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黄精多糖对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用 被引量:28
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作者 雷升萍 龙子江 +3 位作者 施慧 高华武 朱永恒 王靓 《中药药理与临床》 CSCD 北大核心 2017年第1期102-106,共5页
目的:探究黄精多糖(Polygonatum sibiricum polysaccharides,PSP)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)损伤的保护作用。方法:体外无菌培养H9c2心肌细胞,制备缺氧/复氧损伤模型。应用A0-EB和Hoechst33324染色法观察心肌... 目的:探究黄精多糖(Polygonatum sibiricum polysaccharides,PSP)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)损伤的保护作用。方法:体外无菌培养H9c2心肌细胞,制备缺氧/复氧损伤模型。应用A0-EB和Hoechst33324染色法观察心肌细胞凋亡形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用MTT法检测心肌细胞存活率,Westen Blot法检测H9c2心肌细胞Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白表达。结果:缺氧/复氧模型组中H9c2细胞存活率明显降低,细胞核浓染致密、固缩,细胞凋亡率明显增加,Caspase-3的表达和Bax/Bcl-2比率显著上调;与模型组比较,黄精多糖1.0、1.5、2.0mg/ml药物组中细胞存活率均明显升高,细胞核淡染,轻微缩小,细胞凋亡率降低,Bax/Bcl-2比率明显下调,Caspase-3表达水平被显著抑制。结论:黄精多糖对H/R诱导的H9c2心肌细胞具有保护作用,其作用可能与抑制心肌细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 黄精多糖 缺氧/复氧损伤 h9c2心肌细胞 凋亡 BAX/BcL-2 caspase-3
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基于中药血清化学及血清药理学方法探讨香青兰保护心肌细胞缺氧/复氧损伤物质基础 被引量:28
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作者 田友清 尚靖 +2 位作者 何婷 蔡旻煊 阿布卡德 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期620-624,共5页
目的:利用中药血清化学及血清药理学方法探讨香青兰保护心肌细胞缺氧/复氧损伤的物质基础。方法:测定和比较香青兰提取物及其灌胃给药前后大鼠空白血清和含药血清的HPLC,寻找香青兰入血成分;体外培养乳大鼠原代心肌细胞及H9c2细胞,用Na2... 目的:利用中药血清化学及血清药理学方法探讨香青兰保护心肌细胞缺氧/复氧损伤的物质基础。方法:测定和比较香青兰提取物及其灌胃给药前后大鼠空白血清和含药血清的HPLC,寻找香青兰入血成分;体外培养乳大鼠原代心肌细胞及H9c2细胞,用Na2S2O4或N2为缺氧剂建立缺氧/复氧损伤模型,以细胞活力、LDH释放量、T-SOD活力、MDA产量及细胞凋亡为指标,考察香青兰提取物及其含药血清、香青兰提取物不同给药剂量及不同给药时间段所采血清的处理物对细胞损伤的影响。结果:香青兰在血清中出现4个移行成分,其中3个为原型成分,1个可能为代谢产物;与模型组或空白血清组相比,香青兰提取物、含药血清及不同因素影响下的血清处理物显著降低缺氧/复氧心肌细胞LDH释放量和MDA产量(P<0.05,P<0.01),显著升高T-SOD及细胞活力(P<0.05,P<0.01),明显抑制细胞凋亡。结论:香青兰提取物4个入血成分可能为香青兰保护心肌细胞缺氧/复氧损伤的物质基础。 展开更多
关键词 香青兰 血清药物化学 血清药理学 缺氧/复氧损伤 原代心肌细胞 h9c2细胞
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麦冬皂苷D通过降低自噬抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大 被引量:22
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作者 王远 王宇光 +6 位作者 马增春 汤响林 梁乾德 谭洪玲 肖成荣 赵永红 高月 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1370-1376,共7页
目的麦冬皂苷D是否抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)所引起的心肌肥大及其可能机制。方法体外培养大鼠心肌细胞系H9c2,MTS法检测麦冬皂苷D的细胞毒性;其次将1μmol·L^(-1)的AngⅡ作用于H9c2细胞24h后引起心肌肥大,用不同浓度的麦冬皂苷D(op... 目的麦冬皂苷D是否抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)所引起的心肌肥大及其可能机制。方法体外培养大鼠心肌细胞系H9c2,MTS法检测麦冬皂苷D的细胞毒性;其次将1μmol·L^(-1)的AngⅡ作用于H9c2细胞24h后引起心肌肥大,用不同浓度的麦冬皂苷D(ophiopogonin D,OPD)共处理,BCA法检测总蛋白含量;实时荧光定量PCR技术检测标志性肥大基因BNP和β-MHC的mRNA表达;Western blot法检测自噬蛋白LC3B的表达,同时运用高内涵筛选技术检测心肌细胞自噬蛋白LC3B的表达以及线粒体膜电位的改变。结果细胞活力的检测结果显示,与对照组相比,AngⅡ不同浓度作用24 h后,对细胞活力无明显影响,而麦冬皂苷D的高浓度(50~100μmol·L^(-1))可明显抑制细胞的活性;AngⅡ作用于心肌细胞24h后,可引起心肌肥大,导致特异性肥大基因mRNA表达上调,并且明显增加细胞总蛋白含量;同时使心肌细胞自噬增强;线粒体膜电位降低,而麦冬皂苷D共处理能明显逆转上述指标。结论麦冬皂苷D对AngⅡ所诱导的心肌肥大有抑制作用。 展开更多
