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可生物素化H-2K^d-BSP融合蛋白的原核表达和纯化
被引量:
3
1
作者
钱亚云
刘静
+3 位作者
张伟
潘兴元
龚卫娟
季明春
《实用临床医药杂志》
CAS
2008年第4期1-4,共4页
目的构建可生物素化的H-2Kd-BSP融合基因的表达载体,原核表达H-2Kd-BSP融合蛋白,以制备H-2Kd-肽四聚体。方法采用RT-PCR技术从小鼠SP2/0细胞中克隆小鼠MHC-Ⅰ类分子H-2Kd基因的胞外区,拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列(BSP)后,插入pET-...
目的构建可生物素化的H-2Kd-BSP融合基因的表达载体,原核表达H-2Kd-BSP融合蛋白,以制备H-2Kd-肽四聚体。方法采用RT-PCR技术从小鼠SP2/0细胞中克隆小鼠MHC-Ⅰ类分子H-2Kd基因的胞外区,拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列(BSP)后,插入pET-22b高效表达载体多克隆位点,诱导表达后对表达产物进行纯化,用Western印迹法分析鉴定纯化融合蛋白。结果成功构建pET-H-2Kd原核表达载体,测序证实H-2Kd-BSP融合基因序列正确。pET-H-2Kd原核表达载体可在大肠杆菌BL21中高效诱导表达H-2Kd-BSP融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的36%,主要以包涵体形式表达;经反复洗涤纯化,纯化蛋白纯度可达90%以上。纯化蛋白可被H-2Kd分子特异性单克隆抗体SF1-1.1所识别。结论可生物素化H-2Kd-BSP融合蛋白的原核表达和纯化为进一步制备H-2Kd-肽四聚体奠定了实验基础。
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关键词
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bsp
融合
蛋白
可生物素化序列
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职称材料
题名
可生物素化H-2K^d-BSP融合蛋白的原核表达和纯化
被引量:
3
1
作者
钱亚云
刘静
张伟
潘兴元
龚卫娟
季明春
机构
扬州大学医学院病原生物学和免疫学教研室
出处
《实用临床医药杂志》
CAS
2008年第4期1-4,共4页
基金
国家自然科学基金项目(30771955)
江苏省自然科学基金基础研究重点项目(BK2006706)
文摘
目的构建可生物素化的H-2Kd-BSP融合基因的表达载体,原核表达H-2Kd-BSP融合蛋白,以制备H-2Kd-肽四聚体。方法采用RT-PCR技术从小鼠SP2/0细胞中克隆小鼠MHC-Ⅰ类分子H-2Kd基因的胞外区,拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列(BSP)后,插入pET-22b高效表达载体多克隆位点,诱导表达后对表达产物进行纯化,用Western印迹法分析鉴定纯化融合蛋白。结果成功构建pET-H-2Kd原核表达载体,测序证实H-2Kd-BSP融合基因序列正确。pET-H-2Kd原核表达载体可在大肠杆菌BL21中高效诱导表达H-2Kd-BSP融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的36%,主要以包涵体形式表达;经反复洗涤纯化,纯化蛋白纯度可达90%以上。纯化蛋白可被H-2Kd分子特异性单克隆抗体SF1-1.1所识别。结论可生物素化H-2Kd-BSP融合蛋白的原核表达和纯化为进一步制备H-2Kd-肽四聚体奠定了实验基础。
关键词
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bsp
融合
蛋白
可生物素化序列
Keywords
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^d
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2
k
d-
bsp
fusion protein
BirA substrate peptide
分类号
R392-33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
可生物素化H-2K^d-BSP融合蛋白的原核表达和纯化
钱亚云
刘静
张伟
潘兴元
龚卫娟
季明春
《实用临床医药杂志》
CAS
2008
3
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