抗菌肽的研究进展 被引量：24

1

作者 祝骥 高飞 +2 位作者 易喻 陈建澍 应国清 《生命科学》 CSCD 2008年第4期605-610,共6页

近年来,由于细菌耐药性问题日趋严峻,开发新型抗菌制剂已迫在眉睫。抗菌肽具有相对分子质量小、对热稳定、抗菌谱广及不同于抗生素的抗菌机制,不产生耐药性,因而具有重要的临床应用价值。本文对天然来源、蛋白质酶解、化学合成及基因工... 近年来,由于细菌耐药性问题日趋严峻,开发新型抗菌制剂已迫在眉睫。抗菌肽具有相对分子质量小、对热稳定、抗菌谱广及不同于抗生素的抗菌机制,不产生耐药性,因而具有重要的临床应用价值。本文对天然来源、蛋白质酶解、化学合成及基因工程方法产生的抗菌肽及其研究进展进行了综述。 展开更多

关键词 抗菌肽:蛋白质酶解 基因工程 化学合成

下载PDF 职称材料

生长激素释放因子(GRF)的基因改造及化学合成 被引量：9

2

作者 冯立文 张永亮 +5 位作者 张玉静 欧阳红生 刘松财 岳军明 申建新 刘万臣 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期538-540,共3页

为了提高生长激素释放因子（ＧＲＦ）的体内活性，根据猪ＧＲＦ的天然序列，设计了改造后ＧＲＦ（１～３２）的基因序列（含信号肽），两端加设ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄⅢ的粘性末端，分４段由ＤＮＡ合成仪合成，每段长度分别为９５、９７... 为了提高生长激素释放因子（ＧＲＦ）的体内活性，根据猪ＧＲＦ的天然序列，设计了改造后ＧＲＦ（１～３２）的基因序列（含信号肽），两端加设ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄⅢ的粘性末端，分４段由ＤＮＡ合成仪合成，每段长度分别为９５、９７、８６、１０６ＮＴ，２条链间有１５个碱基的粘端。用尿素变性ＰＡＧＥ纯化合成片段，用Ｔ４多核苷酸激酶对合成ＤＮＡ磷酸化，混合４个片段复性，然后用Ｔ４连接酶连接。提取ｐＢｌｕｓｃｒｉｐｔ质粒，用ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ在Ｍｕｌｔｉｃｏｒｅｂｕｆｅｒ中酶切完全后，琼脂糖电泳，由ＧｅｎｅＥｌｕｔｅＡｇｒｏｓｅＳｐｉｎＣｏｌｕｍｓ回收酶切大片段。将该酶切片段与上述合成的ＧＲＦ基因由Ｔ４连接酶连接，并转化至氯化钙致敏的ＤＨ５α。选取重组菌落，提取质粒，用ＰＣＲ及双酶切鉴定阳性克隆。用Ｍｉｎｉｐｒｅｐ提取重组质粒，ＡＢＩ３７３自动测序仪测序。测序结果表明已克隆到合成的ＧＲＦ基因。 展开更多

关键词 生长激素 释放因子 GRF 基因改造 化学合成

下载PDF 职称材料

蛇毒类凝血酶Calobin cDNA的设计合成与克隆 被引量：5

3

作者 袁盛凌 段海清 张兆山 《生物技术通讯》 CAS 2003年第5期357-360,共4页

人工合成了朝鲜蝮蛇(Agkistrodoncaliginosus)类凝血酶Calobin的编码序列。在设计引物时选择大肠杆菌和酵母菌的偏爱密码子,通过相互搭桥的方式,将全长为789bp的编码序列分成14个片段,每个片段长度为78个碱基左右,采用“核心模板法”并... 人工合成了朝鲜蝮蛇(Agkistrodoncaliginosus)类凝血酶Calobin的编码序列。在设计引物时选择大肠杆菌和酵母菌的偏爱密码子,通过相互搭桥的方式,将全长为789bp的编码序列分成14个片段,每个片段长度为78个碱基左右,采用“核心模板法”并加以改进,通过4次PCR延伸反应,得到了全长基因。经扩增后回收目的片段,双酶切后连接到克隆载体,将得到的转化子酶切鉴定后,任意选择6个克隆进行双向测序,得到了全序列正确的3个克隆。本工作为类凝血酶在大肠杆菌和酵母系统中的高效表达奠定了基础,也为长度为700～900bp片段的合成提供了帮助。 展开更多