关键词 麦冬皂苷D 血管紧张素Ⅱ h9c2细胞 心肌肥大 自噬 线粒体膜电位
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参芎葡萄糖注射液通过激活PI3K/AKT通路拮抗H2O2诱导H9c2细胞凋亡 被引量:15
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作者 陆定艳 李靖 +6 位作者 孙佳 薛维娜 何彬 李勇军 王永林 林昌虎 刘亭 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第17期3773-3779,共7页
探究参芎葡萄糖注射液拮抗H2O2诱导H9c2细胞凋亡的机制。体外培养H9c2细胞,预先给予体积分数1. 7%,3. 4%,6. 8%的参芎葡萄糖注射液处理H9c2细胞,再给予H2O2诱导细胞凋亡。MTS法检测细胞存活率,AO/EB荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化,An... 探究参芎葡萄糖注射液拮抗H2O2诱导H9c2细胞凋亡的机制。体外培养H9c2细胞,预先给予体积分数1. 7%,3. 4%,6. 8%的参芎葡萄糖注射液处理H9c2细胞,再给予H2O2诱导细胞凋亡。MTS法检测细胞存活率,AO/EB荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化,Annexin/PI法检测细胞凋亡率,基因芯片技术检测细胞表达谱的变化,荧光定量PCR技术(qRTPCR)检测PIK3CA,Bcl-2,Bax,caspase-3,GAPDH mRNA的表达,Western blot法检测PIK3CA,AKT,P-AKT,Bcl-2,Bax,caspase-3蛋白的表达水平,用试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量和丙二醛(MDA)含量。结果显示,不同浓度的参芎葡萄糖注射液可显著提高H2O2诱导的H9c2细胞存活率(P<0. 01),明显逆转H2O2诱导的细胞凋亡情况(P<0. 01)。芯片实验发现,参芎葡萄糖注射液处理后,H9c2细胞有138个基因表达发生改变,其中与PI3K/AKT通路相关的PIK3CA差异表达倍数较高,为3. 59倍。qRT-PCR和Western blot结果表明,参芎葡萄糖注射液可下调H2O2处理后H9c2细胞中caspase-3的mRNA和蛋白表达水平(P<0. 01),上调PIK3CA和Bcl-2的mRNA和蛋白的表达水平(P<0. 01),并上调AKT蛋白的磷酸化水平(P<0. 01)。在PI3K/AKT通路抑制剂LY294002作用下,参芎葡萄糖注射液拮抗H2O2细胞损伤作用显著降低。结果表明,参芎葡萄糖注射液可能是通过调控PI3K/AKT信号通路来抑制H2O2诱导的H9c2细胞凋亡。 展开更多
关键词 参芎葡萄糖注射液 h9c2细胞 细胞凋亡 基因芯片 PI3K/AKT通路
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麦冬皂苷D′对大鼠心肌细胞H9c2的细胞毒性 被引量:14
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作者 任思嘉 徐焕华 +8 位作者 李明 郝斐然 马增春 汤响林 梁乾德 谭洪玲 肖成荣 王宇光 高月 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期325-331,共7页
目的研究麦冬皂苷D′对大鼠心肌细胞H9c2的细胞毒性作用,初步探讨其作用机制,为寻找其临床安全使用剂量提供依据。方法麦冬皂苷D′0.1,1,5,10,20,25和50μmol?L^(-1)作用于H9c2细胞24 h。MTS法检测细胞存活率及其IC_(50);荧光显微镜观... 目的研究麦冬皂苷D′对大鼠心肌细胞H9c2的细胞毒性作用,初步探讨其作用机制,为寻找其临床安全使用剂量提供依据。方法麦冬皂苷D′0.1,1,5,10,20,25和50μmol?L^(-1)作用于H9c2细胞24 h。MTS法检测细胞存活率及其IC_(50);荧光显微镜观察细胞形态变化;高内涵免疫荧光筛选检测细胞核数目变化;流式细胞仪检测其活性氧生成、线粒体膜电位和细胞凋亡率。结果麦冬皂苷D′0.1,1,5,10,20,25和50μmol?L^(-1)作用于H9c2细胞24 h后,细胞存活率分别为108.9%,106.3%,91.9%,61.0%,24.8%,24.7%和24.2%,IC_(50)为9.9μmol·L^(-1);荧光显微镜检测显示细胞皱缩;高内涵免疫荧光检测显示细胞核数目减少(P<0.05)。流式细胞术检测显示,麦冬皂苷D′0.1,1,5和10μmol·L^(-1)显著升高活性氧生成量(P<0.05),降低线粒体膜电位(P<0.05),升高细胞凋亡率(P<0.05)。结论麦冬皂苷D′对H9c2心肌细胞有明显的细胞毒性作用,该作用可能与其激活细胞凋亡通路有关。 展开更多
关键词 麦冬皂苷D′ h9c2细胞 毒性作用
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E2F6在物理性低氧及化学性低氧诱导的凋亡中的表达特征(英文) 被引量:12
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作者 束波 杨巍维 杨黄恬 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期1-10,共10页
心肌细胞凋亡性死亡是低氧发生时的重要病理学特征,但低氧诱导的心肌细胞凋亡的调控机制尚未完全阐明。E2F6是E2F转录因子家族成员之一, 我们新近的研究证实其具有抑制DNA损伤诱导的细胞凋亡作用。但是,E2F6 是否参与了低氧诱导的心肌... 心肌细胞凋亡性死亡是低氧发生时的重要病理学特征,但低氧诱导的心肌细胞凋亡的调控机制尚未完全阐明。E2F6是E2F转录因子家族成员之一, 我们新近的研究证实其具有抑制DNA损伤诱导的细胞凋亡作用。但是,E2F6 是否参与了低氧诱导的心肌细胞凋亡的调控尚不清楚。在本研究中,我们初步探讨了E2F6 在物理性低氧及化学性低氧模拟物诱导大鼠心肌细胞系H9c2 细胞凋亡中的表达特征。结果表明:物理性低氧、化学性低氧模拟物去铁胺(desferrioxamine, DFO)和氯化钴(cobaltchloride, CoCl2)均能有效诱导 H9c2 细胞发生凋亡。在物理性低氧及 CoCl2 诱导的 H9c2 细胞凋亡中,内源性 E2F6 mRNA 表达明显下调,但蛋白表达没有明显变化。而在DFO 诱导的凋亡中,内源性E2F6 mRNA及蛋白表达均发生明显下调。这些结果提示,E2F6 可能参与调控DFO 模拟低氧诱导的H9c2 细胞凋亡,而对物理性低氧及CoCl2 模拟低氧诱导的细胞凋亡敏感性较低。此外,DFO 模拟低氧诱导的细胞凋亡机制可能与物理性低氧及 CoCl2 模拟低氧诱导的细胞凋亡机制不同。 展开更多
