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H6亚型禽流感病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:5
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作者 周辰瑜 谢芝勋 +6 位作者 彭宜 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 谢丽基 范晴 《畜牧与兽医》 北大核心 2012年第11期12-16,共5页
本研究旨在建立一种快速、特异、敏感的H6亚型禽流感病毒(AIV)实时荧光定量RT-PCR检测方法。针对H6亚型AIV的血凝素(HA)基因序列保守区设计1对引物,并优化反应条件。结果表明,该方法的最低检测限为1.07×101拷贝质粒DNA,与常规PCR相... 本研究旨在建立一种快速、特异、敏感的H6亚型禽流感病毒(AIV)实时荧光定量RT-PCR检测方法。针对H6亚型AIV的血凝素(HA)基因序列保守区设计1对引物,并优化反应条件。结果表明,该方法的最低检测限为1.07×101拷贝质粒DNA,与常规PCR相比,灵敏度高出1 000倍;扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,Tm值为(80.81±0.08)℃,组内变异系数为0.08%~0.99%,组间变异系数为1.85%,可重复性好;对H1、H3、H5、H7、H9亚型禽流感病毒及新城疫病毒等其他呼吸道病原体无扩增;检测快速,从样本处理到报告结果仅需3.5 h。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h6亚型 荧光定量RT—PCR
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两株H6亚型禽流感病毒全基因组序列测定及遗传进化分析 被引量:5
2
作者 李旭勇 李玉保 +6 位作者 刘文强 马树杰 崔鹏飞 孙香雪 潘玉迪 陈化兰 郭晶 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期275-278,共4页
为研究2016年在活禽交易市场鸭体内分离的2株H6亚型禽流感病毒(AIV)[分别是A/duck/Jiangxi/88/2016(H6N6)(简称DK/88/16)和A/duck/Jiangxi/219/2016(H6N2)(简称DK/219/16)]分子特征及遗传进化规律,本实验对其进行了全基因组扩增和测序,... 为研究2016年在活禽交易市场鸭体内分离的2株H6亚型禽流感病毒(AIV)[分别是A/duck/Jiangxi/88/2016(H6N6)(简称DK/88/16)和A/duck/Jiangxi/219/2016(H6N2)(简称DK/219/16)]分子特征及遗传进化规律,本实验对其进行了全基因组扩增和测序,并进行了遗传进化分析。结果显示,2株病毒间HA基因同源性较低,仅为94.5%,但与我国近年分离的H6亚型病毒株保持较高同源性。DK/88/16和DK/219/16的NA基因分别与我国近年流行的流感病毒N6和N2基因保持较高同源性。对2株病毒的内部基因分析显示,其内部基因的来源较为复杂,其中DK/88/16的内部基因PA来源于我国最近流行的H5N2或H5N6病毒,显示该株病毒为新的重组病毒。对2株病毒的分子特征分析显示,除M1蛋白的30和215位点及NS1蛋白的42位点具有增强病毒对小鼠致病力的分子特征外,其余均保持低致病力分子特征。以上结果表明,H6N2和H6N6亚型AIV在我国鸭群中持续存在,并不断的遗传重组,需要进行持续的流行病学监测。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h6亚型 基因遗传分析
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H6亚型禽流感病毒一步法RT-PCR检测方法的建立 被引量:4
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作者 谭丹 邓国华 +2 位作者 施建忠 刘道新 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期142-145,共4页
