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基因Ⅰ、Ⅳ型戊型肝炎病毒高灵敏度通用引物的设计和初步应用 被引量:55
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作者 葛胜祥 郭清顺 +2 位作者 李少伟 张军 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期181-187,共7页
设计针对国内流行的戊型肝炎病毒(HEV)基因Ⅰ、Ⅳ型,在这两型序列的保守区域设计了一套RT-PCR引物--E引物,并将E引物与目前较常用的3对通用引物(Meng、ConORF1和ConORF2引物)比较了检测基因Ⅰ、Ⅳ型HEV的灵敏度.对基因Ⅰ型HEV,E引物能... 设计针对国内流行的戊型肝炎病毒(HEV)基因Ⅰ、Ⅳ型,在这两型序列的保守区域设计了一套RT-PCR引物--E引物,并将E引物与目前较常用的3对通用引物(Meng、ConORF1和ConORF2引物)比较了检测基因Ⅰ、Ⅳ型HEV的灵敏度.对基因Ⅰ型HEV,E引物能检出的稀释度为105,参考引物能检出的稀释度为102~104;对基因Ⅳ型HEV,E引物能检出的稀释度为102,参考引物能检出的稀释度为101~102.在17份HEV-IgM阳性血清中,E引物检出5份,检出率为29.4%;参考引物只能检出1份或2份,检出率最高为11.8%.E引物在33份HEV-IgM阳性的隐性感染血清中检出6份,阳性率18.2%;在79份HEV-IgM阳性的临床肝炎血清中检出36份,阳性率45.6%.以上结果初步表明,对于在国内流行的基因Ⅰ、Ⅳ型HEV,E引物的检测灵敏度要高于目前常用的通用引物. 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 基因Ⅰ型 基因Ⅳ型 聚合酶链反应 通用引物 设计 PCR
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基因Ⅳ型禽呼肠孤病毒σC蛋白单克隆抗体的制备及功能鉴定
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作者 高金慧 王素艳 +8 位作者 刘芮 祁小乐 陈运通 张艳萍 崔红玉 刘永振 段雨路 高立 高玉龙 《中国动物检疫》 CAS 2024年第8期98-104,共7页
为制备基因Ⅳ型(GCⅣ)禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)σC蛋白单克隆抗体,构建了重组原核表达质粒pCold-I-ARV-GCⅣ-σC,将重组质粒导入感受态细胞BL21(DE3)中进行蛋白诱导表达;随后将纯化后的σC蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技... 为制备基因Ⅳ型(GCⅣ)禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)σC蛋白单克隆抗体,构建了重组原核表达质粒pCold-I-ARV-GCⅣ-σC,将重组质粒导入感受态细胞BL21(DE3)中进行蛋白诱导表达;随后将纯化后的σC蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选获得阳性杂交瘤细胞;以间接免疫荧光(IFA)和蛋白免疫印迹(Western blot)试验鉴定杂交瘤细胞后,将杂交瘤细胞株通过腹腔注射小鼠制备单克隆抗体腹水,以ELISA测定腹水效价。结果显示:成功筛选出一株分泌ARV GCⅣσC蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株(1H4);制备的单克隆抗体能与ARV GCⅣσC蛋白发生反应,同时与感染不同基因型ARV的鸡肝癌细胞(LMH)均有良好的反应性;该单克隆抗体识别重链为IgG1,其腹水ELISA效价为1:256000。结果表明,成功制备ARV GCⅣσC蛋白单克隆抗体,其效价高,反应性良好,为进一步研究σC蛋白功能、ARV致病机理以及建立临床诊断方法奠定了基础。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒 基因Ⅳ型 σC蛋白 单克隆抗体 功能鉴定
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115例抗-HEV E2-IgM、IgG阳性感染者HEV RNA检测与基因分型研究 被引量:3
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作者 谈春荣 胡梅 +4 位作者 张京 孙焕英 朱旭 夏宁邵 张曼 《检验医学》 CAS 北大核心 2008年第6期625-629,共5页
目的对戊型肝炎暴发人群中115例抗-HEV E2-IgM、IgG阳性感染者进行病毒RNA检测和基因分型研究,探讨其临床意义。方法对收集的暴发人群中115例抗.HEV E2-IgM、IgG均阳性人员血清和23例戊型肝炎患者粪便标本,采用通用引物进行逆转录-... 目的对戊型肝炎暴发人群中115例抗-HEV E2-IgM、IgG阳性感染者进行病毒RNA检测和基因分型研究,探讨其临床意义。方法对收集的暴发人群中115例抗.HEV E2-IgM、IgG均阳性人员血清和23例戊型肝炎患者粪便标本,采用通用引物进行逆转录-酶链聚合反应(RT-PCR)扩增戊型肝炎病毒Ⅰ、Ⅳ型基因片段,并进行测序和同源进化分析。结果从被检血清中扩增出8例戊型肝炎病毒阳性RNA基因片段,阳性毒株之间核苷酸同源性在97.3%~100%之间,进化树分析提示阳性毒株与戊型肝炎病毒基因Ⅳ型距离最近,与日本株和中国原型株的同源性分别为93.3%~95.3%和86.7%~87.3%;粪便标本中未能检测到戊型肝炎病毒RNA。结论本次急性戊型肝炎暴发流行由戊型肝炎病毒基因型Ⅳ型导致,暴发毒株与日本株有更近的亲缘关系;高灵敏度引物和取样时机是提高戊型肝炎病毒RNA检出率的前提。 展开更多
关键词 肝炎病毒 戊型 基因Ⅳ型 聚合酶链反应
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A Real Life Study on Treatment of Egyptian Patients with HCV Genotype IV with Simeprevir and Sofosbuvir 被引量:1
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作者 A. Hanno D. Elwazzan +1 位作者 M. Ibrahim R. Hafez 《Health》 CAS 2016年第9期780-786,共7页