关键词 E2F6 凋亡 物理性低氧 氯化钴 去铁胺 h9c2细胞
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花旗松素对H9C2细胞氧化应激保护作用机制研究 被引量:12
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作者 曾志辉 王晓莉 +6 位作者 叶艳琼 王甜甜 苏其利 詹纪春 申婕 曾茂君 赵明一 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2019年第15期1794-1799,共6页
背景氧化应激(OS)与缺血性心脏病(IHD)的发生发展密切相关,抗OS损伤在IHD防治中至关重要。花旗松素(Tax)具有抗炎、抗肿瘤、抗OS作用,但其抗OS机制尚未完全明了。目的探讨Tax对过氧化氢(H_2O_2)诱导的H9C2心肌细胞OS损伤的保护机制,为O... 背景氧化应激(OS)与缺血性心脏病(IHD)的发生发展密切相关,抗OS损伤在IHD防治中至关重要。花旗松素(Tax)具有抗炎、抗肿瘤、抗OS作用,但其抗OS机制尚未完全明了。目的探讨Tax对过氧化氢(H_2O_2)诱导的H9C2心肌细胞OS损伤的保护机制,为OS损伤性疾病的新药研发提供基础依据。方法 2017年3月—2018年3月,将H9C2细胞随机分为对照组〔仅加入0.1%二甲基亚砜(DMSO)〕、H_2O_2处理组(加入200μmol/ml H_2O_2处理12 h)、Tax+H_2O_2处理组(加入100μmol/ml Tax预处理6 h,换液后加入200μmol/ml H_2O_2处理12 h)、Tax处理组(加入100μmol/ml Tax处理6 h)。对于对照组、H_2O_2处理组、Tax+H_2O_2处理组,采用光学显微镜观察细胞形态,荧光倒置显微镜观察细胞染色情况,RT-PCR法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、骨桥蛋白(OPN)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)mRNA表达水平。采用Western blotting法检测对照组、Tax处理组丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路p38、磷酸化p38(p-p38)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2、磷酸化ERK(p-ERK)1/2、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)表达水平。结果与对照组相比,H_2O_2处理组细胞出现肥大,呈圆形及不规则形状,而Tax+H_2O_2处理组细胞形态接近梭形,细胞变圆及肥大程度较H_2O_2处理组轻,不规则形态细胞数量减少。H_2O_2处理组绿色荧光量较对照组明显增多且亮度增强,而Tax+H_2O_2处理组较H_2O_2处理组绿色荧光量及亮度减弱。Tax+H_2O_2处理组iNOS mRNA、OPN mRNA表达水平低于对照组、H_2O_2处理组(P<0.05);Tax+H_2O_2处理组HMGB1 mRNA表达水平高于对照组、H_2O_2处理组(P<0.05)。Tax处理组MAPK信号通路p38表达水平低于对照组,p-p38、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK表达水平高于对照组(P<0.05)。结论 Tax可以改善H_2O_2对细胞造成的形态学改变并减少细胞内OS水平,其机制可能通过激活MAPK信号通路,激活HMGB1表达,抑制OS相关基因iNOS、OPN的表达 展开更多
关键词 氧化性应激 MAP激酶信号系统 一氧化氮合酶Ⅱ型 骨桥蛋白质 高迁移率族蛋白质类 花旗松素 h9c2细胞
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黄芪甲苷的抗氧化性对缺氧缺糖H9c2细胞的保护作用探讨 被引量:11
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作者 承燕 吕磊 江时森 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2012年第1期51-55,共5页
目的:探讨黄芪甲苷(AST-Ⅳ)的抗氧化性对缺氧缺糖H9c2细胞的保护作用。方法:对用无糖Na2S2O4溶液制造的细胞缺氧模型给予AST-Ⅳ预处理,同时以抗氧化能力相近的抗氧化剂水溶性维生素E(Trolox)作为对照检测细胞内氧自由基(ROS)、丙二醛(M... 目的:探讨黄芪甲苷(AST-Ⅳ)的抗氧化性对缺氧缺糖H9c2细胞的保护作用。方法:对用无糖Na2S2O4溶液制造的细胞缺氧模型给予AST-Ⅳ预处理,同时以抗氧化能力相近的抗氧化剂水溶性维生素E(Trolox)作为对照检测细胞内氧自由基(ROS)、丙二醛(MDA)的浓度和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,CCK-8检测细胞存活率,FITC-annexin V/PI双染检测凋亡情况。结果:经60μmol.L-1的AST-Ⅳ预处理后,细胞内ROS、MDA浓度较模型组有明显下降(P<0.01),下降程度与Trolox预处理组相近。AST-Ⅳ预处理组细胞存活率明显高于模型组(P<0.01),但低于Trolox预处理组(P<0.01)。AST-Ⅳ预处理组LDH漏出率和细胞凋亡率较模型组均下降(P<0.01),但不如Trolox预处理组下降明显(P<0.01)。结论:AST-Ⅳ能减轻无糖Na2S2O4溶液造成的细胞氧化应激,但效果不如Trolox,其抗氧化性对H9c2细胞的保护作用有限。 展开更多
关键词 黄芪甲苷 h9c2细胞 缺氧 自由基
