广西巴马小型猪的培育 被引量：42

1

作者 王爱德 兰干球 郭亚芬 《实验动物科学》 2010年第1期60-63,共4页

目的以广西巴马香猪作为原始基础群,要培育出体型尽量小、两头乌毛色整齐、繁殖性能好、遗传性稳定、有关生物学特性明确、适于实验应用的小型猪品系。方法①纯繁闭锁繁育;②封闭群(A系)主要采用群内随机交配方式;③近交系(B系)是在第1... 目的以广西巴马香猪作为原始基础群,要培育出体型尽量小、两头乌毛色整齐、繁殖性能好、遗传性稳定、有关生物学特性明确、适于实验应用的小型猪品系。方法①纯繁闭锁繁育;②封闭群(A系)主要采用群内随机交配方式;③近交系(B系)是在第10世代封闭群的基础上开始选择近交家系,采用连续全同胞兄妹高度近交方式;④定向选择;⑤遗传监测;⑥饲养试验;⑦广西地方标准的制定;⑧有关生物学特性的研究;⑨实验应用。结果①1994年鉴定专家将培育的实验小型猪命名为"广西巴马小型猪",至今己有22年培育历史。②至2009年完成了广西巴马小型猪封闭群21世代的培育。③至2009年完成了广西巴马小型猪近交系11世代的培育。④对小体型、两头乌毛色的整齐性、多产性的选择及性格温顺的驯养均有效。⑤19个微卫星座位上平均观察等位基因数:17世代广西巴马小型猪封闭群为3.00个,在21个微卫星座位上近交系7世代平均观测等位基因数为1.9048个、平均有效等位基因数为1.5461个,平均基因纯合率为0.7232。⑥确认在广西巴马小型猪生长期间营养需要:蛋白质水平12%、能量3100kcal/kg、钙0.65%、有效磷0.32%。⑦在对质量控制因素研究的基础上制定出广西地方标准DB45/T546-2008《实验动物小型猪》(发布日期:2008.09.08、实施日期:2008.10.08)。⑧国内多家研究机构的应用表明广西巴马小型猪是应用于心血管病和糖尿病等研究的优秀模型动物。结论成功培育出适于医学、生物学实验应用的、具有独特优异特性的广西巴马小型猪封闭群和近交系。 展开更多

关键词 广西巴马小型猪 培育

下载PDF 职称材料

广西巴马小型猪克隆胚的构建及胚胎移植 被引量：10

2

作者 卢晟盛 吕培茹 +5 位作者 刘红波 何若钢 潘天彪 罗龙兴 黄敏瑞 卢克焕 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期147-153,共7页

通过胚胎移植验证构建的广西巴马小型猪克隆胚是否可以发育到期。利用刺入式手术胚胎移植法,将0.5～1.5日龄巴马小型猪克隆胚移植到2头巴马小型猪和2头陆川猪的输卵管壶腹部。其中2头巴马小型猪和1头陆川猪返情,另外一头陆川猪于2007年1... 通过胚胎移植验证构建的广西巴马小型猪克隆胚是否可以发育到期。利用刺入式手术胚胎移植法,将0.5～1.5日龄巴马小型猪克隆胚移植到2头巴马小型猪和2头陆川猪的输卵管壶腹部。其中2头巴马小型猪和1头陆川猪返情,另外一头陆川猪于2007年10月13日产下1头克隆雄性巴马小型猪。说明巴马小型猪克隆胚能够在受体猪体内发育到期并产仔。 展开更多

关键词 广西巴马小型猪 体细胞核移植 睾丸成纤维细胞 胚胎移植

下载PDF 职称材料

广西巴马小型猪动脉粥样硬化模型的制作 被引量：11

3

作者 李艳君 宋少锐 +5 位作者 郭亚芬 兰干球 陈宝剑 严雪瑜 吴延军 蒋钦杨 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第7期1770-1776,共7页

本试验旨在制作广西巴马小型猪动脉粥样硬化模型,初步判断猪发生动脉粥样硬化时的指数值,以期为今后建立相关模型提供依据。试验选取广西巴马小型猪试验组和对照组各10头,通过饲喂高脂高胆固醇饲料建立动脉粥样硬化模型,检测建模过程中... 本试验旨在制作广西巴马小型猪动脉粥样硬化模型,初步判断猪发生动脉粥样硬化时的指数值,以期为今后建立相关模型提供依据。试验选取广西巴马小型猪试验组和对照组各10头,通过饲喂高脂高胆固醇饲料建立动脉粥样硬化模型,检测建模过程中血液生化指标,将动脉粥样硬化指数与血管切片作关联分析,初步拟定发生动脉粥样硬化时的指数值。屠宰后血管切片结果显示,试验组有2头广西巴马小型猪发生动脉粥样硬化,对照组均正常。2头广西巴马小型猪的血管切片结果与动脉粥样硬化指数进行关联分析后,初步拟定的动脉粥样硬化指数值在3.8以上,并持续3个月以上。 展开更多

