犬贾第虫纯培养的建立 被引量：6

1

作者 赵永军 张西臣 +4 位作者 刘全 李建华 尹继刚 杨举 吴涛 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第8期706-709,共4页

将取自一1岁自然感染犬贾第虫的雌性、德国牧羊犬的包囊利用蔗糖密度梯度离心-G1耐酸漏斗滤过法进行分离和纯化,经口感染给10日龄的沙鼠幼鼠,8 d后无菌取其小肠上段,分离出滋养体,转入改良TYS-I-33培养基中进行培养,在驯化5个月之后,虫... 将取自一1岁自然感染犬贾第虫的雌性、德国牧羊犬的包囊利用蔗糖密度梯度离心-G1耐酸漏斗滤过法进行分离和纯化,经口感染给10日龄的沙鼠幼鼠,8 d后无菌取其小肠上段,分离出滋养体,转入改良TYS-I-33培养基中进行培养,在驯化5个月之后,虫体逐渐适应了培养环境,在管壁上形成了细胞单层并进行传代,每隔48～72 h传代1次,共传18代.将培养物置肉汤及血琼脂平板培养,未见细菌及霉菌污染,为纯培养. 展开更多

关键词 犬贾第虫 纯培养 改良TYI-S-33培养基

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犬贾第虫携病毒株体外纯培养的建立 被引量：4

2

作者 陈丽凤 李建华 +3 位作者 张西臣 刘全 赵月平 曹利利 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期261-265,共5页

目的培养一携带犬贾第虫病毒的犬贾第虫(Giardiacanis)细胞株。方法用蔗糖密度梯度离心-G1耐酸漏斗过滤法纯化犬贾第虫包囊,经口接种5日龄长爪沙鼠(Merionesunguiculata),8d后于其十二指肠无菌收集犬贾第虫滋养体,置改良的TYI-S-33培养... 目的培养一携带犬贾第虫病毒的犬贾第虫(Giardiacanis)细胞株。方法用蔗糖密度梯度离心-G1耐酸漏斗过滤法纯化犬贾第虫包囊,经口接种5日龄长爪沙鼠(Merionesunguiculata),8d后于其十二指肠无菌收集犬贾第虫滋养体,置改良的TYI-S-33培养基中培养,待滋养体在培养管壁上形成细胞单层后进行传代。同时进行冻存和复苏实验,以及纯度、稳定性、细胞生物学特性、微生物污染等4项指标检测。滋养体经液氮冻融3次后3000×g离心15min,取上清,用磷钨酸负染,透射电镜观察病毒粒子。结果犬贾第虫滋养体接种14d后虫体逐渐适应了培养环境,在培养管壁上形成细胞单层,经上述4项指标检测,证明形成了稳定的犬贾第虫细胞株。电镜观察,见滋养体内有外观球形呈20面体结构、直径约为36nm的病毒样粒子。结论建立了携带GCV的犬贾第虫细胞株的体外纯培养。 展开更多

关键词 犬贾第虫病毒 体外培养 改良TYI-S-33培养基

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犬贾第虫dsRNA病毒的鉴定及特性 被引量：3

3

作者 喻建军 张西臣 +4 位作者 何宏轩 李建华 尹继刚 杨举 田宗成 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期475-478,共4页

对分离到的 6株犬贾第虫 ( Giardia canis)包囊进行核酸分析 ,在其中 1株犬贾第虫核酸的琼脂糖凝胶电泳图谱上观察到 1条长度约 7.0 kb的片段。经鉴定 ,该核酸不能被 DNA酶 ( 1 0 0 mg/ L)降解 ,对质量浓度低的 RNA酶 ( 0 .1 mg/ L)不敏... 对分离到的 6株犬贾第虫 ( Giardia canis)包囊进行核酸分析 ,在其中 1株犬贾第虫核酸的琼脂糖凝胶电泳图谱上观察到 1条长度约 7.0 kb的片段。经鉴定 ,该核酸不能被 DNA酶 ( 1 0 0 mg/ L)降解 ,对质量浓度低的 RNA酶 ( 0 .1 mg/ L)不敏感 ,但可被质量浓度高的 RNA酶 ( 1 0 mg/ L)降解。纯化包囊经液氮冻融后 ,磷钨酸负染 ,电镜观察发现有球形、直径约为 33nm的病毒样粒子存在 ,包囊超薄切片在胞质中也观察到该病毒样粒子存在。RNA依赖 RNA聚合酶活性测定结果表明 ,该病毒具有 RNA依赖 RNA聚合酶的活性。犬贾第虫 ds RNA病毒核酸经 RT-PCR扩增后得到 1条预计扩增大小的片段 ,将其回收后连接到 p MD1 8-T载体上进行克隆并测序 。 展开更多