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PTEN对缺氧复氧心肌H9c2细胞凋亡、氧化损伤及免疫炎症因子水平的影响 被引量:11
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作者 燕林贞 燕钦栋 +2 位作者 张顺祥 丁小青 李康 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1940-1946,共7页
目的:研究第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)对缺氧复氧条件下心肌H9c2细胞凋亡、氧化损伤及免疫炎症因子水平的影响。方法:用H9c2细胞构建缺氧复氧模型。细胞转染PTEN小干扰RNA(siRNA)和阴性对照siRNA,缺氧复氧处理后,RT... 目的:研究第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)对缺氧复氧条件下心肌H9c2细胞凋亡、氧化损伤及免疫炎症因子水平的影响。方法:用H9c2细胞构建缺氧复氧模型。细胞转染PTEN小干扰RNA(siRNA)和阴性对照siRNA,缺氧复氧处理后,RT-PCR和Western blot分别测定细胞中PTEN的mRNA和蛋白水平。MTT法测定细胞活力,流式细胞术测定细胞凋亡,用黄嘌呤氧化法测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性,用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,用二硝基苯肼法测定培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性,ELISA测定培养液上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)水平,Western blot法测定细胞中cleaved caspase-3、Bax和Fas L的蛋白水平。结果:缺氧复氧处理后H9c2细胞中PTEN的mRNA和蛋白水平均明显升高(P <0. 05)。转染PTEN siRNA后的细胞中PTEN的mRNA和蛋白水平明显下降(P <0. 05)。缺氧复氧处理后H9c2细胞活力下降,凋亡率升高,细胞中cleaved caspase-3、Bax和Fas L的蛋白水平升高,MDA水平也升高,SOD活性下降,培养液上清中LDH、TNF-α、IL-1β和IL-6的水平升高(P <0. 05),而下调PTEN可以部分拮抗缺氧复氧对H9c2细胞活力、凋亡率、MDA水平、SOD水平及培养液上清中LDH、TNF-α、IL-1β和IL-6水平的影响。结论:下调PTEN可以减轻缺氧复氧诱导的心肌H9c2细胞氧化损伤,减少H9c2细胞凋亡,降低TNF-α、IL-1β和IL-6的水平。 展开更多
关键词 第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物 h9c2细胞 细胞凋亡 缺氧 复氧 氧化损伤
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抗阻运动通过刺激骨骼肌FSTL1分泌抑制心梗大鼠心肌细胞凋亡及其机制探讨 被引量:11
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作者 郝美丽 席悦 田振军 《体育科学》 CSSCI 北大核心 2020年第1期67-78,共12页
目的:探讨抗阻运动通过刺激骨骼肌卵泡抑素样蛋白1(Follistatin-like protein 1,FSTL1)分泌,抑制心梗(Myocardial Infarction,MI)大鼠心肌细胞凋亡及其机制。方法:动物实验:结扎SD大鼠左冠状动脉前降支制备MI模型,术后随机分为5组,分别... 目的:探讨抗阻运动通过刺激骨骼肌卵泡抑素样蛋白1(Follistatin-like protein 1,FSTL1)分泌,抑制心梗(Myocardial Infarction,MI)大鼠心肌细胞凋亡及其机制。方法:动物实验:结扎SD大鼠左冠状动脉前降支制备MI模型,术后随机分为5组,分别为假手术组(S)、心梗安静对照组(MI)、心梗+抗阻运动组(MR)、心梗+腺相关病毒空载体组(MV)、心梗+FSTL1腺相关病毒载体组(MF),每组10只,其中S组只穿线不结扎。术后1周,MR组进行为期4周的爬梯抗阻运动,MV组和MF组于左后肢胫骨前肌分别注射腺相关病毒空载体和FSTL1腺相关病毒载体。训练结束后次日,腹腔麻醉,测定心功能,摘取心脏和左后肢胫骨前肌。Masson染色观察并计算心肌胶原容积百分比(CVF%);TUNEL检测分析心肌细胞凋亡;Western Blotting实验测定骨骼肌和血清FSTL1蛋白含量,心肌FSTL1、DIP2A、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、Bcl2/Bax蛋白表达。细胞实验:H9C2细胞分为8组,即H9C2对照组、H9C2+LPS(脂多糖:Lipopolysaccharide,LPS)组、H9C2+LPS+AICAR(AMPK激动剂AICAR)组、H9C2+LPS+LY294002(PI3K抑制剂LY294002)组、H9C2+LPS+AICAR+LY294002组、H9C2+LPS+rhFSTL1组、H9C2+LPS+rhFSTL1+AICAR组、H9C2+LPS+rhFSTL1+LY294002组。TUNEL检测H9C2细胞凋亡,CCK8检测H9C2细胞存活率,Western Blotting实验检测细胞FSTL1、DIP2A、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、Bcl2/Bax蛋白表达。结果:MI后大鼠骨骼肌FSTL1基因和蛋白表达降低,心肌FSTL1基因表达无显著变化,心肌和血清FSTL1蛋白水平显著升高,心肌细胞凋亡和心肌纤维化显著增加,心功能下降。抗阻运动或胫骨前肌注射FSTL1腺相关病毒载体后,骨骼肌、血清和心肌FSTL1蛋白水平均显著升高,心肌FSTL1受体DIP2A、p-Akt、p-mTOR、Bcl2/Bax蛋白表达均显著上调,心肌细胞凋亡和心肌纤维化减少,心功能显著改善,且抗阻运动显著上调骨骼肌FSTL1基因表达,但心肌FSTL1基因表达无显著性差异。FSTL1和AICAR干预均显著抑制LPS诱导� 展开更多
关键词 抗阻运动 骨骼肌 心肌梗死 卵泡抑素样蛋白1 心肌细胞凋亡 h9c2细胞
