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抗H5亚型AIV血凝素单克隆抗体的制备及亚型鉴定
1
作者 詹爱军 王新卫 +2 位作者 陈枝楠 卢体康 花群义 《中国农学通报》 CSCD 2008年第6期8-11,共4页
制备抗H5亚型AIV血凝素单克隆抗体;依据淋巴细胞杂交瘤技术,用纯化的H5N1亚型AIV和重组噬菌体T4-H5HA免疫Balb/C小鼠,细胞融合后用ELISA方法筛选特异性单克隆抗体;获得6株抗H5亚型AIVHA的特异性单克隆抗体H5-01(1E6)、H5-02(2C2)、H5-03... 制备抗H5亚型AIV血凝素单克隆抗体;依据淋巴细胞杂交瘤技术,用纯化的H5N1亚型AIV和重组噬菌体T4-H5HA免疫Balb/C小鼠,细胞融合后用ELISA方法筛选特异性单克隆抗体;获得6株抗H5亚型AIVHA的特异性单克隆抗体H5-01(1E6)、H5-02(2C2)、H5-03(2A8)、H5-04(2G6)、H5-05(2E9)和H5-06(3F6)。各株单抗亚型测定的结果为:H5-01、H5-02为IgG1,H5-03、H5-04为IgG2a,H5-05、H5-06为IgG2b,轻链的亚型均为kappa链;经特异性和与同型病毒的反应谱检测,6株均是抗H5亚型AIVHA特异性单克隆抗体,为进一步分析H5N1亚型AIV的结构与功能以及建立监测该亚型AIV的试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 h5n1亚型aiv 单克隆抗体 亚型 鉴定
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金丝桃素蛋白络合物在鸡体内对H9N2亚型禽流感病毒杀灭效果的研究 被引量：9
2
作者 祝艳华 梁剑平 +6 位作者 赵晓虹 王雯慧 尚若锋 崔颖 罗永江 廖明 王学红 《中兽医医药杂志》 2006年第3期5-8,共4页
为了明确金丝桃素蛋白络合物在动物体内对H9N2亚型AIV的杀灭效果及临床上用于预防和治疗的剂量,将180只28日龄非免疫石歧杂黄鸡随机分为6组,分别为金丝桃素蛋白络合物高、中、低剂量组,金刚烷胺药物对照组,感染不给药组及健康对照组。其... 为了明确金丝桃素蛋白络合物在动物体内对H9N2亚型AIV的杀灭效果及临床上用于预防和治疗的剂量,将180只28日龄非免疫石歧杂黄鸡随机分为6组,分别为金丝桃素蛋白络合物高、中、低剂量组,金刚烷胺药物对照组,感染不给药组及健康对照组。其中,金丝桃素蛋白络合物三个剂量组的实验鸡于感染H9N2亚型AIV12h后分别以不同的剂量灌服给药,而金刚烷胺药物组于攻毒12h后以100mg/l饮水。用棉拭子采集各实验组鸡的咽喉及泄殖腔黏液,进行微量血凝(HA)试验及RT-PCR检测,以确定各实验组鸡的排毒情况。结果表明,金丝桃素蛋白络合物对人工感染H9N2亚型AIV的实验鸡有较好的保护作用,与金刚烷胺药物对照及感染不给药组相比有显著差异。 展开更多
关键词 h9n2亚型aiv 金丝桃素蛋白络合物 hA试验 RT—PCR
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H9N2亚型禽流感病毒流行病学研究进展 被引量：6
3
作者 邢燕茹 范春艳 +1 位作者 罗玉丽 汪秀会 《中国家禽》 北大核心 2021年第10期80-86,共7页
H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)在我国已有二十多年的流行历史,且在我国鸡群中广泛传播,给家禽养殖业造成了巨额损失;H9N2亚型AIV感染人事件的报道也屡见不鲜,给公共卫生带来了巨大的压力和挑战。为了有效控制H9N2亚型... H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)在我国已有二十多年的流行历史,且在我国鸡群中广泛传播,给家禽养殖业造成了巨额损失;H9N2亚型AIV感染人事件的报道也屡见不鲜,给公共卫生带来了巨大的压力和挑战。为了有效控制H9N2亚型AIV的流行和传播,降低其感染风险,文章从流行特点、分子适应机制、感染宿主范围以及防控措施等方面对H9N2亚型AIV的流行病学进行了系统阐述,在阐明H9N2亚型AIV的流行规律及趋势的同时,概述了其分子致病机制,并初步评估了其进化方向和风险性,为AIV的综合防控提供参考依据和理论支持。 展开更多
关键词 h9n2亚型aiv 流行特点 分子适应机制 宿主
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波形蛋白对H9N2亚型AIV复制的影响研究
4
作者 卢安然 殷贵虎 +4 位作者 黄翔宇 黄静雯 胡嘉宁 蔡怡秦 冯秀丽 《畜牧与兽医》 北大核心 2022年第4期93-101,共9页