关键词 蛇毒 类凝血酶 基因合成 聚合酶链式反应 序列分析

下载PDF 职称材料

小鼠白细胞介素4基因的化学合成、克隆与表达 被引量：1

4

作者 任力强 陈南春 +2 位作者 陈苏民 苏成芝 金伯泉 《生物化学杂志》 CSCD 1992年第5期529-534,共6页

利用381A型DNA合成仪,分29个寡聚核苷酸片段化学合成了小鼠IL-4全基因,共442bp。以pUC12质粒作为载体,将所有合成片段分前后两组进行磷酸化、退火、连接和克隆,经过菌落原位杂交、酶切鉴定和质粒DNA序列分析,分别得到了含有小鼠IL-4前... 利用381A型DNA合成仪,分29个寡聚核苷酸片段化学合成了小鼠IL-4全基因,共442bp。以pUC12质粒作为载体,将所有合成片段分前后两组进行磷酸化、退火、连接和克隆,经过菌落原位杂交、酶切鉴定和质粒DNA序列分析,分别得到了含有小鼠IL-4前后两半基因片段的两种重组质粒,回收前半基因片段,插入到含有后半基因重组质粒的EcoRI和PstI酶切位点之间,成功地得到了含有小鼠IL-4全基因的重组质粒pFR101。将全合成基因插入到质粒pSM53中,得表达质粒pFR105,转化大肠杆菌TAP106,根据IL-4对CTLL细胞的作用,肯定了TAP106(pFR105)细菌中有小鼠IL-4活性蛋白的表达。 展开更多

关键词 白细胞介素 基因 合成 克隆 表达

下载PDF 职称材料

人血管生长素基因的化学合成与克隆 被引量：3

5

作者 应康 刘景昌 +2 位作者 吴小舟 叶蕴辉 谢毅 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期409-416,共8页

采用固相亚磷酸胺法化学合成并克隆人血管生长素基因。该基因全长４２３ｂｐ，其中３６９ｂｐ的结构基因全部选用大肠杆菌偏爱的密码子。在结构基因上游设置了适合原核非融合蛋白表达的核糖体结合位点和Ｓ－Ｄ序列。采用两级退火一步拼... 采用固相亚磷酸胺法化学合成并克隆人血管生长素基因。该基因全长４２３ｂｐ，其中３６９ｂｐ的结构基因全部选用大肠杆菌偏爱的密码子。在结构基因上游设置了适合原核非融合蛋白表达的核糖体结合位点和Ｓ－Ｄ序列。采用两级退火一步拼接法成功克隆全长基因。该基因适合在多种融合或非融合原核表达载体中表达。 展开更多

关键词 血管生长素 基因重组 固相合成 无性系

原文传递

密码子优化BTRCP-CypA融合基因的PCR合成 被引量：1

6

作者 孟祥平 白雪飞 +1 位作者 杨建英 乔晓岚 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期4445-4450,共6页

为了提高BTRCP-Cyp A融合基因的表达量,对基因密码子进行优化,主要是去除过多富含AT碱基以及提高GC含量。在此基础上提出一种用于基因合成的PCR法。拆分单链寡核首酸长度为59 nt左右,重叠区碱基数14~21 nt,Tm值为46~62℃。具体步骤如下... 为了提高BTRCP-Cyp A融合基因的表达量,对基因密码子进行优化,主要是去除过多富含AT碱基以及提高GC含量。在此基础上提出一种用于基因合成的PCR法。拆分单链寡核首酸长度为59 nt左右,重叠区碱基数14~21 nt,Tm值为46~62℃。具体步骤如下:把拆分的寡核首酸组装成300~500 bp左右的中间片段,再将中间片段拼接成全长基因。结果表明利用该法法合成了BTRCP-Cyp A融合基因,并提高了表达量。因而改良的PCR法能经济、简便、高效地进行基因合成,具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 基因合成 PCR 化学合成 密码子优化

