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日本血吸虫SjGrpE蛋白的表达纯化及多克隆抗体制备
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作者 肖非 胡智 +1 位作者 谭潇 黄泽智 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期355-360,共6页
目的分析日本血吸虫核苷酸交换因子(SjGrpE)蛋白生物学特性,表达与纯化重组SjGrpE蛋白并测定其免疫原性。方法采用生物信息学方法预测SjGrpE蛋白的氨基酸组成、分子量、亲/疏水性、跨膜区、信号肽、定位、磷酸化位点、泛素化位点、糖基... 目的分析日本血吸虫核苷酸交换因子(SjGrpE)蛋白生物学特性,表达与纯化重组SjGrpE蛋白并测定其免疫原性。方法采用生物信息学方法预测SjGrpE蛋白的氨基酸组成、分子量、亲/疏水性、跨膜区、信号肽、定位、磷酸化位点、泛素化位点、糖基化位点、二级和三级结构及B细胞表位。以日本血吸虫cDNA为模板,PCR扩增SjGrpE基因,将其双酶切后连接到pET28a载体得到重组质粒pET28a-SjGrpE。将pET28a-SjGrpE转化大肠埃希菌BL21,用IPTG诱导目的蛋白表达,并用镍离子亲和层析法纯化蛋白。将重组SjGrpE蛋白免疫小鼠,分离血清并鉴定获得的抗多克隆抗体。结果SjGrpE蛋白分子量约为24.3 kDa,是一种亲水性蛋白,无跨膜区、无信号肽,定位在线粒体;该蛋白含有18个磷酸化位点和2个泛素化位点,无糖基化位点,含有5个B细胞表位。SjGrpE基因全长为660 bp,成功构建重组质粒pET28a-SjGrpE并纯化获得重组SjGrpE蛋白。重组SjGrpE蛋白能够刺激小鼠分泌高滴度抗体。结论成功制备重组SjGrpE蛋白,该蛋白具有良好免疫原性,为后续研究其作为日本血吸虫病疫苗候选分子的价值奠定了基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 grpe蛋白 免疫原性 生物信息学分析
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