关键词 犬贾第虫 贾第虫病毒 鉴定 犬

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犬贾第虫端粒重复序列的Southern印迹杂交分析 被引量：2

4

作者 刘成武 张西臣 +3 位作者 李建华 刘慧 宫鹏涛 张国才 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2008年第3期183-185,共3页

目的确定犬贾第虫端粒DNA的重复序列,为进行端粒酶活性检测奠定基础。方法根据已发表的蓝氏贾第虫的端粒重复序列5′-TAGGG-3′设计寡聚核苷酸探针(TAGGG)5,并以地高辛标记,将犬贾第虫基因组DNA经Bal31-EcoRⅠ酶切后,进行Southern印迹... 目的确定犬贾第虫端粒DNA的重复序列,为进行端粒酶活性检测奠定基础。方法根据已发表的蓝氏贾第虫的端粒重复序列5′-TAGGG-3′设计寡聚核苷酸探针(TAGGG)5,并以地高辛标记,将犬贾第虫基因组DNA经Bal31-EcoRⅠ酶切后,进行Southern印迹杂交分析。结果犬贾第虫基因组DNA与探针(TAGGG)5杂交,获得了较好的杂交条带,随Bal31酶切时间的延长,杂交信号逐渐减弱。结论犬贾第虫端粒重复序列定位在染色体的末端序列与国外报道的贾第虫端粒重复序列一致,为5′-TAGGG-3′。 展开更多

关键词 犬贾第虫 端粒DNA Southern印迹杂交

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犬贾第虫MM/Sac-C/1基因的克隆及序列分析 被引量：2

5

作者 赵永军 战洪波 +1 位作者 王亮 康桂英 《内蒙古民族大学学报（自然科学版）》 2016年第4期311-316,272,共7页

利用PCR技术从犬贾第虫滋养中扩增出了2004bp大小的MM/Sac-C/1基因,构建了p MD-MM/Sac-C/1克隆载体,并进行了序列测定,利用计算机对该序列进行了核苷酸同源性比较.结果表明,与GeneBank登陆的蓝氏贾第虫WB株AF236019序列比较,其同源性为9... 利用PCR技术从犬贾第虫滋养中扩增出了2004bp大小的MM/Sac-C/1基因,构建了p MD-MM/Sac-C/1克隆载体,并进行了序列测定,利用计算机对该序列进行了核苷酸同源性比较.结果表明,与GeneBank登陆的蓝氏贾第虫WB株AF236019序列比较,其同源性为98%,蛋白质同源性比较结果显示,与蓝氏贾第虫WB株表面抗原的同源性为90%,获得了犬贾第虫MM/Sac-C/1基因. 展开更多

关键词 犬贾第虫 MM/Sac-C/1基因 克隆及序列分析

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犬贾第鞭毛虫PDI-4基因的表达及定位 被引量：1

6

作者 吴娜 吴威 +5 位作者 李玲丹 宫鹏涛 李建华 杨举 李赫 张西臣 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第1期50-53,共4页

