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赤霉素生物合成途径及其相关研究进展 被引量：61
1
作者 谈心 马欣荣 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期571-577,共7页
赤霉素是一种高效能的广谱植物生长调节剂,能够促进植物的生长发育,具有重要的生物学功能.利用突变体研究赤霉素生物合成途径和信号转导是目前的研究热点.本文对赤霉素的研究历史、合成途径、关键酶基因、作用机理以及最新的研究进展等... 赤霉素是一种高效能的广谱植物生长调节剂,能够促进植物的生长发育,具有重要的生物学功能.利用突变体研究赤霉素生物合成途径和信号转导是目前的研究热点.本文对赤霉素的研究历史、合成途径、关键酶基因、作用机理以及最新的研究进展等作一综述. 展开更多
关键词 赤霉素 基因克隆 生物合成途径 信号传导途径
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溶菌酶的研究进展 被引量：39
2
作者 贾向志 李元 马文煜 《生物技术通讯》 CAS 2002年第5期374-377,共4页
溶菌酶在自然界中广泛存在,是一种与单核-巨噬细胞系统有关的非特异防御机制。人溶菌酶在临床上具有潜在的使用价值。由于来源有限,利用基因工程技术从细菌或酵母中生产人溶菌酶实现产业化,是解决其供需矛盾的有效途径。有关溶菌酶抗菌... 溶菌酶在自然界中广泛存在,是一种与单核-巨噬细胞系统有关的非特异防御机制。人溶菌酶在临床上具有潜在的使用价值。由于来源有限,利用基因工程技术从细菌或酵母中生产人溶菌酶实现产业化,是解决其供需矛盾的有效途径。有关溶菌酶抗菌功能以外的其它未知生物学作用,也是当前研究的热点。 展开更多
关键词 溶菌酶 研究进展 模型 基因克隆 表达
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发酵行业4-乙烯基愈创木酚和4-乙基愈创木酚研究进展 被引量：46
3
作者 崔云前 曹小红 +1 位作者 王春玲 周广田 《中国酿造》 CAS 北大核心 2009年第4期14-17,共4页
介绍了4-乙烯基愈创木酚和4-乙基愈创木酚在发酵行业的研究进展,列举了一些有价值的研究实例,指出4-乙烯基愈创木酚和4-乙基愈创木酚是白酒、啤酒(特别是小麦啤酒)、葡萄酒、酱油等产品的重要呈香物质,并从原料、酵母菌种和工艺角度对... 介绍了4-乙烯基愈创木酚和4-乙基愈创木酚在发酵行业的研究进展,列举了一些有价值的研究实例,指出4-乙烯基愈创木酚和4-乙基愈创木酚是白酒、啤酒(特别是小麦啤酒)、葡萄酒、酱油等产品的重要呈香物质,并从原料、酵母菌种和工艺角度对它们形成的途径和影响因素进行了探讨,提出以分子生物学手段对酵母菌种进行基因克隆是全面提升传统发酵产品质量的关键。 展开更多
关键词 发酵 4-乙烯基愈创木酚 4-乙基愈创木酚 酵母菌种 基因克隆
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植物细胞色素P450酶系的研究进展及其与外来物质的关系 被引量：28
4
作者 刘宛 李培军 +3 位作者 周启星 许华夏 孙铁珩 张春桂 《环境污染治理技术与设备》 CSCD 北大核心 2001年第5期1-9,共9页
植物细胞色素P45 0是分子量为 40— 60KD、结构类似的一类血红素 硫铁蛋白。它以可溶性和膜结合两种形态存在于植物细胞内 ,可催化多种化学反应 ,在防御植物免受有害物质侵害方面具有重要作用。目前已克隆 90多个植物细胞色素P45 0基因... 植物细胞色素P45 0是分子量为 40— 60KD、结构类似的一类血红素 硫铁蛋白。它以可溶性和膜结合两种形态存在于植物细胞内 ,可催化多种化学反应 ,在防御植物免受有害物质侵害方面具有重要作用。目前已克隆 90多个植物细胞色素P45 0基因。本文概述了植物P45 0基因表达调控与环境、发育、组织特异性关系的研究进展。认为植物P45 展开更多
关键词 植物 细胞色素P450 基因克隆 外来物质 酶系 进展研究 环境毒物 生物修复 转基因植物
