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H1和H3亚型禽流感病毒二重PCR检测方法的建立 被引量:8
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作者 郭捷 谢芝勋 +5 位作者 彭宜 刘加波 谢志勤 庞耀珊 邓显文 谢丽基 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第12期31-34,共4页
为建立简便、快速同时检测H1和H3亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的方法,根据GenBank中H1亚型AIV-HA基因和H3亚型AIV-HA基因的序列,分别设计了2对针对H1AIV和H3AIV的保守基因序列的引物。应用这2对引物对混有H1AIV和H3AIV的... 为建立简便、快速同时检测H1和H3亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的方法,根据GenBank中H1亚型AIV-HA基因和H3亚型AIV-HA基因的序列,分别设计了2对针对H1AIV和H3AIV的保守基因序列的引物。应用这2对引物对混有H1AIV和H3AIV的模板进行二重PCR扩增,得到了2个特异性扩增条带,大小与试验设计相符的302bp(H1AIV)和626bp(H3AIV),而对其他亚型AIV和禽呼吸道病原体的PCR扩增结果均为阴性,敏感性测定结果表明,该二重PCR技术能同时检出50pg的H1AIV模板和26pg的H3AIV模板。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h1亚型 h3亚型 二重聚合酶链反应
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H1亚型禽流感病毒RT-RPA-LFD快速检测方法的建立及应用
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作者 曾婷婷 李孟 +9 位作者 谢芝勋 李丹 谢丽基 罗思思 张民秀 王盛 谢志勤 范晴 阮志华 粟永春 《江西农业学报》 CAS 2024年第3期61-66,共6页
以H1亚型AIV的HA基因为研究对象,采用重组聚合酶核酸等温扩增技术(RPA),通过RT-PCR方法优选出1套引物,进而优化体系的反应温度、最佳探针及引物浓度,使用优化后的最佳反应体系进行敏感性及特异性试验,并探索该方法能达到的最短反应时间... 以H1亚型AIV的HA基因为研究对象,采用重组聚合酶核酸等温扩增技术(RPA),通过RT-PCR方法优选出1套引物,进而优化体系的反应温度、最佳探针及引物浓度,使用优化后的最佳反应体系进行敏感性及特异性试验,并探索该方法能达到的最短反应时间,利用侧向流动免疫(LFD)试纸条观测反应后的结果,最终建立检测H1亚型AIV的RT-RPA-LFD快速检测方法。结果表明:建立的RT-RPA-LFD快速检测方法在探针工作浓度为0.14 mmol/L,37℃条件下反应20 min,可最低检测到1.5×10^(2)copies/反应的H1亚型AIV RNA,其他常见家禽病原体未见阳性反应。该方法与RT-PCR及鸡胚分离鉴定测序结果完全一致,可满足H1亚型AIV临床快速鉴别诊断的需求,为基层兽医现场快速检测提供技术支撑。 展开更多
关键词 h1亚型aiv 等温扩增技术 快速检测 RT-RPA-LFD
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H1亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:5
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作者 郭捷 谢芝勋 +5 位作者 罗思思 刘加波 邓显文 谢志勤 庞耀珊 范晴 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第7期29-34,共6页
本研究旨在建立一种检测H1亚型禽流感病毒(AIV)的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。根据对GenBank中H1亚型AIV HA基因序列的分析,设计针对H1亚型AIV的HA基因特异性引物,并以H1亚型AIV的cDNA为模版,构建重组阳性质粒。采用梯度稀释重组... 本研究旨在建立一种检测H1亚型禽流感病毒(AIV)的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。根据对GenBank中H1亚型AIV HA基因序列的分析,设计针对H1亚型AIV的HA基因特异性引物,并以H1亚型AIV的cDNA为模版,构建重组阳性质粒。采用梯度稀释重组标准品阳性质粒DNA的方法,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(real-time PCR)标准曲线。敏感性试验结果显示,扩增效率和标准误差分别为100.9%和0.011 7,熔解曲线呈单一熔解峰。在35个Ct值内该方法可检测到100个拷贝的标准品DNA;特异性试验结果显示,该方法对于其他亚型AIV和禽呼吸道病原体不能检出;重复性试验结果显示,组内变异系数小于1%。建立的Real-time PCR具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于临床上H1亚型AIV的检测。 展开更多
关键词 h1亚型aiv SYBR GreenⅠ 实时荧光定量PCR
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H5N1亚型禽流感病毒HA糖基化位点缺失突变株的构建及生物学特性 被引量:4
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作者 张晓剑 李彦芳 +3 位作者 熊丽平 陈素娟 彭大新 刘秀梵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期495-499,共5页