关键词 广西巴马小型猪 动脉粥样硬化模型 动脉粥样硬化指数

下载PDF 职称材料

广西巴马小型猪转基因克隆胚胎的体外生产 被引量：11

4

作者 朱向星 全守能 卢晟盛 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期41-46,共6页

广西巴马小型猪是一种原产于广西巴马县的小型猪品种,非常适于实验动物化,进行广西巴马小型猪的基因修饰研究,可以显著提升其在生物医学研究中的利用价值。当前最有效的构建转基因猪方法是体细胞核移植,但因用于体细胞核移植生物供体细... 广西巴马小型猪是一种原产于广西巴马县的小型猪品种,非常适于实验动物化,进行广西巴马小型猪的基因修饰研究,可以显著提升其在生物医学研究中的利用价值。当前最有效的构建转基因猪方法是体细胞核移植,但因用于体细胞核移植生物供体细胞在经受转基因操作后活性显著下降,从而制约了转基因克隆猪的生产效率。Xfect polymer是一种新型转染试剂,具有细胞毒性低和操作简便等优点,已被证明适用于多种真核细胞的转基因操作。本研究旨在利用体细胞核移植技术来检验经Xfect polymer转染制备的广西巴马小型猪转基因体细胞,可否支持猪克隆胚胎完全的体外发育的能力,以期为将来生产模拟人类疾病的转基因克隆广西巴马小型猪奠定基础。 展开更多

关键词 广西巴马小型猪 胚胎 体细胞核移植 基因修饰 转染

原文传递

高脂高糖饲料联合低剂量链脲佐菌素(STZ)诱导广西巴马小型猪2型糖尿病动物模型的建立 被引量：9

5

作者 吴延军 夏攀洁 +5 位作者 严雪瑜 申玉建 何剑雄 杨祝良 郭亚芬 兰干球 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期2393-2398,共6页

本研究的目的是应用高脂高糖饲料联合低剂量STZ建立理想的广西巴马小型猪2型糖尿病模型。挑取8头雌性巴马小型猪体重为(21.64±0.62)kg分成对照组和实验组2组,每组4头。对照组标准饲喂9个月(control,CTR);实验组高脂高糖饲料饲喂6... 本研究的目的是应用高脂高糖饲料联合低剂量STZ建立理想的广西巴马小型猪2型糖尿病模型。挑取8头雌性巴马小型猪体重为(21.64±0.62)kg分成对照组和实验组2组,每组4头。对照组标准饲喂9个月(control,CTR);实验组高脂高糖饲料饲喂6个月后按照60 mg/kg给予注射链脲佐菌素(STZ),接着高脂高糖饲喂至9个月(HFHC+STZ,HS);每个月检测空腹血糖、空腹胰岛素、甘油三酯和胆固醇的变化。静脉注射葡萄糖耐实验检测葡萄糖利用率。高胰岛素血症与葡萄糖耐受损判定为胰岛素抵抗。结果显示:与对照组相比,实验组猪均发生二型糖尿病症状,包括胰岛素抵抗和葡萄糖耐受损。实验结束时,HS组与CTR组空腹血糖分别为(13.83±0.74 vs 4.28±0.09)mmol/L;空腹胰岛素分别为(40.67±0.80 vs 38.94±1.75)m U/L。本研究通过高脂高糖饲料联合低剂量STZ成功建立广西巴马小型猪2型糖尿病模型,为后续糖尿病的临床研究和药物治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 广西巴马小型猪 高脂高糖饲料 STZ 2型糖尿病

原文传递

广西巴马小型猪Presenilin-2基因真核表达载体的构建及其在小鼠N2a细胞中的表达验证 被引量：8

6

作者 吴延军 陈秋明 +5 位作者 杨秀荣 兰干球 张名媛 李艳君 郭亚芬 蒋钦杨 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期267-271,共5页

本研究的目的是构建广西巴马小型猪Presenilin-2真核表达载体并在细胞水平对其进行验证。利用RT-PCR的方法扩增并克隆Presenilin-2基因,再将Presenilin-2亚克隆到p EGFP-N1,通过脂质体转染方法将p EGFP-PS2-N1转至N2a细胞,48 h后在荧光... 本研究的目的是构建广西巴马小型猪Presenilin-2真核表达载体并在细胞水平对其进行验证。利用RT-PCR的方法扩增并克隆Presenilin-2基因,再将Presenilin-2亚克隆到p EGFP-N1,通过脂质体转染方法将p EGFP-PS2-N1转至N2a细胞,48 h后在荧光显微镜下观察细胞是否表达绿色荧光蛋白。结果显示,本研究成功构建了阅读框架正确的广西巴马小型猪Presenilin-2基因真核表达载体,转染p EGFP-PS2-N1后,N2a细胞有绿色荧光蛋白的表达。该研究将为下一步研究Presenilin-2基因的功能和生产转Presenilin-2基因猪奠定基础。 展开更多

