白介素-2对心肌细胞[Ca^(2+)]_i的作用及其信号转导途径 被引量：14

1

作者 曹春梅 夏强 +1 位作者 叶治国 张雄 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期425-430,共6页

为研究白介素 2 (interleukin 2 ,IL 2 )对心肌细胞内钙浓度 ([Ca2 + ]i)的影响及其信号转导途径 ,实验采用酶解法分离成年大鼠心室肌细胞 ,以Fura 2 /AM为钙探针 ,用细胞内双波长钙荧光系统检测细胞 [Ca2 + ]i 的变化。结果发现 :(1)IL... 为研究白介素 2 (interleukin 2 ,IL 2 )对心肌细胞内钙浓度 ([Ca2 + ]i)的影响及其信号转导途径 ,实验采用酶解法分离成年大鼠心室肌细胞 ,以Fura 2 /AM为钙探针 ,用细胞内双波长钙荧光系统检测细胞 [Ca2 + ]i 的变化。结果发现 :(1)IL 2 (0 5～ 2 0 0U/ml)浓度依赖性地降低单个心室肌细胞内钙瞬态 ,IL 2 (2 0 0U/ml)对咖啡因诱导的肌浆网内储钙的释放无影响 ;(2 )纳洛酮 (naloxone ,Nal) (10 -8mol/L)和nor binaltorphimine (nor BNI,10 -8mol/L)可阻断IL 2对心肌细胞钙瞬态的作用 ,而纳曲吲哚 (naltrindole ,NTI) (10 -6mol/L)不能阻断此作用 ;(3)κ阿片受体激动剂U5 0 488H (10 -6mol/L)降低心肌细胞钙瞬态 ,nor BNI (10 -8mol/L)可阻断此作用 ;(4 ) 5mg/L百日咳毒素 (PTX)预处理可取消IL 2降低心肌细胞钙瞬态的作用 ,而酪氨酸激酶抑制剂genistein (10 -4 mol/L)不能取消IL 2的作用 ;(5 )U7312 2预处理可阻断IL 2的作用。研究结果表明 ,IL 2降低心肌细胞钙瞬态的作用 ,是通过心肌细胞上κ阿片受体介导的 ,其下游途径包括PTX敏感的G蛋白和磷脂酶C。 展开更多

关键词 白介素-2 阿片受体 细胞内CA^2+ G蛋白 磷脂酶C 心肌细胞 信号转导

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电针对高血压性脑出血大鼠海马Gi_2α、Gi_3α基因转录的影响 被引量：8

2

作者 周爽 方邦江 黄建华 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期437-439,共3页

目的:从基因转录水平研究电针对高血压性脑出血的治疗作用及其可能作用机制。方法:双肾双夹法复制易卒中型肾血管性高血压模型,以胶原酶加肝素脑内注射诱发脑出血,建立高血压性脑出血大鼠模型。运用Northernblotting分子杂交技术动态检... 目的:从基因转录水平研究电针对高血压性脑出血的治疗作用及其可能作用机制。方法:双肾双夹法复制易卒中型肾血管性高血压模型,以胶原酶加肝素脑内注射诱发脑出血,建立高血压性脑出血大鼠模型。运用Northernblotting分子杂交技术动态检测电针治疗后不同时相点脑出血大鼠海马Gi蛋白α亚基基因转录水平。结果:模型组大鼠海马Gi2αmRNA、Gi3αmRNA表达明显减弱,其中以Gi2αmRNA表达下降更为明显。电针治疗后,大鼠海马Gi2αmRNA、Gi3αmRNA表达均呈现不同程度的增强,并随着时间的推移而逐渐趋于恢复。结论:电针水沟、内关、足三里穴治疗脑出血的作用机制可能与上调脑组织Giα基因转录水平,使Giα蛋白合成增加,进而减轻了紊乱的信号转导系统对脑组织引起的损害等作用有关。 展开更多

关键词 脑出血 高血压性 电针 gi蛋白 基因转录

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κ阿片受体激动剂U50488H对大鼠心肌缺血再灌注室性心律失常的影响及作用机制 被引量：8

3

作者 张鹏 朱运龙 +3 位作者 王跃民 李明哲 毕辉 裴建明 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2006年第3期251-255,共5页

