建立新型的常见腹泻相关病毒的多重检测方法 被引量：8

1

作者 刘艳 徐子乾 +9 位作者 李金松 靳淼 程卫霞 巩勋 李慧莹 杨晚竹 杨梦婕 胡秀梅 马学军 段招军 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期288-293,共6页

利用GenomeLab(tm)GeXP遗传分析系统建立一种同时检测A组轮状病毒、诺如病毒GI、GII型、札如病毒、肠道腺病毒、星状病毒、人博卡病毒II型7种常见腹泻相关病毒的方法。对反应条件进行优化后,非同日三次重复实验表明至少在104拷贝/μL水... 利用GenomeLab(tm)GeXP遗传分析系统建立一种同时检测A组轮状病毒、诺如病毒GI、GII型、札如病毒、肠道腺病毒、星状病毒、人博卡病毒II型7种常见腹泻相关病毒的方法。对反应条件进行优化后,非同日三次重复实验表明至少在104拷贝/μL水平可同时特异地检测出7种病毒,对Enterovirus71、Human Parechovirus、Picobir-navirusII阳性标本无交叉反应。本研究初步建立了一种高通量、快速的常见腹泻相关病毒的检测方法,为腹泻病原的分子诊断提供了新的方法。 展开更多

关键词 多重RT-PCR 病毒性腹泻 gexp SYSTEM 分子鉴别诊断

原文传递

毛白杨纤维素合酶基因家族部分成员的克隆及表达 被引量：5

2

作者 陈亚娟 王宏芝 +3 位作者 李瑞芬 张中保 崔莉洁 魏建华 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第10期70-75,共6页

从毛白杨中分离7个纤维素合酶基因,分别为PtoCesA4,PtoCesA5,PtoCesA7,PtoCesA8,PtoCesA13,PtoCesA17和PtoCesA18,通过与已公布的毛果杨全基因序列及拟南芥和水稻基因组中纤维素合酶基因序列的同源性比对分析,结合目前纤维素合成机制的... 从毛白杨中分离7个纤维素合酶基因,分别为PtoCesA4,PtoCesA5,PtoCesA7,PtoCesA8,PtoCesA13,PtoCesA17和PtoCesA18,通过与已公布的毛果杨全基因序列及拟南芥和水稻基因组中纤维素合酶基因序列的同源性比对分析,结合目前纤维素合成机制的研究进展,预测毛白杨中上述不同纤维素合酶的功能。利用GenomeLabTMGeXP遗传分析系统分析毛白杨中纤维素合酶基因在不同组织中的转录表达水平,结果表明PtoCesA4,PtoCesA7,PtoCesA8,PtoCesA17和PtoCesA18在木质部高丰度表达,推测这些基因可能参与毛白杨次生细胞壁的形成,为毛白杨次生细胞壁中纤维素的合成调控提供参考依据。 展开更多

关键词 毛白杨 纤维素合酶 gexp 基因表达

下载PDF 职称材料

同时鉴别诊断H7亚型和5种NA亚型禽流感病毒GeXP检测方法的建立

3

作者 罗思思 谢芝勋 +8 位作者 李孟 李丹 谢丽基 王盛 张民秀 黄娇玲 谢志勤 曾婷婷 张艳芳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期670-677,共8页

目的旨在建立同时鉴别诊断H7亚型及其5种NA亚型(N2、N3、N4、N7和N9)AIV的检测方法。方法针对H7亚型HA基因、5种NA亚型NA基因和所有亚型AIV M基因的保守序列,分别设计了6对亚型特异性引物和1对AIV亚型通用检测引物,利用GeXP多基因表达... 目的旨在建立同时鉴别诊断H7亚型及其5种NA亚型(N2、N3、N4、N7和N9)AIV的检测方法。方法针对H7亚型HA基因、5种NA亚型NA基因和所有亚型AIV M基因的保守序列,分别设计了6对亚型特异性引物和1对AIV亚型通用检测引物,利用GeXP多基因表达和毛细管电泳分析技术,建立同时检测H7亚型和5种NA亚型AIV的GeXP高通量分型鉴别诊断方法,对其进行特异性、敏感性和临床样品检测。结果特异性结果显示该法单管可同时检测H7、N2、N3、N4、N7和N9亚型AIV,均能检出对应的亚型AIV,通用检测引物检出所有亚型AIV,与其它常见禽病病原体不存在交叉反应。敏感性结果显示该法对7种AIV目的基因(含H7、N2、N3、N4、N7、N9基因)浓度均为100拷贝/μL时,仍可同时检测出。该法对150份临床样品的检测结果与病毒分离鉴定一致。结论本研究建立的同时鉴别诊断H7亚型和5种亚型AIV GeXP高通量检测方法具有特异性强、敏感性高、快速和简便等优点,为防控AIV提供新型检测方法。 展开更多