原文传递

人TRAIL基因胞外段的化学合成和克隆 被引量：1

7

作者 杨文理 陈毅荣 陈守春 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期495-498,共4页

根据大肠杆菌高表达序列重新设计了人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)胞外段的基因编码区的核苷酸序列,应用化学合成的方法合成了多个互补DNA片段,经互补片段分别退火和连接后,将完整编码区克隆于pMD18-T质粒中,进行DNA序列分析... 根据大肠杆菌高表达序列重新设计了人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)胞外段的基因编码区的核苷酸序列,应用化学合成的方法合成了多个互补DNA片段,经互补片段分别退火和连接后,将完整编码区克隆于pMD18-T质粒中,进行DNA序列分析,获得了与设计序列完全一致的含有完整编码区的人TRAIL胞外段基因,并成功构建了高效的TRAIL胞膜外段原核表达载体pTWIN1/TRAIL_(111-281)。 展开更多

关键词 TRAIL 高表达序列 化学合成

原文传递

脑钠素基因的化学合成及克隆

8

作者 陈晖 张婕 +2 位作者 王启松 崔宏 汤健 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1991年第4期413-416,共4页

根据已知猪脑钠素的氨基酸序列,选用大肠杆菌偏爱的密码子,设计合成了猪脑钠素基因。该基因全长114 bp,其中结构基因为78 bp。整个基因分成6个小片段分别合成,经退火、连接后克隆到M13mp18载体中。经序列分析证明,所得到的基因与设计要... 根据已知猪脑钠素的氨基酸序列,选用大肠杆菌偏爱的密码子,设计合成了猪脑钠素基因。该基因全长114 bp,其中结构基因为78 bp。整个基因分成6个小片段分别合成,经退火、连接后克隆到M13mp18载体中。经序列分析证明,所得到的基因与设计要求完全一致。 展开更多

关键词 基因 脑钠素 化学合成 克隆

原文传递

化学合成虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅱ基因的克隆

9

作者 徐辉明 陈嘉勤 +1 位作者 梁宋平 李敏 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 2000年第1期61-64,共4页

报道了全化学合成虎纹捕鸟蛛毒素 Ⅱ (HWTX Ⅱ )基因 ,在克隆载体pBluescript中的克隆 .但HWTX Ⅱ基因在表达载体pGEX KT中几乎无表达 .根据以前成功地表达全化学合成虎纹捕鸟蛛毒素 Ⅰ (HWTX Ⅰ )基因的实验结果 ,对在同一表达系统所... 报道了全化学合成虎纹捕鸟蛛毒素 Ⅱ (HWTX Ⅱ )基因 ,在克隆载体pBluescript中的克隆 .但HWTX Ⅱ基因在表达载体pGEX KT中几乎无表达 .根据以前成功地表达全化学合成虎纹捕鸟蛛毒素 Ⅰ (HWTX Ⅰ )基因的实验结果 ,对在同一表达系统所构建的HWTX Ⅰ与HWTX Ⅱ基因的表达产物进行比较 ,认为HWTX Ⅰ与HWTX Ⅱ在原核表达系统的表达行为上的差异有助于我们进一步探讨HWTX 展开更多