为快速检测临床样品中的H6亚型禽流感病毒(AIV),本研究通过分析流感数据库中H6亚型的HA基因,在HA保守区设计一对引物,建立一种用于扩增H6亚型禽流感病毒HA基因的一步法RT-PCR检测方法,扩增片段为327 bp。采用该方法对H6亚型AIV的尿囊液1... 为快速检测临床样品中的H6亚型禽流感病毒(AIV),本研究通过分析流感数据库中H6亚型的HA基因,在HA保守区设计一对引物,建立一种用于扩增H6亚型禽流感病毒HA基因的一步法RT-PCR检测方法,扩增片段为327 bp。采用该方法对H6亚型AIV的尿囊液10倍倍比稀释样品进行检测,结果显示最低检出量为102.5EID50/mL。用该方法检测其他亚型AIV和鸡新城疫病毒等病原均为阴性,具有良好的特异性。对H6 AIV人工感染鸡的咽喉、泄殖腔棉拭子样品进行一步法RT-PCR检测,并与病毒分离进行比较,显示该方法对棉拭子的检测极限可达102.5EID50/mL,同时利用该方法及病毒分离对临床样品进行检测,两者检测结果一致。实验结果表明该RT-PCR方法具有较好的特异性、敏感性,可以应用于临床样品的实验室检测。 展开更多
关键词 禽流感病毒 一步法RT-PCR h6亚型
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湖南湖北两省H_6亚型禽流感病毒表面基因的序列分析 被引量:4
4
作者 丁晴微 于杨 +7 位作者 崔鹏飞 齐瑛琳 李印 施建忠 崔佳莹 邱伯根 陈化兰 邓国华 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期282-287,共6页
2008年至2009年间,在湖南和湖北两省的活禽市场中分离到了14株H6亚型禽流感病毒,为了解这14株病毒之间的分子特征和差异,我们运用PCR和测序鉴定对这14株病毒的NA基因进行了分型,并对其表面基因HA和NA进行序列测定及序列分析。14株H6亚... 2008年至2009年间,在湖南和湖北两省的活禽市场中分离到了14株H6亚型禽流感病毒,为了解这14株病毒之间的分子特征和差异,我们运用PCR和测序鉴定对这14株病毒的NA基因进行了分型,并对其表面基因HA和NA进行序列测定及序列分析。14株H6亚型病毒中,H6N2亚型12株,H6N6亚型2株。序列测定和进化分析结果显示:DK/HN/284的HA基因与其它13株的HA差异性较大,差异性达到19.4%~20.2%,其余13株毒同源性在94.2%~99.9%;N2亚型NA基因的同源性在91.1%~99.9%,差异性比较大;两株N6亚型NA基因同源性为89.5%,差异明显。这些数据表明:不同毒株呈现一定的地域性差异。与我国周边其它地区的H6亚型禽流感毒株序列进行比较发现,只有DK/HN/284的HA基因与香港早期的毒株可能有着共同的来源,其余都与香港和韩国等的毒株有着较大的差异性,并且各个毒株的HA基因上潜在的糖基化位点和受体结合位点也有所不同,这些数据表明,这些毒株表现出明显的异源性。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h6亚型 hA NA 基因分析
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H9和H6亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测方法的建立 被引量:2
5
作者 李丹 李孟 +10 位作者 谢芝勋 罗思思 谢丽基 张民秀 黄娇玲 范晴 王盛 谢志勤 邓显文 曾婷婷 张艳芳 《贵州农业科学》 CAS 2020年第4期87-91,共5页
为H9与H6亚型禽流感病毒(AIV)的监测及其防控提供技术支撑,依据Genbank中H9和H6亚型AIV的HA基因及所有亚型AIV M基因的保守序列,分别设计3对特异性引物,优化退火温度和引物浓度及其配比等条件,建立并优化可同时鉴别检测H9和H6亚型AIV的... 为H9与H6亚型禽流感病毒(AIV)的监测及其防控提供技术支撑,依据Genbank中H9和H6亚型AIV的HA基因及所有亚型AIV M基因的保守序列,分别设计3对特异性引物,优化退火温度和引物浓度及其配比等条件,建立并优化可同时鉴别检测H9和H6亚型AIV的三重RT-PCR检测方法,并对所建方法进行特异性、敏感性及临床样品检测验证。结果表明:三重RT-PCR反应的最佳体系为2×PCR Mix 12.5μL,H9与H6亚型AIV cDNA共2μL为模板,特异性引物M-F和M-R(20pmol/μL)加入量为0.6μL,特异性引物H9-F和H9-R(20pmol/μL)及H6-F和H6-R(20pmol/μL)的加入量分别为0.7μL和1μL,用RNA-free水补足至终体积为25μL,退火温度53℃。该方法可在一个反应管内同时鉴别检测H9与H6亚型AIV,特异性强,敏感性高,可推广应用。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h9亚型 h6亚型 M基因 三重RT-PCR