关键词 H7亚型 NA亚型 禽流感病毒 gexp 高通量

下载PDF 职称材料

九种鸡呼吸道病病原体GeXP检测方法的建立 被引量：4

4

作者 罗思思 谢芝勋 +5 位作者 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 谢丽基 范晴 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1040-1046,共7页

本研究旨在建立一种能同时检测(H5、H7、H9)亚型禽流感病毒、传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、传染性喉气管炎病毒、鸡毒支原体、滑液囊支原体和副鸡嗜血杆菌共9种鸡呼吸道传染病病原体的GeXP高通量检测方法。根据GenBank中这9种病原... 本研究旨在建立一种能同时检测(H5、H7、H9)亚型禽流感病毒、传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、传染性喉气管炎病毒、鸡毒支原体、滑液囊支原体和副鸡嗜血杆菌共9种鸡呼吸道传染病病原体的GeXP高通量检测方法。根据GenBank中这9种病原体的基因保守序列,设计了10对特异性引物。用所建立的GeXP多重PCR方法对单一、混合病原体进行检测,验证多重反应体系的特异性和准确性,以含靶基因的质粒来检测多重反应体系的灵敏度,并对38份阳性样品进行检测。该法能特异性检出9种鸡呼吸道病病原体,并可在1×102 copies/μL水平同时特异地检测出9种病原体,38份阳性样品的检测结果与实际相符。本研究建立的同时鉴别9种鸡呼吸道病原体的GeXP检测方法具有高通量、特异性强、灵敏度高的特点,为同时鉴别这9种临床症状相似的疾病提供了新型检测方法。 展开更多

关键词 鸡呼吸道病 gexp 多重PCR 毛细管电泳

原文传递

同时监测8种牛常见病原体的GeXP高通量快速检测技术 被引量：3

5

作者 范晴 谢芝勋 +10 位作者 谢志勤 谢丽基 黄莉 黄娇玲 张艳芳 曾婷婷 王盛 罗思思 邓显文 刘加波 庞耀珊 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1920-1931,共12页

本研究旨在建立一种可同时检测8种常见牛传染病病原体(口蹄疫病毒、蓝舌病病毒、水疱性口炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、产肠毒大肠杆菌、牛传染性鼻气管炎病毒和小反刍兽疫病毒)的GeXP高通量快速检测方法。将多重PCR技术和毛... 本研究旨在建立一种可同时检测8种常见牛传染病病原体(口蹄疫病毒、蓝舌病病毒、水疱性口炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、产肠毒大肠杆菌、牛传染性鼻气管炎病毒和小反刍兽疫病毒)的GeXP高通量快速检测方法。将多重PCR技术和毛细管电泳技术有效地结合,根据上述8种病原体的基因保守序列,设计并合成了8对特异性引物,在每对特异性引物的5′端加上一段通用引物,形成特异性嵌合引物。优化反应体系和反应条件,用单一病毒和混合病毒样品来验证所建立的GeXP方法的特异性,用克隆质粒稀释液来测试GeXP方法的灵敏度,检测305份临床样品,进一步验证该方法的可靠性。结果:优化后的GeXP检测体系,可扩增出各病原体对应的特异片段,能在100拷贝·μL^(-1)水平同时并特异地检测出8种牛病病原体核酸。305份临床样品的检测结果与荧光PCR检测结果一致,阳性样品测序结果表明无非特异性扩增的假阳性。结果显示,所建立的GeXP方法具有高通量、特异性好、灵敏度高、方便快速等优点,可用于临床鉴别诊断和流行病学调查,具有较高的临床应用价值。 展开更多