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猕猴桃ACC氧化酶cDNA克隆及全序列测定 被引量：20
5
作者 任小林 金志 +2 位作者 彭世清 李嘉瑞 郑学勤 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期333-337,共5页
从‘秦美’猕猴桃（ＡｃｔｉｎｉｄｉａｄｅｌｉｃｉｏｓａＣ．Ｆ．ＬｉａｎｇｅｔＡ．Ｒ．Ｆｅｒｇｕｓｏｎ．ｃｖ．Ｑｉｎｍｅｉ）呼吸高峰跃变初期的果实中提取总ＲＮＡ，然后纯化得ｍＲＮＡ，用Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）作为引物反转录... 从‘秦美’猕猴桃（ＡｃｔｉｎｉｄｉａｄｅｌｉｃｉｏｓａＣ．Ｆ．ＬｉａｎｇｅｔＡ．Ｒ．Ｆｅｒｇｕｓｏｎ．ｃｖ．Ｑｉｎｍｅｉ）呼吸高峰跃变初期的果实中提取总ＲＮＡ，然后纯化得ｍＲＮＡ，用Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）作为引物反转录合成ｃＤＮＡ第一链，以此为模板，用人工合成的寡聚核苷酸作为引物进行扩增，得到大小约０．９５Ｋｂ基因片段，并将其克隆到ｐＧＥＭ－５ｚｆ（＋）载体上。经限制性内切酶图谱分析，组建亚克隆并进行了全序列测定，在其开放读码框架内，由９５７个ｂｐ编码３１９个氨基酸组成，该ｃＤＮＡ与海沃德ＡＣＣ氧化酶ｃＤＮＡ的核苷酸和氨基酸残基同源率分别达９５．０１％和９５．６１％，证明己克隆到完整的秦美猕猴桃ＡＣＣ氧化酶基因编码区。 展开更多
关键词 猕猴桃 ACC氧化酶 基因克隆 测序
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重要观赏兰科植物的分子生物学研究进展 被引量：32
6
作者 朱根发 郭振飞 《植物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期471-477,共7页
兰科植物是开花植物中最大的家族之一,分子标记技术应用于兰科植物的分类鉴定和品种鉴别,为兰花的分类提供了分子水平的证据,也为兰花保护策略和措施的制定提供了理论基础。兰科植物表现有高度特异的形态、结构和生理特性,是研究花着色... 兰科植物是开花植物中最大的家族之一,分子标记技术应用于兰科植物的分类鉴定和品种鉴别,为兰花的分类提供了分子水平的证据,也为兰花保护策略和措施的制定提供了理论基础。兰科植物表现有高度特异的形态、结构和生理特性,是研究花着色机理和子房发育的理想对象。兰花离体培养开花系统的建立,可以用来探明兰花从营养生长向生殖生长的转变机制,是研究花的分化和发育的理想材料。兰花具有特异的查尔酮合成酶(CHS)基因和二氢叶酸还原酶(DFR)基因等控制花色素的合成,DOH1基因控制石斛兰花芽的形成和提早开花,PHAL.039基因和ACC合成酶基因在蝴蝶兰授粉后的子房发育中起着重要的调控作用,这些特异基因的分离和克隆为兰花花的分化、发育及着色机制提供了分子基础。蝴蝶兰属、大花蕙兰(Cymbidium hybridium)、石斛兰属、文心兰属、五唇兰属和万代兰属等兰科植物都有转基因的研究报道,主要以原球茎为材料采用基因枪或农杆菌法转化,部分研究获得了转化植株。 展开更多
关键词 兰科植物 分子生物学 分子标记技术 品种 基因克隆
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枯草杆菌DC-2纳豆激酶基因的克隆及其融合蛋白在E.coli中的表达 被引量：21
7
作者 彭勇 黄庆 张义正 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期559-563,共5页
