析表明2009年、2010年、2011年基本上分为三个分支,并且每个分支与当年的疫苗株都不在同一分支上;HA1氨基酸变异中,抗原决定簇约有10.6%发生了变化,受体结合位点194位有改变。结论:2009年-2011年北京市西城区分离到的H3N2亚型流感病毒的抗原性及基因特性发生了变化,这种变化与世界各地的变化趋势大体吻合。 展开更多
关键词 H3N2甲型流感病毒 ha1基因 基因序列分析
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2008～2009年珠海市H3N2亚型流感病毒HA1基因特性分析 被引量：3
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作者 李红霞 魏泉德 +4 位作者 张丽荣 张静涛 林毅雄 方艳梅 郑予柯 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期117-121,共5页
为了解20082009年珠海市H3N2亚型流感病毒HA1基因变异情况,选择珠海市20082009年期间不同时间点的经狗肾传代细胞（MDCK）培养分离的H3N2亚型流感毒株20株,提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增HA1基因片段,将产物纯化并测序,推导氨基酸序列,进... 为了解20082009年珠海市H3N2亚型流感病毒HA1基因变异情况,选择珠海市20082009年期间不同时间点的经狗肾传代细胞（MDCK）培养分离的H3N2亚型流感毒株20株,提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增HA1基因片段,将产物纯化并测序,推导氨基酸序列,进行基因进化特性分析。与同时期的疫苗株比较,2008年珠海市流行的H3N2亚型流感毒株HA1区抗原决定簇的氨基酸位点变异数少于4个;2009年珠海市流行的H3N2亚型流感毒株除09-0056外,HA1区存在5个位于抗原决定簇内的变异氨基酸位点。2008年H3N2亚型流感毒株的HA1区的糖基化位点与疫苗株一致;2009年H3N2亚型流感毒株HA1区丢失第144位糖基化位点。20082009年H3N2亚型流感毒株RBS氨基酸序列未见明显变异。与2008年H3N2亚型流感毒株比较,2009年H3N2亚型流感毒株HA1区抗原决定簇内存在多个位点的氨基酸替换。这些说明2008年珠海市流行的H3N2亚型流感病毒不是新变种;2009年流行的H3N2亚型流感病毒为新的变异株,这可能是H3N2亚型流感病毒在2009年6-9月为珠海地区季节性流感流行优势株的原因。 展开更多
关键词 H3N2亚型流感病毒 ha1基因 序列分析 变异
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河北省2005～2006年H1N1亚型流感病毒血凝素HA1基因特征研究 被引量：4
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作者 郭瑞玲 齐顺祥 +1 位作者 刘艳芳 刘兰芬 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2008年第15期2956-2958,2963,共4页
[目的]研究2005～2006年河北省分离的H1N1型流感病毒毒株HA1基因特性。阐明HA1基因的变异与流感流行的关系。[方法]用MDCK分离培养流感病毒,提取病毒核糖核酸(RNA),采用RT-PCR扩增病毒HA1基因,纯化产物进行核苷酸序列测定,用DNAStar软... [目的]研究2005～2006年河北省分离的H1N1型流感病毒毒株HA1基因特性。阐明HA1基因的变异与流感流行的关系。[方法]用MDCK分离培养流感病毒,提取病毒核糖核酸(RNA),采用RT-PCR扩增病毒HA1基因,纯化产物进行核苷酸序列测定,用DNAStar软件作分析处理。[结果]2005～2006年在河北省流行的H1N1型流感病毒HA1基因核苷酸和氨基酸序列与同时期的H1N1亚型疫苗株A/NewCaledonia/20/1999相比已发生较大变异,核苷酸同源性为97.0%～98.1%,氨基酸同源性为97.9%～98.7%,有5～7个氨基酸发生了替换,但均不在抗原表位。种系进化结果显示A/河北南市/37/2005与A/河北新市/56/2005和A/河北新市/129/2006位于2个小分支,均距A/NewCaledonia/20/1999较远,A/河北南市/37/2005与A/NewYork/221/2003有较近的亲缘关系。[结论]H1N1型流感病毒HA1基因已发生明显变异,但对抗原性改变意义不大;近几年H1N1持续低流行使人群易感性得以积累是今年H1N1型流感流行的主要原因;2005～2006年河北省同时流行着至少2支种系发生距离较远的H1N1型流感病毒。 展开更多
关键词 H1N1亚型流感病毒 血凝素基因 核苷酸序列
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2011年-2016年唐山地区B型流感病毒血凝素基因特性分析 被引量：3
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作者 王建红 刘丹 +2 位作者 陈洪永 秦磊 高清华 《中国卫生检验杂志》 CAS 2017年第19期2820-2823,共4页
