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靶向遗传印记基因PEG10的siRNA真核表达载体的构建及鉴定 被引量:5
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作者 黄锦 林菊生 +1 位作者 常莹 周秀敏 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期86-88,共3页
目的构建并鉴定针对遗传印记基因PEG10的siRNA真核表达载体。方法根据PEG10基因cDNA序列,设计针对目的基因的4个siRNA靶序列,将其插入H1启动子下游,克隆到真核表达载体psiRNA-hH1neo中,通过酶切鉴定和DNA测序鉴定。结果酶切鉴定及DNA测... 目的构建并鉴定针对遗传印记基因PEG10的siRNA真核表达载体。方法根据PEG10基因cDNA序列,设计针对目的基因的4个siRNA靶序列,将其插入H1启动子下游,克隆到真核表达载体psiRNA-hH1neo中,通过酶切鉴定和DNA测序鉴定。结果酶切鉴定及DNA测序结果显示插入片断正确。结论本研究成功构建针对PEG10的真核表达载体,可能成为肝癌基因治疗中的一种新型、高效的治疗载体。 展开更多
关键词 遗传印记基因 PEG10 SIRNA 真核表达载体 鉴定
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肝脏特异性表达人遗传印记基因PEG10转基因载体的构建和鉴定 被引量:1
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作者 刘瑶 林菊生 +4 位作者 熊杰 谭锦泉 张强 常莹 任精华 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2008年第12期982-986,共5页
目的构建小鼠肝脏特异性表达人遗传印记基因PEG10的转基因载体pALB-PEG10-EGFP,为制备转基因小鼠做准备。方法RT-PCR扩增PEG10基因cDNA序列,克隆入T载体进行酶切、测序鉴定,后将其定向克隆至真核表达载体pALB-EGFP中ALB的下游,构建转基... 目的构建小鼠肝脏特异性表达人遗传印记基因PEG10的转基因载体pALB-PEG10-EGFP,为制备转基因小鼠做准备。方法RT-PCR扩增PEG10基因cDNA序列,克隆入T载体进行酶切、测序鉴定,后将其定向克隆至真核表达载体pALB-EGFP中ALB的下游,构建转基因载体pALB-PEG10-EGFP;在Lipofectamine介导下转染L02细胞,经G418抗性筛选,挑选阳性克隆并扩大培养;采用RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学等方法分析PEG10在L02细胞中的表达和细胞内定位。结果酶切和测序结果表明pALB-PEG10-EGFP构建成功;稳定转染后的L02表达有PEG10的mRNA及蛋白,且主要定位于胞浆。结论重组体pALB-PEG10-EGFP的构建初步奠定了转基因小鼠制备的基础。 展开更多
关键词 遗传印记基因 PEG10 白蛋白启动子 转基因载体 鉴定
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