不同H5亚型禽流感(AIV)HA上糖基化位点的分布是不同的,然而不同糖基化位点对病毒的作用仍不十分清楚。本研究利用定点突变和反向遗传操作构建了3个不同糖基化位点单缺失突变病毒,并对其增殖特性和毒力进行了测定。结果表明,通过HA基因... 不同H5亚型禽流感(AIV)HA上糖基化位点的分布是不同的,然而不同糖基化位点对病毒的作用仍不十分清楚。本研究利用定点突变和反向遗传操作构建了3个不同糖基化位点单缺失突变病毒,并对其增殖特性和毒力进行了测定。结果表明,通过HA基因序列测定和免疫印迹分析证实已成功去除了特定糖基化位点。158位糖基化位点缺失突变株rS△158在鸡胚中的EID50和MDCK细胞上TCID50比野生型rS略低,空斑直径显著减小;而单独去除169位和290位糖基化位点的rS△169和rS△290的EID50和TCID50略高于野生型rS,空斑直径相近,但空斑数要比后者高出10倍以上。所有突变株及野生型病毒在CEF上增殖速率相同,对SPF鸡均是高致病性的。因此,糖基化位点可影响病毒的体外增殖,但结果因细胞而异。 展开更多
关键词 h5N1亚型禽流感 hA 糖基化位点 突变
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Effect of the Extract from Hypericum perforatum on Highly Pathogenic Avian Influenza Virus(HPAIV)
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作者 LIANG Jian-pingt SHANG Ruo-feng +7 位作者 WANG Xue-hong GUO Zhi-ting GUO Wen-zhu HAO Bao-cheng WANG Shu-yang TAO Lei LI Xue-hu LU Xi-hong 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第11期107-110,共4页
[Objective] The aim was to study the effects of the extract from Hypericum perforatum on highly pathogenic Avian Influenza Virus(HPAIV)in vivo.[Method] Chickens infected with H5N1 virus were treated with the extract f... [Objective] The aim was to study the effects of the extract from Hypericum perforatum on highly pathogenic Avian Influenza Virus(HPAIV)in vivo.[Method] Chickens infected with H5N1 virus were treated with the extract from H.perforatum for 4 d.The virus was then detected by hemoagglutination(HA)test and reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR).[Result] No H5N1 virus could be detected at the 7th d when the chickens were treated with 0.2 or 0.1 g/(kg·d)of the extract from H.perforatum.However,the virus could be detected in other chickens without the extract from HPE treatment.[Conclusion] The extract from H.perforatum might be a potential drug candidate to control infection of H5N1 subtype AIV in chickens. 展开更多
关键词 hYPERICUM perforatum(hPE)preparation h5N1 subtype aiv hA RT-PCR
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金丝桃素蛋白络合物体外抗H5N1亚型禽流感病毒的活性研究 被引量:18
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作者 赵晓虹 梁剑平 +5 位作者 祝艳华 尚若锋 王雯慧 崔颖 罗永江 王学江 《中兽医医药杂志》 2006年第3期13-15,共3页
用鸡胚法进行了金丝桃素蛋白络合物抗H5N1亚型禽流感病毒活性研究。分别采用了感染病毒同时给药、给药后接种病毒、先感染病毒后给药三种方式,通过测定鸡胚尿囊液的血凝效价和计算药物对感染鸡胚的保护率,观察金丝桃素蛋白络合物的抗H5N... 用鸡胚法进行了金丝桃素蛋白络合物抗H5N1亚型禽流感病毒活性研究。分别采用了感染病毒同时给药、给药后接种病毒、先感染病毒后给药三种方式,通过测定鸡胚尿囊液的血凝效价和计算药物对感染鸡胚的保护率,观察金丝桃素蛋白络合物的抗H5N1亚型禽流感病毒活性。实验结果表明,①药物在体外与病毒作用一段时间后再将其混悬液接种鸡胚,药物浓度在0.5mg/ml以上时,对感染鸡胚的保护率达100%,同时给药组的血凝效价显著降低,与对照组相比差异极显著;②在感染病毒前给药,药物浓度在2mg/ml以上时,对感染鸡胚的保护率达100%,药物组的血凝效价显著降低,与对照组相比差异极显著;③先感染病毒后给药,药物浓度在2mg/ml以上时,对感染鸡胚的保护率达88.9%,血凝效价明显降低,与对照组相比差异显著。同时,在此种方式下,药物对病毒的抑制作用与药物浓度有一定依赖性,适当提高药物浓度,可以增强其抗病毒活性。 展开更多
关键词 金丝桃素蛋白络合物 h5N1亚型禽流感病毒 血凝效价 保护率
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