关键词 牛传染病 gexp 高通量检测

下载PDF 职称材料

7种猪场常见高致死病原GeXP检测方法的建立 被引量：2

6

作者 王秋实 李江凌 +1 位作者 赵素君 刘锐 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第5期1283-1289,共7页

本研究旨在建立能同时检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、坏死梭杆菌(Fn)和副猪嗜血杆菌(Hps)7种猪场常见高致死性流行病原的多重PCR检测方法。利用7种病... 本研究旨在建立能同时检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、坏死梭杆菌(Fn)和副猪嗜血杆菌(Hps)7种猪场常见高致死性流行病原的多重PCR检测方法。利用7种病原体的保守序列设计7对特异性引物,同时合成了Cy-5标记的通用引物。将通用引物分别连接到特异性引物的5′端形成7对特异性嵌合引物。优化反应条件,分别使用7组嵌合引物和通用引物混合,扩增7种病原的混合cDNA/DNA,验证其单重PCR的特异性。利用GeXP多重基因表达遗传分析系统,混合7种嵌合引物和通用引物,扩增单一病原的cDNA/DNA,验证其多重PCR特异性;将其他常见猪病病原的基因组作为干扰的阳性标本,利用7对混合嵌合引物和通用引物进行多重PCR分析,扩增加入了阳性标本的混合模板,验证其多重PCR的抗干扰能力。利用重组质粒和体外转录的RNA进行梯度稀释,确定GeXP多重检测体系的灵敏度。结果表明,7种不同引物分别进行GeXP单重及多重检测,均能检测出特异性目的片段的信号,无明显的干扰片段信号出现;GeXP多重检测抗干扰试验结果显示,在混入3种干扰病原模板后,依然可同时特异性检测出7种病原;GeXP多重检测灵敏度分析显示,在10~3拷贝/μL浓度条件下能检测到7种不同基因的特异性结果。本研究建立的同时检测7种猪场常见高致死性流行病原的GeXP检测方法具有高通量、高特异性和高灵敏度的特点,为快速诊断猪流行性疾病的交叉感染和混合感染提供了新型的检测方法。 展开更多

关键词 高致死疾病 流行病原 gexp 特异性嵌合引物 多重PCR

下载PDF 职称材料

7种假丝酵母菌耐药相关基因GeXP检测方法的建立 被引量：3

7

作者 吴金燕 易国辉 +4 位作者 周利民 黄宪希 薛丽 薛伟玲 郭虹 《海南医学院学报》 CAS 2014年第11期1477-1481,共5页

目的:利用GeXP多重基因表达遗传分析系统,建立一种可同时检测7种假丝酵母菌耐药相关基因RNA表达水平的方法。方法:设计7种(MDR1、FlU1、CDR1、CDR2、ADH1、ERG3、ERG11)已知与白假丝酵母耐药相关基因的特异性引物及假丝酵母ITS基因参照... 目的:利用GeXP多重基因表达遗传分析系统,建立一种可同时检测7种假丝酵母菌耐药相关基因RNA表达水平的方法。方法:设计7种(MDR1、FlU1、CDR1、CDR2、ADH1、ERG3、ERG11)已知与白假丝酵母耐药相关基因的特异性引物及假丝酵母ITS基因参照引物,优化多重反应体系及反应条件,用热带假丝酵母标准株来验证多重反应体系的特异性,通过比较标准株和临床敏感株,剂量依赖株及耐药株各基因表达峰图,分析不同菌株各基因表达差异。结果:经过优化反应条件,可同时扩增出假丝酵母耐药相关的7种基因特异片段,耐药株和剂量依赖株的ERG11、CDR2、CDR1、MDR1和ERG3基因的相对表达量与敏感株相比均有不同程度的增高。结论:建立了多重基因表达检测体系,GeXP多重基因表达检测方法具有高通量、特异性强、灵敏度高和快速等优点。 展开更多