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H9和H6亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测方法的建立 被引量:2
6
作者 李丹 谢芝勋 +7 位作者 宋德贵 李孟 谢志勤 罗思思 谢丽基 黄莉 范晴 黄娇玲 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第12期3101-3106,共6页
试验旨在建立可同时鉴别检测H9和H6亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的二重RT-PCR方法。根据GenBank中H9和H6亚型AIV的HA基因保守序列,分别设计2对特异性引物,优化引物浓度与退火温度等条件,建立了可同时鉴别检测H9和H6亚型AI... 试验旨在建立可同时鉴别检测H9和H6亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的二重RT-PCR方法。根据GenBank中H9和H6亚型AIV的HA基因保守序列,分别设计2对特异性引物,优化引物浓度与退火温度等条件,建立了可同时鉴别检测H9和H6亚型AIV的二重RT-PCR检测方法。用该法对H9和H6亚型AIV混合感染样品、H9亚型AIV单一感染样品和H6亚型AIV单一感染样品进行扩增,结果均得到对应的目的条带,而对其余亚型AIV及其他禽病病原体均未扩增出特异性条带。该法对H9和H6亚型AIV的检测下限均为5×104拷贝/μL。本研究建立的二重RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高、稳定性和重复性良好,可同时鉴别检测H9与H6两种亚型AIV,为H9与H6亚型AIV的监测提供技术支撑。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h9亚型 h6亚型 二重RT-PCR
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广西H6亚型禽流感病毒HA基因的遗传变异分析 被引量:2
7
作者 粟艳琼 邹联斌 +3 位作者 胡杰 张步娴 屈素洁 莫胜兰 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1907-1911,共5页
本研究于2009至2014年间在广西南宁、防城港和梧州三市活禽交易市场中分离获得12株H6亚型禽流感病毒(AIV)毒株。通过RT-PCR、序列测定及基因序列分析,结果表明,扩增获得的12株毒株基因大小均为1 701 bp,与Gen Bank中所登录的HA基因大小... 本研究于2009至2014年间在广西南宁、防城港和梧州三市活禽交易市场中分离获得12株H6亚型禽流感病毒(AIV)毒株。通过RT-PCR、序列测定及基因序列分析,结果表明,扩增获得的12株毒株基因大小均为1 701 bp,与Gen Bank中所登录的HA基因大小一致;其氨基酸序列推导结果发现12株分离毒株裂解位点氨基酸序列均为PQIETRG,只含有一个碱性氨基酸,符合低致病禽流感病毒的特点;对糖基化位点进行分析,结果发现HA基因中存在8个潜在糖基化位点,其中只有毒株GX2161的182~184 aa处发生了交替,其氨基酸序列为R-N-T,这与高致病力毒株的R-X-R/K-R的分子特征不同,推测GX6121毒株可能为典型的低致病力毒株。12个分离毒株与Gen Bank中公开登录的其它20个H6亚型AIV毒株的遗传进化树分析表明,防城港的4株毒株与越南株LC050583处于同一分支上,梧州的3株毒株与越南株LC042081处于同一分支,表现出较明显的地域性,而由于地理位置的影响,南宁的5株毒株则与越南株LC050583、广西株HQ599858、JX304770形成三个分支,表现出较近亲缘性,这表明AIV中HA存在一定的遗传变异性。本研究在分子水平上为有效防控广西活禽市场中H6亚型AIV的感染提供参考。 展开更多
关键词 禽流感 hA基因 h6亚型 遗传变异
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一株广西鸡源H6亚型禽流感病毒全基因组序列分析及其重要生物学特性 被引量:2
8
作者 李孟 谢芝勋 +10 位作者 李丹 罗思思 谢丽基 张民秀 黄娇玲 范晴 王盛 谢志勤 邓显文 曾婷婷 张艳芳 《安徽农业科学》 CAS 2020年第23期125-128,142,共5页
