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PLAGL2基因siRNA表达质粒的构建及体外干扰作用
1
作者
邓飞涛
柴新群
叶伦
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第5期598-601,共4页
目的构建PLAGL2 siRNA表达载体质粒并探讨其体外干扰作用。方法构建的PLAGL2 siRNA表达载体质粒经脂质体介导转染到小鼠肺Ⅱ型上皮细胞株H441细胞中并获得稳定细胞株,采用实时荧光PCR及Westernblot技术分别检测转染组和野生型H441细胞中...
目的构建PLAGL2 siRNA表达载体质粒并探讨其体外干扰作用。方法构建的PLAGL2 siRNA表达载体质粒经脂质体介导转染到小鼠肺Ⅱ型上皮细胞株H441细胞中并获得稳定细胞株,采用实时荧光PCR及Westernblot技术分别检测转染组和野生型H441细胞中PLAGL2、SP-C、SP-B mRNA和PLAGL2蛋白表达水平的变化。结果实时荧光PCR检测结果显示:与野生型H441细胞相比较,PLAGL2 siRNA表达载体质粒转染的H441细胞中PLA-GL2 mRNA水平明显降低(P<0.05),SP-C mRNA水平明显增高(P<0.05),而SP-B mRNA水平没有明显差异(P>0.05);Western blot检测结果显示:与野生型H441细胞相比较,PLAGL2 siRNA表达载体质粒转染的H441细胞中PLAGL2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论成功构建了PLAGL2 siRNA表达载体,将其转染至H441细胞中可有效抑制PLAGL2基因的表达,同时促进SP-C基因的表达。
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关键词
RNA
小分子干扰
PLAGL2
SP-C
SP-B
h
441
细胞
下载PDF
职称材料
突变K-ras基因siRNA腺病毒载体的构建及其对人肺腺癌细胞株H441的影响
被引量：
2
2
作者
张志平
姜冠潮
+2 位作者
杨帆
周足力
王俊
《中国肿瘤临床》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第9期481-484,共4页
目的:构建含12密码子点突变的K-ras基因siRNA腺病毒载体,并研究其对人肺腺癌细胞株H441中突变K-ras基因表达的影响。方法:首先构建含有K-rasV12 siRNA的人H1启动子真核表达载体pSilencerH1/siK-rasV12;利用EcoRⅠ与HindⅢ双酶切将人H1...
目的:构建含12密码子点突变的K-ras基因siRNA腺病毒载体,并研究其对人肺腺癌细胞株H441中突变K-ras基因表达的影响。方法:首先构建含有K-rasV12 siRNA的人H1启动子真核表达载体pSilencerH1/siK-rasV12;利用EcoRⅠ与HindⅢ双酶切将人H1载体启动子和K-rasV12 siRNA序列亚克隆至经相同酶切的腺病毒穿梭质粒pAdTrack中,形成转移质粒pAdTrack-H1/siK-rasV12,然后与腺病毒骨架质粒pAd/PL共转染至大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,酶切、序列鉴定。提取含目的基因的腺病毒重组体质粒,经PacⅠ酶切线性化后用脂质体转染293细胞,包装成重组腺病毒AdH1/siK-rasV12,扩增、纯化,并对病毒滴度进行检测。利用得到的重组腺病毒感染人肺腺癌H441细胞株,采用Westernblot检测感染前后K-rasV12蛋白表达水平的变化,观察AdH1/siK-rasV12对人肺腺癌细胞K-rasV12表达的影响。结果:成功构建K-rasV12s iRNA腺病毒载体,该载体可明显抑制H441细胞中K-rasV12蛋白的表达。结论:构建的AdH1/siK-rasV12腺病毒能有效抑制突变K-ras基因在人肺腺癌细胞株H441中的表达,为肺癌的基因治疗提供了新的方法和材料。
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关键词
SIRNA
突变K—ras基因
腺病毒
h
441
细胞
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职称材料
题名
PLAGL2基因siRNA表达质粒的构建及体外干扰作用
1
作者
邓飞涛
柴新群
叶伦
机构
华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科