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花旗松素通过激活Nrf2/HO-1/HIF1α/Autophagy信号通路对H2O2所致H9C2细胞氧化应激保护作用的研究 被引量:10
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作者 苏其利 王晓莉 +4 位作者 谭小华 陆亚朋 旷寿金 蔡骞 赵明一 《生命科学研究》 CAS CSCD 2017年第3期233-238,共6页
氧化应激(oxidative stress,OS)是缺血性心肌病(ischemic cardiomyopathy,ICM)的主要发病机制之一,抗氧化应激损伤是防治缺血性心肌病的关键。为了探讨花旗松素(taxifolin,tax)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)诱导的大鼠心肌细胞H... 氧化应激(oxidative stress,OS)是缺血性心肌病(ischemic cardiomyopathy,ICM)的主要发病机制之一,抗氧化应激损伤是防治缺血性心肌病的关键。为了探讨花旗松素(taxifolin,tax)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)诱导的大鼠心肌细胞H9C2氧化应激的影响及其可能的分子机制,将培养的H9C2心肌细胞随机分为对照组(Control)、氧化应激组(H_2O_2)、tax预处理组(tax+H_2O_2)、tax单独处理组(tax)。通过观察细胞形态的改变,检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的生成、自噬体自噬泡的形成,以及自噬(autophagy)相关蛋白质LC3 I/II、p62的表达,验证tax对氧化应激及自噬的影响。同时,通过检测Nrf2、HO-1、HIF1α的表达,研究可能存在的分子机制。研究发现tax可缓解H_2O_2诱导的H9C2细胞氧化应激,表现为细胞肥大形态缓解、ROS生成降低、MDA产生减少,而且Nrf2/HO-1/HIF1α蛋白的表达升高,自噬水平升高。实验结果表明:tax可能通过激活Nrf2/HO-1/HIF1α/Autophagy信号通路促进自噬及抗氧化应激,从而发挥心肌保护作用。 展开更多
关键词 花旗松素(tax) 缺血性心肌病(IcM) h9c2心肌细胞 氧化应激(OS) h2O2氧化损伤 Nrf2/hO-1/hIF1α/Au-
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基于CaMKⅡδ-RIPK1/RIPK3-MLKL通路的黄芪-丹参配伍对缺氧/复氧诱导的H9C2细胞坏死性凋亡的影响 被引量:6
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作者 张丞波 王新东 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2023年第7期108-113,共6页
目的观察黄芪-丹参配伍对缺氧/复氧诱导的H9C2心肌细胞坏死性凋亡的影响,基于CaMKⅡδ-RIPK1/RIPK3-MLKL通路探讨其作用机制。方法体外培养H9C2细胞,建立缺氧/复氧模型。将细胞分为对照组、模型组、黄芪丹参+激活剂(油酸)组、黄芪丹参... 目的观察黄芪-丹参配伍对缺氧/复氧诱导的H9C2心肌细胞坏死性凋亡的影响,基于CaMKⅡδ-RIPK1/RIPK3-MLKL通路探讨其作用机制。方法体外培养H9C2细胞,建立缺氧/复氧模型。将细胞分为对照组、模型组、黄芪丹参+激活剂(油酸)组、黄芪丹参组和抑制剂(KN-93磷酸盐)组,分别于相应培养基培养。试剂盒检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)水平,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-qPCR和Western blot检测钙调蛋白激酶(CaMK)Ⅱδ、受体相互作用蛋白激酶(RIPK)1、RIPK3、混合系激酶区域样蛋白(MLKL)mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,模型组细胞上清液LDH水平显著升高(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),CaMKⅡδ、RIPK1、RIPK3和MLKL mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,黄芪丹参组细胞上清液LDH水平显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著降低(P<0.01),CaMKⅡδ、RIPK1、RIPK3和MLKL mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。黄芪丹参作用与CaMKⅡδ抑制剂KN-93磷酸盐相当。结论黄芪-丹参配伍可减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤,抑制心肌细胞坏死性凋亡,其机制与下调CaMKⅡδ-RIPK1/RIPK3-MLKL通路有关。 展开更多
关键词 黄芪 丹参 h9c2细胞 缺氧/复氧 钙调蛋白激酶Ⅱδ 坏死性凋亡 RIPK1/RIPK3-MLKL通路
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淫羊藿总黄酮对D-半乳糖致H9c2细胞衰老的保护作用研究 被引量:10
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作者 李靳 张长城 +4 位作者 杨莉 王婷 周志勇 袁丁 顿耀艳 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期2255-2258,共4页