纳豆激酶是一种纤维蛋白溶解酶 ,有望开发成为新型的溶栓药物 .从中国豆豉中分离的具有较强纤溶活性的枯草杆菌DC 2中提取总DNA ,根据纳豆激酶 (NK)基因序列设计引物 ,用PCR法扩增NK基因 .序列分析表明 ,NK基因成熟肽编码区含有 82 5bp ... 纳豆激酶是一种纤维蛋白溶解酶 ,有望开发成为新型的溶栓药物 .从中国豆豉中分离的具有较强纤溶活性的枯草杆菌DC 2中提取总DNA ,根据纳豆激酶 (NK)基因序列设计引物 ,用PCR法扩增NK基因 .序列分析表明 ,NK基因成熟肽编码区含有 82 5bp ,编码 2 75个氨基酸残基 ,与文献报道的序列分别有 93 4 %和 94 5 %同源性 .将NK基因插入载体pGEX 4T1构建表达质粒pGEX NK ,转化大肠杆菌JM10 9后 ,经 1mmol LIPTG诱导 4h ,发现大量NK融合蛋白表达 ,并形成包涵体 .SDS PAGE分析表明 ,NK融合蛋白作为包涵体的分子量为 5 3kD .凝胶自动扫描结果显示 ,NK融合蛋白约占菌体可溶性蛋白的 2 6 % . 展开更多
关键词 枯草杆菌DC-2 纳豆激酶基因 融合蛋白 基因克隆 基因表达 大肠杆菌
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高等植物赤霉素生物合成及其调节研究进展 被引量：29
8
作者 钟希琼 王惠珍 《植物学通报》 CSCD 北大核心 2001年第3期303-307,共5页
主要介绍近年来高等植物中生物活性GAs的生物合成 ,拟南芥GA生物合成途径中关键酶基因(GA1 _GA5)的克隆和GA3基因CYP70 1A3在酵母 (Saccharomycescerevisiae)中的成功表达。评述了活性GAs对赤霉素生物合成的反馈抑制作用和反馈调节中信... 主要介绍近年来高等植物中生物活性GAs的生物合成 ,拟南芥GA生物合成途径中关键酶基因(GA1 _GA5)的克隆和GA3基因CYP70 1A3在酵母 (Saccharomycescerevisiae)中的成功表达。评述了活性GAs对赤霉素生物合成的反馈抑制作用和反馈调节中信号的传递和接收问题。高等植物中光周期对GA生物合成的调节主要是在 2 0_氧化和 /或 3β_羟基化步骤。 展开更多
关键词 赤霉素 基因克隆 生物合成调节 研究进展 植物
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水稻矮化相关基因的研究进展 被引量：28
9
作者 于永红 斯华敏 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 2005年第3期344-347,共4页
矮秆水稻的培育成功是20世纪农业最主要的成就之一。本文综述了水稻矮化相关基因的遗传学、激素对矮化基因突变体的调控以及矮化相关基因的克隆等方面的研究进展,并分析了利用基因工程手段控制农作物生长的巨大潜能。
关键词 水稻 矮化相关基因 基因突变 基因工程 激素调控 基因克隆
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卵泡抑制素与乙肝表面抗原融合基因表达质粒的构建及表达 被引量：28
10
作者 茆达干 杨利国 +2 位作者 曹少先 张志杰 何晓红 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期775-778,共4页
目的 :构建高免疫原性的抑制素真核表达载体。方法 :通过PCR扩增pCMV S基因中的S基因片段 ,然后将抑制素α(1 32 )片段与S的融合基因克隆到真核表达质粒pcDNA13.1( ) :酶切、测序鉴定后 ,采用脂质体包裹法将重组质粒转染Hela细胞 ,用SDS... 目的 :构建高免疫原性的抑制素真核表达载体。方法 :通过PCR扩增pCMV S基因中的S基因片段 ,然后将抑制素α(1 32 )片段与S的融合基因克隆到真核表达质粒pcDNA13.1( ) :酶切、测序鉴定后 ,采用脂质体包裹法将重组质粒转染Hela细胞 ,用SDS PAGE和ELISA对其表达产物进行检测。用抑制素融合表达质粒免疫大白鼠 ,ELISA检测血中抗抑制素抗体水平。结果 :酶切鉴定和序列分析表明 ,融合基因的表达质粒pClS构建成功。表达质粒在HeLa细胞中获得了表达 ,融合蛋白的分子量约为 2 9kD ,融合蛋白具有抑制素免疫原性。重组质粒免疫使大白鼠产生了抗抑制素抗体。结论 :高免疫原性的抑制素表达质粒的构建为利用抑制素基因免疫技术诱导单胎动物生多胎奠定了基础。 展开更多