目的克隆、表达二硫键异构酶4基因,并研究其在犬贾第鞭毛虫滋养体中的定位。方法根据GenBank登陆的贾第鞭毛虫二硫键异构酶4基因(gPDI-4)(登录号XM_001710176)序列,通过分析序列,设计合成一对gPDI-4引物。以犬贾第鞭毛虫滋养体总RNA为模... 目的克隆、表达二硫键异构酶4基因,并研究其在犬贾第鞭毛虫滋养体中的定位。方法根据GenBank登陆的贾第鞭毛虫二硫键异构酶4基因(gPDI-4)(登录号XM_001710176)序列,通过分析序列,设计合成一对gPDI-4引物。以犬贾第鞭毛虫滋养体总RNA为模板,采用反转录PCR的方法扩增PDI-4基因并克隆至pMD-18T载体,构建pMD-gPDI-4载体,再把目的基因亚克隆至pET-28a载体,构建表达载体pET-gPDI-4,转化入大肠埃希菌表达菌DE3中,经IPTG诱导后用SDS-PAGE分析表达情况。同时用组氨酸(His)结合树脂柱纯化PDI-4蛋白。用纯化的PDI-4蛋白免疫小鼠,之后收集血清作为一抗,通过免疫荧光法检测PDI-4在贾第鞭毛虫滋养体中的定位。结果反转录PCR(RT-PCR)扩增出大小为1 065bp的PDI-4基因,构建的pET-gPDI-4能高效表达gPDI-4蛋白,SDS-PAGE显示表达蛋白分子质量为36ku。免疫荧光试验显示贾第鞭毛虫PDI-4蛋白除定位于细胞表面、内质网和腹部吸盘外,主要存在于腹部鞭毛。结论成功克隆、表达了犬贾第鞭毛虫PDI-4基因,并确定其主要在腹鞭毛表达。 展开更多

关键词 犬贾第鞭毛虫 蛋白二硫键异构酶4 滋养体 免疫荧光定位 腹鞭毛

原文传递

犬贾第鞭毛虫α-12贾第素基因的原核表达及纯化

7

作者 宋百军 赵娜 +5 位作者 赵源 宫鹏涛 李建华 杨举 李赫 张西臣 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第11期51-54,共4页

为了原核表达、纯化犬贾第鞭毛虫α-12贾第素蛋白,试验经RT-PCR获得α-12贾第素基因片段,克隆至原核表达载体p ET-28a(+),构建重组原核表达质粒p ET-28a-α-12,再转化入E.coli Rosetta(DE3)后,用IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经SDS-PAGE... 为了原核表达、纯化犬贾第鞭毛虫α-12贾第素蛋白,试验经RT-PCR获得α-12贾第素基因片段,克隆至原核表达载体p ET-28a(+),构建重组原核表达质粒p ET-28a-α-12,再转化入E.coli Rosetta(DE3)后,用IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经SDS-PAGE和Western-blot分析验证,并用Ni琼脂糖凝胶纯化融合的α-12贾第素蛋白。结果表明:重组原核表达质粒p ET-28a-α-12经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为40 ku,且主要以包涵体形式存在;表达量约占菌体总蛋白的15.7%;纯化的重组蛋白纯度达90%以上。 展开更多

关键词 犬贾第虫 α-12贾第素 原核表达 包涵体蛋白 纯化

原文传递

犬贾第虫体外诱导成囊形态学变化的观察

8

作者 李凌丹 宫鹏涛 +4 位作者 李建华 李赫 杨举 张西臣 杜德江 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期991-993,共3页

为观察犬贾第虫(Giardia canis)滋养体体外诱导成囊过程中的形态学变化,本实验采用TYI-S-33培养基体外纯培养G.canis滋养体,通过改良的TYI-S-33培养基诱导成囊,在0 h、24 h、48 h和72 h对虫体进行观察。结果显示:24 h后虫体开始变圆;48 ... 为观察犬贾第虫(Giardia canis)滋养体体外诱导成囊过程中的形态学变化,本实验采用TYI-S-33培养基体外纯培养G.canis滋养体,通过改良的TYI-S-33培养基诱导成囊,在0 h、24 h、48 h和72 h对虫体进行观察。结果显示:24 h后虫体开始变圆;48 h后可以观察到虫体鞭毛和吸盘消失,虫体表面出现囊膜分泌型小体,少量虫体被包囊壁包裹;72 h后成囊率最高可达50%。本研究为G.canis成囊方面的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 犬贾第虫 成囊 形态学