为研究波形蛋白(vimentin)对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)复制的影响,构建了真核表达载体FLAG-vimentin,并采用Western blot技术验证FLAG-vimentin重组载体和病毒NP蛋白的表达情况,用荧光定量PCR技术检测病毒HA基因水平。同时,设计合成siRNA... 为研究波形蛋白(vimentin)对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)复制的影响,构建了真核表达载体FLAG-vimentin,并采用Western blot技术验证FLAG-vimentin重组载体和病毒NP蛋白的表达情况,用荧光定量PCR技术检测病毒HA基因水平。同时,设计合成siRNA,敲低内源性vimentin,检测其对病毒HA基因表达水平的影响。构建原核表达载pCold I-vimentin,蛋白纯化后孵育细胞,采用Western blot、荧光定量PCR技术检测病毒的蛋白表达和基因水平的变化。结果证实,H9N2亚型AIV感染FLAG-vimentin重组载体转染的Hela细胞12 h时,病毒NP蛋白表达减少;而在感染24和36 h时,病毒NP蛋白表达上升。荧光定量PCR结果亦显示,在AIV感染后12 h时,HA基因表达水平明显降低。siRNA敲低Hela细胞内源性vimentin后,H9N2亚型AIV的HA基因表达水平在病毒感染12 h时明显升高,24 h时差异较小,36 h时有所升高。纯化后的vimentin重组蛋白孵育细胞,在病毒感染36 h时,H9N2亚型AIV的NP蛋白表达显著被抑制。荧光定量PCR结果亦证实病毒HA基因在AIV感染后36 h时表达水平明显降低。上述结果表明,H9N2亚型AIV在人源Hela细胞上的早期复制中,vimentin能起到一定程度上的抑制作用,且其重组表达蛋白孵育细胞能够阻断H9N2亚型AIV对细胞的感染,为深入研究vimentin抗病毒复制的机制提供了重要的试验依据,同时为开展抗H9N2亚型AIV的药物研发提供了参考。 展开更多
关键词 波形蛋白 h9n2亚型aiv 重组蛋白表达 病毒基因表达 小干扰RnA
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泛素化激酶Cbl蛋白对H9N2亚型禽流感病毒早期复制的抑制作用
5
作者 陈佳静 李彤彤 +3 位作者 张则 卢安然 李陈飞 冯秀丽 《畜牧与兽医》 北大核心 2021年第6期78-83,共6页
为研究Cbl蛋白(Casitas b-lineage lymphoma)对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)复制的影响,采用PCR技术扩增Cbl基因片段并连接到FLAG-N载体中,Western blot技术验证FLAG-Cbl重组载体表达及病毒NP蛋白的表达情况,并采用荧光定量PCR技术检测病毒... 为研究Cbl蛋白(Casitas b-lineage lymphoma)对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)复制的影响,采用PCR技术扩增Cbl基因片段并连接到FLAG-N载体中,Western blot技术验证FLAG-Cbl重组载体表达及病毒NP蛋白的表达情况,并采用荧光定量PCR技术检测病毒的血凝素(HA)、核蛋白(NP)和非结构蛋白(NS)基因水平;采用RNAi技术检测Cbl对病毒HA基因表达水平的影响。结果显示:EcoRⅠ、HindⅢ双酶切鉴定及测序分析发现,成功构建真核表达重组载体FLAG-Cbl;Western blot结果证实H9N2亚型AIV感染FLAG-Cbl重组载体转染的A549细胞6 h时,病毒NP蛋白表达降低;荧光定量PCR结果证实病毒NP、NS及HA基因在AIV感染FLAG-cbl重组载体转染的A549细胞的6和12 h时表达水平均明显降低;RNAi敲低A549细胞内源性Cbl蛋白后,H9N2亚型AIV的HA基因表达水平在病毒感染12、24和36 h明显升高。结果表明:Cbl蛋白能在早期抑制H9N2亚型AIV在A549细胞上的复制,为深入研究Cbl蛋白抗病毒复制的机制提供了重要的试验依据,同时为开展抗AIV的药物研发提供了参考。 展开更多
关键词 Cbl蛋白 h9n2亚型aiv 重组蛋白表达 病毒基因表达 SIRnA
原文传递
H1亚型禽流感病毒RT-RPA-LFD快速检测方法的建立及应用 被引量：1
6
作者 曾婷婷 李孟 +9 位作者 谢芝勋 李丹 谢丽基 罗思思 张民秀 王盛 谢志勤 范晴 阮志华 粟永春 《江西农业学报》 CAS 2024年第3期61-66,共6页
以H1亚型AIV的HA基因为研究对象,采用重组聚合酶核酸等温扩增技术(RPA),通过RT-PCR方法优选出1套引物,进而优化体系的反应温度、最佳探针及引物浓度,使用优化后的最佳反应体系进行敏感性及特异性试验,并探索该方法能达到的最短反应时间... 以H1亚型AIV的HA基因为研究对象,采用重组聚合酶核酸等温扩增技术(RPA),通过RT-PCR方法优选出1套引物,进而优化体系的反应温度、最佳探针及引物浓度,使用优化后的最佳反应体系进行敏感性及特异性试验,并探索该方法能达到的最短反应时间,利用侧向流动免疫(LFD)试纸条观测反应后的结果,最终建立检测H1亚型AIV的RT-RPA-LFD快速检测方法。结果表明:建立的RT-RPA-LFD快速检测方法在探针工作浓度为0.14 mmol/L,37℃条件下反应20 min,可最低检测到1.5×10^(2)copies/反应的H1亚型AIV RNA,其他常见家禽病原体未见阳性反应。该方法与RT-PCR及鸡胚分离鉴定测序结果完全一致,可满足H1亚型AIV临床快速鉴别诊断的需求,为基层兽医现场快速检测提供技术支撑。 展开更多