关键词 蜘蛛 虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅱ基因 化学合成 克隆

下载PDF 职称材料

eglinC基因的化学合成与克隆

10

作者 傅敏杰 张晓东 +3 位作者 王鄂生 申宗侯 王启松 闵永洁 《武汉大学学报（自然科学版）》 CSCD 1994年第3期110-116,共7页

采用固相亚磷酰胺法合成了ｅｇｌｉｎＣ全基因，该基因全长２２１ｂｐ，包括其结构基因，５＇－端起始密码子ＡＴＧ和３＇－端终止密码子ＴＡＧ，并在基因的５＇－和３＇－分别装上ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ位点．共分１２个片段，采取分... 采用固相亚磷酰胺法合成了ｅｇｌｉｎＣ全基因，该基因全长２２１ｂｐ，包括其结构基因，５＇－端起始密码子ＡＴＧ和３＇－端终止密码子ＴＡＧ，并在基因的５＇－和３＇－分别装上ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ位点．共分１２个片段，采取分段合成，酶促连接成完整的ｅｇｌｉｎＣ基因．合成的基因克隆于Ｍ１３载体，经杂交、检测，筛选出含ｅｇｌｉｎＣ基因的克隆．用双脱氧链终止法测其序列，结果与设计的一致． 展开更多

关键词 eglinC基因 化学合成 无性系 载体

下载PDF 职称材料

人可溶性TRAIL cDNA的设计、合成与克隆

11

作者 杨文理 陈守春 +1 位作者 陈毅荣 覃扬 《泸州医学院学报》 2005年第5期397-401,共5页

目的:合成可溶性的肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)的cDNA,并构建其原核表达载体。方法:根据大肠杆菌密码子偏好性和表达载体多克隆位点限制性内切酶要求,设计基因拼接引物,合成TRAIL基因胞膜外段双链cDNA序列,将其连接于克隆载... 目的:合成可溶性的肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)的cDNA,并构建其原核表达载体。方法:根据大肠杆菌密码子偏好性和表达载体多克隆位点限制性内切酶要求,设计基因拼接引物,合成TRAIL基因胞膜外段双链cDNA序列,将其连接于克隆载体pMD18-T中;将酶切、纯化的TRAIL基因与经相同处理的载体PSC相连接,转化感受态大肠杆菌JM109,筛选阳性重组子。结果:成功获得了包含TRAIL基因胞膜外段的双链cDNA序列,并成功构建了TRAIL胞膜外段原核表达载体PSC/TRAIL111-281。结论:采用PCR的方法,实现合成寡核苷酸片段的一次性组装,方便了进一步的克隆。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 基因合成 聚合酶链式反应

下载PDF 职称材料

重组人干细胞因子 被引量：6

12

作者 赵志虎 曹诚 +1 位作者 张京生 马清钧 《生物工程进展》 CSCD 1998年第2期25-28,共4页

选择大肠杆菌的偏性密码，合成了可溶形式的人干细胞因子（ｈＳＣＦ）的ｃＤＮＡ。通过ＰＣＲ完成了合成片段的一次性组装与克隆，并在Ｅ．ｃｏｌｉ中进行了温控型的高效表达，目的蛋白可占菌体总蛋白的４０％左右。表达产物复性后，经... 选择大肠杆菌的偏性密码，合成了可溶形式的人干细胞因子（ｈＳＣＦ）的ｃＤＮＡ。通过ＰＣＲ完成了合成片段的一次性组装与克隆，并在Ｅ．ｃｏｌｉ中进行了温控型的高效表达，目的蛋白可占菌体总蛋白的４０％左右。表达产物复性后，经离子交换、凝胶过滤层析，得到了电泳纯的ｒｈＳＣＦ。经测定，ｒｈＳＣＦ氨基端序列及其它理化性质与天然ｈＳＣＦ完全一致，并可刺激人骨髓细胞的增殖，导致粒、巨核系集落（ＣＦＵ－ＧＭ）大小、数量的明显增加，显示天然ｈＳＣＦ的生物活性。 展开更多

关键词 人干细胞因子 基因合成 聚合酶链反应 克隆 表达

下载PDF 职称材料

恶性疟杂合45肽抗原基因的化学合成及克隆 被引量：7

13

作者 裘敏燕 闵永洁 +3 位作者 王启松 钟雄林 陈仕荣 王昌才 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1992年第2期82-85,共4页