目的:研究淫羊藿总黄酮(Total Flavonoids of Epimedium,TFE)对D-半乳糖诱导H9c2细胞衰老模型的影响及其机制。方法:采用不同浓度TFE干预D-半乳糖作用的H9c2细胞,以细胞形态学和β-半乳糖苷酶染色检验细胞衰老情况,并检测超氧化物歧化酶... 目的:研究淫羊藿总黄酮(Total Flavonoids of Epimedium,TFE)对D-半乳糖诱导H9c2细胞衰老模型的影响及其机制。方法:采用不同浓度TFE干预D-半乳糖作用的H9c2细胞,以细胞形态学和β-半乳糖苷酶染色检验细胞衰老情况,并检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、细胞内活性氧(ROS)水平以及细胞凋亡情况。结果:各浓度TFE均能显著降低D-半乳糖所致的β-半乳糖苷酶染色阳性的细胞数目、MDA含量及ROS荧光强度,并能升高SOD活性,改善细胞核染色质浓缩及减少凋亡小体。结论:TFE可通过抗氧化和减少细胞早期凋亡来对抗D-半乳糖所致H9c2细胞衰老。 展开更多
关键词 淫羊藿总黄酮 D-半乳糖 h9c2细胞 衰老
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RISK信号通路在1-磷酸鞘氨醇后适应减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用 被引量:9
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作者 王雨晴 吴艳娜 +4 位作者 李欣 尹永强 康毅 娄建石 温克 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期181-185,共5页
目的研究再灌注损伤挽救激酶(reperfusion injury salvage kinase,RISK)信号通路在1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)后适应减轻H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用。方法将H9c2细胞随机分为7组,即(1)正常对照组(C);(2)缺氧/... 目的研究再灌注损伤挽救激酶(reperfusion injury salvage kinase,RISK)信号通路在1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)后适应减轻H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用。方法将H9c2细胞随机分为7组,即(1)正常对照组(C);(2)缺氧/复氧组(H/R);(3)S1P组;(4)S1P+LY294002组(S1P+LY);(5)LY组;(6)S1P+PD98059组(S1P+PD);(7)PD组。采用MTT法测定各组细胞存活率;比色法测定丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(TSOD)和锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活力;采用激光共聚焦显微镜技术检测细胞内游离钙离子浓度变化;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率;Western blot法测定Akt和ERK1/2蛋白的磷酸化水平。结果与H/R组比较,S1P组可明显增加H9c2细胞缺氧/复氧损伤后细胞存活率及凋亡率,增加TSOD及Mn-SOD活力,降低MDA含量,降低钙离子浓度,增加Akt和ERK1/2磷酸化水平,而PI3K/Akt信号通路阻断剂LY294002或ERK1/2阻断剂PD98059可阻断S1P对H9c2的上述作用。结论 S1P能够减轻H9c2细胞缺氧/复氧损伤,加入PI3K/Akt抑制剂LY294002和ERK1/2抑制剂PD98059均使S1P的保护作用被取消,表明S1P通过RISK信号通路发挥抗H9c2细胞缺氧/复氧损伤作用。 展开更多
关键词 S1P 缺氧/复氧 h9c2细胞 PI3K/Akt ERK1/2 RISK
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原花青素B2通过抑制NLRP3活性减轻过氧化氢对H9c2细胞的损伤 被引量:9
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作者 姚鹏梅 刘倩倩 +2 位作者 金婷 唐富天 刘义 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1552-1557,共6页
目的研究原花青素B2(procyanidin B2,PCB2)对过氧化氢(H2O2)诱导的H9c2心肌细胞损伤的作用和机制。方法将H9c2细胞分为5组,分别是对照(control)组,H2O2组,H2O2+PCB2(5 mg·kg^-1)组,H2O2+PCB2(15 mg·kg^-1)和H 2O 2+PCB2(45 mg... 目的研究原花青素B2(procyanidin B2,PCB2)对过氧化氢(H2O2)诱导的H9c2心肌细胞损伤的作用和机制。方法将H9c2细胞分为5组,分别是对照(control)组,H2O2组,H2O2+PCB2(5 mg·kg^-1)组,H2O2+PCB2(15 mg·kg^-1)和H 2O 2+PCB2(45 mg·kg^-1)组。测定细胞NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱天冬酶-1(caspase-1)、白细胞介素(IL)-1β和IL-18蛋白表达。测定细胞活性氧(ROS)含量,丙二醛(MDA)含量,乳酸脱氢酶(LDH)、总抗氧化酶(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果与Control组相比,H2O2组H9c2细胞活力下降,LDH释放增加。与H2O2组相比,PCB2能够增加细胞活力和降低LDH释放,且作用具有剂量依赖性。PCB2还能够剂量依赖性地下调H2O2作用后细胞中NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达水平,减少MDA和ROS含量,增加T-AOC、SOD、CAT和GSH-Px活性。结论PCB2能够减轻H2O2引起的H9c2细胞损伤,该作用与其抑制氧化应激介导的NLRP3活化有关。 展开更多
关键词 原花青素B2 过氧化氢 h9c2细胞 NLRP3 抗氧化酶 丙二醛
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胰岛素激活PI_3K-AKT通路而促进H9c2心肌细胞葡萄糖摄取 被引量:9