2017年对广西地区活禽交易市场进行低致病性禽流感流行病学调查,从采集的鸡咽喉和泄殖腔拭子中分离鉴定出一株鸡源H6N6亚型禽流感病毒,命名为A/chicken/Guangxi/286C10/2017(H6N6)。应用RT-PCR方法分别对分离毒株的8个基因片段进行扩增... 2017年对广西地区活禽交易市场进行低致病性禽流感流行病学调查,从采集的鸡咽喉和泄殖腔拭子中分离鉴定出一株鸡源H6N6亚型禽流感病毒,命名为A/chicken/Guangxi/286C10/2017(H6N6)。应用RT-PCR方法分别对分离毒株的8个基因片段进行扩增,同时将产物进行克隆和测序,然后对测序结果进行同源性比对及遗传进化分析。另外,还通过固相受体结合试验对毒株的唾液酸受体进行测定。结果显示,该分离株的HA基因与广东分离株A/chicken/Guangdong/G3249/2014(H6)的核苷酸同源性最高,裂解位点符合低致病性禽流感病毒的分子特征;NA基因与江西分离株A/duck/Ganzhou/GZ148/2016(H6N6)核苷酸同源性最高;内部基因中,PB1和NS基因来源于广东的鸡,PB2基因来源于越南的鸡,PA、NP和M基因来源于广西的鹅;同时,研究还发现该病毒的HA、NA、PA、NP和M基因来源H6亚型AIV,PB2、PB1和NS基因来源H9N2亚型AIV,推测A/chicken/Guangxi/286C10/2017(H6N6)可能是由不同地区、不同宿主来源的H6和H9亚型AIV通过基因重组产生的一株新的重配毒株。由于广西地理位置特殊,今后应加强对该地区H6亚型禽流感病毒变异情况的监测。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h6亚型 遗传进化 受体分析
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一株三穗鸭源H6N6亚型禽流感病毒的分离鉴定 被引量:1
9
作者 陈佳琪 嵇辛勤 +4 位作者 段志强 文明 阮涌 李世静 雷云 《动物医学进展》 北大核心 2015年第10期48-53,共6页
探讨H6N6亚型禽流感病毒在鸭群中的流行状况,为贵州省流感疫情动态监测及防控提供依据。从贵州三穗县某养鸭殖场采集50份泄殖腔棉拭子,处理后经过绒毛尿囊腔接种9日龄非免疫鸡胚,通过血凝(HA)和血凝抑制试验(HI)分离到1株既不是新城疫病... 探讨H6N6亚型禽流感病毒在鸭群中的流行状况,为贵州省流感疫情动态监测及防控提供依据。从贵州三穗县某养鸭殖场采集50份泄殖腔棉拭子,处理后经过绒毛尿囊腔接种9日龄非免疫鸡胚,通过血凝(HA)和血凝抑制试验(HI)分离到1株既不是新城疫病毒,也不是H5、H7和H9亚型禽流感的病毒;提取病毒RNA,通过禽流感病毒HA和NA基因通用引物扩增得到相应的HA和NA基因片段。经过测序比对分析证实所分离病毒为H6N6亚型禽流感病毒。贵州鸭群中存在H6N6亚型禽流感病毒,为进一步研究其起源和致病性提供了重要依据。 展开更多
关键词 h6亚型 禽流感病毒 分离 鉴定
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H4和H6亚型禽流感病毒血凝素蛋白特异性单因子血清的制备
10
作者 杨佳运 李旭勇 +4 位作者 贾艳娥 郭晶 翁少亭 高雪 朱启运 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1058-1063,共6页
为制备H4和H6亚型禽流感病毒血凝素蛋白特异性单因子血清,以便快速鉴定H4以及H6亚型禽流感病毒,根据GenBank中A/Duck/Hunan/S11090/2012(H4N6)和A/Chicken/Guangdong/S1312/2010(H6N2)的血凝素基因序列,人工合成并进行密码子优化后插入... 为制备H4和H6亚型禽流感病毒血凝素蛋白特异性单因子血清,以便快速鉴定H4以及H6亚型禽流感病毒,根据GenBank中A/Duck/Hunan/S11090/2012(H4N6)和A/Chicken/Guangdong/S1312/2010(H6N2)的血凝素基因序列,人工合成并进行密码子优化后插入真核表达载体pCAGGs,通过双酶切鉴定以及测序确定重组质粒构建成功。给每只SPF鸡注射免疫200μg重组质粒,免疫周期为30d,第3次免疫后第10天,通过心脏采血收获单因子血清。间接免疫荧光试验和Western-blot试验的结果表明,重组质粒中HA基因均被成功表达。利用H4和H6亚型禽流感病毒抗原进行血凝抑制试验,结果显示抗体效价均在64至128之间,表明制备的单因子血清抗体效价较高,敏感性强。使用其他亚型的禽流感病毒以及新城疫病毒为抗原进行血凝抑制试验发现结果均为阴性,表明制备的单因子血清与其他亚型禽流感病毒及新城疫病毒无交叉反应。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h4亚型 h6亚型 单因子血清