关键词 广西巴马小型猪 Presenilin-2基因 N2A细胞 阿尔茨海默病 转基因猪

原文传递

广西巴马小型猪皮肤成纤维细胞的分离培养体系优化 被引量：7

7

作者 张大鹏 李跃民 +3 位作者 栗楠 邱小燕 杨波 肖雄 《生物学杂志》 CAS CSCD 2017年第2期99-103,共5页

通过比较6种方法和5个部位分离成纤维细胞的效率,旨在优化广西巴马小型猪皮肤成纤维细胞的分离培养体系。结果表明:1)采用酶消化法Ⅰ所得成纤维细胞的密度显著高于其他处理组(P<0.05),其死亡率与方法Ⅳ处理组之间差异不显著(P>0.0... 通过比较6种方法和5个部位分离成纤维细胞的效率,旨在优化广西巴马小型猪皮肤成纤维细胞的分离培养体系。结果表明:1)采用酶消化法Ⅰ所得成纤维细胞的密度显著高于其他处理组(P<0.05),其死亡率与方法Ⅳ处理组之间差异不显著(P>0.05),但显著低于其余处理组(P<0.05);2)冷冻保存10 d后复苏的耳部皮肤组织,经方法Ⅰ酶消化后所得成纤维细胞的密度和存活率均分别极显著低于新鲜组织方法Ⅰ处理组(P<0.01);3)组织块培养4 d后即可从其边缘长出成纤维细胞,再经过8 d培养,细胞汇合率可达100%;4)耳部皮肤组织所获成纤维细胞的密度显著高于其他部位处理组(P<0.05),而且贴壁生长效果良好;5)所得耳部皮肤成纤维细胞可传至10代以上,其中第3代和第4代生长最为迅速;6)生长曲线显示第3代耳部皮肤成纤维细胞呈典型的"S形"生长。因此,宜选用先加0.25%胰蛋白酶+0.04%EDTA消化30 min,再用0.2%胶原蛋白酶消化30 min的方法分离广西巴马小型猪的耳部皮肤成纤维细胞。 展开更多

关键词 广西巴马小型猪 皮肤成纤维细胞 酶消化法 组织块培养法

下载PDF 职称材料

广西巴马小型猪miR-148b慢病毒制备及靶基因通路预测分析 被引量：6

8

作者 张名媛 郭晓萍 +4 位作者 孙晴超 司景磊 兰干球 郭亚芬 蒋钦杨 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1596-1604,共9页

【目的】构建广西巴马小型猪miR-148b慢病毒表达载体并对其靶基因进行预测及相关通路分析,为揭示miR-148b的作用机制打下基础。【方法】以广西巴马小型猪血液基因组DNA为模板,扩增miR-148b的前体及部分侧翼序列,使用T4连接酶将目的片段... 【目的】构建广西巴马小型猪miR-148b慢病毒表达载体并对其靶基因进行预测及相关通路分析,为揭示miR-148b的作用机制打下基础。【方法】以广西巴马小型猪血液基因组DNA为模板,扩增miR-148b的前体及部分侧翼序列,使用T4连接酶将目的片段连接至pLV-CMV-MCS-EF1载体上,构建获得pLV-miR-148b慢病毒表达载体;以pLVmiR-148b慢病毒表达载体转染293T细胞48 h后进行表达验证;利用miRDB、miRWalk 2.0和TargetScan 7.2三大数据库预测分析广西巴马小型猪miR-148b的靶基因,并以MirPath v.3分析miR-148b靶基因相关通路。【结果】广西巴马小型猪miR-148b片段大小为385 bp,与miRBase 21.0网站上已发布猪miR-148b成熟序列(前体和侧翼序列)的同源性达100%。构建获得的pLV-miR-148b慢病毒表达载体能在293T细胞中成功表达,且相对表达量极显著高于pLV-GFP慢病毒空载质粒转染组(P<0.01)。数据库预测分析得到18个广西巴马小型猪miR-148b的靶基因,分别为CLOCK(时间昼夜调控因子)、MIER1(转录调控因子)、MECP2(甲基化CpG结合蛋白)、ZNF704(锌指蛋白)、SPTY2D1(SPT2染色质蛋白)、QKI(RNA结合蛋白)、ZBTB20(锌指蛋白)、MGAT4A(钠/磷酸转运蛋白)、UHMK1(编码蛋白激酶)、PIK3C2A(磷酸肌醇-3-激酶2α肽)、C6orf62(6号染色体开放阅读框62抗体)、HECW2(E3泛素蛋白连接酶)、MAP1B(微管相关蛋白)、NHS(NHS肌动蛋白调节因子)、B4GALT6(β-1,4-半乳糖基转移酶)、ATP2A2(肌浆ATP酶/内质网Ca2+转运酶)、AP4E1(蛋白复合物接头分子)和BBX(锌指蛋白);且发现有11条靶基因相关通路,其中与疾病相关的通路有脂肪酸合成通路、细胞外基质受体相互作用通路、癌症的蛋白聚糖通路、神经胶质瘤通路、癌症的小分子核糖核酸通路、肾细胞癌通路、N-聚糖生物合成通路和致心律失常性右室心肌病通路。【结论】广西巴马小型猪miR-148b慢病毒表达载体能在293T细胞中成功表达,miR-148b存 展开更多

