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家蚕丝心蛋白H链基因的荧光原位杂交(FISH) 被引量:3
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作者 宋方洲 易发平 +7 位作者 张平波 易发平 鲁成 张平波 洪锡钧 伴野丰 藤井博 古贺克已 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2002年第4期361-365,T001,共6页
蚕丝业在国民经济中占有极为重要的地位.家蚕作为重要的模式生物和生物反应器,历来为人们所关注.有关蚕丝基因的结构、表达调控和分子进化都已有较详细的研究和报道,但关于蚕丝结构基因的分子细胞遗传学基因定位的研究,几乎尚无报道.经... 蚕丝业在国民经济中占有极为重要的地位.家蚕作为重要的模式生物和生物反应器,历来为人们所关注.有关蚕丝基因的结构、表达调控和分子进化都已有较详细的研究和报道,但关于蚕丝结构基因的分子细胞遗传学基因定位的研究,几乎尚无报道.经用荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)对家蚕丝心蛋白H链基因(Fib-H)的分子细胞遗传学定位研究结果,初步将家蚕丝心蛋白H链基因定位在了分子细胞遗传学第25连锁群染色体的端部,即25~0.0的位置,从而解决了该基因迄今尚未定位的问题,并证实了丝心蛋白H链基因在染色体位置上为单一座位. 展开更多
关键词 h基因 家蚕 丝心蛋白基因 荧光原位杂交 基因定位 FISh 分子细胞遗传学 染色体 位点
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北京长白杂交猪IgGH链基因CH2-CH3的克隆、序列分析及表达质粒构建 被引量:3
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作者 李新生 高凤山 +4 位作者 李云岗 崔保安 陈红英 崔沛 夏春 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期1-6,共6页
根据GenBank中注册的猪IgG H链基因cDNA CH2 CH3序列(SSU03780),设计了含KpnⅠ和HindⅢ酶切位点的一对引物,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法从北京长白杂交猪肠系膜淋巴结细胞扩增猪IgG H链基因CH2 CH3序列.将PCR产物纯化回收后,... 根据GenBank中注册的猪IgG H链基因cDNA CH2 CH3序列(SSU03780),设计了含KpnⅠ和HindⅢ酶切位点的一对引物,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法从北京长白杂交猪肠系膜淋巴结细胞扩增猪IgG H链基因CH2 CH3序列.将PCR产物纯化回收后,插入到含LacZ基因的克隆载体pGEM-T Easy中,转化大肠杆菌JM 109感受态细胞,经KpnⅠ和HindⅢ双酶切及PCR鉴定,筛选出阳性克隆.将所克隆的目的片断亚克隆到原核表达载体pQE 30,构建重组质粒pQE 30/PIgG CH2 CH3.将重组表达质粒转化大肠杆菌JM 109感受态细胞,筛选阳性克隆,经IPTG诱导表达后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析.结果表明,本研究克隆了猪IgG H链基因CH2 CH3序列,全长663 bp,编码221个氨基酸,利用Gentyx version 6.0软件将CH2 CH3基因的核苷酸序列与GenBank中的参考序列比较,其核苷酸序列同源率为99.551%,推导的氨基酸序列同源率为100%.将pQE 30/PIgG CH2 CH3转化JM 109感受态细胞,表达的融合蛋白相对分子质量约为26.95 ku,经IPTG诱导2 h,表达量约占菌体总蛋白41.5%. 展开更多
关键词 猪IgG h基因 Ch2和Ch3 基因克隆 DNA序列分析 原核表达
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猪IgG H链基因CH2-CH3的克隆和分析 被引量:1
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作者 姜法铭 曹海军 +5 位作者 朱志盈 姚惠娟 樊生超 华修国 崔立 缪德年 《上海农业学报》 CSCD 2006年第4期18-21,共4页
根据已发表的猪IgG H链序列,设计了1对通用引物,从猪外周血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增IgG H链基因CH2-CH3序列,并克隆入pMD18-T Simple载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经SalI和XbaI双酶切鉴定,筛选出阳性克隆。核酸序列测定分... 根据已发表的猪IgG H链序列,设计了1对通用引物,从猪外周血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增IgG H链基因CH2-CH3序列,并克隆入pMD18-T Simple载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经SalI和XbaI双酶切鉴定,筛选出阳性克隆。核酸序列测定分析表明,IgG H链基因CH2-CH3序列全长为669 bp,编码CH2-CH3的221个氨基酸和J区的1个脯氨酸。利用DNASTAR软件将其与猪IgG H链各CH2-CH3序列进行比较,发现其与U03778-1、U03779-2a、U03780-2b、U03781-3、U03782-4的核苷酸序列同源率分别为92.1%、98.4%、98.5%、93.0%和97.2%,推导的氨基酸序列同源率分别为86.5%、96.4%、96.5%、87.0%和94.2%。经进化树分析提示,该序列可能为一个新的亚型。 展开更多
关键词 猪IgG h基因 Ch2-Ch3 基因克隆 DNA序列分析
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家蚕丝素蛋白H链基因启动子区域的克隆及活性分析 被引量:11
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作者 周文林 曹锦如 +3 位作者 叶爱红 曹广力 薛仁宇 贡成良 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期72-77,共6页
家蚕(Bombyxmori)丝素蛋白H链基因(fib-H)具有在后部丝腺组织专一性、高效性表达的特点。为利用其时空调控机制,通过PCR扩增方法克隆fib-H启动子片段,并进行序列分析,进而构建由fib-H启动子控制报告基因DsRed的重组载体pSK-FH-DsRed-Pol... 家蚕(Bombyxmori)丝素蛋白H链基因(fib-H)具有在后部丝腺组织专一性、高效性表达的特点。为利用其时空调控机制,通过PCR扩增方法克隆fib-H启动子片段,并进行序列分析,进而构建由fib-H启动子控制报告基因DsRed的重组载体pSK-FH-DsRed-PolyA,通过家蚕BmN细胞和丝腺进行瞬时表达。结果表明:克隆的fib-H启动子序列具有典型的丝腺特异性表达启动子的特征,并可以驱动DsRed报告基因在BmN细胞和家蚕后部丝腺组织中瞬时表达。 展开更多
关键词 家蚕 丝素h基因 启动子 DsRed基因 瞬时表达
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