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两株野鸟源H6N1和H6N8亚型禽流感病毒的遗传进化分析和对小鼠的感染性研究 被引量:1
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作者 蒋文明 李金平 +3 位作者 彭程 王素春 侯广宇 陈继明 《中国动物检疫》 CAS 2017年第4期90-93,共4页
为了解2016年在江西省鄱阳湖野鸟中分离的两株H6N8和H6N1亚型禽流感病毒(P419和P339)的生物学特性,本研究对其进行了全基因组序列测定、受体分析和对BALB/c小鼠的感染性试验。序列分析结果显示,这2个毒株属于不同的分支,并经历了不同亚... 为了解2016年在江西省鄱阳湖野鸟中分离的两株H6N8和H6N1亚型禽流感病毒(P419和P339)的生物学特性,本研究对其进行了全基因组序列测定、受体分析和对BALB/c小鼠的感染性试验。序列分析结果显示,这2个毒株属于不同的分支,并经历了不同亚型病毒间的广泛重组。2个分离株的HA裂解位点基序均为PQIETR/GLF,符合低致病性禽流感病毒的分子特征。HA蛋白受体结合位点处第138、226、228位氨基酸残基分别为丙氨酸(A)、谷氨酰胺(Q)、甘氨酸(G),具有结合禽样流感病毒受体的分子特征。受体结合试验表明,分离毒株仅能结合禽样受体。Balb/c小鼠的感染性试验结果显示,分离株只在小鼠的上呼吸道鼻甲中进行有限复制,使小鼠体重发生轻微变化,未表现明显临床症状,表明这2株分离株可感染小鼠,但致病力不强。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h6亚型 野鸟 感染性
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H6亚型鸭源流感病毒HA基因序列分析 被引量:1
12
作者 李岩 《现代畜牧兽医》 2015年第4期5-8,共4页
为了研究H6亚型禽流感病毒的分子特征,本研究从鸭的咽喉拭子样本中分离到一株禽流感病毒,通过血凝抑制试验证实该分离株为H6亚型流感病毒,命名为A/duck/Heilongjiang/QG1/2013(H6)。对其血凝素基因进行了克隆和序列分析,结果表明分离株... 为了研究H6亚型禽流感病毒的分子特征,本研究从鸭的咽喉拭子样本中分离到一株禽流感病毒,通过血凝抑制试验证实该分离株为H6亚型流感病毒,命名为A/duck/Heilongjiang/QG1/2013(H6)。对其血凝素基因进行了克隆和序列分析,结果表明分离株与我国鸭源禽流感病毒A/duck/Guangxi/585/2005(H6N5)的同源性最高,达到97.8%。系统发育树分析进一步证实分离株与A/duck/Guangxi/585/2005(H6N5)的亲缘关系最近,共同起源于台湾分离株A/chicken/Taiwan/G23/87(H6N1)。本研究为H6亚型禽流感的流行病学研究补充了新的数据。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h6亚型 hA基因 序列分析
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广西H6亚型禽流感病毒流行病学调查 被引量:1
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作者 粟艳琼 马育兵 +4 位作者 邹联斌 胡杰 张步娴 屈素洁 莫胜兰 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期589-594,共6页
为了解广西H6亚型AIV感染情况,本研究于2013~2015年间随机采集了南宁、柳州、北海、防城港、梧州五市活禽市场中的鸡棉拭子、鸭棉拭子及环境棉拭子并用PCR对棉拭子进行检测,分析结果表明,广西H6亚型AIV感染的阳性率为5.93%(736/12 415)... 为了解广西H6亚型AIV感染情况,本研究于2013~2015年间随机采集了南宁、柳州、北海、防城港、梧州五市活禽市场中的鸡棉拭子、鸭棉拭子及环境棉拭子并用PCR对棉拭子进行检测,分析结果表明,广西H6亚型AIV感染的阳性率为5.93%(736/12 415),且呈逐年上升趋势;鸭棉拭子感染率6.91%(434/6 280)高于鸡棉拭子感染率4.06%(203/4 995);在所有采集的棉拭子中,共分离获得H6亚型AIV毒株9株,分离率为0.08%。另外,受气候影响,春、冬两季感染率较高,且南宁市感染率高于其他四市。本次流行病学调查结果能较好地评估目前广西H6亚型AIV流行情况,为进一步做好H6亚型AIV感染防控工作提供了重要实验依据。 展开更多