关键词 广西巴马小型猪 miR-148b 慢病毒载体 靶基因 相关通路预测

下载PDF 职称材料

广西巴马小型猪肥胖基因(leptin)成熟肽序列的cDNA克隆、序列分析 被引量：6

9

作者 兰干球 李芳芳 +3 位作者 黄雄军 郭亚芬 王爱德 李柏 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2008年第3期183-186,共4页

以广西巴马小型猪的脂肪组织总RNA为模板,通过RT-PCR扩增出巴马小型猪的leptin基因成熟肽序列,经纯化回收后连接到pMD18-T载体上,经鉴定后测序。研究结果表明,本试验克隆到leptin基因成熟肽cDNA序列,其长度为441 bp,与GenBank中报道的猪... 以广西巴马小型猪的脂肪组织总RNA为模板,通过RT-PCR扩增出巴马小型猪的leptin基因成熟肽序列,经纯化回收后连接到pMD18-T载体上,经鉴定后测序。研究结果表明,本试验克隆到leptin基因成熟肽cDNA序列,其长度为441 bp,与GenBank中报道的猪leptin成熟肽cDNA序列同源性高达99.06%,与奶牛、家鼠、马等物种的成熟肽cDNA序列间同源性可达到84.5%以上,证明leptin基因具有较高的保守性。同时发现,与普通猪相比,巴马小型猪leptin基因成熟肽cDNA序列有四处存在碱基突变,均为无义突变。 展开更多

关键词 广西巴马小型猪 LEPTIN基因 克隆

下载PDF 职称材料

广西巴马小型猪PPARγ-2基因多态性与2型糖尿病易感性的相关性 被引量：5

10

作者 梁家充 郭亚芬 +2 位作者 陈江伟 杨柳 兰干球 《安徽农业科学》 CAS 2012年第19期10153-10155,10250,共4页

[目的]探讨PPARγ-2基因多态性与广西巴马小型猪2型糖尿病易感性的关系。[方法]利用高糖高脂日粮饲喂24头广西巴马小型猪,利用PCR方法扩增PPARγ-2基因外显子2部分序列,测定其空腹血糖和胰岛素(INS)含量并进行糖耐量试验。[结果]克隆的P... [目的]探讨PPARγ-2基因多态性与广西巴马小型猪2型糖尿病易感性的关系。[方法]利用高糖高脂日粮饲喂24头广西巴马小型猪,利用PCR方法扩增PPARγ-2基因外显子2部分序列,测定其空腹血糖和胰岛素(INS)含量并进行糖耐量试验。[结果]克隆的PPARγ-2基因外显子2部分序列存在1处SNP位点(19813A/G),有AG(7头)和AA(17头)2种基因型。AG型广西巴马小型猪的空腹胰岛素含量和糖耐量试验中60 min血糖值显著高于AA型(P<0.05),而AG型广西巴马小型猪2型糖尿病发生率(71.4%)明显高于AA型(5.9%)。[结论]广西巴马小型猪PPARγ-2基因外显子2的19813A/G多态性与2型糖尿病易感性有关。 展开更多

关键词 广西巴马小型猪 PPARγ-2基因 2型糖尿病

下载PDF 职称材料

广西巴马小型猪PPARγ基因克隆及组织表达差异分析 被引量：5

11

作者 申玉建 方程 +6 位作者 邱庆庆 司景磊 吴延军 杨祝良 杨秀荣 郭亚芬 蒋和生 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1884-1890,共7页

