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实时定量聚合酶链反应法检测人周围血淋巴细胞受照后GADD45基因表达的改变 被引量：2
1
作者 刘莉 佘义 +4 位作者 赵卫东 李进 王芹 田丽丽 姜恩海 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2008年第6期454-457,共4页
目的建立辐射诱导人淋巴细胞GADD45基因表达定量检测技术,探讨GADD45基因表达变化作为辐射生物剂量计的可行性。方法健康人周围血经X射线照射后分离淋巴细胞,提取总RNA,反转录成cDNA,利用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测GADD45基... 目的建立辐射诱导人淋巴细胞GADD45基因表达定量检测技术,探讨GADD45基因表达变化作为辐射生物剂量计的可行性。方法健康人周围血经X射线照射后分离淋巴细胞,提取总RNA,反转录成cDNA,利用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测GADD45基因经不同剂量照射(0～8 Gy)、2 Gy照后不同时间(0～72 h)的mRNA表达水平,以管家基因GAPDH为内参进行定量分析。结果照射后GADD45基因在转录水平表达呈剂量依赖性增加,4 Gy照射时达到峰值,8 Gy仍然保持在较高水平,GADD45基因表达改变存在线性剂量-效应关系,其线性回归方程为y^=3.408+1.528x,R2=0.787。2 Gy照射后GADD45基因mRNA表达在照射后1 h呈现上升趋势,在4 h时达峰值,照射后72 h基因表达仍未恢复到初始水平。结论实时荧光定量PCR检测GADD45基因表达方法具有良好的敏感性、重复性和剂量-效应关系,有可能成为新的辐射生物剂量计。 展开更多
关键词 GADD45基因 生物剂量计 基因表达 实时荧光定量RCR
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X射线对人周围血淋巴细胞Gadd45 mRNA表达影响 被引量：1
2
作者 王恰 李明芳 +3 位作者 杨爱初 杨宇华 梁晓阳 严茂胜 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2015年第6期640-644,共5页
目的分析不同受照剂量和不同受照时间对人周围血淋巴细胞生长抑制和DNA损伤基因45（Gadd45）mRNA相对表达水平的影响,探讨Gadd45基因作为生物剂量计的可能性。方法 1剂量-效应关系研究。以0.00、0.10、0.25、0.50、1.00、2.00、3.00和5.... 目的分析不同受照剂量和不同受照时间对人周围血淋巴细胞生长抑制和DNA损伤基因45（Gadd45）mRNA相对表达水平的影响,探讨Gadd45基因作为生物剂量计的可能性。方法 1剂量-效应关系研究。以0.00、0.10、0.25、0.50、1.00、2.00、3.00和5.00 Gy剂量X射线离体照射健康人周围血样,分离淋巴细胞进行检测;2时间-效应关系研究。以2.00 Gy剂量X射线离体照射健康人周围血样,分离淋巴细胞后分别于培养0、3、6、12、24和48 h时收获细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测Gadd45 mRNA相对表达水平。结果 1 0.00-0.50 Gy剂量范围内,Gadd45 mRNA相对表达水平随照射剂量的增加而增加,回归方程为y=1.056 9＋7.132 2 x[决定系数（R^2）=0.992,P〈0.01]。0.50 Gy剂量组Gadd45 mRNA相对表达水平达到峰值,为0.00 Gy剂量组的4.53倍;0.50-5.00 Gy剂量范围内,Gadd45 mRNA相对表达水平呈波动性下降。22.00 Gy剂量照射后3-12 h,Gadd45 mRNA相对表达水平随照射时间的增加而增加,回归方程为y=-6.366 0＋4.965 0 x（R^2=0.932,P〈0.05）。照射后12 h时间组Gadd45 mRNA相对表达水平达到峰值,为0 h时间组的57.68倍;Gadd45 mRNA相对表达水平在照射后24-48 h大幅度下降,照射后48 h时间组为0 h时间组的2.08倍。结论 X射线照射可致Gadd45 mRNA表达上调,在一定剂量和时间范围内具有良好的剂量-效应和时间-效应关系;但Gadd45基因作为新型生物剂量计仍需进一步研究验证。 展开更多