关键词 h6亚型 禽流感 流行病学调查 棉拭子
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H6亚型禽流感病毒血凝素蛋白线性表位的预测与鉴定
14
作者 王建华 汪招雄 +3 位作者 郭露铰 龚军 何艳兵 任涛 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第7期12-18,共7页
应用生物信息学方法预测H6亚型禽流感病毒血凝素蛋白(HA)线性抗原表位,并对所获表位的免疫原性进行初步鉴定,为流感病毒表位疫苗研制和H6亚型特异性ELISA检测方法奠定基础。依据近年流感病毒流行趋势,从GenBank下载具有代表性的H6、H5... 应用生物信息学方法预测H6亚型禽流感病毒血凝素蛋白(HA)线性抗原表位,并对所获表位的免疫原性进行初步鉴定,为流感病毒表位疫苗研制和H6亚型特异性ELISA检测方法奠定基础。依据近年流感病毒流行趋势,从GenBank下载具有代表性的H6、H5、H7和H9亚型禽流感病毒血凝素蛋白的氨基酸序列。利用DNA Star软件进行H6同亚型间氨基酸序列保守性分析,再将H6与H5、H7、H9不同亚型之间氨基酸同源性进行比较,然后借助在线服务器ExPASy和IEDB对序列进行抗原性、亲水性、柔韧性、二级结构和表面可及性预测。最后去除H6与H5、H7、H9亚型氨基酸同源区域,选择H6亚型氨基酸相对保守区域并且抗原表位综合预测结果较优的几个片段,所选择表位长度为15个氨基酸。合成所获得的优势线性表位,并用间接ELISA方法对所获表位的免疫原性进行鉴定。预测后获得4个线性抗原表位,经鉴定免疫原性最好的为表位A,最差的为表位B。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h6亚型 血凝素蛋白 线性抗原表位
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广西鸭源H6N6亚型禽流感病毒NA的序列分析
15
作者 张步娴 邹联斌 +3 位作者 胡杰 粟艳琼 屈素洁 莫胜兰 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期72-78,共7页
2009年至2014年间我单位在广西南宁、防城港和梧州三市活禽交易市场进行流行病学调查时,在鸭咽喉和泄殖腔中分离到10株H6亚型禽流感病毒(AIV)毒株。为了解这10株病毒的神经氨酸酶基因(NA)的分子特征和差异,我们运用RT-PCR对这10株H... 2009年至2014年间我单位在广西南宁、防城港和梧州三市活禽交易市场进行流行病学调查时,在鸭咽喉和泄殖腔中分离到10株H6亚型禽流感病毒(AIV)毒株。为了解这10株病毒的神经氨酸酶基因(NA)的分子特征和差异,我们运用RT-PCR对这10株H6亚型禽流感病毒的NA基因进行了扩增、序列测定及分析。结果显示,所分离的10株病毒均为H6N6亚型流感病毒。序列同源性分析结果表明A/DK/NN/6121/2013株的NA基因与其他9株NA基因差异性较大,差异性达到5.4%~5.9%,其余9株之间相似性在97.9%~100%;南宁与防城港、南宁与梧州以及梧州与防城港毒株相似性分别为94.5%~100%、94.1%~98.1%和97.8%~98.5%,这些数据表明不同毒株呈现一定的地域性差异。氨基酸序列分析发现10个毒株NA基因上潜在的糖基化位点也有所不同,表明这些毒株有异源性。遗传进化分析表明10株NA基因片段均属于欧亚谱系的禽源演化分支,除了南宁市的DK/NN/6121与福建相应毒株遗传进化关系较近外,其他9株与越南的相应毒株相互之间遗传进化关系都很亲近,且与越南A/duck/Vietnam/LBM235/2012(H3N6)株的NA基因存在很近的遗传关系,推测它们之间的基因可能存在基因交流;同时发现与台湾和韩国等的毒株关联不大。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h6亚型 NA 基因分析
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H6亚型禽流感病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立和应用
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作者 莫胜兰 甘海霞 +7 位作者 粟艳琼 梁媛 张步娴 屈素洁 尹彦文 施开创 李军 邹联斌 《广西农学报》 2018年第1期43-46,共4页
