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大丽轮枝菌转录因子VDAG_04814基因功能探究
1
作者
贾鑫宇
东保柱
+1 位作者
杨继峰
周洪友
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2024年第6期202-209,共8页
为明确Zn(Ⅱ)2Cys6转录因子基因VDAG_04814对大丽轮枝菌的生长发育及致病过程中的作用。利用聚乙二醇介导的同源重组构建VDAG_04814基因敲除突变体。将野生型菌株和突变体菌株分别接种至添加过氧化氢、氯化钠、氯化钾、山梨醇、十二烷...
为明确Zn(Ⅱ)2Cys6转录因子基因VDAG_04814对大丽轮枝菌的生长发育及致病过程中的作用。利用聚乙二醇介导的同源重组构建VDAG_04814基因敲除突变体。将野生型菌株和突变体菌株分别接种至添加过氧化氢、氯化钠、氯化钾、山梨醇、十二烷基硫酸钠、刚果红的PDA培养基以及铺有无菌玻璃纸的培养基,分析其抗氧化胁迫、盐胁迫、渗透胁迫、细胞壁细胞膜完整性胁迫的水平和菌株穿透能力;测定其致病力,检测马铃薯植株中真菌生物量。经潮霉素筛选和PCR验证,正确的敲除转化子可扩增到上下游各1500 bp及敲除片段序列全长4500 bp的DNA条带。ΔVDAG_04814菌株生长速度缓慢、黑色素形成能力降低;在添加过氧化氢、氯化钠、氯化钾的氧化胁迫和盐胁迫培养基上,ΔVDAG_04814相较于野生型菌株受到的抑制率更高;在添加山梨醇的渗透胁迫培养基上,ΔVDAG_04814的生长抑制率显著低于野生型菌株;在添加十二烷基硫酸钠、刚果红的细胞壁细胞膜完整性胁迫培养基中生长并没有受到抑制;在铺有无菌玻璃纸培养基上,ΔVDAG_04814没有菌落长出,而野生型菌株有正常形态的菌落长出;致病力测定表明,ΔVDAG_04814菌株的致萎程度较野生型菌株显著下降,致萎指数为47.22~55.56。综合上述结果,VDAG_04814基因能够调控大丽轮枝菌的生长发育、抗胁迫能力、穿透能力以及对马铃薯的致病力,可为马铃薯黄萎病的防控提供新靶点。
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关键词
大丽轮枝菌
转录因子
基因功能验证
侵染能力
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职称材料
基于TRV病毒的工业大麻(Cannabis sativa L.)VIGS体系的优化
2
作者
刘俊飞
杨晓娟
+2 位作者
潘根
郑建树
黄思齐
《中国麻业科学》
2023年第5期197-205,214,共10页
病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术是一种可以通过感染病毒抑制植物内源基因表达的方法,对于验证植物基因的功能非常重要。在工业大麻中,由于其遗传体系尚不稳定,构建和优化工业大麻VIGS体系对于验证部分基因功...
病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术是一种可以通过感染病毒抑制植物内源基因表达的方法,对于验证植物基因的功能非常重要。在工业大麻中,由于其遗传体系尚不稳定,构建和优化工业大麻VIGS体系对于验证部分基因功能具有重要的意义。研究以工业大麻八氢番茄红素脱氢酶基因(phytoene desaturase gene,PDS)作为报告基因,利用烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)作为载体,注射到工业大麻叶片后观察沉默效果,并对工业大麻VIGS体系进行优化,考察不同侵染方式、侵染的苗龄、目的基因片段、工作液浓度以及农杆菌菌株对沉默效率的影响。结果表明,在1周龄时采用叶背注射法,侵染菌液浓度为OD_(600)=1.0,选择GV3101作为农杆菌菌株,使用PDS片段为960~1259 bp或126~425 bp,侵染后在24℃条件下培养2~3周,可以观察到明显的沉默效果。该结果为进一步研究工业大麻的基因功能及后续的遗传改良和品种改良提供了重要的基础。同时,优化的工业大麻VIGS体系也为其他植物的VIGS研究提供了参考和借鉴。
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关键词
VIGS
工业大麻
PDS
基因功能验证
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职称材料
题名
大丽轮枝菌转录因子VDAG_04814基因功能探究
1
作者
贾鑫宇
东保柱
杨继峰
周洪友
机构
内蒙古农业大学园艺与植物保护学院
生物农药创制与资源利用自治区高等学校重点实验室(培育中)
内蒙古自治区兴安盟农牧科学研究所
出处