关键词 X射线 生长抑制和dna损伤基因45 生物剂量计 基因表达 电离辐射
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GADD45β基因在脂肪细胞分化过程中的表达及肿瘤坏死因子-α对其的调节作用
3
作者 范红旗 郭锡熔 +7 位作者 陈荣华 金子林 倪毓辉 王玢 张敏 刘峰 辜楠 邱洁 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第17期1155-1157,共3页
目的观察3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中生长抑制和DNA损伤诱导家族45β（GADD45β）基因mRNA表达水平的变化，探讨TNF—α对成熟脂肪细胞中GADD45β基因表达水平的调节作用。方法体外培养3T3-L1脂肪细胞，在诱导3T3-L1脂肪细胞分化成熟... 目的观察3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中生长抑制和DNA损伤诱导家族45β（GADD45β）基因mRNA表达水平的变化，探讨TNF—α对成熟脂肪细胞中GADD45β基因表达水平的调节作用。方法体外培养3T3-L1脂肪细胞，在诱导3T3-L1脂肪细胞分化成熟的基础上，应用重组TNF—α干预分化成熟的脂肪细胞，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测诱导分化不同时段及TNF-α干预后不同时间脂肪细胞中GADD45β基因表达水平。结果随脂肪细胞逐渐分化成熟，GADD45β基因mRNA表达水平渐降低。GADD45β基因表达水平除在细胞分化d1～7、d8～10各时段内差异无显著意义（P〉0．05）外，余各时段之间表达水平差异均具有最著意义（P〈0.05）。不同质量浓度重组TNF-α（0．1～10．0μg/L）均能显著促进成熟脂肪细胞中GADD45β基因mRNA的表达。TNF-α质量浓度为0.1μg／L时，GADD45β基因表达水平6h内上升51．39％，24h内上升100．15％；TNF—α质量浓度为1．0μg／L时，GADD45β基因表达水平6h内上升44．15％，24h内上升100．63％；TNF—α质量浓度达10．0μg/L，GADD45β基因表达水平6h内即上升104．26％，24h内上升122．17％。结论GADD45β基因可能参与脂肪细胞分化及脂质形成过程；TNF-α对成熟脂肪细胞中GADD45β基因表达具有促进作用，其促进效应总体趋势呈现时间依赖性特征。 展开更多
关键词 生长抑制和dna损伤诱导家族45β 脂肪细胞 细胞分化 肿瘤坏死因子Α
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Gadd45g基因对垂体瘤AtT-20细胞的增殖、凋亡和自噬的影响 被引量：1
4
作者 胡昌龙 杨勇 +7 位作者 陈波 王景文 张锋 胡维 葛璐 龚爱华 王安利 李巧玉 《江苏医药》 CAS 2015年第10期1130-1134,I0001,共6页
目的探讨生长阻滞及DNA损伤诱导基因45g(Gadd45g)过表达及靶向沉默对垂体瘤AtT-20细胞及小鼠原代星型胶质细胞的增殖、凋亡及自噬等影响。方法构建Gadd45g基因的CDS区序列克隆至真核表达质粒p3XFLAG-Gadd45g及其shRNA真核表达质粒pLKO.1... 目的探讨生长阻滞及DNA损伤诱导基因45g(Gadd45g)过表达及靶向沉默对垂体瘤AtT-20细胞及小鼠原代星型胶质细胞的增殖、凋亡及自噬等影响。方法构建Gadd45g基因的CDS区序列克隆至真核表达质粒p3XFLAG-Gadd45g及其shRNA真核表达质粒pLKO.1-sh-Gadd45g,将p3XFLAG-Gadd45g转染至小鼠垂体瘤AtT-20细胞中。其shRNA真核表达质粒pLKO.1-purosh-Gadd45g进行慢病毒包装,病毒感染小鼠星形胶质细胞;Western blot检测FLAG-Gadd45g融合蛋白的表达及RT-PCR检测shRNA沉默效率,CCK-8检测细胞增殖活力,Western blot检测其对凋亡蛋白、自噬蛋白的影响。结果 Gadd45g及其特异性shRNA真核表达质粒构建成功。构建的p3XFLAGGadd45g质粒在垂体瘤AtT-20细胞中能够表达;Gadd45g shRNA具有沉默效率。