目的:研究选择性κ阿片受体激动剂U50488H对大鼠心肌缺血再灌注室性心律失常的影响及作用机制。方法:建立心肌缺血再灌注损伤动物模型,将实验大鼠按随机原则分组,监测大鼠心率(HR)、动脉压(ABP)、左心室内压(LVP)及收缩(+dp/dtmax)和舒... 目的:研究选择性κ阿片受体激动剂U50488H对大鼠心肌缺血再灌注室性心律失常的影响及作用机制。方法:建立心肌缺血再灌注损伤动物模型,将实验大鼠按随机原则分组,监测大鼠心率(HR)、动脉压(ABP)、左心室内压(LVP)及收缩(+dp/dtmax)和舒张功能(-dp/dtmax)等血流动力学指标,观察大鼠室性心律失常的发生情况和作用机制。结果:U50488H可显著降低大鼠HR、ABP、LVP及±dp/dtmax。在心肌缺血前预先给予U50488H,可明显降低大鼠心肌缺血再灌注室性心律失常的发生率以及室性心律失常评分,该作用可被选择性к阿片受体阻断剂Nor-BNI阻断。提前给予Gi/o蛋白抑制剂pertussis toxin、NO合成酶抑制剂L-NAME、KATP通道阻断剂glibenclamide和PKC的选择性抑制剂chelerythrine,结果发现U50488H的抗心律失常作用减弱(P<0.01);而提前给予TK的抑制剂genistein,对U50488H的抗心律失常作用则无明显影响(P>0.05)。结论:U50488H可通过激动心脏к阿片受体减少大鼠心肌缺血再灌注室性心律失常的发生。在激活к阿片受体前,分别预先阻断Gi/o蛋白P、KC以及KATP通道,可以使к阿片受体介导的抗心律失常的作用减弱或消失,提示к阿片受体的信号转导途径可能涉及Gi/o蛋白P、KC和KATP通道。 展开更多

关键词 U50488H Κ阿片受体 心肌缺血再灌注 心律失常 抑制性G蛋白 蛋白激酶C ATP敏感性钾通道

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两种不同营养配方预进餐对2型糖尿病住院患者血糖影响研究 被引量：8

4

作者 朱文艺 周正海 +6 位作者 徐静 冯筱青 杜珊珊 段炼 樊荣 黄陈 王建 《中国食物与营养》 2016年第1期77-80,共4页

目的:比较低血糖指数(GI)全营养素与高蛋白营养素2种不同营养配方预进餐对2型糖尿病患者血糖控制效果的影响。方法:回顾性分析115例2型糖尿病患营养治疗记录,其中高蛋白营养素治疗组31例为高蛋白组、低GI全营养素治疗组39例为低GI组、... 目的:比较低血糖指数(GI)全营养素与高蛋白营养素2种不同营养配方预进餐对2型糖尿病患者血糖控制效果的影响。方法:回顾性分析115例2型糖尿病患营养治疗记录,其中高蛋白营养素治疗组31例为高蛋白组、低GI全营养素治疗组39例为低GI组、无肠内营养治疗干预组45例为对照组,每组都进行糖尿病饮食指导、教育并编制糖尿病膳食食谱。观察比较3组患者营养干预前,营养干预后第1d、第3d、第7d的空腹、餐后2h血糖控制情况。结果:与对照组相比,高蛋白组与低GI组空腹血糖在干预前后均没有明显差异,无统计学意义(P>0.05);餐后2h血糖在干预前、第1d没有差异,无统计学意义(P>0.05),而在第3d、第7d血糖明显下降,有统计学意义(P<0.05)。与低GI组相比,高蛋白组空腹血糖和餐后2h血糖干预前后均没有明显差异,无统计学意义(P>0.05)。结论:不同营养配方预进餐有利于2型糖尿病患者血糖控制,尤其是餐后2h血糖控制,2种营养配方控制血糖效果相似。 展开更多

关键词 低血糖指数 乳清蛋白 预进餐 2型糖尿病 血糖

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百日咳毒素对棉铃虫神经细胞电压门控钠、钙通道的调节作用 被引量：3

5

作者 李杰 贺秉军 刘安西 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期26-30,共5页

用膜片钳技术研究了百日咳毒素对离体培养的棉铃虫幼虫中枢神经细胞电压门控钠、钙通道的影响。结果表明,对照组细胞钠通道在-50^-40mV激活,在-20mV左右电流达到最大值,在记录的20min内,电流-电压关系曲线(I-V)和电流幅值未有明显变化;... 用膜片钳技术研究了百日咳毒素对离体培养的棉铃虫幼虫中枢神经细胞电压门控钠、钙通道的影响。结果表明,对照组细胞钠通道在-50^-40mV激活,在-20mV左右电流达到最大值,在记录的20min内,电流-电压关系曲线(I-V)和电流幅值未有明显变化;细胞与百日咳毒素预孵后,钠通道在-40mV左右激活,电流在0mV左右达到最大值,在记录过程中,激活电压和峰值电压继续向正方向移动约10mV,电流持续下降。对照组钙通道在-40^-30mV激活,在0mV左右电流达峰值;经百日咳毒素处理后,I-V曲线向负电位方向移动约10mV,在记录过程中,I-V曲线继续向负电位方向移动,电流的衰减(rundown)现象比对照组严重,此外,百日咳毒素处理引起钙电流达到峰值的时间显著延长。结果提示,百日咳毒素敏感的G蛋白(Gi)可能通过直接途径或间接途径调节棉铃虫神经细胞钠、钙通道的电压敏感性和开放几率以及钙通道由备用态向激活态转化的速度。同时,经百日咳毒素处理后钠通道的I-V曲线与抗性棉铃虫I-V曲线非常相似,可能暗示Gi蛋白在棉铃虫抗药性形成中发挥作用。 展开更多