为建立一种快速检测H6亚型禽流感病毒的基因检测方法,根据Gen Ban K中H6亚型禽流感病毒的HA基因保守序列设计一对引物和一条Taq Man探针,通过各项条件优化建立了检测H6亚型禽流感病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法特异性强... 为建立一种快速检测H6亚型禽流感病毒的基因检测方法,根据Gen Ban K中H6亚型禽流感病毒的HA基因保守序列设计一对引物和一条Taq Man探针,通过各项条件优化建立了检测H6亚型禽流感病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法特异性强,与其它亚型(H1、H3、H4、H5、H7、H9)禽流感病毒、传染性法氏囊病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡新城疫病毒、马立克氏病毒、传染性喉气管炎病毒等均不发生交叉反应。该方法经实验室和临床上多次试验,证明其特异性强、重复性好、灵敏度高,可用于H6亚型流感病毒的监测。 展开更多
关键词 h6亚型 禽流感病毒 TAQMAN探针 荧光定量
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H6亚型禽流感病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量:8
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作者 周辰瑜 谢芝勋 +7 位作者 宋杨 彭宜 陈安莉 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 谢丽基 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1855-1861,共7页
建立一种快速、敏感、特异的检测H6亚型禽流感病毒(AIV)逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。根据H6亚型AIV血凝素(HA)基因序列的保守区8个位点设计了6条特异性LAMP引物,以H6亚型AIV阳性样品RNA为模板进行一步法扩增,对反应条件和... 建立一种快速、敏感、特异的检测H6亚型禽流感病毒(AIV)逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。根据H6亚型AIV血凝素(HA)基因序列的保守区8个位点设计了6条特异性LAMP引物,以H6亚型AIV阳性样品RNA为模板进行一步法扩增,对反应条件和反应体系进行优化。结果表明该方法的特异性良好,对其他呼吸道病原体均无扩增反应。该方法灵敏度高,最低可检测到H6亚型AIV RNA为0.01 pg,该方法无需特殊仪器,只需在水浴锅中进行,是一种适于基层的简便、灵敏、快速的H6亚型AIV检测方法。 展开更多
关键词 h6亚型禽流感病毒 逆转录环介导等温扩增 特异性 敏感性
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基于H6蛋白禽流感抗体间接ELISA检测方法建立与应用 被引量:4
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作者 王微 张霞 +4 位作者 张人俊 胡安东 杨颖 温贵兰 文明 《山地农业生物学报》 2022年第1期21-27,共7页
为临床H6亚型禽流感抗体检测提供技术支撑,通过克隆得到的H6亚型禽流感病毒H6基因并与原核表达载体pET-32α连接,经PCR、酶切和测序鉴定后,转化大肠杆菌进行诱导表达和Western blotting鉴定,以纯化的表达产物为包被抗原,通过反应条件优... 为临床H6亚型禽流感抗体检测提供技术支撑,通过克隆得到的H6亚型禽流感病毒H6基因并与原核表达载体pET-32α连接,经PCR、酶切和测序鉴定后,转化大肠杆菌进行诱导表达和Western blotting鉴定,以纯化的表达产物为包被抗原,通过反应条件优化,建立检测禽流感病毒H6抗体的间接ELISA方法并对临床鸡血清样本检测评价。结果表明:该方法最佳反应条件是,包被抗原浓度为10μg/mL,4℃过夜;5%脱脂奶粉37℃封闭2 h;血清稀释度为1∶20,37℃孵育30 min;酶标二抗稀释度为1∶5000,37℃作用30 min;显色时间为37℃10 min。该ELISA方法可特异性检测H6亚型禽流感抗体,阳性血清稀释至1∶320仍可检出,与其他禽病阳性血清均无交叉反应,检测变异系数均小于10%。以该ELISA方法检测2017年至2019年收集的1837份家禽临床血清样本,H6亚型禽流感抗体阳性率为10.45%。这些结果表明,建立的基于H6蛋白禽流感抗体间接ELISA检测方法,具有良好的特异性、敏感性、重复性和可靠性,能为H6亚型禽流感血清流行病学调查提供技术手段。 展开更多