【目的】克隆广西巴马小型猪过氧化物酶增殖物激活受体γ基因(PPARγ),并确定其在不同组织中的表达情况,为后续研究该基因在猪支原体肺炎(MPS)中的作用机制打下基础。【方法】利用RT-PCR克隆广西巴马小型猪PPARγ基因,并进行BLAST比对... 【目的】克隆广西巴马小型猪过氧化物酶增殖物激活受体γ基因(PPARγ),并确定其在不同组织中的表达情况,为后续研究该基因在猪支原体肺炎(MPS)中的作用机制打下基础。【方法】利用RT-PCR克隆广西巴马小型猪PPARγ基因,并进行BLAST比对分析及其推导蛋白的生物信息学分析;以实时荧光定量PCR检测PPARγ基因在18月龄广西巴马小型猪心脏、脾脏、肺脏、肾脏、大肠、小肠、肌肉和脂肪中的表达情况。【结果】广西巴马小型猪PPARγ基因开放阅读框序列1515 bp,编码504个氨基酸。广西巴马小型猪PPARγ基因推导氨基酸序列与Gen Bank已发表的猪PPARγ基因(FJ436399.1)推导氨基酸序列同源性最高,达100.0%;而与牛(NM_181024.2)、人类(NM_005037.5)、猕猴(NM_001032860.1)、鼠(NM_001308354.1)和鸿雁(KJ019822.1)的同源性分别为92.9%、91.8%、91.5%、90.5%和83.5%,表明PPARγ基因高度保守。PPARγ蛋白分子量为57380.91 Da,理论等电点(p I)为6.88,不稳定系数49.26,脂肪指数为88.21,亲水性平均水平为-0.293,为亲水性蛋白,其二级结构主要是α-螺旋,占总数的39.09%。PPARγ基因在广西巴马小型猪大肠组织中的表达量最高,极显著高于其他组织(P<0.01),而在肾脏、心脏和肌肉组织中的表达量极低。【结论】PPARγ基因在18月龄广西巴马小型猪的各组织中均有表达,但不同组织中的表达水平存在明显差异,可能与其在不同组织中的功能差异有关。 展开更多

关键词 广西巴马小型猪 PPARΓ基因 猪肺炎支原体 克隆 组织表达差异 炎症调控

下载PDF 职称材料

广西巴马小型猪α-1,3-半乳糖转移酶基因RNAi载体构建与检测 被引量：5

12

作者 郭晓萍 陈时锦 +3 位作者 张笠 蒋钦杨 兰干球 郭亚芬 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1165-1171,共7页

α-1,3-半乳糖转移酶基因(α-1,3 GT)在异种器官移植中的免疫排斥反应有重要的作用,本研究旨在构建α-1,3-半乳糖转移酶基因的干扰载体,在m RNA和蛋白质水平鉴定并筛选出干扰效果最佳的序列。根据巴马小型猪GGTA1基因CDS序列,设计合成3... α-1,3-半乳糖转移酶基因(α-1,3 GT)在异种器官移植中的免疫排斥反应有重要的作用,本研究旨在构建α-1,3-半乳糖转移酶基因的干扰载体,在m RNA和蛋白质水平鉴定并筛选出干扰效果最佳的序列。根据巴马小型猪GGTA1基因CDS序列,设计合成3对特异性单链si RNA序列以及一对阴性序列,构建GGTA1 RNA干扰载体分别命名为p LLU2G-sh GGTA1-1、p LLU2G-sh GGTA1-2、p LLU2G-sh GGTA1-3和p LLU2G-sh GGTA1-NC。将构建好的载体分别转染转染PK15细胞,通过q RT-PCR和Western blot检测GGTA1 m RNA及其蛋白的相对表达量。结果显示本研究成功构建了3个重组RNAi表达载体,与转染p LLU2G-NC和空白组相比,p LLU2G-sh GGTA1-1、p LLU2G-sh GGTA1-2和p LLU2G-sh GGTA1-3转染组的GGTA1 m RNA和蛋白表达量均明显下降,对m RNA表达的抑制效率分别为85.02%、86.05%和83.85%。本研究成功获得有效抑制广西巴马小型猪GGTA1基因表达的RNAi载体,为下一步生产沉默GGTA1基因广西巴马小型猪奠定基础。 展开更多

关键词 巴马小型猪 α-1 3半乳糖转移酶基因 RNAI

原文传递

广西巴马小型猪Tau基因可变剪接体的克隆和鉴定 被引量：5

13

作者 陈少梅 陈宝剑 +5 位作者 苏秀珍 杨秀荣 蒋钦杨 兰干球 蒋和生 郭亚芬 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期127-129,共3页

为研究广西巴马小型猪‰基因可变剪接体序列，根据NCBI中预测的猪‰基因序列设计引物，利用巢式PCR和5’RACE方法克隆并验证‰基因。结果显示：广西巴马小型猪Tan基因与参考序列相比存在3处缺失，分别为191～277、344～1389、1526～157... 为研究广西巴马小型猪‰基因可变剪接体序列，根据NCBI中预测的猪‰基因序列设计引物，利用巢式PCR和5’RACE方法克隆并验证‰基因。结果显示：广西巴马小型猪Tan基因与参考序列相比存在3处缺失，分别为191～277、344～1389、1526～1579bp。3处缺失形成4条Tau基因的可变剪接体，其序列长度分别为1302、1215、1356、1269bp，提交至GenBank获得登录号分别为KC473498、KC473499、KC473500、KC473501。 展开更多