目的分析2011年-2016年唐山地区B型流感血凝素基因特征。方法对唐山市哨点医院流感样病例咽拭子标本进行核酸检测,阳性标本采用MDCK细胞分离培养,选取10株B型流感病毒进行HA1基因测序,分析其核苷酸序列特征及氨基酸变异情况。结果进化... 目的分析2011年-2016年唐山地区B型流感血凝素基因特征。方法对唐山市哨点医院流感样病例咽拭子标本进行核酸检测,阳性标本采用MDCK细胞分离培养,选取10株B型流感病毒进行HA1基因测序,分析其核苷酸序列特征及氨基酸变异情况。结果进化分析显示,唐山地区B型流感病毒分为B/Victoria系和B/Yamagata系,其中4株B/Vic系毒株为1B分支(2011年-2012年)和1A分支(2015年-2016年),6株B/Yam系毒株均属于3分支。与疫苗株B/Brisbane/60/2008相比,B/Vic系毒株氨基酸替换发生在N129S和I146V(1B分支)、I117V和N129D(1A分支)。与疫苗株B/Wisconsin/1/2010(B/Yam 3分支)相比,B/Yam毒株共有7个位点发生氨基酸替换;与疫苗株B/Massachusetts/2/2012(B/Yam 2分支)相比,有14个位点发生氨基酸替换,其中N116K、S150I、N165Y和D196N位于抗原表位上。结论 2011年-2016年唐山地区B型流感毒株发生明显变异,连续分子学监测对该地区的疫苗接种政策有重要意义。 展开更多
关键词 B型流感病毒 Victoria系 Yamagata系 ha1基因 遗传变异
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H3N2亚型犬流感病毒HA1基因的原核表达及抗原性分析 被引量：3
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作者 张敦伟 熊永忠 +3 位作者 远立国 贾坤 张桂红 李守军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期157-159,共3页
为原核表达H3N2亚型犬流感病毒(CIV)HA1蛋白,本研究利用特异性引物扩增CIV H3分离株的HA1基因,将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定。再将其亚克隆于pET-32a(+)中构建重组表达质粒pET-HA1。将该质粒转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱... 为原核表达H3N2亚型犬流感病毒(CIV)HA1蛋白,本研究利用特异性引物扩增CIV H3分离株的HA1基因,将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定。再将其亚克隆于pET-32a(+)中构建重组表达质粒pET-HA1。将该质粒转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳分析,表达的重组蛋白约为58 ku。纯化的HA1蛋白经western blot和Dot-ELISA鉴定表明,表达的重组HA1蛋白可以与H3N2亚型CIV阳性血清发生特异性反应。 展开更多
关键词 犬流感病毒 ha1基因 原核表达 抗原性
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2007-2009年广西壮族自治区甲3亚型流感病毒HA1基因变异的特征研究 被引量：3
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作者 康宁 谭毅 +3 位作者 闭福银 居昱 韦增良 潘浩 《疾病监测》 CAS 2011年第4期278-283,共6页
目的从HA1基因层面探讨2007-2009年广西壮族自治区(广西)甲3流感病毒的变异、进化发展规律,探寻与WHO疫苗推荐株以及上海市、北京市和浙江省等地当年流行株之间的差异。方法提取广西22株2007-2009年甲3流感毒株RNA,并测定其血凝素重链(H... 目的从HA1基因层面探讨2007-2009年广西壮族自治区(广西)甲3流感病毒的变异、进化发展规律,探寻与WHO疫苗推荐株以及上海市、北京市和浙江省等地当年流行株之间的差异。方法提取广西22株2007-2009年甲3流感毒株RNA,并测定其血凝素重链(HA1)区域的核苷酸序列,采用生物信息软件,分析与当年疫苗推荐株及上海、北京和浙江等地在HAI以及HAI抗原决定簇区域的差异,分析进化关系。结果 22株广西甲3流感病毒2007年与2008年比较接近,HA1区核苷酸和氨基酸的同源性均值分别为99.39%和99.08%;而与2009年变异较大,同源性均值分别为99.04%和97.78%。而对比世界卫生组织(WHO)推荐的2008-2009年甲3流感疫苗株A/B risbane/10/2007,广西3年分离株HA1区氨基酸酸同源性均值分别为99.81%、99.25%和97.94%。2009年广西甲3流感病毒与当年疫苗株比较,HA1抗原决定簇发生了6个氨基酸的替换,且发生在A、D、E三区。各年度散发株和暴发株同源性较均在99.00%以上。2007年广西甲3毒株与上海及北京比,HA1区氨基酸同源性均值分别为99.83%和99.12%,2008年比较结果分别为98.93%和99.25%。基因进化树分析显示2009年分离株与2007年、2008年及当年疫苗株距离较远,单独分支。结论广西2007年与2008年甲3流感病毒HA1基因特性较为接近,2009年毒株发生了较大变异。广西与上海、浙江等地分离株更为接近,而与北京分离株差异较大。WHO推荐的当年疫苗株均滞后广西流行株。 展开更多
关键词 甲3亚型流感病毒 ha1基因 变异
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