关键词 棉铃虫 Na通道 Ca2通道 gi蛋白 百日咳毒素 全细胞膜片钳

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pGEX载体表达马立克氏病病毒囊膜糖蛋白gI基因的最佳条件 被引量：4

6

作者 丁家波 崔治中 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期567-572,共6页

通过聚合酶链式反应 (PCR) ,扩增出马立克氏病病毒特超强毒 (vv +MDV) 648株囊膜糖蛋白gI基因 ,并将该基因按正确的阅读框 (ORF)克隆到表达性载体质粒pGEX 6P 1中谷胱甘肽转移酶 (GST)基因的下游。重组质粒 (pGEX gI)经氯化钙转化宿主菌... 通过聚合酶链式反应 (PCR) ,扩增出马立克氏病病毒特超强毒 (vv +MDV) 648株囊膜糖蛋白gI基因 ,并将该基因按正确的阅读框 (ORF)克隆到表达性载体质粒pGEX 6P 1中谷胱甘肽转移酶 (GST)基因的下游。重组质粒 (pGEX gI)经氯化钙转化宿主菌BL2 1 ;通过建立重组菌生长时间与OD60 0 值间的关系曲线 ,以及对诱导时间、诱导温度、IPTG浓度等条件的摸索 ,根据聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)判定GST gI融合蛋白的最佳表达条件 ,并经蛋白质印迹试验 (WesternBlotting)对表达产物进行了验证。将表达产物免疫小鼠 ,所得抗血清能与MDV感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)在间接免疫荧光试验 (IFA)中 ,呈较强的细胞膜荧光着色。实验结果表明 :IPTG的最佳浓度为 0 2～ 0 5mmol L ;最适的诱导时期为重组菌生长对数中期 ;温度对表达几乎没有影响。 展开更多

关键词 马立克氏病病毒 gi基因 融合蛋白 间接免疫荧光试验 蛋白质印迹试验 pGEX载体 基因表达

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严重烫伤大鼠心肌抑制性G蛋白α亚基的变化 被引量：5

7

作者 魏斌 李晓辉 +2 位作者 李淑慧 徐红梅 谭娅 《中国危重病急救医学》 CAS CSCD 2000年第8期492-494,共3页

目的 :研究烧伤早期心肌抑制性 G蛋白 α亚基 (Giα)含量的变化 ,探讨其在烧伤后心肌舒缩功能下降中的作用。方法 :采用 30 %体表面积 度烫伤大鼠模型 ,测定伤前及伤后左心室收缩压 (L VSP) ,左心室压力最大上升与下降速率 (L V± ... 目的 :研究烧伤早期心肌抑制性 G蛋白 α亚基 (Giα)含量的变化 ,探讨其在烧伤后心肌舒缩功能下降中的作用。方法 :采用 30 %体表面积 度烫伤大鼠模型 ,测定伤前及伤后左心室收缩压 (L VSP) ,左心室压力最大上升与下降速率 (L V± dp/dtm ax)。采用 Western杂交法和放射免疫法分别测定大鼠心肌 Giα及腺苷酸环化酶 (AC)的活性。结果 :与对照组比较 ,烫伤后心功能指标显著降低 ,烫伤后 12、2 4和 48小时心肌 Giα分别升高6 9.5 % (t=5 .79,P<0 .0 1)、37.8% (t=3.89,P<0 .0 1)和 2 9.1% (t=3.42 ,P<0 .0 5 ) ,AC活性降低。结论 :烫伤后 Giα含量升高是导致腺苷酸环化酶信号转导系统功能障碍及心肌舒缩功能下降的重要原因之一。 展开更多

关键词 烧伤 心功能 gi蛋白 信号转导 腺苷酸环化酶

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牛传染性鼻气管炎病毒gI蛋白截短表达与单克隆抗体制备 被引量：2