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以30日龄长爪沙鼠为介体建立犬贾第虫纯培养

9

作者 赵永军 刘坚强 《内蒙古民族大学学报（自然科学版）》 2009年第1期68-69,共2页

将取自然感染犬贾第虫的德国牧羊犬的包囊利用蔗糖梯度离心-G1耐酸漏斗滤过法进行分离和纯化,经口感染给30日龄的沙鼠.8d后无菌取小肠上段,分离出滋养体,转入改良TYI-S-33培养基中37℃培养.72h后在管壁上形成了细胞单层,将培养物置肉汤... 将取自然感染犬贾第虫的德国牧羊犬的包囊利用蔗糖梯度离心-G1耐酸漏斗滤过法进行分离和纯化,经口感染给30日龄的沙鼠.8d后无菌取小肠上段,分离出滋养体,转入改良TYI-S-33培养基中37℃培养.72h后在管壁上形成了细胞单层,将培养物置肉汤及血琼脂平板培养,未见细菌及霉菌污染,为纯培养. 展开更多

关键词 犬贾第虫 30日龄长爪沙鼠 纯培养

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犬贾第虫病毒感染性体外转录体制备及转染试验

10

作者 曹利利 李建华 +3 位作者 张西臣 张国才 宫鹏涛 杨举 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2008年第1期31-34,共4页

目的研究犬贾第虫病毒全长cDNA体外RNA转录体的感染性,为进一步研究犬贾第虫病毒的特性、深入阐明病毒的致病机理奠定基础。方法根据已知的GCV(长春株)基因序列设计一套特异性重叠引物,利用RT-PCR技术,构建感染性犬贾第虫病毒基因组全长... 目的研究犬贾第虫病毒全长cDNA体外RNA转录体的感染性,为进一步研究犬贾第虫病毒的特性、深入阐明病毒的致病机理奠定基础。方法根据已知的GCV(长春株)基因序列设计一套特异性重叠引物,利用RT-PCR技术,构建感染性犬贾第虫病毒基因组全长cDNA;用T7 RiboMAXTM Express Large Scale RNA Production System制备体外转录体,电穿孔方法感染无病毒株犬贾第虫滋养体,通过提取总核酸和超薄切片电镜观察感染情况。结果成功构建犬贾第虫病毒基因组全长cDNA,体外转录体电穿孔后72 h,提取的总核酸中发现6.2 kb的dsRNA带,电镜观察到完整的病毒粒子。结论该转录体具有感染性,可以在无病毒株犬贾第虫滋养体内复制表达,为进一步研究GCV奠定基础。 展开更多

关键词 GCV 全长CDNA 体外转录体 感染性 电穿孔

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犬贾第虫核糖体16sRNA部分序列克隆及测定

11

作者 秦睿玲 张西臣 +1 位作者 田宗成 李建华 《热带医学杂志》 CAS 2002年第4期324-326,共3页

目的　获取犬贾第虫核糖体 16sRNA基因序列。方法　从犬贾第虫包囊中 ,快速提取DNA ,并以DNA为模板 ,利用热启动PCR技术扩增出一 6 11bp的预计大小的基因片段 ,纯化回收后 ,与PMD18 T载体连接转化到DH5a大肠杆菌中 ,筛选到阳性克隆经PCR... 目的　获取犬贾第虫核糖体 16sRNA基因序列。方法　从犬贾第虫包囊中 ,快速提取DNA ,并以DNA为模板 ,利用热启动PCR技术扩增出一 6 11bp的预计大小的基因片段 ,纯化回收后 ,与PMD18 T载体连接转化到DH5a大肠杆菌中 ,筛选到阳性克隆经PCR、EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定 ,并用双脱氧链末端终止法测定DNA序列 ,登陆BLAST进行同源性比较和分析。结果　获得了长度为 6 11bp的基因序列 ,并发现与犬贾第虫核糖体的同源性最高达 99%。结论　获得了犬贾第虫核糖体 16sRNA的部分基因序列 ,为研究其在核酸进化领域中的地位和PCR法快速诊断贾第虫病提供了理想的基因材料。 展开更多

关键词 核糖体 测定 犬贾第虫 16sRNA 克隆

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犬贾第虫端粒酶催化亚基基因的克隆及序列分析

12

作者 刘成武 张西臣 +2 位作者 李建华 宫鹏涛 陈丽凤 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2006年第6期424-427,共4页