关键词 h6亚型禽流感 h6蛋白 间接ELISA方法 建立 应用
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检测H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法的建立及初步应用
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作者 万志敏 龚简汐 +7 位作者 赵喆泓 汤婷 李亚锋 谢泉 李拓凡 邵红霞 秦爱建 叶建强 《中国家禽》 北大核心 2024年第11期34-39,共6页
为建立快速检测H6亚型禽流感病毒的血清学方法,试验利用前期制备的两株抗H6亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体,建立检测H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法,并进行特异性、灵敏度、稳定性试验以及对活禽市场采集的48份咽拭子样品的检... 为建立快速检测H6亚型禽流感病毒的血清学方法,试验利用前期制备的两株抗H6亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体,建立检测H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法,并进行特异性、灵敏度、稳定性试验以及对活禽市场采集的48份咽拭子样品的检测效果。结果显示:该ELISA方法只与H6亚型禽流感病毒反应,而与H1、H3、H4、H5、H7、H9、H10、H12等其他亚型禽流感病毒,血清4型禽腺病毒、血清8b型禽腺病毒、血清3型鸭腺病毒、传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、传染性法氏囊病病毒以及禽白血病病毒均无交叉反应;该ELSIA方法可检测2.32×10^(4)TCID50/mLH6亚型禽流感病毒,批间和批内重复试验变异系数均小于10%;该ELISA方法和RT-PCR方法对活禽市场采集的48份咽拭子样品检测结果一致,进一步检测攻毒鸡的咽拭子显示该方法可有效检测咽拭子中H6亚型禽流感病毒。研究表明,基于两株单克隆抗体建立的检测H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法具有特异性强、灵敏度高的特点,适用于H6亚型禽流感病毒感染的临床检测。 展开更多
关键词 h6亚型禽流感病毒 单克隆抗体 血凝素蛋白 双抗体夹心ELISA
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H6亚型禽流感病毒的分离鉴定与生物学特性分析 被引量:4
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作者 罗思思 谢芝勋 +6 位作者 周辰瑜 刘加波 谢志勤 庞耀珊 邓显文 谢丽基 范晴 《中国家禽》 北大核心 2015年第2期54-56,共3页
为了解低致病性禽流感病毒(LPAIVs)在广西地区家禽中的流行情况,对广西地区活禽市场的家禽进行LPAIVs流行病学监测,分离鉴定出7株H6亚型禽流感病毒(AIV)。通过在广西地区活禽市场采集家禽咽喉和泄殖腔棉拭子样品,将其接种SPF鸡胚,收集... 为了解低致病性禽流感病毒(LPAIVs)在广西地区家禽中的流行情况,对广西地区活禽市场的家禽进行LPAIVs流行病学监测,分离鉴定出7株H6亚型禽流感病毒(AIV)。通过在广西地区活禽市场采集家禽咽喉和泄殖腔棉拭子样品,将其接种SPF鸡胚,收集尿囊液进行HA和HI试验,结果显示这7株只与H6亚型AIV的阳性血清发生反应,产生血凝抑制现象,初步鉴定为H6亚型AIV。通过HA和NA基因的克隆与测序鉴定,进一步确定为H6亚型AIV,与NA基因存在5种组合,包括H6N1、H6N2、H6N5、H6N6和H6N8。鸡致病性试验表明分离株可感染但不致死SPF鸡,并通过咽喉和泄殖腔排毒,结合HA裂解位点附近的氨基酸序列,表明所分离到的7株H6亚型AIV符合LPAIV的特征。 展开更多
关键词 h6亚型禽流感病毒 分离 鉴定
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