8

作者 侯丽娜 于明华 +4 位作者 刘春羽 赵洪哲 郑秉武 温永俊 王凤雪 《中国动物检疫》 CAS 2022年第8期112-119,共8页

为获得牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gI蛋白单克隆抗体,构建了gI截短基因重组原核表达质粒pET-32a-gI,并对其进行了诱导表达和纯化,通过SDS-PAGE和Western blot验证了gI蛋白在大肠杆菌内的表达... 为获得牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gI蛋白单克隆抗体,构建了gI截短基因重组原核表达质粒pET-32a-gI,并对其进行了诱导表达和纯化,通过SDS-PAGE和Western blot验证了gI蛋白在大肠杆菌内的表达情况。将纯化的gI蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、筛选及亚克隆,得到针对IBRV gI蛋白的单克隆细胞株gI14。利用体内诱生法制备抗IBRV gI蛋白单克隆抗体腹水,使用Western blot和间接免疫荧光(IFA)对单克隆抗体特异性进行检测和验证。Western blot结果显示:原核表达的gI融合蛋白相对分子质量为34 ku,gI蛋白单克隆抗体与gI表达蛋白反应性良好,与pET-32a(+)空载体蛋白无特异性结合;天然表达的gI蛋白相对分子质量为45 ku,gI蛋白单克隆抗体与细胞内感染的IBRV所表达的gI蛋白反应性良好。IFA结果显示,gI蛋白单克隆抗体及阳性对照组IBRV多抗均能与细胞内感染的IBRV发生特异性结合,使细胞出现特异性绿色荧光信号,而空白及阴性对照组均未见绿色荧光信号。结果表明,本研究基于高效表达的gI蛋白,成功制备了1株能稳定表达gI单克隆抗体的细胞株gI14,获得的gI蛋白单克隆抗体与原核表达的gI蛋白及IBRV全病毒均能特异性结合,这为进一步研制IBRV诊断试剂盒及探究IBRV gI蛋白抗原表位及蛋白功能奠定了基础。 展开更多

关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 gi蛋白 原核表达 单克隆抗体

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Gi和Go的同时纯化及其性质研究 被引量：1

9

作者 杨胜于 黄有国 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第6期937-942,共6页

经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ、ＵｌｔｒｏｇｅｌＡｃＡ ３４、Ｈｅｐｔｙｌａｍ ｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ 和Ｂｉｏ Ｓｃａｌｅ Ｑ２等四步层析从牛脑皮层膜中同时纯化出抑制型Ｇ 蛋白（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ，... 经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ、ＵｌｔｒｏｇｅｌＡｃＡ ３４、Ｈｅｐｔｙｌａｍ ｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ 和Ｂｉｏ Ｓｃａｌｅ Ｑ２等四步层析从牛脑皮层膜中同时纯化出抑制型Ｇ 蛋白（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ， Ｇｉ）和Ｏ型Ｇ蛋白（ｏｔｈｅｒ Ｇ ｐｒｏ－ｔｅｉｎ， Ｇｏ）．对Ｇｏ 的选择性激活使Ｇｉ 和Ｇｏ 的分离大为简化，并使二者的大量制备成为可能．纯化的Ｇ 蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染显示单一蛋白带，其结合［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ的活性分别提高６８倍和１２４倍．用圆二色光谱法（ＣＤ）测量了纯化的Ｇ蛋白的二级结构． 展开更多

关键词 G蛋白 gi GO 纯化 分离 膜蛋白 化学性质 CD

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Gi蛋白介导MrgC受体对CFA炎症痛的抗痛觉过敏作用 被引量：1

10

作者 江剑平 张科 曾赟鋆 《福建师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期67-72,共6页

通过观察完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)炎症痛大鼠对伤害性热刺激的缩足反射潜伏期(paw withdrawal latency,PWL)变化,探讨Gi蛋白是否介导MrgC受体(Mas-related gene C receptors,MrgC)对炎症痛的抗痛觉过敏作用.... 通过观察完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)炎症痛大鼠对伤害性热刺激的缩足反射潜伏期(paw withdrawal latency,PWL)变化,探讨Gi蛋白是否介导MrgC受体(Mas-related gene C receptors,MrgC)对炎症痛的抗痛觉过敏作用.结果显示,椎管内给予MrgC受体激动剂BAM8-22(bovine adrenal medulla 8-22,BAM8-22)能明显延长CFA炎症鼠在24 h和48 h时的缩足反射潜伏期基础值,并显著增强24h时的抗伤害作用.椎管内预先给予百日咳毒素(pertussis toxin,PTX)能抑制Gi蛋白的功能.在给予PTX7 d后,初次给予BAM8-22并不能延长CFA炎症鼠24 h时的缩足潜伏期基础值,但在24 h时再次注射BAM8-22时,能显著增强其抗伤害作用和48 h时的缩足潜伏期基础值.以上结果说明在CFA炎症痛模型中,预先给予PTX能抑制BAM8-22的抗痛觉过敏作用,但重复再次给予BAM8-22能恢复Gi蛋白的功能.表明Gi蛋白及其相关信号通路介导MrgC受体在炎症痛中的抗痛觉过敏作用. 展开更多

关键词 MrgC受体 gi蛋白 抗痛觉过敏 完全弗氏佐剂炎症痛 缩足潜伏期

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二穗短柄草BdGI基因表达及其蛋白互作分析

11

作者 童伟杨 路雪萍 +3 位作者 罗文举 钱佳璇 吴佳海 王小利 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期672-679,共8页