目的对犬贾第虫端粒酶催化亚基(GcTERT)基因进行克隆及序列分析。方法根据人源贾第虫的端粒酶催化亚基TERT基因(AF195121)设计1对引物,以犬贾第虫滋养体总核酸为模板,扩增犬贾第虫端粒酶催化亚基(GcTERT)基因,PCR产物连接到PGEM-T载体... 目的对犬贾第虫端粒酶催化亚基(GcTERT)基因进行克隆及序列分析。方法根据人源贾第虫的端粒酶催化亚基TERT基因(AF195121)设计1对引物,以犬贾第虫滋养体总核酸为模板,扩增犬贾第虫端粒酶催化亚基(GcTERT)基因,PCR产物连接到PGEM-T载体并转化入DH5α感受态菌进行测序,通过BLAST对GenBank进行同源性搜索,并用分子生物学软件进行分析。结果测得犬贾第虫端粒酶催化亚基(GcTERT)基因全长2 883 bp,该基因序列与人源贾第虫的端粒酶催化亚基基因同源性为99%,氨基酸的同源性也为99%。结论成功扩增了犬贾第虫端粒酶催化亚基(GcTERT)基因,为进一步研究该基因的功能及筛选抗犬贾第虫药物靶标奠定了基础。 展开更多

关键词 犬贾第虫 端粒酶 克隆 序列分析

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蓝氏贾第鞭毛虫PPDK特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建及鉴定 被引量：3

13

作者 曹利静 冯宪敏 +2 位作者 卢思奇 张西臣 王凤云 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2008年第1期1-7,共7页

丙酮酸磷酸双激酶(Pyruvatephos phate dikinase,PPDK)可能是蓝氏贾第鞭毛虫能量代谢中具有催化作用的关键酶桩一。为了进一步探讨该酶在贾第虫能量代谢中的作用,本文采用RNA draw软件分析贾第虫编码PPDK的基因序列并设计特异性反义锤... 丙酮酸磷酸双激酶(Pyruvatephos phate dikinase,PPDK)可能是蓝氏贾第鞭毛虫能量代谢中具有催化作用的关键酶桩一。为了进一步探讨该酶在贾第虫能量代谢中的作用,本文采用RNA draw软件分析贾第虫编码PPDK的基因序列并设计特异性反义锤头状核酶(Hammerheade ribozyme),克隆该核酶序列并与犬贾第虫病毒(GCV)连接,构建了载有特异性锤头状核酶的贾第虫病毒重组载体pGCV634/H5/2174。该载体经线性化处理后进行体外转录,转录产物以电击方式转染对数生长期的贾第虫滋养体。提取转染后24h虫体总RNA,并以其为模板进行RT-PCR验证转染效果和对靶mRNA的切割效果。结果初步证实了该载体对虫体细胞内编码PPDK的mRNA具有切割作用。 展开更多

关键词 蓝氏贾第鞭毛虫 丙酮酸磷酸双激酶 锤头状核酶 贾第虫病毒

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犬贾第虫病毒转染载体介导的绿色荧光蛋白在犬贾第虫体内的表达 被引量：3

14

作者 陈丽凤 李建华 +3 位作者 刘全 赵月平 曹利利 张西臣 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期36-40,共5页

目的构建犬贾第虫病毒(Giardia canis virus,GCV)转染载体。方法根据GCV基因组(DQ238861)的转录起始位点、复制起始位点及包装位点的序列特征和表达外源基因的顺式作用元件,将绿色荧光蛋白(GFP)基因替换GCV基因部分编码区,构建GCV基因与... 目的构建犬贾第虫病毒(Giardia canis virus,GCV)转染载体。方法根据GCV基因组(DQ238861)的转录起始位点、复制起始位点及包装位点的序列特征和表达外源基因的顺式作用元件,将绿色荧光蛋白(GFP)基因替换GCV基因部分编码区,构建GCV基因与GFP基因的嵌合体,并置T7启动子之下。用T7 RNA聚合酶体外转录后经电穿孔转染犬贾第虫滋养体,并用荧光显微镜检测GFP表达情况,间接ELISA测定转染后GFP的表达量。结果构建了犬贾第虫病毒重组质粒pGCV634/GFP/GCV2174,经SacⅠ和NotⅠ双酶切得到约2.0和3.5 kb两条带,与预计值相符。由其介导的绿色荧光蛋白在犬贾第虫体内得到了高效表达,其表达量在转染后第1天达高峰(A490=1.8);以后随时间的延长而逐渐下降,14 d后绿色荧光信号基本消失。结论成功构建了犬贾第虫病毒转染载体,为贾第虫细胞基因表达调控的研究提供了方法。 展开更多