关键词 广西巴马小型猪 Tau基因 5’RACE 可变剪接体

下载PDF 职称材料

广西巴马小型猪脂联素受体1和受体2cDNA的克隆及序列分析 被引量：4

14

作者 冯雪萍 兰干球 +3 位作者 易顺华 易德桥 郭亚芬 李柏 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第6期2416-2418,共3页

[目的]克隆并分析广西巴马小型猪脂联素受体1(AdipoR1)和脂联素受体2(AdipoR2)编码基因的cDNA全序列。[方法]利用RT-PCR法,以骨骼肌总RNA为模板,分别扩增AdipoR1和AdipoR2全长cDNA序列,纯化后连接pMD 18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,筛选... [目的]克隆并分析广西巴马小型猪脂联素受体1(AdipoR1)和脂联素受体2(AdipoR2)编码基因的cDNA全序列。[方法]利用RT-PCR法,以骨骼肌总RNA为模板,分别扩增AdipoR1和AdipoR2全长cDNA序列,纯化后连接pMD 18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆体,鉴定后测序,并与其他物种AdipoR1和AdipoR2 cDNA序列进行同源性比较。[结果]RT-PCR扩增得到大小与AdipoR1和AdipoR2基因编码序列大小相同的片段,片段长度为1 128和1 161 bp。同源性比较分析发现,广西巴马小型猪AdipoR1和AdipoR2cDNA序列与GenBank中已报道的家猪脂联素受体同源性分别高达99.8%、99.7%,分别有1处和3处发生了碱基错义突变。[结论]该试验成功克隆了广西巴马小型猪AdipoR1和AdipoR2基因的cDNA,为进一步研究AdipoR基因的生物功能及设计以AdipoR为靶标的新型药物奠定了基础。 展开更多

关键词 广西巴马小型猪 脂联素受体 克隆

下载PDF 职称材料

广西巴马小型猪LAIR-1基因cDNA克隆及序列分析 被引量：4

15

作者 黄云 张名嫒 +3 位作者 黎江 蒋钦杨 兰干球 郭亚芬 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期692-696,共5页

【目的】了解广西巴马小型猪白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)基因的序列特征及基本结构,为以广西巴马小型猪作为人类器官模型及器官移植手术后的排斥反应研究奠定基础。【方法】根据GenBank上已登录的人和家鼠LAIR-1基因序列的保... 【目的】了解广西巴马小型猪白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)基因的序列特征及基本结构,为以广西巴马小型猪作为人类器官模型及器官移植手术后的排斥反应研究奠定基础。【方法】根据GenBank上已登录的人和家鼠LAIR-1基因序列的保守区域,用Oligo设计合成1对引物,并以广西巴马小型猪总RNA为模板,对LAIR-1基因进行RT-PCR扩增,经PCR和双酶切鉴定后,进行测序及同源性比对分析。【结果】从广西巴马小型猪的外周血淋巴细胞中克隆获得LAIR-1基因cDNA序列,全长867bp;与人、家鼠和挪威鼠的同源性分别为79.3%、50.9%和49.9%。【结论】广西巴马小型猪LAIR-1基因cDNA序列与人类的亲缘关系最近,进一步验证了广西巴马小型猪作为人类器官模型研究的可行性。 展开更多

关键词 广西巴马小型猪 LAIR-1基因 CDNA 克隆 序列分析

下载PDF 职称材料

广西巴马小型猪全身CT影像学观察 被引量：4

16

作者 江雨航 申玉建 +7 位作者 张其伟 高小童 张琼文 崔悦悦 夏琴 兰干球 郭亚芬 蒋钦杨 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期677-685,共9页

