梅毒螺旋体外膜蛋白Gpd基因的克隆、表达及其免疫活性研究 被引量：10

1

作者 赵飞骏 吴移谋 +2 位作者 张晓红 刘双全 余敏君 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期767-771,共5页

利用PCR技术从Tp Nichols株基因组模板中扩增梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)外膜蛋白Gpd基因,定向克隆构建真核表达重组体pcDNA3.1(+)-Gpd,免疫印迹和免疫组化技术检测pcDNA3.1(+)-Gpd在HeLa细胞中的表达;同时将真核表达重组体pcDNA... 利用PCR技术从Tp Nichols株基因组模板中扩增梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)外膜蛋白Gpd基因,定向克隆构建真核表达重组体pcDNA3.1(+)-Gpd,免疫印迹和免疫组化技术检测pcDNA3.1(+)-Gpd在HeLa细胞中的表达;同时将真核表达重组体pcDNA3.1(+)-Gpd免疫新西兰兔,检测其在兔体内的免疫应答效果。免疫印迹和免疫组化鉴定均显示重组体在HeLa细胞中能有效表达一个41kD的Gpd融合蛋白。新西兰兔接种核酸疫苗后,能产生特异性抗体,第3次免疫后2周抗体最高滴度可达1∶1024,免疫后兔脾细胞受Gpd蛋白刺激有明显增殖反应。所诱导的抗体水平和脾淋巴细胞增殖情况均显著高于空质粒对照组和空白对照组(p<0.05)。Tp真核表达重组体pcDNA3.1(+)-Gpd的成功构建及能刺激新西兰兔产生较强特异的免疫应答,为Gpd蛋白生物学功能及梅毒DNA疫苗的深入研究奠定了一定的实验基础。 展开更多

关键词 梅毒螺旋体 gpd基因 真核表达 免疫

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立枯丝核菌不同融合群菌株GPD基因的克隆及序列特征分析 被引量：5

2

作者 王艳丽 任衍春 +7 位作者 张震 王教瑜 毛雪琴 姜华 邱海萍 柴荣耀 杜新法 孙国昌 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期639-646,共8页

利用同源克隆的方法对11个立枯丝核菌标准融合群菌株的GPD基因进行了分离。分析发现不同融合群立枯丝核菌GPD基因在外显子数目、编码蛋白长度及内含子剪切方式等方面存在差异,如AG-2-2ⅢB、AG-2-2Ⅳ、AG-8三个融合群的GPD基因的外显子... 利用同源克隆的方法对11个立枯丝核菌标准融合群菌株的GPD基因进行了分离。分析发现不同融合群立枯丝核菌GPD基因在外显子数目、编码蛋白长度及内含子剪切方式等方面存在差异,如AG-2-2ⅢB、AG-2-2Ⅳ、AG-8三个融合群的GPD基因的外显子个数为10个,其他融合群均为11个;AG-8融合群的GPD基因的编码蛋白长度为267个氨基酸,其余融合群的GPD基因的编码蛋白长度约为340个氨基酸。AG-2-2ⅢB、AG-2-2Ⅳ、AG-8三个融合群的GPD基因在98、98、272氨基酸位点的内含子发生了缺失。基于蛋白序列的进化分析表明不同融合群之间GPD基因编码蛋白存在明显差异,可以有效地将不同融合群菌株区分开来;同时,不同物种之间GPD基因在进化上仍具有一定保守性,立枯丝核菌自身的GPD基因蛋白序列归为一类且与担子菌门同源性最高。这些结果表明进行保守基因序列差异分析是进行立枯丝核菌分类分群研究的新思路。 展开更多

关键词 立枯丝核菌 gpd基因 克隆 进化分析 融合群

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梅毒螺旋体外膜蛋白Gpd的基因型分析及其重组蛋白的免疫原性鉴定 被引量：3