关键词 多重基因表达 假丝酵母菌 耐药基因

下载PDF 职称材料

一种新型多重PCR技术在肿瘤研究中的应用 被引量：3

8

作者 张寒 郑胡镛 《转化医学研究（电子版）》 2014年第3期48-57,共10页

多重基因表达遗传分析系统(GenomeLab gene expression profiler genetic analysis system,GeXP)是一种全新的基因表达谱定量分析平台。它能够在同一反应中对多至35个基因进行定量检测和分析,并将通用引物与特异引物相结合。它采用荧光... 多重基因表达遗传分析系统(GenomeLab gene expression profiler genetic analysis system,GeXP)是一种全新的基因表达谱定量分析平台。它能够在同一反应中对多至35个基因进行定量检测和分析,并将通用引物与特异引物相结合。它采用荧光毛细电泳分离技术对多重PCR产物进行定量检测和分析。本文重点综述了多重基因表达遗传分析系统的技术原理及其在肿瘤研究中的应用。 展开更多

关键词 多重基因表达遗传分析系统 多重基因表达 肿瘤标志物

下载PDF 职称材料

GeXP系统在恶性疟耐青蒿素基因K13SNP检测中的应用

9

作者 石莹 樊学军 +1 位作者 田绿波 龙娟 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2020年第3期249-252,258,共5页

目的探讨GeXP系统在恶性疟耐青蒿素基因K13SNP检测中的应用价值。方法根据4种SNP的序列特征制备标准品质粒。收集2016-2018年出入境人群中检出的28例临床标本,利用GenBank下载4种SNP的核苷酸序列,利用GeXPexpressProfiler设计特异性引物... 目的探讨GeXP系统在恶性疟耐青蒿素基因K13SNP检测中的应用价值。方法根据4种SNP的序列特征制备标准品质粒。收集2016-2018年出入境人群中检出的28例临床标本,利用GenBank下载4种SNP的核苷酸序列,利用GeXPexpressProfiler设计特异性引物,优化条件采用GeXP系统结合多重PCR检测对应SNP及28份临床标本。结果优化的引物能特异性检测4种K13SNP位点,无交叉反应,灵敏度为100%,特异性为99.81%,检测效能为99.15%,检出限为5×103copies/μl,应用于临床标本检测,结果与测序法的一致性为99.32%。结论GeXP方法检测恶性疟耐青蒿素基因4种K13SNP位点快速、准确可用于输入性恶性疟的检测。 展开更多

关键词 恶性疟 耐青蒿素 K13 gexp 多重PCR

原文传递

GeXP联合多重PCR系统在腹泻病毒检测中的应用

10

作者 石莹 陈肖潇 +3 位作者 樊学军 田绿波 杨雨 张薇薇 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2016年第3期319-323,共5页

目的 利用GeXP系统结合多重PCR技术，建立诺如病毒（GI和GII组）、轮状病毒、星状病毒的方法。方法根据4种病毒的序列特征，制备病毒标准品质粒，收集病原体样本，利用GenBank下载4种病毒的核苷酸序列，根据4种病毒的序列特征，利用GeXP... 目的 利用GeXP系统结合多重PCR技术，建立诺如病毒（GI和GII组）、轮状病毒、星状病毒的方法。方法根据4种病毒的序列特征，制备病毒标准品质粒，收集病原体样本，利用GenBank下载4种病毒的核苷酸序列，根据4种病毒的序列特征，利用GeXPexpressProfiler设计特异性引物，优化条件使GeXP系统能够特异性、快速的检测对应病毒。评价其灵敏度、特异性及功效，并应用于120份临床标本检测。结果优化后的引物能特异性的检测各病毒，无交叉反应；灵敏度为100％，特异性为99．53％，功效为99．62％，与荧光定量PCR检测结果一致性为99．51％，检测浓度最低至5×10^3／μl拷贝，在已知临床样本灵敏度高、特异性好。结论GeXP方法的建立为快速、准确的检测这4种腹泻病毒提供了便利，对口岸突发群体性腹泻的病原体检出有重要意义。 展开更多

关键词 腹泻病毒 gexp 多重PCR

原文传递

7种食源性致病菌GeXP多重PCR检测方法的建立及其应用 被引量：2

11

作者 张艳芳 谢芝勋 +7 位作者 曾婷婷 刘加波 谢丽基 邓显文 谢志勤 罗思思 黄娇玲 王盛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期2536-2546,共11页