光周期是调控植物开花的主要途径之一,GI在光周期途径中是控制生理节律和开花的关键因子。为探索二穗短柄草(Brachypodiam distachyon)BdGI基因的表达模式和蛋白互作关系,本研究通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析BdGI基因在不同光... 光周期是调控植物开花的主要途径之一,GI在光周期途径中是控制生理节律和开花的关键因子。为探索二穗短柄草(Brachypodiam distachyon)BdGI基因的表达模式和蛋白互作关系,本研究通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析BdGI基因在不同光照条件下和长日照下不同生长发育阶段的表达情况;运用酵母双杂交初步筛选出互作蛋白BdZTL,并用双分子荧光互补法(BiFC)和免疫共沉淀法(CoImmunoprecipitation)进行验证。qRT-PCR分析结果表明,BdGI基因在不同光照下和长日照下不同生长发育阶段的表达情况不同,且都保持一定的昼夜节律,并且受到光周期的调控;利用酵母双杂交检测到GI与ZTL蛋白存在互作关系,双分子荧光互补与免疫共沉淀检测结果验证了两者互作关系的真实性。综上所述,BdGI的表达受光周期调控,具有昼夜节律性,在光周期诱导二穗短柄草开花的过程中也具备一定的调控作用。本研究结果为GI基因的功能研究奠定了理论基础。 展开更多

关键词 gi基因 光周期通路 荧光定量PCR 蛋白互作

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早搏灵对乌头碱诱导的快速性心律失常大鼠心肌G蛋白含量的影响

12

作者 陈波 王皖琪 +8 位作者 周亚滨 张琪 于晓红 徐京育 张雪松 宋雪 张瑜 孙琳琳 牛雯颖 《河北中医》 2019年第6期901-904,共4页

目的通过观察早搏灵对乌头碱诱导快速性心律失常大鼠模型心肌Gi蛋白和Gs蛋白含量的影响及心电图变化,探讨其对快速性心律失常的治疗机制。方法将40只健康Wistar大鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组、胺碘酮组和早搏灵组4组,各10只... 目的通过观察早搏灵对乌头碱诱导快速性心律失常大鼠模型心肌Gi蛋白和Gs蛋白含量的影响及心电图变化,探讨其对快速性心律失常的治疗机制。方法将40只健康Wistar大鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组、胺碘酮组和早搏灵组4组,各10只。采用经尾静脉注射乌头碱方式,将模型组、胺碘酮组、早搏灵组大鼠成功复制快速性心律失常模型。模型组、空白组予0.9%氯化钠注射液10mL/kg灌服;早搏灵组予34.6mg/mL的早搏灵溶液10mL/kg灌服;胺碘酮组予5.5mg/mL的胺碘酮溶液10mL/kg灌服,连续1周。观察并记录每组大鼠心律失常持续时间,并用免疫蛋白印迹法检测心肌Gi蛋白和Gs蛋白灰度值的变化。结果与模型组比较,早搏灵组、胺碘酮组快速性心律失常持续时间缩短(P<0.05),早搏灵组与胺碘酮组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组、早搏灵组、胺碘酮组Gi蛋白灰度值降低(P<0.05),Gs蛋白灰度值升高(P<0.05)。早搏灵组、胺碘酮组Gi蛋白灰度值高于模型组(P<0.05),Gs蛋白灰度值低于模型组(P<0.05),早搏灵组与胺碘酮组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论早搏灵能有效缩短乌头碱诱导的大鼠快速性心律失常持续时间,升高Gi含量,并且降低Gs含量。 展开更多