关键词 h1亚型aiv 等温扩增技术 快速检测 RT-RPA-LFD
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3株表达H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒的免疫效力比较 被引量：1
7
作者 王彦红 陈素娟 +4 位作者 刘武杰 仇旭升 董丽 彭大新 刘秀梵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期60-64,共5页
作者旨在探讨鸡痘病毒ORF073或ORF214基因缺失后,在母源抗体存在情况下对重组病毒免疫效力的影响。将构建好的在ORF073或ORF214基因插入H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-△73LRH5A、rFPVLP-△214LRH5A)及单表达H5亚型AIV HA基因... 作者旨在探讨鸡痘病毒ORF073或ORF214基因缺失后,在母源抗体存在情况下对重组病毒免疫效力的影响。将构建好的在ORF073或ORF214基因插入H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-△73LRH5A、rFPVLP-△214LRH5A)及单表达H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-12LSH5A)分别免疫SPF鸡和商品鸡,检测重组疫苗诱导的免疫效力。结果:3种重组鸡痘病毒在SPF鸡产生较高的HI抗体效价及100%的免疫保护;在HI母源抗体效价为2.45的商品鸡体内基因缺失株重组病毒比rFPVLP-12LSH5A易于清除,抗体上升缓慢而且免疫28 d后HI抗体效价较低,免疫保护率低,分别为16.7%和23.3%;在母源HI抗体效价为0的商品鸡体内基因缺失株重组病毒免疫后产生的抗体效价高,免疫28 d后分别达到3.50和3.17。结果表明在商品鸡体内母源抗体影响下,缺失ORF073或ORF214基因的重组鸡痘病毒的免疫效力降低。 展开更多
关键词 重组鸡痘病毒 h5亚型aiv 免疫效力
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H3N2亚型猫流感病毒抑制Ⅰ型干扰素机制分析
8
作者 曲素娟 阎志群 《畜牧兽医科技信息》 2017年第7期19-21,共3页
家猫对高致病性和低致病性禽流感病毒(AIV)均易感,感染后可以导致肺炎的发生,而其易感机制无相关报道。本研究利用H3N2亚型AIV家猫分离株(FIV)为模型,分析了感染后对IFN-β应答的影响及机制。结果显示H3N2 FIV可以很好的在猫肾细胞(CRFK... 家猫对高致病性和低致病性禽流感病毒(AIV)均易感,感染后可以导致肺炎的发生,而其易感机制无相关报道。本研究利用H3N2亚型AIV家猫分离株(FIV)为模型,分析了感染后对IFN-β应答的影响及机制。结果显示H3N2 FIV可以很好的在猫肾细胞(CRFK)上复制并导致明显的细胞病变(CPE),在感染48h后病毒滴度达104±0.25TCID50/mL;通过荧光素酶报告系统发现该病毒感染后不能激活IFN-β应答,反而能够抑制SeV介导的IFN-β通路激活。机制分析发现病毒能够抑制IRF3通路进而阻断IFN-β应答。本研究首次发现猫源H3N2亚型AIV能够抑制Ⅰ型干扰素应答。 展开更多
关键词 猫 h3n2亚型aiv beta干扰素 nS1蛋白 抑制
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重组禽流感病毒(H_5N_2)的拯救及其生物学特性分析
9
作者 杨禹 邵卫星 徐天刚 《中国畜牧兽医文摘》 2013年第9期97-97,共1页
为控制在我国流行的H5N1高致病性禽流感（Avian influenza virus，AIV）和筛选具有标记的疫苗毒株，用流行的H5N1亚型AIV的HA基因和H9N2亚型AIV的NA基因及H1N1亚型AIV（A／PR／8／34毒株）的6个内部基因通过流感8质粒反向遗传操作系统... 为控制在我国流行的H5N1高致病性禽流感（Avian influenza virus，AIV）和筛选具有标记的疫苗毒株，用流行的H5N1亚型AIV的HA基因和H9N2亚型AIV的NA基因及H1N1亚型AIV（A／PR／8／34毒株）的6个内部基因通过流感8质粒反向遗传操作系统拯救了重组病毒rH5N2／PR8株。 展开更多
关键词 禽流感病毒 重组病毒 生物学特性 h9n2亚型aiv h5n1亚型 高致病性禽流感 h1n1亚型 疫苗毒株
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