在垂体瘤AtT-20细胞中过表达Gadd45g,可明显抑制细胞增殖,并能诱导Caspase-3表达,降低Beclin 1表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值(P<0.05)。与之相反,在原代培养的星形胶质细胞中,shRNA干扰Gadd45g表达,可促进细胞增殖,并降低Caspase-3表达,而增加Beclin 1表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值(P<0.05)。结论垂体瘤中Gadd45g的表达缺失可能使得垂体瘤AtT-20细胞凋亡受阻及自噬作用增强,从而促进垂体瘤的发生、发展。恢复垂体瘤细胞中Gadd45g的表达及抑制垂体瘤细胞自噬作用有望成为垂体瘤治疗的新方法。 展开更多
关键词 生长阻滞及dna损伤诱导基因45g 垂体瘤
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GADD45β在骨关节炎中的作用及其对MKK7/JNK途径的影响
5
作者 王远瑞 孙强 +2 位作者 陈永锋 漆伟 康飞科 《西部医学》 2024年第8期1097-1106,共10页
目的探讨生长抑制和DNA损伤诱导基因45β(GADD45β)在骨关节炎(OA)发生发展中的作用及机制。方法将大鼠软骨细胞分为对照组、IL-1β组、NC-OE+IL-1β组、GADD45βOE+IL-1β组、NC-sh+IL-1β组和GADD45βsh+IL-1β组。除对照组之外,其他... 目的探讨生长抑制和DNA损伤诱导基因45β(GADD45β)在骨关节炎(OA)发生发展中的作用及机制。方法将大鼠软骨细胞分为对照组、IL-1β组、NC-OE+IL-1β组、GADD45βOE+IL-1β组、NC-sh+IL-1β组和GADD45βsh+IL-1β组。除对照组之外,其他组细胞均采用10 ng/mL的IL-1β处理24 h。采用MTT法和TUNEL法检测软骨细胞增殖和凋亡。将SD大鼠分为假手术组、OA组、NC-OE+OA组和GADD45βOE+OA组,每组12只。假手术组大鼠只进行假手术操作,其他组大鼠均为前交叉韧带切断加内侧半月板部分切除法诱导的OA模型大鼠。假手术组和OA组大鼠关节腔内注射磷酸盐缓冲液,NC-OE+OA组和GADD45βOE+OA组大鼠关节腔内分别注射NC-OE和GADD45βOE慢病毒,每周注射1次,共4周。采用番红O-固绿染色观察大鼠软骨降解并进行OARSI评分,采用TUNEL染色检测大鼠软骨细胞凋亡。采用RT-qPCR检测GADD45β、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP13、IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA水平。采用Western blot检测GADD45β、丝裂原活化蛋白激酶激酶7(MKK7)、p-MKK-7、c-Jun氨基末端激酶(JNK)1/2/3和p-JNK1/2/3的蛋白水平。结果与对照组比较,IL-1β组软骨细胞的GADD45βmRNA和蛋白水平降低,相对细胞活力和Bcl-2 mRNA水平均降低,TUNEL阳性率以及Bax、MMP3、MMP13、IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平均升高,MKK-7和JNK1/2/3的相对磷酸化水平升高(P<0.05)。与IL-1β组和NC-OE+IL-1β组比较,GADD45βOE+IL-1β组软骨细胞的GADD45βmRNA和蛋白水平升高,相对细胞活力和Bcl-2 mRNA水平均升高,TUNEL阳性率以及Bax、MMP3和MMP13、IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平均降低,MKK-7和JNK1/2/3的相对磷酸化水平降低(P<0.05)。与IL-1β组和NC-sh+IL-1β组比较,GADD45βsh+IL-1β组软骨细胞的GADD45βmRNA和蛋白水平降低,相对细胞活力和Bcl-2 mRNA水平均降低,TUNEL阳性率以及Bax、MMP3、MMP13、IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平均升高,MK 展开更多
关键词 骨关节炎 生长抑制和dna损伤诱导基因45β C-JUN氨基末端激酶 软骨 炎症 细胞凋亡