关键词 乌头碱 早搏灵 快速性心律失常 gi蛋白 Gs蛋白 动物

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Gi蛋白真核表达载体的构建及表达检测

13

作者 胡祖权 何天军 +4 位作者 贾义 宋萍萍 邱炜 赵远波 曾柱 《贵阳医学院学报》 CAS 2014年第6期794-799,共6页

目的:克隆抑制腺苷酸环化酶G蛋白(Gi蛋白)3个亚基α、β和γ基因,构建p EYFP-N-Giα1和p ECFP-C-Giβ1-γ2真核表达载体,完成其在真核细胞中的表达检测。方法:培养肝癌细胞Hep G2,提取总RNA后反转录成c DNA,通过聚合酶链式反应(PCR)扩... 目的:克隆抑制腺苷酸环化酶G蛋白(Gi蛋白)3个亚基α、β和γ基因,构建p EYFP-N-Giα1和p ECFP-C-Giβ1-γ2真核表达载体,完成其在真核细胞中的表达检测。方法:培养肝癌细胞Hep G2,提取总RNA后反转录成c DNA,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增α、β和γ的编码基因,在α亚基两端添加酶切位点,在β和γ亚基两端分别添加酶切位点和连接肽,经酶切和连接得到Giα1和Giβ1-γ2,再将Giα1和Giβ1-γ2基因分别构建到荧光蛋白报告载体p EYFP-N1和p ECFP-C1中,利用脂质体法将真核表达载体转染到肝癌细胞中,激光共聚焦显微镜观察分析其表达活性。结果:PCR扩增获得Gi蛋白α、β和γ亚基的编码基因,在两端添加酶切位点和连接肽后获得的Giα1和Giβ1-γ2基因,成功构建了p EYFP-N-Giα1和p ECFP-C-Giβ1-γ2真核表达载体,并在肝癌细胞中实现其真核细胞表达。结论:成功构建Gi蛋白的真核表达载体,并鉴定其在活细胞中具有表达活性。 展开更多

关键词 gi蛋白 脂质体 转染 荧光蛋白 真核表达载体

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Gi蛋白在心脏β肾上腺素受体信号转导通路中的作用 被引量：1

14

作者 付德明 《中华高血压杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期824-827,共4页

在生命过程中，生物细胞几乎每时每刻都靠介体传递化学信使以适应环境的变化，其中G蛋白耦联受体（G protein coupled receptor, GPCR）是连接细胞内外信息的重要桥梁之一，国内外众多科学家对其进行了广泛的研究。美国科学家Alfred和Ma... 在生命过程中，生物细胞几乎每时每刻都靠介体传递化学信使以适应环境的变化，其中G蛋白耦联受体（G protein coupled receptor, GPCR）是连接细胞内外信息的重要桥梁之一，国内外众多科学家对其进行了广泛的研究。美国科学家Alfred和Martin因率先分离并确定G蛋白及其在细胞信号转导中的作用而获得1994年诺贝尔生理学和医学奖。2012年，美国科学家Robert和Brian再次因GPCR研究而获得诺贝尔化学奖。 展开更多

关键词 Β肾上腺素受体 信号转导通路 gi蛋白 RECEPTOR 诺贝尔化学奖 美国科学家 G蛋白耦联受体 protein

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β1整合素及细胞骨架结构对Gi蛋白心肌细胞内构型的影响

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作者 韩捷 Bloch W +3 位作者 Reiner M Walther M 朱晓慧 Addicks K 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期808-810,F003,共4页

采用免疫荧光双标记、免疫电镜等方法观察胚胎干细胞系及小鼠胚胎心肌细胞中多种G蛋白细胞内构型特点及其与细胞骨架锚蛋白之间的相关性。结果发现Gi在野生型胚胎干细胞和小鼠胚胎心肌细胞内呈网状分布 ,且与细胞骨架蛋白分布一致。而在... 采用免疫荧光双标记、免疫电镜等方法观察胚胎干细胞系及小鼠胚胎心肌细胞中多种G蛋白细胞内构型特点及其与细胞骨架锚蛋白之间的相关性。结果发现Gi在野生型胚胎干细胞和小鼠胚胎心肌细胞内呈网状分布 ,且与细胞骨架蛋白分布一致。而在 β1整合素基因敲除胚胎干细胞中Gi则呈近似于弥漫样分布 ,与细胞骨架蛋白的分布无相关性。在G2 0 1N细胞 ,Gi又恢复其特有的网样分布。细胞骨架解聚剂可模拟 β1整合素基因敲除所造成的Gi构型改变。提示 展开更多

关键词 Β1整合素 gi蛋白 信号分子 心肌细胞 细胞骨架

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混合膳食组成对体外消化过程中GI与食物消解的影响 被引量：14

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作者 康晶燕 傅楠 +2 位作者 王勇 董志忠 陈晓东 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2018年第2期102-109,共8页

对14种单品食物与8种混合膳食展开了体外消化实验,测定了消化过程中GI的变化过程,研究膳食中不同成分对血糖生成指数的影响,并通过显微镜观察食物在不同消化过程中结构和形貌变化,研究不同成分对食物消解过程的影响。根据食物碳水化合... 对14种单品食物与8种混合膳食展开了体外消化实验,测定了消化过程中GI的变化过程,研究膳食中不同成分对血糖生成指数的影响,并通过显微镜观察食物在不同消化过程中结构和形貌变化,研究不同成分对食物消解过程的影响。根据食物碳水化合物的含量计算含有50 g碳水化合物的食物量,用50 g葡萄糖作为参照物,利用烧杯或者锥形瓶模拟人体食用食物后在胃部和小肠的4 h消化过程中葡萄糖变化情况。相对于单独的主食来说,加入蔬菜、肉类、蛋类或水果后的混合膳食出现明显的GI下降。研究食物消解过程也发现,混合膳食中米饭的形貌与结构变化会显著慢于单独米饭的外形变化;而挂面的消解趋势与其相反。结果证实了膳食纤维、脂肪和蛋白质会抑制淀粉类食物的消化过程,减缓葡萄糖释放速率。 展开更多