【目的】获取正常形态下广西巴马小型猪心血管系统、运动系统、呼吸系统、中枢神经系统和泌尿系统的电子计算机断层扫描(CT)影像图谱及各组织器官的测量数据,为广西巴马小型猪影像数据库建立及其后续研究提供参考依据。【方法】选取10... 【目的】获取正常形态下广西巴马小型猪心血管系统、运动系统、呼吸系统、中枢神经系统和泌尿系统的电子计算机断层扫描(CT)影像图谱及各组织器官的测量数据,为广西巴马小型猪影像数据库建立及其后续研究提供参考依据。【方法】选取10头健康合格的12月龄广西巴马小型猪,公母各半,全身麻醉后置于CT诊断台上,采用头前尾后俯卧姿势,腹部正中矢状面垂直于扫描床平面并与床面长轴的中线重合,从头顶至足部连续进行扫描,并采用多平面重建(MPR)、最大密度投影(MIP)和容积再现技术(VR)等观察分析广西巴马小型猪各系统的解剖关系。【结果】将广西巴马小型猪原始容积数据进行图像重组,即可获得心血管、运动、呼吸、中枢神经和泌尿系统等五大系统的三维重建图像,同时测量获得各系统主要组织器官的相关数据,且发现公猪和母猪间差异不显著(P>0.05);但在获得的广西巴马小型猪CT影像图谱中肌肉、细小血管及神经等显示并不清晰,无法测量,致使各系统中的组织器官测量数据并不完全。【结论】通过CT技术对正常形态下的广西巴马小型猪进行全身影像观察及各组织器官数据测量,可实现不用屠宰解剖(活体)即能观察其内部结构,使广西巴马小型猪解剖学及疾病模型应用更直观。 展开更多

关键词 广西巴马小型猪 CT影像 系统器官 测量数据

下载PDF 职称材料

广西巴马小型猪氟烷基因PCR-RFLP分析 被引量：4

17

作者 严雪瑜 黄云 +3 位作者 严小东 蒋钦杨 郭亚芬 蒋和生 《湖北农业科学》 北大核心 2012年第18期4144-4146,共3页

采用PCR-RFLP分析了广西巴马小型猪的氟烷基因类型。结果显示,PCR扩增获得广西巴马小型猪氟烷基因片段长452bp,其碱基序列与GenBank公布的普通猪同源性为99.6%;采用HhaⅠ酶切检测广西巴马小型猪、巴长二元杂猪和长白猪氟烷基因的PCR产物... 采用PCR-RFLP分析了广西巴马小型猪的氟烷基因类型。结果显示,PCR扩增获得广西巴马小型猪氟烷基因片段长452bp,其碱基序列与GenBank公布的普通猪同源性为99.6%;采用HhaⅠ酶切检测广西巴马小型猪、巴长二元杂猪和长白猪氟烷基因的PCR产物,均产生2条电泳条带,未表现多态性;测序表明广西巴马小型猪氟烷基因第1843位碱基均为C。猪氟烷基因PCR-RFLP分析技术为优质猪的培育提供了理论依据。 展开更多

关键词 广西巴马小型猪 氟烷基因 PCR-RFLP

下载PDF 职称材料

广西巴马小型猪ApoA1基因克隆及其生物信息学分析 被引量：4

18

作者 张名媛 韦东力 +6 位作者 司景磊 郭晓萍 崔悦悦 瞿秋红 綦文晶 兰干球 郭亚芬 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1339-1346,共8页

【目的】克隆广西巴马小型猪载脂蛋白A1(ApoA1)基因并进行生物信息学分析,为后续开展ApoA1基因研究提供基础数据,同时为制作广西巴马小型猪动脉粥样硬化疾病模型打下基础。【方法】以提取的广西巴马小型猪肝脏组织总RNA为模板,运用RT-PC... 【目的】克隆广西巴马小型猪载脂蛋白A1(ApoA1)基因并进行生物信息学分析,为后续开展ApoA1基因研究提供基础数据,同时为制作广西巴马小型猪动脉粥样硬化疾病模型打下基础。【方法】以提取的广西巴马小型猪肝脏组织总RNA为模板,运用RT-PCR克隆广西巴马小型猪ApoA1基因序列,以实时荧光定量PCR(qPCR)检测ApoA1基因在广西巴马小型猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏组织中的表达情况,并利用MegAlign、ProtParam、SOPMA、Net-Phos、SignalP和SWISS-MODEL等在线分析软件对广西巴马小型猪ApoA1基因进行生物信息学分析及构建系统发育进化树。【结果】广西巴马小型猪ApoA1基因编码区(CDS)序列长795bp,与普通猪ApoA1基因序列的同源性为99.9%,仅第630处有1个碱基发生同义突变。ApoA1基因在广西巴马小型猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏组织中均有表达,且以肝脏中的相对表达量最高、脾脏中的相对表达量最低。广西巴马小型猪ApoA1由264个氨基酸残基构成,其分子式为C1343H2136N376O409S5,蛋白分子量为30254.31Da,理论等电点(pI)为5.47,属于亲水性蛋白,存在跨膜结构,不存在信号肽,有18处磷酸化位点(丝氨酸磷酸化位点有10处,苏氨酸磷酸化位点有6处,络氨酸磷酸化位点有2处)。广西巴马小型猪ApoA1的二级结构中,α-螺旋占79.92%,β-折叠占2.65%,无规则卷曲占11.12%,延伸链占6.31%,属于全α类蛋白。广西巴马小型猪ApoA1氨基酸序列与普通猪的同源性最高,达99.6%;由基于ApoA1氨基酸序列同源性构建的系统发育进化树也可看出,广西巴马小型猪与普通猪的亲缘关系最近。【结论】广西巴马小型猪ApoA1基因保守性强,以在肝脏中的表达量最高,是广西巴马小型猪抗动脉粥样硬化的重要因子,通过敲除该基因可制作广西巴马小型猪动脉粥样硬化疾病模型。 展开更多