关键词 犬贾第虫病毒 转染载体 绿色荧光蛋白

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蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建 被引量：1

15

作者 曹利静 冯宪敏 +3 位作者 魏超君 王凤云 张西臣 卢思奇 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期98-102,138,共6页

目的构建蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)特异性锤头状核酶-犬贾第虫病毒(Giardia canis virus,GCV)重组载体。方法采用RNAdraw软件分析贾第虫编码丙酮酸激酶的基因序列,并设计特异性反义锤头状核酶(PKH)序列,将其与犬贾... 目的构建蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)特异性锤头状核酶-犬贾第虫病毒(Giardia canis virus,GCV)重组载体。方法采用RNAdraw软件分析贾第虫编码丙酮酸激酶的基因序列,并设计特异性反义锤头状核酶(PKH)序列,将其与犬贾第虫病毒(GCV)连接,构建重组载体pGCV-PKH。将重组载体线性化体外转录产物,分别进行贾第虫细胞外、细胞内目的mRNA切割实验,采用荧光显微镜观察转染后24h的各组虫体。采用实时PCR对切割产物进行相对定量分析。结果构建了载有蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶特异性锤头状核酶的犬贾第虫病毒重组载体pGCV-PKH。细胞内切割实验结果表明,荧光显微镜下只有pGCV-GFP转染组虫体显示绿色荧光,pGCV-PKH转染组丙酮酸激酶mRNA的相对含量约为正常对照组的33.14%。细胞外切割实验结果表明,该组载体能在细胞外有效切割丙酮酸激酶mRNA,在设定条件下,其切割效率为58.5%。结论重组载体pGCV-PKH能有效转染蓝氏贾第鞭毛虫细胞,并能在其细胞内外对丙酮酸激酶mRNA进行有效切割。 展开更多

关键词 蓝氏贾第鞭毛虫 犬贾第虫病毒 锤头状核酶 丙酮酸激酶

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犬贾第虫病毒(长春株)全基因组序列分析 被引量：2

16

作者 陈丽凤 李建华 +4 位作者 张西臣 刘全 赵月萍 曹利利 陈超 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期408-411,共4页

根据已报道的人源蓝氏贾第虫病毒序列设计了互相重叠的6对特异性引物,以犬贾第虫(长春株)纯培养滋养体总核酸为模板进行RT-PCR。PCR产物连接到pMD18-T载体进行测序,通过BLAST在GenBank进行同源性搜索,并用DNAMAN分子生物学软件进行分析... 根据已报道的人源蓝氏贾第虫病毒序列设计了互相重叠的6对特异性引物,以犬贾第虫(长春株)纯培养滋养体总核酸为模板进行RT-PCR。PCR产物连接到pMD18-T载体进行测序,通过BLAST在GenBank进行同源性搜索,并用DNAMAN分子生物学软件进行分析。结果测得我国犬贾第虫病毒(长春株)基因组全长为6 276bp(DQ238861),编码1个有887个氨基酸残基的衣壳蛋白和1 056个氨基酸残基的融合蛋白,这2个阅读框被-1核糖体移码框分开,重叠处有220 nt。基因组中G+C占49.62%。其序列与国外报道的人源蓝氏贾第虫病毒(L13218)序列同源性为94.62%,编码的氨基酸同源性为93.50%;与国内人源蓝氏贾第虫病毒(AF525216)序列同源性为98.88%,编码的氨基酸同源性为98.30%。 展开更多

关键词 犬贾第虫病毒 全长CDNA序列 基因组 序列分析

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蓝氏贾第鞭毛虫alpha-8贾第素特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建 被引量：1