关键词 血糖生成指数(gi) 膳食组成 脂肪 膳食纤维 蛋白质 体外消化 食品消化

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儿茶素单体对心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用及机制研究 被引量：12

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作者 叶锦霞 王岚 +1 位作者 梁日欣 杨滨 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期801-805,共5页

目的:观察没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法:建立体外培养大鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤模型,倒置显微镜下观察加入各儿茶... 目的:观察没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法:建立体外培养大鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤模型,倒置显微镜下观察加入各儿茶素单体(50,20,8μg·mL-1)后,各组缺氧再给氧前后细胞形态学和搏动频率变化;以MTT法检测各组细胞的存活率;测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量;测定心肌细胞膜ATP酶;分别给予蛋白激酶(PKC)阻断剂十字孢碱staurosporine(stau,10nmol·L-1)和Gi/o蛋白失活剂pertussis toxin(PTX,200μg·mL-1),以探讨其作用机制。结果:GCG,EGCG均能够增加心肌细胞存活率,增加SOD和ATP酶活性,降低心肌细胞LDH的释放,降低培养液中MDA的含量,给予PKC阻断剂和Gi/o蛋白失活剂后,与单纯GCG组、EGCG组比较,心肌细胞搏动频率和存活率降低,同时LDH,MDA释放量增加,SOD活性下降。结论:GCG和EGCG具有抗体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的作用,其机制可能与其清除自由基、抑制心肌细胞Ca2+超载以及心肌细胞蛋白激酶C和G蛋白的介导有关。 展开更多

关键词 儿茶素单体 心肌细胞 缺氧再给氧 蛋白激酶 G蛋白

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酸枣仁提取物调控cAMP-PKA通路促进小鼠体长增长及大鼠慢波睡眠的机制研究 被引量：9

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作者 谢艳 张云芳 +4 位作者 宁桃丽 邹吉锋 李少侠 薛彩霞 王娜 《上海中医药杂志》 2021年第5期77-83,共7页

目的探讨酸枣仁提取物调控cAMP-PKA通路影响小鼠体长增长及大鼠慢波睡眠的具体机制。方法 (1)48只昆明种雄性小鼠随机分为6组,分别为空白对照组(灌胃去离子水,并于末次灌胃后侧脑室注射灭菌的0.9%NaCl溶液)、蓝墨水组(灌胃去离子水,并... 目的探讨酸枣仁提取物调控cAMP-PKA通路影响小鼠体长增长及大鼠慢波睡眠的具体机制。方法 (1)48只昆明种雄性小鼠随机分为6组,分别为空白对照组(灌胃去离子水,并于末次灌胃后侧脑室注射灭菌的0.9%NaCl溶液)、蓝墨水组(灌胃去离子水,并于末次灌胃后侧脑室注射过滤灭菌的蓝墨水)、用药组(灌胃酸枣仁提取物水溶液,并于末次灌胃后侧脑室注射过滤灭菌的蓝墨水)、阳性对照组(灌胃酸枣仁皂苷A水溶液,并于末次灌胃后侧脑室注射过滤灭菌的蓝墨水)、Gi/o蛋白抑制剂+用药组(灌胃酸枣仁提取物水溶液,并于末次灌胃后侧脑室注射加有过滤灭菌蓝墨水的PT)和5-HT1AR抑制剂+用药组(灌胃酸枣仁提取物水溶液,并于末次灌胃后侧脑室注射加有过滤灭菌蓝墨水的P-MPPF)。各组小鼠灌胃相应药物,连续20 d。测定小鼠体长差异,采用ELISA法测定小鼠血清生长激素(GH)水平、脑组织5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)活性、PKA的含量和Gi/o蛋白的含量;Western blot法测定小鼠脑组织5-HT1AR蛋白的表达。(2)36只SD大鼠随机分成6组,分组及给药方式同小鼠,连续给药3 d后,采用WXL睡眠自动分析系统,分析大鼠睡眠时相差异。结果 (1)与空白对照组和蓝墨水组比较,用药组、Gi/o蛋白抑制剂+用药组、5-HT1AR抑制剂+用药组、阳性对照组小鼠体长均明显增长(P<0.01);与空白对照组比较,用药组和阳性对照组小鼠血清GH水平、5-HT1AR蛋白含量、Gi/o蛋白含量均明显升高(P<0.01),5-HT1AR活性升高(P<0.05),PKA含量明显降低(P<0.01);与蓝墨水组比较,用药组和阳性对照组小鼠血清GH水平明显升高(P<0.01),Gi/o蛋白含量、5-HT1AR活性升高(P<0.05),PKA含量明显降低(P<0.01);与Gi/o蛋白抑制剂+用药组和5-HT1AR抑制剂+用药组比较,用药组和阳性对照组小鼠血清GH水平、5-HT1AR蛋白含量均明显升高(P<0.01),5-HT1AR活性升高(P<0.05)。用药组与阳性对照组比较,小鼠� 展开更多