本研究旨在建立一种能够同时鉴别包括大肠杆菌O157:H7、沙门菌、空肠弯曲菌、单核细胞增生李斯特菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌7种常见食源性致病菌的GeXP多重PCR检测方法。根据这些致病菌在GenBank上公布的保守基因序列,... 本研究旨在建立一种能够同时鉴别包括大肠杆菌O157:H7、沙门菌、空肠弯曲菌、单核细胞增生李斯特菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌7种常见食源性致病菌的GeXP多重PCR检测方法。根据这些致病菌在GenBank上公布的保守基因序列,设计合成了7对特异性GeXP引物。用单一或混合细菌样品的DNA模板优化反应条件,设置对照组,构建重组质粒,随机组合不同浓度的样品,验证所建立的GeXP方法的特异性、敏感性和准确性。最后用该方法检测120份临床样品,进一步验证所建立的GeXP检测方法的准确性和可靠性。结果显示,单一或混合模板的GeXP检测均能特异性出现相应清晰峰值,可在10~3拷贝·μL^-1水平上同时特异地检测出7种细菌病原体,不同浓度模板混合时,本试验所建立的方法依然可检测出对应病原体。检测120份临床样品,GeXP多重PCR阳性率为2.50%(3/120)~15.83%(19/120),普通PCR阳性率为2.50%(3/120)~15.00%(18/120),GeXP多重PCR多检出8份阳性,表明GeXP方法更为敏感与准确。本研究建立的同时鉴别7种食源性致病菌的GeXP多重PCR检测方法,具有高通量、特异性强和敏感性高的特点,为食源性常见致病菌感染或混合感染提供了快速分子诊断方法。 展开更多

关键词 食源性致病菌 gexp 多重PCR 特异性嵌合引物

下载PDF 职称材料

GeXP多重PCR技术同时检测12种常见呼吸道病毒 被引量：33

12

作者 李瑾 毛乃颖 +6 位作者 秦萌 胡秀梅 杨梦婕 王淼 张晨 许文波 马学军 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期526-532,共7页

本研究建立了一种基于GeXP多重基因表达遗传分析系统的多重RT—PCR检测方法，该方法可以同时检测12种呼吸道病毒，包括流感病毒A型和B型、季节性H1N1、副流感病毒1～3型、人鼻病毒、人偏肺病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒A型和B型、人博... 本研究建立了一种基于GeXP多重基因表达遗传分析系统的多重RT—PCR检测方法，该方法可以同时检测12种呼吸道病毒，包括流感病毒A型和B型、季节性H1N1、副流感病毒1～3型、人鼻病毒、人偏肺病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒A型和B型、人博卡病毒。针对病原体保守区序列设计12种病毒的特异性引物，分别用已验证的阳性标本为模板检验多重体系的特异性。多重检测体系在10^3拷贝／μL水平可同时检测到12种病毒。另检测24份临床标本，以realtime RT—PCR为参考标准，进一步验证检测体系。结果表明，这种基于GeXP系统的新方法灵敏度高、特异性强，可以快速同时检测12种常见呼吸道病毒。 展开更多

关键词 gexp系统 呼吸道病毒 多重RT—PCR

原文传递

8种脑炎相关虫媒病毒GeXP检测方法的初步建立 被引量：16

13

作者 何玢 王环宇 +4 位作者 张晨 王淼 秦萌 王克霞 马学军 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期57-62,共6页

利用GeXP多重基因表达遗传分析系统,建立一种多重逆转录-聚合酶链反应(mRT-PCR)方法,同时检测与病毒性脑炎相关的乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)等8种虫媒病毒。优化多重反应体系及反应条件,分别以病毒分离培养物和阳... 利用GeXP多重基因表达遗传分析系统,建立一种多重逆转录-聚合酶链反应(mRT-PCR)方法,同时检测与病毒性脑炎相关的乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)等8种虫媒病毒。优化多重反应体系及反应条件,分别以病毒分离培养物和阳性标本来验证多重反应体系的特异性,以克隆质粒体外转录的RNA梯度稀释液来检测多重检测体系的灵敏度。结果表明,优化后的多重检测体系,可扩增出各病毒对应的特异片段,并可在102拷贝/μL水平同时并特异地检测出8种(共13个特异片段)脑炎相关病毒RNA。该方法具有高通量、灵敏度高、特异性强且快速等优点,对病毒性脑炎的分子诊断及流行病学调查具有重要意义。 展开更多