关键词 卵泡抑制素 乙肝表面抗原 基因克隆 基因表达 表达质粒 真核表达载体
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羧酸酯酶研究进展 被引量：25
11
作者 滕霞 孙曼霁 《生命科学》 CSCD 2003年第1期31-35,共5页
哺乳动物羧酸酯酶carboxylesterase(EC 3.1.1.1)组成一个多基因家族,其基因产物定位于多种组织的内质网中。羧酸酯酶能有效地催化酯类和酰胺类化合物水解,属丝氨酸水解酶家族。羧酸酯酶与多种药物、环境毒物及致癌物的解毒和代谢有关,... 哺乳动物羧酸酯酶carboxylesterase(EC 3.1.1.1)组成一个多基因家族,其基因产物定位于多种组织的内质网中。羧酸酯酶能有效地催化酯类和酰胺类化合物水解,属丝氨酸水解酶家族。羧酸酯酶与多种药物、环境毒物及致癌物的解毒和代谢有关,并参与脂质运输和代谢。作者详细介绍了羧酸酯酶的生化性质、作用机理及其分子生物学方面的最新进展。 展开更多
关键词 羧酸酯酶 一级结构 生化特性 药物代谢 基因克隆
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紫花苜蓿NAC类转录因子基因MsNAC2的克隆及其功能分析 被引量：31
12
作者 申玉华 徐振军 +4 位作者 唐立红 杨晓坡 黄文婕 武小斌 张文波 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第15期2925-2938,共14页
【目的】NAC转录因子是植物特有的一类转录因子,N端含有一段高度保守、约150个氨基酸组成的NAC结构域,而C端为高度变异的转录调控区。NAC转录因子不仅参与植物生长发育的调控,而且在植物抗逆反应中具有重要的调控作用。作者从紫花苜蓿... 【目的】NAC转录因子是植物特有的一类转录因子,N端含有一段高度保守、约150个氨基酸组成的NAC结构域,而C端为高度变异的转录调控区。NAC转录因子不仅参与植物生长发育的调控,而且在植物抗逆反应中具有重要的调控作用。作者从紫花苜蓿中克隆了一个NAC类转录因子基因Ms NAC2,期望通过分析其DNA和氨基酸序列特征,阐明其在紫花苜蓿中响应非生物胁迫的表达模式,通过在烟草中过量表达鉴定其生物学功能,为进一步了解Ms NAC2在紫花苜蓿中的耐逆调控机理提供试验基础,并为通过转基因技术改善紫花苜蓿抗逆力和提高其品质奠定研究基础。【方法】应用RT-PCR和RACE技术获得紫花苜蓿Ms NAC2全长序列,并进行生物信息学分析。应用real-time PCR技术分析该基因在非生物胁迫下的时空表达特征。构建Ms NAC2-GFP融合表达载体,进行基因表达的亚细胞定位分析。同时构建p BI121-Ms NAC2植物超表达载体,通过农杆菌介导法转化烟草叶盘,比较逆境胁迫条件下野生型烟草和转基因株系的表型和生理指标,鉴定超表达Ms NAC2对烟草耐逆能力的调控效应。【结果】Ms NAC2全长1 358 bp,开放阅读框长度为1 023 bp,编码340个氨基酸,编码蛋白质分子量为39.4 k D,其N端含有典型的NAC保守结构域,C端高度变异。进化树聚类分析表明,该基因与脐橙Cs NAC亲缘关系较近,属于NAC蛋白的ATAF亚家族。洋葱亚细胞定位分析表明Ms NAC2定位于细胞核。转录水平表达分析表明Ms NAC2受250 mmol·L-1Na Cl、20%PEG6000、0.1 mmol·L-1 ABA和4℃胁迫诱导而显著升高,并且Ms NAC2在根中的表达量要明显高于在叶中的表达量。抗性试验结果显示,在Na Cl、PEG和4℃冷害胁迫下,转基因烟草苗高、根长、鲜重和干重等生长指标均高于野生型。生理指标检测结果表明,在250 mmol·L-1 Na Cl、20%PEG6000和4℃处理24 h后,转基因烟草叶片丙二醛含量明显低 展开更多
关键词 紫花苜蓿 MS NAC2 基因克隆 功能分析
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茶树冷胁迫诱导抗寒基因CBF的克隆与表达分析 被引量：27