Background and Aims: Treatment with a combination of the nucleotide polymerase inhibitor sofosbuvir and NS3A (non-structural protein 3A) protease inhibitor simeprevir resulted in high rates of sustained virological re... Background and Aims: Treatment with a combination of the nucleotide polymerase inhibitor sofosbuvir and NS3A (non-structural protein 3A) protease inhibitor simeprevir resulted in high rates of sustained virological response in chronic hepatitis C Genotype 4. Methods: We conducted a real life study on Egyptian patients coming to tropical medicine department clinic at El Mery main university hospital from February 2015 to February 2016 for treatment naive and treatment experienced patients with chronic HCV genotype 4, including cirrhotics and non cirrhotics. Naive (cir-rhotics and non cirrhotics) and relapsers (non cirrhotics) received nucleotide polymerase inhibitor sofosbuvir and NS3A inhibitor simeprevir once daily for 12 weeks and 24 weeks for relapser cirrhotic patients. The primary end point was a sustained virologic response at 12 weeks after end of treatment. An informed consent was obtained from each patient at the beginning of the study (Real life study: a study on Egyptian patients when the drug was available in the market). Results: 30 naive patients with HCV genotype 4 and 20 relapsers (10 non cirrhotic and 10 cirrhotic patients) were enrolled. Patient inclusion criteria: Naive patients are those who tested positive for HCV RNA by PCR and had no experience to HCV treatment;Relapsers are those who tested positive for HCV RNA by PCR and had a previous treatment for HCV. Cirrhosis was diagnosed on ultrasound basis. Mean age was 53.57 ± 10.682 years old in naive patients and 48.30 ± 5.100 years old in relapsers. Median baseline HCV RNA was 360,069 IU/mL for naive patients and 1,245,000 IU/mL for relapsers;using Fib4 20% of naive patients were F3-F4, while 40% of relapsers were F3-F4. Degree of fibrosis was confirmed by fibrotest in relapsers. Upon treatment of patients with sofosbuvir and semiprevir once daily for 12 weeks and 24 weeks only to cirrhotic relapsers, end of treatment PCR was negative in 100% in all groups including cirrhotics and non cirrhotics. Primary end point (SVR 12) was achieved in 10 展开更多
关键词 EGYPTIANS HCV genotype iv Simeprevir Sofobuvir
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HEV与细胞结合的氨基酸位点分析
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作者 林亚洁 刘畅 +5 位作者 郭少奇 余梓豪 李明豫 刘君妃 郑子峥 夏宁邵 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1-11,共11页
目的:构建模型用于评估戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)突变衣壳蛋白与细胞的结合作用以及各氨基酸位点在细胞结合过程中的作用,探讨HEV的入侵机制,为研究HEV的受体奠定基础。方法:以D66的基因四型重组类病毒颗粒样抗原为研究对象... 目的:构建模型用于评估戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)突变衣壳蛋白与细胞的结合作用以及各氨基酸位点在细胞结合过程中的作用,探讨HEV的入侵机制,为研究HEV的受体奠定基础。方法:以D66的基因四型重组类病毒颗粒样抗原为研究对象,对其关键结构域位点的氨基酸进行定点突变,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)和酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)方法确认突变蛋白的正常构象,并通过流式细胞仪分析突变蛋白对吸附的影响,探讨影响病毒吸附入胞的关键位点。结果:通过聚合酶链式反应定点诱变技术成功制备并鉴定了45个正确折叠、构象正常的突变蛋白;ELISA检测结果显示,重组类病毒颗粒样抗原D66的单点突变并不会影响蛋白构象;应用模型模拟突变蛋白与细胞的结合过程,T484A、S488A、T489A、P491A、R512A、Y561A、N562A和T585A突变蛋白显著影响了对C3A的吸附。结论:成功建立了一种评估HEV衣壳蛋白与细胞结合性的模型,T484A、S488A、T489A、P491A、R512A等位点的丙氨酸突变显著减弱了HEV衣壳蛋白与细胞的结合,这些位点可能是影响HEV与细胞结合的关键位点。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 单点突变蛋白 D66四型重组类病毒颗粒样抗原
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