本文报道用固相亚磷酰胺法成功地合成了人恶性疟杂合抗原基因(Human Plasmodiumfalciparum antigen gene,HPFAG)。其全长为162bp,包含有三个裂殖子重复多肽(83kDa、55kDa、35kDa)和两个环子孢子表面重复多肽,以及两端的接头,共分成8个... 本文报道用固相亚磷酰胺法成功地合成了人恶性疟杂合抗原基因(Human Plasmodiumfalciparum antigen gene,HPFAG)。其全长为162bp,包含有三个裂殖子重复多肽(83kDa、55kDa、35kDa)和两个环子孢子表面重复多肽,以及两端的接头,共分成8个大小不同的片段合成。分离纯化后的片段连接成完整的双链基因,与P-Blue script重组,转化E.coli JM109,经原位杂交和酶切分析,筛选出重组体,又经DNA序列分析测定,证明与所设计基因完全相同。 展开更多

关键词 疟杂合45肽 抗原基因 DNA化学合成

下载PDF 职称材料

按大肠杆菌高表达序列设计的人干扰素α-2b基因的化学合成和克隆 被引量：1

14

作者 刘丽华 哈斯阿古拉 +2 位作者 李宏 张鹤龄 罗辽复 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期66-69,共4页

根据大肠杆菌高表达序列重新设计了人干扰素α-2b基因编码区的核苷酸序列,应用化学合成的方法合成了多个互补DNA片段,经互补片段分别退火和连接后,将完整编码区分两段分别克隆于pUC19质粒中,进行DNA序列分析,分别选取序列完全正确的两... 根据大肠杆菌高表达序列重新设计了人干扰素α-2b基因编码区的核苷酸序列,应用化学合成的方法合成了多个互补DNA片段,经互补片段分别退火和连接后,将完整编码区分两段分别克隆于pUC19质粒中,进行DNA序列分析,分别选取序列完全正确的两种克隆片段进行重组.获得了与设计序列完全一致的含有完整编码区的人干扰素α-2b基因. 展开更多

关键词 人干扰素α—2b基因 高表达序列 化学合成

下载PDF 职称材料

人恶性疟杂合多肽抗原基因化学合成及克隆 被引量：4

15

作者 钟雄林 陈仕荣 +3 位作者 裘敏燕 王昌才 闵永洁 王启松 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1991年第4期294-298,共5页

本文报道用固相亚磷酰胺法合成人恶性疟杂合多肽抗原基因。基因全长为216bp,分为10个寡聚核苷酸片段分别合成,然后经T4 DNA连接酶按设计顺序连接成完整的杂合抗原基因,重组到噬茵体M13 mp 18 RF DNA内,转染大肠杆菌JM109。用分子杂交和... 本文报道用固相亚磷酰胺法合成人恶性疟杂合多肽抗原基因。基因全长为216bp,分为10个寡聚核苷酸片段分别合成,然后经T4 DNA连接酶按设计顺序连接成完整的杂合抗原基因,重组到噬茵体M13 mp 18 RF DNA内,转染大肠杆菌JM109。用分子杂交和酶切分析筛选出重组克隆体。经序列分析,证明所合成的人恶性疟杂合多肽抗原基因与所设计完全一致。 展开更多