13
作者 陈暄 房婉萍 +3 位作者 邹中伟 王玉花 成浩 黎星辉 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期53-59,共7页
利用cDNA-AFLP技术进行了茶树低温胁迫处理的基因表达差异分析,获得低温诱导后特异表达的差异片段TDF11(transcript derived fragment,TDF)。经BLAST比对发现该片段与白菜、拟南芥、烟草的抗寒基因CBF(C-repeat binding factor)分别有94... 利用cDNA-AFLP技术进行了茶树低温胁迫处理的基因表达差异分析,获得低温诱导后特异表达的差异片段TDF11(transcript derived fragment,TDF)。经BLAST比对发现该片段与白菜、拟南芥、烟草的抗寒基因CBF(C-repeat binding factor)分别有94%、84%、81%的同源性。通过3’/5’RACE的方法获得该片段cDNA全长序列(GenBank,登录号EU857638)。所得序列全长981bp,其开放阅读框编码275个氨基酸。该基因与白菜、烟草、拟南芥中的CBF基因编码的氨基酸序列分别有74%、57%、57%的同源性。用RT-PCR的方法对其在低温处理过程中的表达进行分析,结果表明,茶树CBF基因在低温诱导4h开始表达,在8h左右表达量最高,然后开始下降,但仍维持在一个较高的水平。结果提示CBF基因可能在茶树抗寒分子机制的形成过程中发挥重要的作用。 展开更多
关键词 茶树 CBF基因 克隆 表达分析
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西伯利亚蓼甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因的cDNA克隆与序列分析 被引量：20
14
作者 李晓泽 刘关君 杨传平 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期41-48,共8页
根据NaHCO3胁迫下西伯利亚蓼茎部消减库中甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(GAPDH)表达序列标签序列设计引物,采用cDNA末端快速扩增技术,从西伯利亚蓼茎中扩增出GAPDH的全长cDNA序列。该cDNA序列全长1331bp,完整阅读框1014bp,编码337个氨基酸。... 根据NaHCO3胁迫下西伯利亚蓼茎部消减库中甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(GAPDH)表达序列标签序列设计引物,采用cDNA末端快速扩增技术,从西伯利亚蓼茎中扩增出GAPDH的全长cDNA序列。该cDNA序列全长1331bp,完整阅读框1014bp,编码337个氨基酸。属于稳定蛋白,具有GAPDH保守功能域。氨基酸组成与其他已知高等植物来自细胞质中的GAPDH基因cDNA序列具有很高的同源性,最高可以达到96%。通过转酿酒酵母INVSC1的NaHCO3和NaCl胁迫试验表明,转基因INVSC1(pYES2-GAPDH)有明显的抗盐胁迫特性。在10%NaHCO3和4mol·L-1 NaCl胁迫下,转基因INVSC1(pYES2-GAPDH)菌株存活率明显比INVSC1(pYES2)高,可以推测GAPDH基因赋予INVSC1(pYES2-GAPDH)抗NaHCO3和NaCl的能力。该基因的cDNA序列在GenBank中登录号为DQ922680。 展开更多
关键词 西伯利亚蓼 甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因 基因克隆 序列分析
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植物钾吸收转运基因的克隆与作物遗传改良 被引量：18
15
作者 汤利 施卫明 王校常 《植物营养与肥料学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期467-473,共7页