关键词 gexp系统 病毒性脑炎 多重RT-PCR

原文传递

GeXP多重基因表达遗传分析系统在手足口病病原分型检测中的应用 被引量：16

14

作者 胡秀梅 张勇 +8 位作者 徐邦牢 杨梦婕 王淼 张晨 李瑾 白如银 周小棉 许文波 马学军 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期331-336,共6页

利用GeXP多重基因表达遗传分析系统,建立一种多重逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,同时检测引起手足口病的9种常见的人肠道病毒—人肠道病毒71型(HEV71)、柯萨奇病毒A组(CVA)16、4、5、9、10型和柯萨奇病毒B组(CVB)1、3、5型。优化多... 利用GeXP多重基因表达遗传分析系统,建立一种多重逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,同时检测引起手足口病的9种常见的人肠道病毒—人肠道病毒71型(HEV71)、柯萨奇病毒A组(CVA)16、4、5、9、10型和柯萨奇病毒B组(CVB)1、3、5型。优化多重反应体系中针对5'UTR区的肠道病毒通用引物和11对针对9种血清型人肠道病毒VP1区的特异性引物的浓度比例,分别以病毒细胞培养物和阳性粪便标本来验证多重反应体系的特异性,以TCID50定量的细胞培养物和克隆质粒体外转录的RNA梯度稀释液来检测多重检测体系的灵敏度。结果表明,优化后的多重检测体系,可扩增出人肠道病毒共有的保守片段的和型特异性片段,HEV71和CVA16细胞培养物的检测下限为100.5TCID50/μL,并可在103copies/μL水平同时、特异地检测出9种病毒RNA。该方法灵敏度高、特异性强,可快速对大量临床样本进行高通量检测,用于手足口病的分子流行病学调查。 展开更多

关键词 gexp系统 手足口病 多重RT-PCR

原文传递

8种猪呼吸道和繁殖障碍病病原体GeXP检测方法的建立 被引量：13

15

作者 张民秀 谢芝勋 +4 位作者 邓显文 谢志勤 谢丽基 黄莉 黄娇玲 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第24期4996-5006,共11页

【目的】建立了一种同时鉴别H1、H3亚型猪流感、猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪瘟、猪日本乙型脑炎、猪圆环病毒病、猪细小病毒病和猪伪狂犬病8种病毒性呼吸道和繁殖障碍病病原体的GeXP高通量检测方法。【方法】根据这8种病原体的基因保守... 【目的】建立了一种同时鉴别H1、H3亚型猪流感、猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪瘟、猪日本乙型脑炎、猪圆环病毒病、猪细小病毒病和猪伪狂犬病8种病毒性呼吸道和繁殖障碍病病原体的GeXP高通量检测方法。【方法】根据这8种病原体的基因保守序列,设计并合成了9对特异性引物,在每对特异性引物的5＇端均加上一段通用引物,形成特异性嵌合引物。运用GeXP单重PCR方法,以单一病毒cDNA/DNA为模板验证引物的可行性;建立GeXP多重PCR方法,以单一病毒cDNA/DNA模板、阳性cDNA/DNA混合模板验证GeXP多重检测体系的特异性和准确性;将含猪圆环病毒、猪细小病毒和猪伪狂犬病病毒靶基因的克隆质粒及体外转录的RNA（H1、H3亚型猪流感、猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪瘟、猪日本乙型脑炎）分别梯度稀释为10^3,10^2,10^1拷贝/μl,运用GeXP多重PCR方法进行单一病原体灵敏度分析;根据单一病原体的灵敏度分析结果,优化各对特异性嵌合引物的工作浓度,将含有体外转录好的6种RNA模板和3种克隆质粒等量混合,将混合物梯度稀释为10^4,10^3,10^2,10^1拷贝/μl,运用GeXP多重PCR方法分析同时检测8种病原体的灵敏度。运用建立好的GeXP多重检测体系对23份临床样品进行检测,并与常规单重PCR进行比较,对该GeXP多重检测体系的临床应用进行评价。【结果】基于GeXP系统的单重PCR检测体系和GeXP多重PCR检测体系均能扩增出特异性片段,验证了引物的可行性、GeXP多重检测体系的特异性和准确性;GeXP多重检测体系的单一病原模板灵敏度分析结果显示,多重检测体系对单一病原体检测的下限均为10-1拷贝/μl;GeXP多重检测体系在8种病原体同时检测的灵敏度分析结果显示,多重检测体系可在10^3拷贝/μl水平可同时检测到8种病原体;比较GeXP多重PCR检测方法和常规PCR方法对临床样品的检测结果,两种检测方法的检测结� 展开更多