17

作者 魏超君 卢思奇 +1 位作者 曹利静 田喜凤 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期321-326,共6页

目的构建蓝氏贾第鞭毛虫alpha-8贾第素(α-8 giardin)特异性锤头状核酶-GCV重组载体。方法采用RNA draw软件对蓝氏贾第鞭毛虫α-8贾第素基因序列(GenBank登录号为AY781323)的二级结构进行模拟分析,按照G∶C比例和锤头状核酶设计原则,选... 目的构建蓝氏贾第鞭毛虫alpha-8贾第素(α-8 giardin)特异性锤头状核酶-GCV重组载体。方法采用RNA draw软件对蓝氏贾第鞭毛虫α-8贾第素基因序列(GenBank登录号为AY781323)的二级结构进行模拟分析,按照G∶C比例和锤头状核酶设计原则,选取合适的核酶切割靶点,设计特异性锤头状核酶(H8)序列,并将其与犬贾第虫病毒(GCV)连接,获得α-8贾第素特异性锤头状核酶-GCV重组载体(pGCV634/H8/1423)。将载体线性化体外转录产物电击转染至贾第虫滋养体细胞内。提取转染后24 h的各组虫体总RNA,并以其为模板采用RT-PCR验证转染效果及对靶mRNA的切割效果。结果成功设计、合成了蓝氏贾第鞭毛虫α-8贾第素mRNA锤头状核酶序列(H8),将其与犬贾第虫病毒载体(GCV)连接,成功构建了pGCV634/H8/1423;RT-PCR实验结果表明,重组载体pGCV634/H8/1423转染贾第虫细胞后24 h可检测到核酶RNA的存在,并实现了对α-8贾第素mRNA高效、特异的切割作用。结论构建的pGCV634/H8/1423能有效转染至贾第虫细胞内,并在其细胞内对α-8贾第素基因的mRNA具有高效、特异的切割作用。 展开更多

关键词 蓝氏贾第鞭毛虫 贾第素 α-8贾第素 锤头状核酶 犬贾第虫病毒

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犬贾第虫病毒转染载体介导的锤头状核酶对KRR1基因体外转录体切割效果的研究 被引量：1

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作者 陈丽凤 李建华 +3 位作者 邹亚学 赵月平 曹利利 张西臣 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期279-284,共6页

目的检测犬贾第虫病毒介导的锤头状核酶对犬贾第虫滋养体核仁功能性蛋白KRR1基因体外转录体切割效率。方法将两端携带反义KRR1基因的锤头状核酶(ribozyme,R酶)插入犬贾第虫病毒(Giardia canis virus,GCV)转染载体中,构建两个核酶嵌合型... 目的检测犬贾第虫病毒介导的锤头状核酶对犬贾第虫滋养体核仁功能性蛋白KRR1基因体外转录体切割效率。方法将两端携带反义KRR1基因的锤头状核酶(ribozyme,R酶)插入犬贾第虫病毒(Giardia canis virus,GCV)转染载体中,构建两个核酶嵌合型犬贾第虫病毒载体:短反义序列,上游及下游均为21个碱基,形成重组质粒KRzS;长反义序列,上游为288个碱基,下游为507个碱基,形成重组质粒KRzL。另设两种阴性对照,即重组质粒TRzL(即R酶两端含虫体反义磷酸丙糖异构酶基因,上游为324个碱基,下游为380个碱基)和重组质粒PKR(即犬贾第虫病毒转染载体中仅有KRR1基因的反义片段而无R酶功能区)。应用荧光实时定量RT-PCR法检测嵌合型锤头状核酶体外对KRR1基因mRNA切割活性。结果KRzS、KRzL转录体对KRR1基因体外转录RNA切割效率分别达到74.0%和81.1%。而PKR对KRR1 mRNA反转录的影响较小,RT-PCR效率仅降低12.0%。TRzL对KRR1 mRNA反转录几乎无影响。结论犬贾第虫病毒介导的锤头状核酶对KRR1基因体外转录体能进行有效切割,为以后的体内锤头状核酶对KRR1基因表达抑制试验提供依据。 展开更多

关键词 犬贾第虫病毒 转染载体 锤头状核酶 KRR1蛋白

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