3

作者 严加林 吴移谋 +1 位作者 赵飞骏 刘双全 《南华大学学报（医学版）》 2005年第1期29-32,36,共5页

目的　构建梅毒螺旋体 (Treponemapallidum ,Tp)外膜蛋白Gpd基因的原核表达载体 ,检测其表达产物的免疫原性 ,并比较梅毒螺旋体各菌株Gpd基因序列的同源度。方法　从TpNichols株基因组模板中PCR扩增Gpd基因 ,与GenBank登录的序列做blas... 目的　构建梅毒螺旋体 (Treponemapallidum ,Tp)外膜蛋白Gpd基因的原核表达载体 ,检测其表达产物的免疫原性 ,并比较梅毒螺旋体各菌株Gpd基因序列的同源度。方法　从TpNichols株基因组模板中PCR扩增Gpd基因 ,与GenBank登录的序列做blast比较 ,定向克隆构建原核表达重组体pET2 8b( + ) -Gpd ,转入大肠杆菌ril表达菌 ,SDS -PAGE分析重组蛋白的表达 ,Western -blot检测重组蛋白的免疫原性。结果　载体上所连目的基因片段序列与GenBank登录的Nichols株Gpd基因序列完全一致 ,同其他病原性密螺旋体菌株登陆序列比较同源度为 98%～ 1 0 0 %。SDS -PAGE检测诱导产物显示有一Mr约为 41kDa的特异蛋白带 ,免疫印迹技术检测其能与梅毒阳性标准血清反应。结论　Tp原核表达重组体pET2 8b( + ) -Gpd成功构建 ,且能够在ril表达菌中融合表达 ,为进一步研究该蛋白的生物学功能奠定了一定的实验基础。 展开更多

关键词 梅毒螺旋体 gpd基因 原核表达

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桦褐孔菌GPD基因cDNA序列和启动子的克隆与分析 被引量：1

4

作者 张宇婷 朴钟云 +1 位作者 刘迪 曲柏宏 《延边大学农学学报》 2019年第4期7-13,共7页

利用RACE和染色体步移技术首次从桦褐孔菌中克隆得到三磷酸甘油醛脱氢酶(GPD)基因和启动子序列。桦褐孔菌GPD基因的cDNA序列全长1223 bp,其中,编码区1020 bp,共编码339个氨基酸,相对分子质量约为36.39 kDa,理论等电点为8.28。序列比对... 利用RACE和染色体步移技术首次从桦褐孔菌中克隆得到三磷酸甘油醛脱氢酶(GPD)基因和启动子序列。桦褐孔菌GPD基因的cDNA序列全长1223 bp,其中,编码区1020 bp,共编码339个氨基酸,相对分子质量约为36.39 kDa,理论等电点为8.28。序列比对结果表明:桦褐孔菌GPD基因与鲍姆桑黄(Sanghuangporusbaumii)相似度为88%。利用染色体步移技术方法克隆得到GPD基因起始密码子上游446 bp启动子序列,分析表明在152 bp和160 bp处有2个转录起始位点,含有TATA、CAAT、CCAAT box及重要顺势作用元件LTR、O2-site、circadian、Sp1、TCCC-motif等,这将为桦褐孔菌菌株的分类鉴定、功能研究及高效表达载体的建立提供基因资源。 展开更多

关键词 桦褐孔菌 gpd基因 启动子 克隆 序列分析

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梅毒螺旋体外膜蛋白Gpd在Hela细胞中的表达及鉴定

5

作者 张明 赵飞骏 +1 位作者 张晓红 刘双全 《南华大学学报（医学版）》 2005年第4期476-478,494,共4页

目的构建梅毒螺旋体(Tp)外膜蛋白甘油磷酸二酯磷酸二酯酶基因(Gpd)的真核表达载体pcDNA3.1(+)-Gpd,鉴定其在Hela细胞的表达,为开展Tp DNA疫苗动物实验打下基础。方法用PCR从Tp Nichols株基因组中扩增Gpd基因,构建真核表达重组质粒pcDNA3... 目的构建梅毒螺旋体(Tp)外膜蛋白甘油磷酸二酯磷酸二酯酶基因(Gpd)的真核表达载体pcDNA3.1(+)-Gpd,鉴定其在Hela细胞的表达,为开展Tp DNA疫苗动物实验打下基础。方法用PCR从Tp Nichols株基因组中扩增Gpd基因,构建真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)-Gpd,脂质体介导转染入Hela细胞,以免疫组化及Western-blot检测在Hela细胞中的表达。结果双酶切及DNA测序显示重组质粒含有1 059 bp的目的基因片段,读码框架正确,无突变。该重组质粒在Hela细胞能有效表达分子量为41 kDa的目的蛋白,重组蛋白能与梅毒螺旋体阳性血清反应。结论构建的质粒pcD-NA3.1(+)-Gpd成功地在体外真核细胞中表达。 展开更多