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3-氨基吡啶-2-甲醛硫代缩氨基脲对不同p53状态肝癌细胞中生长抑制及DNA损伤诱导基因45β的诱导差异及其机制
6
作者 葛覃 房嫣 +5 位作者 杨卫平 付志平 李科 佟辉 施敏敏 邱伟华 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期2029-2031,共3页
目的 探讨3-氨基吡啶-2-甲醛硫代缩氨基脲（Triapine）对不同p53状态肝癌细胞的生长抑制及DNA损伤诱导基因45β（GADD45β）诱导差异及其调控机制.方法 转染p53全序列建立Hep3B＋p53；体外合成GADD45β近端6个启动子序列群（-618 ～-314... 目的 探讨3-氨基吡啶-2-甲醛硫代缩氨基脲（Triapine）对不同p53状态肝癌细胞的生长抑制及DNA损伤诱导基因45β（GADD45β）诱导差异及其调控机制.方法 转染p53全序列建立Hep3B＋p53；体外合成GADD45β近端6个启动子序列群（-618 ～-314）,构建荧光素表达质粒,转染肝癌细胞株HepG2、Hep3B和Hep3B＋p53；以实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）比较Triapine对GADD45β表达诱导及其近端启动子活性影响差异；进一步比较对DNA合成和细胞克隆形成能力抑制差异；并通过半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3的表达变化测定细胞凋亡的发生和发展.结果 Triapine对Hep3B中GADD45诱导并不明显,Hep3B＋p53对Triapine敏感性明显增加,2.5、5.0μmol/L剂量下GADD45/甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）比值分别为0.0425和0.0704,并呈现出剂量-效应的正相关关系.荧光素分析提示Triapine作用Hep3B＋p53后的启动子核因子（NF）-κB（-618/＋6）和E2F-1（-470/＋6）活性较Hep3B明显增强约1.3倍和0.7倍.Triapine能够更加明显地抑制Hep3B ＋p53的DNA合成能力和细胞克隆形成能力,5μmol/L Triapine对Hep3B ＋p53DNA合成的抑制率为40.89％,对细胞克隆形成能力的抑制率达到68.16％,与Hep3B比较差异有统计学意义（P＜0.05）.Triapine作用后Hep3B＋p53的Caspase-3能迅速激活,活性高峰提前出现于6h.结论 p53在核糖核苷酸还原酶抑制剂化疗药物对肝癌细胞的GADD45诱导中具有重要作用,其作用机制可能是增强转录调节因子的表达水平. 展开更多
关键词 肝癌 3-氨基吡啶-2-甲醛硫代缩氨基脲 生长抑制及dna损伤诱导基因45β P53 启动子
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GADD45β和survivin基因在人原发性肝癌组织中的蛋白表达及意义 被引量：4
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作者 朱志杰 黄修明 +3 位作者 邝继孙 谷渊 董星 赵龙栓 《肿瘤基础与临床》 2010年第5期379-381,共3页
目的探讨GADD45β和survivin基因在人原发性肝癌(HCC)组织中的蛋白表达及意义。方法收集不同分化程度的HCC组织标本68例,正常肝组织标本20例,采用免疫组化S-P法检测GADD45β和survivin基因的蛋白表达。结果 GADD45β基因与survivin基因... 目的探讨GADD45β和survivin基因在人原发性肝癌(HCC)组织中的蛋白表达及意义。方法收集不同分化程度的HCC组织标本68例,正常肝组织标本20例,采用免疫组化S-P法检测GADD45β和survivin基因的蛋白表达。结果 GADD45β基因与survivin基因在HCC组织中的蛋白表达率分别为38.24%(26/68)和75.00%(51/68),两者的表达均与HCC的病理分化程度、临床分期有关(P<0.05),survivin基因的表达还与门脉癌栓有关(P<0.05)。随着survivin基因在HCC组织中蛋白表达率的升高,GADD45β基因蛋白表达强度明显下降,两者的表达呈负相关(r=-0.454,P<0.05)。结论 GADD45β基因在HCC发生发展中起抑制作用,GADD45β基因表达缺失是HCC发生发展的重要因素之一;survivin基因的异常表达在肝癌的发生发展中起促进作用。联合检测GADD45β基因和survivin基因的蛋白表达有助于判断HCC的恶性程度和HCC患者的预后。 展开更多