本文从分子水平对植物吸钾的生理机制、钾吸收转运基因的分离克隆、钾基因在植物生理中的作用及应用基因工程技术改良作物钾营养性状、培育钾高效品种等方面的研究进展作了较为系统的讨论。
关键词 钾 基因克隆 遗传改良 植物 钾吸收
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野生大豆S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的克隆及功能分析 被引量：22
16
作者 樊金萍 柏锡 +4 位作者 李勇 纪巍 王希 才华 朱延明 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1581-1587,共7页
干旱、盐碱和低温等非生物逆境是危害作物诸多因素中最为严重的自然灾害,它可以使作物减产,甚至死亡。目前通过生物技术手段获得可利用的抗性基因是提高植物抗性的重要途径。东北野生大豆具有丰富的基因资源,是基因克隆的理想材料。从低... 干旱、盐碱和低温等非生物逆境是危害作物诸多因素中最为严重的自然灾害,它可以使作物减产,甚至死亡。目前通过生物技术手段获得可利用的抗性基因是提高植物抗性的重要途径。东北野生大豆具有丰富的基因资源,是基因克隆的理想材料。从低温(4℃)、干旱(30%PEG)及盐胁迫(200mmolL-1NaCl)处理的东北野生大豆幼苗叶片中提取总RNA,经反转录合成cDNA第一链,并以此链为模板,从已构建的盐胁迫全长cDNA文库和东北野生大豆盐胁迫EST数据库中筛选出与渗透胁迫直接相关的EST序列,根据该序列设计一对PCR引物扩增S-腺苷甲硫氨酸(SAM)合成酶基因的全长序列,经Blast比较分析,确定所获得的SAMS基因全长序列。构建以pBI121为基础的CaMV35S启动子调控的植物表达载体;利用农杆菌介导法将其导入烟草,获得了180株转基因烟草,并进行了低温、干旱和盐胁迫处理,通过测定在不同胁迫处理下的生理指标,分析了基因的功能。野生大豆的SAMS基因在烟草中的超量表达提高了转基因烟草的抗低温、干旱和耐盐能力。 展开更多
关键词 野生大豆 SAM合成酶 基因克隆 功能分析
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佛手GRAS基因的克隆及表达分析 被引量：26
17
作者 石瑞 曹诣斌 +1 位作者 陈文荣 郭卫东 《浙江师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2011年第4期446-451,共6页
利用抑制消减杂交法从芸香科柑橘属不耐寒植物佛手中分离得到了一个表达序列标签(EST)片段,结合RACE技术克隆获得该基因的1 669 bp序列,编码区长1 236 bp,编码413个氨基酸.通过Blastn同源序列比对分析,结果显示该基因与拟南芥已知的GRA... 利用抑制消减杂交法从芸香科柑橘属不耐寒植物佛手中分离得到了一个表达序列标签(EST)片段,结合RACE技术克隆获得该基因的1 669 bp序列,编码区长1 236 bp,编码413个氨基酸.通过Blastn同源序列比对分析,结果显示该基因与拟南芥已知的GRAS基因同源性较高;与GenBank数据库比对分析,表明该基因具有GRAS特有的保守结构域.因此,命名该基因为:CmsGRAS(GenBank登录号:JF440647).用荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)的方法研究了该基因在低温胁迫处理下的表达特性,结果显示该基因在低温胁迫后的表达量有明显的变化. 展开更多
关键词 佛手 GRAS基因 克隆 低温 表达分析
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表达猪流行性腹泻病毒COE基因的重组乳酸菌的构建与鉴定 被引量：25
18
作者 董丽娜 高凤山 +2 位作者 许崇波 胡桂学 姜海龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1743-1747,共5页