关键词 猪呼吸道和繁殖障碍传染病 GENOME Lab基因表达平台(gexp) 多重PCR 通用引物 特异性嵌合引物

下载PDF 职称材料

多重基因分析系统检测幽门螺杆菌的初步研究 被引量：9

16

作者 周丽芳 保志军 +4 位作者 缪应新 季大年 黄一沁 赵付菊 赵虎 《检验医学》 CAS 2014年第4期350-356,共7页

目的评估一种全新的幽门螺杆菌(HP)检测方法,即利用多重基因分析系统(GeXP系统)检测HP感染。方法分别用培养法、快速尿素酶法、普通聚合酶链反应(PCR)和多重基因检测法检测胃活检组织标本中的HP,用Stata 12.0统计软件评估各种方法的敏... 目的评估一种全新的幽门螺杆菌(HP)检测方法,即利用多重基因分析系统(GeXP系统)检测HP感染。方法分别用培养法、快速尿素酶法、普通聚合酶链反应(PCR)和多重基因检测法检测胃活检组织标本中的HP,用Stata 12.0统计软件评估各种方法的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值,从检测方法角度横向评估多重基因法检测HP的有效性;选取16S rRNA、ureA、ureC、26KDa、cagA基因作为HP的诊断基因并做多重基因检测,从多重基因检测角度纵向评估GeXP系统检测HP感染的有效性。结果培养法的敏感性为76.8%,特异性为100.0%,阳性预测值为100.0%,阴性预测值为57.7%;快速尿素酶法的敏感性为87.8%,特异性为80.8%,阳性预测值为93.5%,阴性预测值为67.7%;普通PCR的敏感性和特异性最高,均为100.0%。GeXP系统敏感性和特异性分别为100.0%和71.3%,阳性预测值为90.9%,阴性预测值为100.0%。结论初步建立的诊断HP感染的多重基因检测法(GeXP系统)具有高敏感性、高特异性以及高通量的特点,不仅可以满足临床标本检测的需求,还可以进行根除治疗后的预后监测,具有很高的临床应用价值。 展开更多

关键词 多重基因检测法 gexp系统 幽门螺杆菌 鉴定 基因 高通量

下载PDF 职称材料

外周血多参数基因诊断模型对于原发性肝细胞癌诊断价值的评价 被引量：8

17

作者 张朋军 田亚平 《标记免疫分析与临床》 CAS 2014年第5期499-502,共4页

目的建立一种基于外周血mRNA的原发性肝细胞癌多参数基因诊断模型。方法 GeXP法检测9个基因(GPC3、HGF、ANXA1、FOS、SPAG9、HSPA1B、CXCR4、PFN1和CALR)的含量。103例早期原发性肝癌患者和54例健康对照人群用于建立诊断模型。52例早期... 目的建立一种基于外周血mRNA的原发性肝细胞癌多参数基因诊断模型。方法 GeXP法检测9个基因(GPC3、HGF、ANXA1、FOS、SPAG9、HSPA1B、CXCR4、PFN1和CALR)的含量。103例早期原发性肝癌患者和54例健康对照人群用于建立诊断模型。52例早期原发性肝癌患者和34例健康对照人群用于验证模型。使用二元Logistic回归分析、判别分析、分类树和人工神经网络建立多参数基因诊断模型用于评价其诊断价值。受试者工作曲线、曲线下面积、敏感性和特异性用于诊断价值的评价。结果 9个基因的人工神经网络模型具有最好的诊断价值,其曲线下面积、敏感性和特异性分别为0.943,98%和85%。验证后,其敏感性和特异性分别为96%和86%。结论多参数基因诊断模型的诊断价值优于单一基因诊断价值,可以作为潜在的早期原发性肝癌辅助诊断方法。 展开更多