华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科
出处
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第5期598-601,共4页
基金
湖北省自然科学基金资助项目(No.2008CDB135)
文摘
目的构建PLAGL2 siRNA表达载体质粒并探讨其体外干扰作用。方法构建的PLAGL2 siRNA表达载体质粒经脂质体介导转染到小鼠肺Ⅱ型上皮细胞株H441细胞中并获得稳定细胞株,采用实时荧光PCR及Westernblot技术分别检测转染组和野生型H441细胞中PLAGL2、SP-C、SP-B mRNA和PLAGL2蛋白表达水平的变化。结果实时荧光PCR检测结果显示:与野生型H441细胞相比较,PLAGL2 siRNA表达载体质粒转染的H441细胞中PLA-GL2 mRNA水平明显降低(P<0.05),SP-C mRNA水平明显增高(P<0.05),而SP-B mRNA水平没有明显差异(P>0.05);Western blot检测结果显示:与野生型H441细胞相比较,PLAGL2 siRNA表达载体质粒转染的H441细胞中PLAGL2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论成功构建了PLAGL2 siRNA表达载体,将其转染至H441细胞中可有效抑制PLAGL2基因的表达,同时促进SP-C基因的表达。
关键词
RNA
小分子干扰
PLAGL2
SP-C
SP-B
h
441
细胞
Keywords
siRNA
PLAGL2
SP-C
SP-B
h
441
cells
分类号
R714.51 [医药卫生—妇产科学]
Q471 [医药卫生—临床医学]
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职称材料
题名
突变K-ras基因siRNA腺病毒载体的构建及其对人肺腺癌细胞株H441的影响
被引量：
2
2
作者
张志平
姜冠潮
杨帆
周足力
王俊
机构
济南市中心医院胸外科
北京大学人民医院胸外科
出处
《中国肿瘤临床》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第9期481-484,共4页
基金
国家自然科学基金资助(编号:30440069)
文摘
目的:构建含12密码子点突变的K-ras基因siRNA腺病毒载体,并研究其对人肺腺癌细胞株H441中突变K-ras基因表达的影响。方法:首先构建含有K-rasV12 siRNA的人H1启动子真核表达载体pSilencerH1/siK-rasV12;利用EcoRⅠ与HindⅢ双酶切将人H1载体启动子和K-rasV12 siRNA序列亚克隆至经相同酶切的腺病毒穿梭质粒pAdTrack中,形成转移质粒pAdTrack-H1/siK-rasV12,然后与腺病毒骨架质粒pAd/PL共转染至大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,酶切、序列鉴定。提取含目的基因的腺病毒重组体质粒,经PacⅠ酶切线性化后用脂质体转染293细胞,包装成重组腺病毒AdH1/siK-rasV12,扩增、纯化,并对病毒滴度进行检测。利用得到的重组腺病毒感染人肺腺癌H441细胞株,采用Westernblot检测感染前后K-rasV12蛋白表达水平的变化,观察AdH1/siK-rasV12对人肺腺癌细胞K-rasV12表达的影响。结果:成功构建K-rasV12s iRNA腺病毒载体,该载体可明显抑制H441细胞中K-rasV12蛋白的表达。结论:构建的AdH1/siK-rasV12腺病毒能有效抑制突变K-ras基因在人肺腺癌细胞株H441中的表达,为肺癌的基因治疗提供了新的方法和材料。
关键词
SIRNA
突变K—ras基因
腺病毒
h
441
细胞
Keywords
RNA Small interfering Mutant K-ras Adenovirus vector
h
441
cell
分类号
R734.2 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
PLAGL2基因siRNA表达质粒的构建及体外干扰作用
邓飞涛
柴新群
叶伦
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2009
0
下载PDF
职称材料
2
突变K-ras基因siRNA腺病毒载体的构建及其对人肺腺癌细胞株H441的影响
张志平
姜冠潮
杨帆
周足力
王俊
《中国肿瘤临床》
CAS
CSCD
北大核心
2007
2
下载PDF
职称材料
已选择
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