用疑似患猪流行性腹泻病(PED)的病猪肠病料,根据猪流行性腹泻病毒(PEDV)S糖蛋白基因设计引物进行RT-PCR扩增,获得531 bp的PEDV部分保护性抗原基因,将其克隆入pMD18-T载体后测序,核苷酸序列与PEDV CV777株相应序列的同源性为99.4%。根据... 用疑似患猪流行性腹泻病(PED)的病猪肠病料,根据猪流行性腹泻病毒(PEDV)S糖蛋白基因设计引物进行RT-PCR扩增,获得531 bp的PEDV部分保护性抗原基因,将其克隆入pMD18-T载体后测序,核苷酸序列与PEDV CV777株相应序列的同源性为99.4%。根据测序结果和表达载体特点,设计一对引物,扩增PEDV部分保护性抗原基因(COE基因)501 bp片段。将COE基因与乳酸乳球菌表面表达载体pNZ8149进行连接,电击转化入食品级乳酸乳球菌NZ3900细胞。重组菌以1 ng/mL乳链菌肽(Nisin)诱导,通过SDS-PAGE和Western blot分析,PEDV部分S蛋白成功表达,并具有反应原性。间接免疫荧光试验表明,重组菌表达蛋白定位于菌体细胞表面。 展开更多
关键词 PEDV COE基因 克隆 乳酸乳球菌 表达
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纳豆激酶原的基因克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：16
19
作者 刘北域 官孝群 宋后燕 《上海医科大学学报》 CSCD 1999年第6期401-404,共4页
目的　构建纳豆激酶原基因克隆 ,实现其在大肠杆菌中的表达。方法　从纳豆芽胞杆菌中分离纯化基因组DNA ,作为模板通过PCR扩增纳豆激酶原基因。运用重组DNA技术 ,构建表达质粒pESX 1,转化大肠杆菌JF112 5 ,温度诱导表达目的蛋白。结果... 目的　构建纳豆激酶原基因克隆 ,实现其在大肠杆菌中的表达。方法　从纳豆芽胞杆菌中分离纯化基因组DNA ,作为模板通过PCR扩增纳豆激酶原基因。运用重组DNA技术 ,构建表达质粒pESX 1,转化大肠杆菌JF112 5 ,温度诱导表达目的蛋白。结果　琼脂糖凝胶电脉及核苷酸序列分析证实 pESX 1为含纳豆激酶原基因的阳性克隆。在大肠杆菌中表达纳豆激酶原 ,经自体加工产生具有纤溶活性的纳豆激酶。结论　成功地构建了纳豆激酶原基因克隆 ,实现了在大肠杆菌中的表达。 展开更多
关键词 纳豆激酶原 基因克隆 大肠杆菌 基因表达
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白斑综合症病毒(WSSV)囊膜蛋白VP28基因的克隆及在蓝藻中表达载体的构建 被引量：14
20
作者 张春莉 施定基 +2 位作者 黄倢 张海霞 彭国宏 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期72-76,共5页
用蔗糖密度梯度离心法分离纯化白斑综合症病毒(WSSV)。设计并合成引物 ,提取WSSV中国株的基因组DNA作为模板 ,通过PCR ,扩增克隆出VP28基因 ,利用BamHI和EcoRI切点将VP28基因插入克隆载体 pUC19的多克隆位点上 ,得到VP28基因的重组克隆... 用蔗糖密度梯度离心法分离纯化白斑综合症病毒(WSSV)。设计并合成引物 ,提取WSSV中国株的基因组DNA作为模板 ,通过PCR ,扩增克隆出VP28基因 ,利用BamHI和EcoRI切点将VP28基因插入克隆载体 pUC19的多克隆位点上 ,得到VP28基因的重组克隆质粒,对其进行双向DNA测序。测序结果表明,该基因含有615个核苷酸 ,与GenBank中已有不同来源的WSSV的序列片段同源性为100 %。利用BamHI切点将VP28的基因插入到穿梭表达载体启动子PpsbA的下游 ,EcoRI酶切鉴定 ,得到正向连接的可在蓝藻表达的重组穿梭表达载体 ,命名为 pRL VP28。 展开更多
关键词 白斑综合症病毒 囊膜蛋白VP28 蓝藻 表达载体 构建 对虾 基因克隆
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