关键词 广西巴马小型猪 ApoA1基因 克隆 生物信息学分析 动物模型

下载PDF 职称材料

广西巴马小型猪MyoG基因克隆及外显子3多态性分析 被引量：4

19

作者 张名媛 韦珏 +4 位作者 郭亚芬 蒋钦杨 陈时锦 兰干球 蒋和生 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第12期27-31,共5页

为了解RT-PCR扩增广西巴马小型猪肌细胞生成素(MyoG)cDNA序列,并分析与其他物种间的聚类关系,试验采用PCR-SSCP技术分析广西巴马小型猪、长白猪、杜洛克猪、大约克猪MyoG基因外显子3多态性,根据GenBank中已发表的猪MyoG基因序列设计PCR... 为了解RT-PCR扩增广西巴马小型猪肌细胞生成素(MyoG)cDNA序列,并分析与其他物种间的聚类关系,试验采用PCR-SSCP技术分析广西巴马小型猪、长白猪、杜洛克猪、大约克猪MyoG基因外显子3多态性,根据GenBank中已发表的猪MyoG基因序列设计PCR引物,以广西巴马小型猪肌肉组织总RNA为模板进行RT-PCR,所得目的片段经纯化、克隆、鉴定和测序;从4个猪种的耳组织中分别提取30个个体的基因组DNA,采用PCR的方法扩增出外显子3并进行SSCP分析。结果表明:克隆得到广西巴马小型猪MyoG基因编码区长675 bp,与四川野猪、人、奶牛、小鼠同源序列相似性分别为99.7%、93.8%、91.7%、90.5%,且不同物种间保守性较强;与四川野猪相比,克隆得到的广西巴马小型猪MyoG cDNA序列在第233位点及第642位点上发生基因突变;广西巴马小型猪MyoG基因的基因型只有AA型,而长白猪、杜洛克猪、大约克猪MyoG基因的基因型只有AB型,各群体内无多态性。 展开更多

关键词 广西巴马小型猪 肌细胞生成素(MyoG)基因 克隆 PCR—SSCP

原文传递

广西巴马小型猪MyoD1基因克隆及其真核表达载体的构建 被引量：4

20

作者 奉玲丽 张瑞门 +4 位作者 黄叶 夏攀洁 张名媛 梁晶 兰干球 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第4期977-985,共9页

本研究旨在对广西巴马小型猪成肌细胞决定基因1(myoblast-determining 1,MyoD1)进行克隆分析,并构建MyoD1基因真核表达载体pEGFP-N1-MyoD1,为进一步研究该基因在广西巴马小型猪骨骼肌发育中的调控作用奠定基础。以广西巴马小型猪的肝脏... 本研究旨在对广西巴马小型猪成肌细胞决定基因1(myoblast-determining 1,MyoD1)进行克隆分析,并构建MyoD1基因真核表达载体pEGFP-N1-MyoD1,为进一步研究该基因在广西巴马小型猪骨骼肌发育中的调控作用奠定基础。以广西巴马小型猪的肝脏组织为材料,应用RT-PCR技术克隆得到广西巴马小型猪MyoD1基因编码序列,对其核苷酸序列和蛋白质序列进行生物信息学分析,并构建该基因的真核表达载体,经过PCR和双酶切验证,通过脂质体转染,将重组质粒转染C2C12细胞,在细胞水平验证了该载体的正确性。结果显示,广西巴马小型猪MyoD1基因编码区序列长960 bp,编码319个氨基酸,核苷酸序列与猪、牛、水牛、绵羊、马、人、小家鼠、褐家鼠、家犬的同源性依次为99.7%、92.8%、92.9%、92.6%、91.5%、82.9%、82.9%、82.0%和90.9%;系统进化树分析表明,广西巴马小型猪MyoD1基因在不同物种及进化过程中具有高度保守性;蛋白质结构分析表明,MyoD1蛋白为膜外蛋白,在第4-116位氨基酸处存在1个MyoD家族标志性的MyoD结构域,对广西巴马小型猪、猪和人的MyoD1蛋白高级结构比较发现其具有极高的相似性。本研究构建的广西巴马小型猪MyoD1基因表达载体pEGFP-N1-MyoD1,转染C2C12细胞后产生绿色荧光信号,表明MyoD1基因在C2C12细胞中成功表达。 展开更多

关键词 广西巴马小型猪 MyoD1基因 肌细胞 真核表达载体

下载PDF 职称材料