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作者 叶林 陆凯 +1 位作者 张冬颖 覃数 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期538-542,共5页
目的探索胰岛素(Insulin)对H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的影响及其与PI3K-AKT信号通路的关系。方法采用不同时间及不同浓度的胰岛素处理H9c2心肌细胞,确定胰岛素处理H9c2细胞的最佳浓度和最适时间。实验分空白对照组(NC组),2-NBDG组,Insulin... 目的探索胰岛素(Insulin)对H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的影响及其与PI3K-AKT信号通路的关系。方法采用不同时间及不同浓度的胰岛素处理H9c2心肌细胞,确定胰岛素处理H9c2细胞的最佳浓度和最适时间。实验分空白对照组(NC组),2-NBDG组,Insulin组,Insulin+PI3K-AKT通路抑制剂LY294002组(LY294002组),Insulin+p38MAPK通路抑制剂BIRB796组(BIRB796组),使用荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)检测H9c2心肌细胞葡萄糖摄取能力,以流式细胞仪和荧光酶标仪检测心肌细胞对葡萄糖摄取的变化。通过间接免疫荧光法及激光共聚焦检测H9c2心肌细胞葡萄糖转运体-1(glucose tansporter-1,GLUT-1)及葡萄糖转运体-4(glucose tansporter-4,GLUT-4)的表达。结果 12-NBDG可用于检测H9c2心肌细胞葡萄糖摄取能力。2Insulin处理H9c2心肌细胞最适浓度和时间分别为200μmol/L和30 min。3Insulin组与对照组相比增加H9c2心肌细胞葡萄糖摄取(P<0.05);LY294002组与Insulin组相比降低心肌细胞葡萄糖摄取,两组间差异明显(P<0.05),BIRB796组较Insulin组无统计学差异(P>0.05),提示LY294002可抑制Insulin促进心肌细胞葡萄糖摄取,而BIRB796不能抑制上述作用。4 H9c2心肌细胞膜表达葡萄糖转运体1(GLUT1)和葡萄糖转运体4(GLUT4),Insulin处理H9c2心肌细胞30min后经激光共聚焦成像显示H9c2心肌细胞膜GLUT1和GLUT4表达增加(P<0.05)。结论胰岛素促进H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的作用可能与PI3K-AKT通路相关,与p38MAPK通路不相关,胰岛素激活PI3K-AKT信号通路后可能促进H9c2心肌细胞膜上GLUT-1及GLUT-4的表达,从而使H9c2心肌细胞对葡萄糖摄取增加。 展开更多
关键词 胰岛素 2-NBDG h9c2心肌细胞 葡萄糖摄取 PI3K-AKT p38MAPK GLUT1和GLUT4
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丁香酚对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用 被引量:9
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作者 马强 吴文宁 陈荣 《安徽医学》 2017年第11期1369-1373,共5页
目的研究丁香酚对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞损伤的影响。方法使用不同浓度H_2O_2建立H9C2心肌细胞氧化损伤模型,将建立好的心肌细胞氧化损伤模型分为对照组、50μg/mL丁香酚处理组、100μg/mL丁香酚处理组和200μg/mL丁香酚处理组,采用MT... 目的研究丁香酚对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞损伤的影响。方法使用不同浓度H_2O_2建立H9C2心肌细胞氧化损伤模型,将建立好的心肌细胞氧化损伤模型分为对照组、50μg/mL丁香酚处理组、100μg/mL丁香酚处理组和200μg/mL丁香酚处理组,采用MTT法观察吸光度值(OD)变化来评价丁香酚对H9C2心肌细胞活力的影响;采用Hoechst染色法观察细胞核形态变化,评价丁香酚对H9C2心肌细胞凋亡的影响;为进一步研究丁香酚的抗氧化损伤作用,采用比色法检测试剂盒观察丁香酚对H9C2心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量的影响。结果 400μmol/L H_2O_2显著降低H9C2细胞活力,增加细胞凋亡,适宜建立H9C2心肌细胞氧化损伤模型。100μg/mL和200μg/mL的丁香酚增加H9C2细胞活力,减少细胞凋亡(P<0.05);同时,H_2O_2诱导H9C2细胞LDH及MDA含量增加和SOD含量减少的效应也可被100μg/mL和200μg/mL的丁香酚抑制。结论丁香酚对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞损伤具有保护作用。 展开更多
关键词 丁香酚 h9c2细胞 氧化损伤 细胞保护
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鸢尾素通过调控NF-κB通路减轻糖尿病心肌病炎症反应 被引量:5
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作者 张驰 黄静 +2 位作者 杨萍 刘星 范忠才 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期545-551,共7页