关键词 疟疾 恶性 抗原基因 化学合成 克隆

下载PDF 职称材料

人α-心钠素全基因的化学合成 被引量：4

16

作者 杨迪 闵永洁 +1 位作者 施文 王启松 《生物化学杂志》 CSCD 1989年第4期289-293,共5页

用固相亚磷酰胺法(solid-phase phosphoramidite method)合成了人α-心钠素(简称α-hANP)的全基因。合成的α-hANP基因全长为96bp,包括编码α-hANP的结构基因、基因5＇端的谷氨酸(作为表达产物用内肽酶Glu-C专一裂解的位点)密码子GAA、... 用固相亚磷酰胺法(solid-phase phosphoramidite method)合成了人α-心钠素(简称α-hANP)的全基因。合成的α-hANP基因全长为96bp,包括编码α-hANP的结构基因、基因5＇端的谷氨酸(作为表达产物用内肽酶Glu-C专一裂解的位点)密码子GAA、基因3＇端的终止信号TGA及基因两端的接头部分。基因分7个寡聚核苷酸片段在DNA合成仪上合成,然后一次性酶促连接成为完整的α—hANP双链基因。化学合成的基因克隆到M13载体上,经分子杂交鉴定筛选出的α-hANP基因克隆株,用双脱氧链终止法进行序列分析,证明核苷酸顺序正确。 展开更多

关键词 人 心钠素 化学合成 基因

下载PDF 职称材料

炭疽毒素受体ATRcDNA的合成和克隆及ATR-Fc融合蛋白的真核表达载体的构建 被引量：3

17

作者 胡显文 高丽华 +3 位作者 陈薇 徐俊杰 赵剑 陈惠鹏 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1-8,共8页

可溶性炭疽毒素受体(sATR)可以特异性结合炭疽毒素保护抗原(PA),为获得用于中和炭疽毒素以防治炭疽感染的候选抗毒素药物,构建了表达ATRFc抗体样分子融合蛋白的真核表达载体。将全长为681bp的编码炭疽毒素受体N端1～227氨基酸的基因分... 可溶性炭疽毒素受体(sATR)可以特异性结合炭疽毒素保护抗原(PA),为获得用于中和炭疽毒素以防治炭疽感染的候选抗毒素药物,构建了表达ATRFc抗体样分子融合蛋白的真核表达载体。将全长为681bp的编码炭疽毒素受体N端1～227氨基酸的基因分成长约50～60碱基的18个寡核苷酸片段,相邻片段重叠部分为20～22个碱基,利用重叠延伸PCR和引物PCR法,将合成的片段组装与扩增,得到了含有ATR1～227的全部编码区和HindIII、BamHI位点在内的DNA片段。回收的基因片段经BamHI/HindIII双酶切连接到pUC19质粒中,挑选阳性克隆进行酶切鉴定和双向序列测定,获得了全序列正确的克隆。将ATR基因与Fc基因连接后插入pcDNA3.1载体多克隆位点HindIII和NotI之间,得到表达ATRFc融合蛋白的真核表达载体pcDNA3.1/ATRFc,为利用CHO哺乳动物细胞表达ATRFc并研究其生物学性质奠定了基础。 展开更多

关键词 炭疽毒素受体 FC融合蛋白 基因合成 抗毒素

下载PDF 职称材料

一种改进的基因合成方法

18

作者 王文凯 蓝东明 +1 位作者 王永华 杨博 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第18期10735-10737,共3页

[目的]建立一种简便、廉价、准确的基因合成方法。[方法]对现有的重叠延伸合成方法进行了改进,提出一种IOEP(Improvedoverlap extension PCR method)法。[结果]拆分的单链寡核苷酸长度为60 nt左右,重叠区碱基数13～17 bp,Tm值为40～50℃... [目的]建立一种简便、廉价、准确的基因合成方法。[方法]对现有的重叠延伸合成方法进行了改进,提出一种IOEP(Improvedoverlap extension PCR method)法。[结果]拆分的单链寡核苷酸长度为60 nt左右,重叠区碱基数13～17 bp,Tm值为40～50℃。IOEP法具体步骤如下:把拆分的寡核苷酸组装成500 bp左右的中间片段,再将中间片段拼接成全长基因。利用IOEP法合成了10条基因,其平均化学合成成本率为1.291,平均错误率为1.031‰,优于其他合成方法。[结论]IOEP法是一种具有高准确率、低成本、重复性好的基因合成方法。 展开更多

关键词 基因合成 IOEP 化学合成成本率

下载PDF 职称材料