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2024年第6期202-209,共8页
基金
内蒙古自然科学基金项目(2022QN03001)
中央引导地方科技发展资金项目(2023ZY0014)
内蒙古自治区重点研发项目(2023YFHH0087)。
文摘
为明确Zn(Ⅱ)2Cys6转录因子基因VDAG_04814对大丽轮枝菌的生长发育及致病过程中的作用。利用聚乙二醇介导的同源重组构建VDAG_04814基因敲除突变体。将野生型菌株和突变体菌株分别接种至添加过氧化氢、氯化钠、氯化钾、山梨醇、十二烷基硫酸钠、刚果红的PDA培养基以及铺有无菌玻璃纸的培养基,分析其抗氧化胁迫、盐胁迫、渗透胁迫、细胞壁细胞膜完整性胁迫的水平和菌株穿透能力;测定其致病力,检测马铃薯植株中真菌生物量。经潮霉素筛选和PCR验证,正确的敲除转化子可扩增到上下游各1500 bp及敲除片段序列全长4500 bp的DNA条带。ΔVDAG_04814菌株生长速度缓慢、黑色素形成能力降低;在添加过氧化氢、氯化钠、氯化钾的氧化胁迫和盐胁迫培养基上,ΔVDAG_04814相较于野生型菌株受到的抑制率更高;在添加山梨醇的渗透胁迫培养基上,ΔVDAG_04814的生长抑制率显著低于野生型菌株;在添加十二烷基硫酸钠、刚果红的细胞壁细胞膜完整性胁迫培养基中生长并没有受到抑制;在铺有无菌玻璃纸培养基上,ΔVDAG_04814没有菌落长出,而野生型菌株有正常形态的菌落长出;致病力测定表明,ΔVDAG_04814菌株的致萎程度较野生型菌株显著下降,致萎指数为47.22~55.56。综合上述结果,VDAG_04814基因能够调控大丽轮枝菌的生长发育、抗胁迫能力、穿透能力以及对马铃薯的致病力,可为马铃薯黄萎病的防控提供新靶点。
关键词
大丽轮枝菌
转录因子
基因功能验证
侵染能力
Keywords
Verticillium
dahliae
Transcription
factor
gene
function
validation
Ability
of
infection
分类号
Q965.9 [生物学—昆虫学]
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职称材料
题名
基于TRV病毒的工业大麻(Cannabis sativa L.)VIGS体系的优化
2
作者
刘俊飞
杨晓娟
潘根
郑建树
黄思齐
机构
中国农业科学院麻类研究所
中国农业科学院深圳农业基因组研究所
出处
《中国麻业科学》
2023年第5期197-205,214,共10页
基金
财政部和农业农村部:国家麻类产业技术体系资助(CARS-19-E04)。
文摘
病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术是一种可以通过感染病毒抑制植物内源基因表达的方法,对于验证植物基因的功能非常重要。在工业大麻中,由于其遗传体系尚不稳定,构建和优化工业大麻VIGS体系对于验证部分基因功能具有重要的意义。研究以工业大麻八氢番茄红素脱氢酶基因(phytoene desaturase gene,PDS)作为报告基因,利用烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)作为载体,注射到工业大麻叶片后观察沉默效果,并对工业大麻VIGS体系进行优化,考察不同侵染方式、侵染的苗龄、目的基因片段、工作液浓度以及农杆菌菌株对沉默效率的影响。结果表明,在1周龄时采用叶背注射法,侵染菌液浓度为OD_(600)=1.0,选择GV3101作为农杆菌菌株,使用PDS片段为960~1259 bp或126~425 bp,侵染后在24℃条件下培养2~3周,可以观察到明显的沉默效果。该结果为进一步研究工业大麻的基因功能及后续的遗传改良和品种改良提供了重要的基础。同时,优化的工业大麻VIGS体系也为其他植物的VIGS研究提供了参考和借鉴。
关键词
VIGS
工业大麻
PDS
基因功能验证
Keywords
VIGS
industrial
hemp
PDS
gene
function
validation
分类号
S563.3 [农业科学—作物学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大丽轮枝菌转录因子VDAG_04814基因功能探究
贾鑫宇
东保柱
杨继峰
周洪友
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2024
0
下载PDF
职称材料
2
基于TRV病毒的工业大麻(Cannabis sativa L.)VIGS体系的优化
刘俊飞
杨晓娟
潘根
郑建树
黄思齐
《中国麻业科学》
2023
0
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职称材料
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