关键词 生长阻滞和dna损伤诱导基因 SURVIVIN基因 原发性肝癌 免疫组化
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转录因子ATF3对大鼠Gadd45β/γ基因启动活性的影响及其可能的结合部位 被引量：2
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作者 周梦雅 何风霞 +7 位作者 张婧 刘玉 虞天一 卢燕来 王璐璐 赵聃 邱文 王迎伟 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期26-32,共7页
目的 :构建大鼠生长阻滞及DNA损伤诱导基因45(growth arrest and DNA-damage-inducible gene 45,Gadd45)β/γ启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,并观察在大鼠肾小球系膜细胞(glomerular messangial cells,GMCs)中过表达激活转录因子3... 目的 :构建大鼠生长阻滞及DNA损伤诱导基因45(growth arrest and DNA-damage-inducible gene 45,Gadd45)β/γ启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,并观察在大鼠肾小球系膜细胞(glomerular messangial cells,GMCs)中过表达激活转录因子3(activating transcription factor 3,ATF3)后分别对大鼠Gadd45β/γ基因启动活性的影响。同时筛选其可能的ATF3结合位点。方法:采用PCR技术,将扩增出的大鼠Gadd45β基因启动子全长(-1 105^+236 nt)和Gadd45γ基因启动子全长(-913^+72nt)分别插入到荧光素酶报告基因载体p GL3-basic中,获得Gadd45β/γ基因启动子全长荧光素酶报告质粒(p GL3-Gadd45β/γ-FL),再将p GL3-Gadd45β/γ-FL分别与课题组前期构建的大鼠野生型ATF3过表达质粒(p IRES2/ATF3)共转染GMCs,检测其荧光素酶活性,以确定ATF3对Gadd45β/γ基因的启动作用。另用生物信息学软件预测Gadd45β/γ基因启动子上ATF3潜在的结合位点,并据此构建4个Gadd45β和3个Gadd45γ基因启动子截短片段的荧光素酶报告质粒。将Gadd45β/γ基因启动子全长和各截短片段的荧光素酶报告质粒与p IRES2/ATF3共转染GMCs,再行荧光素酶活性测定,以筛选ATF3的结合位点。结果:菌液PCR及核酸测序证实,大鼠Gadd45β/γ基因启动子(全长和截短)的荧光素酶报告质粒均构建成功。将p GL3-Gadd45β/γ-FL分别和p IRES2/ATF3共转染GMCs发现,Gadd45β/γ基因启动子活性均显著增加。而将Gadd45β启动子全长及4个截短质粒分别与p IRES2/ATF3共转染GMCs后显示,p GL3-Gadd45β-4的启动活性显著低于p GL3-Gadd45β-FL、p GL3-Gadd45β-1、p GL3-Gadd45β-2和p GL3-Gadd45β-3。提示ATF3可能结合在Gadd45β基因启动子的(-146^+23 nt)区域。同样,将Gadd45γ启动子全长及3个截短质粒分别与p IRES2/ATF3共转染GMCs后显示,p GL3-Gadd45γ-2、p GL3-Gadd45γ-3的启动活性显著低于p GL3-Gadd45γ-FL和p GL3-Gadd45γ-1。提示ATF3可能结合在Gadd45γ基因启动子的(-456^-61 nt)区� 展开更多
关键词 生长阻滞和dna损伤基因45(Gadd45) 激活转录因子3(ATF3) 荧光素酶报告质粒 启动子活性
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