关键词 酸枣仁提取物 酸枣仁皂苷A 骨骼增长 cAMP-PKA通路 gi/o蛋白 5-HT1A受体 模型小鼠 模型大鼠 慢波睡眠

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急性心肌梗死后患者心脏自主神经功能的动态变化研究 被引量：6

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作者 贾锋鹏 雷寒 +1 位作者 覃数 马康华 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1384-1388,共5页

目的:观察急性心肌梗死患者(Acutemyocardial infarction,AMI)发病10d内、3月时自主神经功能(窦性心率震荡和心率变异性)的动态变化,冠脉血运重建治疗对自主神经功能恢复的影响,以及淋巴细胞Gαi-2蛋白表达的变化与自主神经功能恢复的... 目的:观察急性心肌梗死患者(Acutemyocardial infarction,AMI)发病10d内、3月时自主神经功能(窦性心率震荡和心率变异性)的动态变化,冠脉血运重建治疗对自主神经功能恢复的影响,以及淋巴细胞Gαi-2蛋白表达的变化与自主神经功能恢复的相关性。方法:对入选的64例无严重并发症的AMI患者根据冠脉血运重建情况分为血运重建组和非血运重建组,分别在发病10 d内(6～10 d),3月时两个时间段作心率变异(Heart rate variability,HRV)和窦性心率震荡(Heart rate turbulence,HRT)分析,并检测患者淋巴细胞Gαi-2蛋白表达。结果:非血运重建组患者AMI 10 d内HRT指标震荡初始(Turbulence onset,TO)和震荡斜率(Turbulence slop,TS),HRV指标高功率谱(High-frequency power,HF)/总功率谱(Total-frequency power,TF)和SDNN均降低,AMI后3月这些指标均比10 d时有显著改善(P<0.05);血运重建组患者AMI 10 d内TS明显恢复,AMI后3月TO、HF/TF、SDNN值才有明显恢复。以SDNN>100 ms、TO<0、TS>2.5 ms/RR为正常参考值进行比较,两组在AMI 10 d内只有TS>2.5ms/RR有显著差异(P=0.024),AMI后3月这3个指标在两组间均无显著差异。AMI后不同时间内淋巴细胞Gαi-2蛋白表达的变化仅与SDNN的变化呈中等程度的正相关(r=0.448,P=0.017),与TS、TO、HF/TF等无相关性。结论:AMI后患者HRT和HRV均有动态变化现象,成功的冠脉血运重建治疗可以使反应压力感受器敏感性的HRT很快恢复,但对HRV无明显影响。Gαi-2蛋白表达与心脏迷走神经变化的相关性有待进一步研究证实。 展开更多

关键词 急性心肌梗死 窦性心率震荡 心率变异性 Gαi-2蛋白

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氯化镧抑制前列腺癌细胞DU145的生长和迁移 被引量：5

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作者 王芃 黄健 +1 位作者 张天蓝 王夔 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第23期2289-2295,共7页

为探索稀土化合物在防治前列腺癌转移方面的潜在药理作用,研究了氯化镧对人前列腺癌细胞DU145的生长和迁移的影响及其机理.基于MTT实验结果得知,LaCl3显著抑制DU145细胞的增殖,且呈浓度依赖关系;克隆形成实验也显示了LaCl3抑制克隆形成... 为探索稀土化合物在防治前列腺癌转移方面的潜在药理作用,研究了氯化镧对人前列腺癌细胞DU145的生长和迁移的影响及其机理.基于MTT实验结果得知,LaCl3显著抑制DU145细胞的增殖,且呈浓度依赖关系;克隆形成实验也显示了LaCl3抑制克隆形成.结果表明,LaCl3能够抑制前列腺癌细胞的生长.此外,利用划痕损伤实验证明,10?5mol/LLaCl3可以抑制细胞迁移,并且在该浓度下,LaCl3对细胞黏附和伸展也有抑制作用.进一步的机制研究表明,不同浓度LaCl3均可下调ERK和P38的磷酸化水平;而百日咳毒素PTx,一种Gi蛋白抑制剂,减弱了LaCl3对ERK和P38磷酸化的抑制作用以及其对DU145细胞克隆形成和伸展的抑制作用.结果表明,LaCl3能够抑制前列腺癌细胞DU145的生长和迁移,该作用与ERK和P38磷酸化水平降低有关,可能是通过PTx敏感的Gi蛋白信号通路介导的. 展开更多

关键词 氯化镧 前列腺癌 生长 迁移 gi蛋白信号通路

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