关键词 梅毒螺旋体 DNA疫苗 gpd基因 真核表达

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稻瘟病菌—3磷酸甘油醛脱氢酶基因（gpd）的快速克隆

6

作者 鲁国东 郑学勤 《浙江农业大学学报》 CSCD 北大核心 1998年第5期468-474,共7页

本文描述了一种简便有效的克隆基因未知５‘和３’末端序列的方法，并用此方法克隆了稻瘟病菌的３－磷酸甘油醛脱氢酶基因即通过比较１２种真菌的已知ｇｐｄ基因序列，寻找内部的保守区段，设计并合成一对特异性引物。引物Ｐ１为造近基... 本文描述了一种简便有效的克隆基因未知５‘和３’末端序列的方法，并用此方法克隆了稻瘟病菌的３－磷酸甘油醛脱氢酶基因即通过比较１２种真菌的已知ｇｐｄ基因序列，寻找内部的保守区段，设计并合成一对特异性引物。引物Ｐ１为造近基因５‘端的一个特异性序列，引物Ｐ２则与３’端的一段特异性序列互补。 展开更多

关键词 稻瘟病菌 克隆方法 gpd基因

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菠菜匍柄霉引起的菠菜叶斑病(英文) 被引量：5

7

作者 周艳芳 石延霞 +2 位作者 谢学文 郭英兰 李宝聚 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期379-383,共5页

菠菜Spinacia oleracea在中国是一种被广泛种植的蔬菜,2009年秋天,在甘肃省兰州市郊区观察到由匍柄霉引起的菠菜叶斑病,根据病原菌的形态学特征、致病性试验及分子测序,其病原菌鉴定为一新种,菠菜匍柄霉Stemphylium spinaciae B.J.Li,Y.... 菠菜Spinacia oleracea在中国是一种被广泛种植的蔬菜,2009年秋天,在甘肃省兰州市郊区观察到由匍柄霉引起的菠菜叶斑病,根据病原菌的形态学特征、致病性试验及分子测序,其病原菌鉴定为一新种,菠菜匍柄霉Stemphylium spinaciae B.J.Li,Y.F.Zhou&Y.L.Guo sp.nov. 展开更多

关键词 菠菜匍柄霉 形态学特征 致病性试验 ITS及gpd基因部分序列 新种

原文传递

我国桔梗上一种新病害匍柄霉叶斑病的病原 被引量：2

8

作者 周艳芳 王燕春 +3 位作者 赵伟强 徐佳 路培 郑力嘉 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期511-515,共5页

2013年在内蒙古赤峰市喀喇沁旗发现桔梗匍柄霉叶斑病,该病害在2014–2017年均再次发生。采用单孢分离法在病叶上得到病原菌,于PCA培养基上培养后,在光学显微镜下观察记录病原菌形态学特征。同时将病原菌的rDNA ITS、gpd和EF-1α的PCR产... 2013年在内蒙古赤峰市喀喇沁旗发现桔梗匍柄霉叶斑病,该病害在2014–2017年均再次发生。采用单孢分离法在病叶上得到病原菌,于PCA培养基上培养后,在光学显微镜下观察记录病原菌形态学特征。同时将病原菌的rDNA ITS、gpd和EF-1α的PCR产物测序后做BLAST分析。结果表明该菌与桔梗匍柄霉Stemphylium platycodontis基本一致。这是国内桔梗匍柄霉叶斑病的首次详细报道。 展开更多

关键词 形态学鉴定 致病性 rDNAITS序列 gpd基因序列 EF-1a基因序列

原文传递

沙棘GPD1和DGAT1双基因载体的构建及表达验证

9

作者 赵思阳 阮成江 +3 位作者 丁健 卢顺光 温秀凤 胡建忠 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期10-14,共5页

为了提高沙棘种子的品质,选取大连民族大学校园内的沙棘‘实优1号’的种子为研究对象,用野生型拟南芥(Col-0)作为目的基因的转化受体,以沙棘种子油脂合成关键基因GPD1和DGAT1为载体,通过In-fusion连接技术构建HrGPD1和HrDGAT1基因双价... 为了提高沙棘种子的品质,选取大连民族大学校园内的沙棘‘实优1号’的种子为研究对象,用野生型拟南芥(Col-0)作为目的基因的转化受体,以沙棘种子油脂合成关键基因GPD1和DGAT1为载体,通过In-fusion连接技术构建HrGPD1和HrDGAT1基因双价表达载体pCGD,采用农杆菌蘸花法获取转基因拟南芥植株,利用甲酯化和氯仿甲醇法对和野生型的拟南芥植株种子进行脂肪酸不同组份的比例及含油率检测。结果表明:拟南芥转基因2代与野生型相比,拟南芥2代种子油酸、亚油酸的比例分别提高了46.70%和9.35%,但种子含油率未明显提高。因此,同时表达沙棘HrGPD1和HrDGAT1基因提高了油酸、亚油酸含量,为高油酸沙棘优良品种的培育和改良提供了基因材料。 展开更多