目的探究鸢尾素(irisin)在糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)中的保护作用及其机制。方法高脂饮食联合链脲佐菌素建立DCM小鼠模型,动物实验设置对照组,DCM组,DCM+低、高剂量irisin组以及DCM+吡咯烷二硫代氨基甲酸(pyrrolidine ... 目的探究鸢尾素(irisin)在糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)中的保护作用及其机制。方法高脂饮食联合链脲佐菌素建立DCM小鼠模型,动物实验设置对照组,DCM组,DCM+低、高剂量irisin组以及DCM+吡咯烷二硫代氨基甲酸(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)〔核因子(nuclear factor,NF)-κB抑制剂〕组,成功建模后irisin干预3周。采用HE、Masson染色观察心肌形态学改变;全自动生化分析仪检测血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)和肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)水平。将H9c2细胞分为对照组、高糖/高脂(HG/HL)组、HG/HL+低剂量irisin组、HG/HL+高剂量irisin组以及HG/HL+PDTC组,CCK-8法检测细胞活力。ELISA测定心肌组织和细胞肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-6表达水平;Western blot检测心肌组织和细胞中NF-κB p65蛋白核转移情况以及核因子κB抑制蛋白α(nuclear factor-κB inhibitor proteinα,IκBα)表达水平。结果动物实验结果显示,低、高剂量irisin能不同程度减轻心肌组织病理损伤与纤维化,抑制CK、CK-MB和炎症因子水平,上调IκBα蛋白表达,抑制NF-κB p65核转移;细胞实验结果显示,低、高剂量irisin能不同程度增强H9c2细胞活力,上调IκBα蛋白水平,抑制NF-κB p65核转移和炎症因子水平。DCM+低、高剂量irisin组的上述变化与DCM+PDTC组相似。结论irisin可能通过抑制NF-κB p65核转移,减轻DCM小鼠心肌组织和高糖高脂诱导H9c2心肌损伤细胞中的炎症反应,发挥心肌保护作用。 展开更多
关键词 糖尿病心肌病 鸢尾素 h9c2细胞 小鼠 炎症反应 NF-κB核转移
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北葶苈子炮制前后对H2O2诱导的H9c2心肌细胞损伤保护作用 被引量:9
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作者 王慧慧 张莉 +2 位作者 杨方方 冯卫生 郑晓珂 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期2018-2024,共7页
目的比较北葶苈子炮制前后对H2O2诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法H2O2诱导H9c2细胞建立细胞损伤模型,同时加入北葶苈子生品及炮制品(400、200、100μg/mL)处理细胞6 h。MTT法检测H9c2细胞存活率,流式细胞术检测细胞ROS、线粒体... 目的比较北葶苈子炮制前后对H2O2诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法H2O2诱导H9c2细胞建立细胞损伤模型,同时加入北葶苈子生品及炮制品(400、200、100μg/mL)处理细胞6 h。MTT法检测H9c2细胞存活率,流式细胞术检测细胞ROS、线粒体膜电位、细胞凋亡率、自噬空泡,Incell-Western法检测细胞凋亡相关蛋白,并检测细胞LDH、MDA、T-SOD、GSH-PX水平。结果与模型组比较,北葶苈子炮制前后均能降低H9c2细胞凋亡率、自噬空泡、ROS水平及凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值(P<0.01),增加线粒体膜电位(P<0.01),降低细胞培养液中LDH及细胞MDA水平(P<0.01),提高细胞T-SOD、GSH-PX水平(P<0.05,P<0.01);北葶苈子炮制品抑制caspase-3蛋白表达(P<0.05)。结论北葶苈子炮制前后均可有效改善由H2O2诱导的心肌细胞损伤,可能与其调节氧化应激的作用有关。 展开更多
关键词 北葶苈子 h9c2细胞 凋亡 自噬 氧化应激
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氯化钴诱导心肌细胞化学性缺氧HIF-1α表达的研究 被引量:9
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作者 石朔 王利华 +4 位作者 郭睿 张敏 苗莹 张淼 李彪 《诊断学理论与实践》 2013年第5期532-536,共5页
目的:观察不同浓度的氯化钴(CoCl2)对H9C2心肌细胞的影响及其诱导化学性缺氧的最佳浓度和时间。方法:用100、300、600、900、1200μmol/L的CoCI2处理H9C2心肌细胞,建立化学性缺氧诱导心肌细胞损伤的实验模型,分别于12、18、24、3... 目的:观察不同浓度的氯化钴(CoCl2)对H9C2心肌细胞的影响及其诱导化学性缺氧的最佳浓度和时间。方法:用100、300、600、900、1200μmol/L的CoCI2处理H9C2心肌细胞,建立化学性缺氧诱导心肌细胞损伤的实验模型,分别于12、18、24、36、48h用Hoechst33342细胞核染色法检测心肌细胞凋亡:CCK-8试剂盒检测心肌细胞存活率;确定最佳诱导浓度600μmol/L后,分别于0、3、6、9、12、18、24、36、48h采用蛋白印迹法检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白的表达;确定最佳诱导时间后,用蛋白印迹法检测100、300、600、900、1200μmol/LCoCl2处理H9C2心肌细胞12h后HIF-1α蛋白的表达情况。结果:在600~1200μmo1/L浓度范围内,CoCl2呈剂量依赖性地抑制H9C2心肌细胞的存活。600μmol/LCoCl2诱导12h后H9C2心肌细胞产生明显凋亡.诱导12~48h范围内.12h时H9C2心肌细胞表达的HIF-1α蛋白最高:100~1200μmoI/LCoCl2诱导H9C2心肌细胞12h.其中600μmol/LCoCl2诱导时H9C2心肌细胞表达的HIF-α蛋白最高。结论:CoCl2诱导H9C2心肌细胞化学性缺氧的最佳浓度为600μmol/L.此时最佳时间为12h。 展开更多
关键词 氯化钴 化学性缺氧 缺氧诱导因子1Α h9c2心肌细胞
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