关键词 沙棘 gpd1基因 DGAT1基因 双基因载体 异源表达

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转lpaat和gpd1基因工程藻的快速筛选 被引量：1

10

作者 王潮岗 李逸 胡章立 《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第1期33-40,共8页

根据莱茵衣藻密码子偏好性对源于油菜的溶血磷脂酸酰基转移酶基因(lpaat)和酵母的甘油3-磷酸酰基转移酶基因(gpd1)进行优化,获得适合莱茵衣藻表达的c-lpaat和c-gpd1基因,将其连接到p H124质粒中,构建相应的衣藻表达载体.通过珠磨法进行... 根据莱茵衣藻密码子偏好性对源于油菜的溶血磷脂酸酰基转移酶基因(lpaat)和酵母的甘油3-磷酸酰基转移酶基因(gpd1)进行优化,获得适合莱茵衣藻表达的c-lpaat和c-gpd1基因,将其连接到p H124质粒中,构建相应的衣藻表达载体.通过珠磨法进行遗传转化,经Zeomycin抗性筛选和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)验证,获得导入c-lpaat和c-gpd1的转基因藻.利用半定量反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)技术筛选高效表达c-lpaat和c-gpd1的转基因藻,目的基因的转录水平分别提高了56.38%和75.95%,其藻细胞的脂肪酸含量也得到相应增加,与基因表达情况一致.证明莱茵衣藻可以有效表达外源高等植物的基因,利用半定量RT-PCR可以快速筛选出潜在的高油脂含量转基因工程藻株. 展开更多

关键词 基因工程 转基因藻 莱茵衣藻 lpaat基因 gpd1基因 三酰甘油合成

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非特异性精神发育迟滞相关基因GPD2的研究进展

11

作者 左璇 高晓彩 张富昌 《中国优生与遗传杂志》 2011年第6期1-2,4,共3页

GPD2基因属于新发现的非特异性神经发育迟滞相关基因之一,编码线粒体甘油磷酸脱氢酶(mGPDH),最新的分子和功能研究显示GPD2基因的转录物水平和它所翻译的mGPDH蛋白活性在一个轻度非特异性神经发育迟滞患者的淋巴细胞中比正常人减少了约... GPD2基因属于新发现的非特异性神经发育迟滞相关基因之一,编码线粒体甘油磷酸脱氢酶(mGPDH),最新的分子和功能研究显示GPD2基因的转录物水平和它所翻译的mGPDH蛋白活性在一个轻度非特异性神经发育迟滞患者的淋巴细胞中比正常人减少了约1/2。相关研究显示mGPDH蛋白质的功能缺陷可能与神经发育迟滞(MR)相关,表明GPD2基因在某些方面涉及神经发育迟滞。本文综述了GPD2基因的结构和产物、基因的生物学功能,与精神发育迟滞的相关性的研究现状,并对以后的研究工作进行了展望。 展开更多

关键词 gpd2基因 非特异性精神发育迟滞 基因突变 mgpdH

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柑橘溃疡病菌gpd1基因在致病性中的功能分析 被引量：1

12

作者 葛宗灿 阎依超 +5 位作者 张翠萍 李生樟 杨瑞环 李逸朗 陈功友 邹丽芳 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期670-680,共11页

甘油作为微生物重要的能量来源及抗逆因子,对其生存具有重要作用。gpd1基因编码甘油-3-磷酸脱氢酶(glycerol-3-phosphate dehydrogenase,G3PDH),是甘油合成代谢途径中关键的限速酶。本研究分析了gpd1基因在柑橘溃疡病菌(Xanthomonas cit... 甘油作为微生物重要的能量来源及抗逆因子,对其生存具有重要作用。gpd1基因编码甘油-3-磷酸脱氢酶(glycerol-3-phosphate dehydrogenase,G3PDH),是甘油合成代谢途径中关键的限速酶。本研究分析了gpd1基因在柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp. citri,Xcc)致病性中的功能。对Xcc强毒菌株Xcc021和弱毒菌株Xcc049E分别进行了gpd1的缺失突变,发现gpd1缺失仅影响强毒菌株Xcc021在感病柑橘寄主上的毒性以及gpd1缺失影响Xcc在营养贫乏培养基中的生长能力,功能互补子能够恢复毒性和生长能力至野生型水平。其他毒性相关表型显示:与野生型Xcc021相比,gpd1突变体菌体的沉降能力增加,游动性降低,生物膜形成能力增强,功能互补子能够恢复这些表型至野生型水平。这表明gpd1基因在强毒菌株中是重要的毒性因子,其涉及的甘油代谢途径可能在强弱毒菌株对于寄主柑橘的毒性具有不同的作用。 展开更多

关键词 柑橘溃疡病菌 gpd1基因 毒性 生物膜 细菌游动性

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