关键词 原发性肝细胞癌 外周血 多参数联合分析 受试者工作曲线 gexp技术

下载PDF 职称材料

GeXP多重分析技术检测肝癌组织长链非编码RNA表达的实验研究 被引量：8

18

作者 史俊英 王晔 +2 位作者 陈文 刘成玉 牟晓峰 《分子诊断与治疗杂志》 2018年第1期9-16,共8页

目的运用多重基因表达遗传分析系统(genomelab gene expression profiler,Ge XP),创建一种能同时检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织长链非编码RNA(long non-coding RNA,Lnc RNA)表达的一种多重逆转录-聚合酶链反应(revers... 目的运用多重基因表达遗传分析系统(genomelab gene expression profiler,Ge XP),创建一种能同时检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织长链非编码RNA(long non-coding RNA,Lnc RNA)表达的一种多重逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RTPCR)检测方法,为HCC的诊断及预后提供一定的方法学基础。方法检索并筛选Pubmed数据库中近10年发表的与HCC有关报道的8种Lnc RNAs,并分别设计特异性引物。首先验证引物及多重反应体系的特异性及灵敏性,经过系统优化后建立一种多重RT-PCR检测方法。另检测23对HCC肿瘤组织和癌旁非肿瘤组织标本,并用实时定量PCR技术(quantitative real-time PCR,q PCR)来验证检测体系并进行结果统计。结果优化后的Ge XP多重检测体系,特异性及灵敏性良好。另在23对HCC肿瘤组织及癌旁组织中检测到了这8种Lnc RNAs的差异表达:与癌旁组织相比,HCC组织中Lnc RNA NEAT1、H19、MALAT1、HOTAIR、DANCR、UCA1、BCAR4的表达显著下降(P均<0.05);肝癌组织中Lnc RNA GAS5的表达显著上升(P<0.05)。q PCR方法验证与Ge XP方法结果一致。结论应用Ge XP多重分析技术成功建立了一种于单管中同时检测HCC组织8种Lnc RNAs表达的检测方法,该方法有效、快捷、灵敏、特异,对HCC的诊断及预后具有启示作用并奠定了一定的方法学基础。 展开更多

关键词 gexp系统 多重RT—PCR qPCR LncRNA 肝细胞癌

下载PDF 职称材料

应用多重GeXP-PCR同时检测6种鸡免疫抑制病病毒的研究 被引量：8

19

作者 曾婷婷 谢芝勋 +5 位作者 谢丽基 邓显文 谢志勤 罗思思 黄莉 黄娇玲 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1198-1208,共11页

拟建立一种基于GeXP多基因表达分析系统的多重PCR方法,同时检测6种鸡免疫抑制病病毒——鸡马立克病毒、禽白血病病毒(包括A、B和J亚群)、禽网状内皮组织增生症病毒、禽呼肠孤病毒、鸡传染性贫血病毒和传染性法氏囊炎病毒。多重PCR反应... 拟建立一种基于GeXP多基因表达分析系统的多重PCR方法,同时检测6种鸡免疫抑制病病毒——鸡马立克病毒、禽白血病病毒(包括A、B和J亚群)、禽网状内皮组织增生症病毒、禽呼肠孤病毒、鸡传染性贫血病毒和传染性法氏囊炎病毒。多重PCR反应使用嵌合引物和通用引物组合的反应体系,经过GeXP多基因表达分析系统进行毛细管电泳,鉴别PCR产物片段;通过调整嵌合引物浓度、Mg^(2+)浓度、Taq酶浓度优化反应体系及调整退火温度和时间优化反应条件。应用建立的多重GeXP-PCR,分别单独和同时检测6种鸡免疫抑制病病毒的8个目的基因,同时以其他常见禽类病毒和鸡组织器官核酸为对照,验证其特异性;检测8个目的基因不同浓度的克隆质粒,验证其敏感性;应用建立的多重PCR检测300份临床样品,并同时用荧光定量PCR和测序验证其检测结果的准确性。结果表明建立的多重GeXP-PCR方法能够分别扩增出6种病毒,8个特异性目的片段,不能扩增其他常见禽类病毒和鸡组织器官的基因;在低至100copies·20μL^(-1)的水平能同时特异性地检测出6种鸡免疫抑制病病毒核酸;检测300份临床病死鸡样品,190份样品显示为阳性,PCR和测序结果与多重GeXP-PCR结果相符。本研究建立的多重GeXP-PCR方法可特异、敏感、高通量地检测6种鸡免疫抑制性病毒,可用于临床鉴别诊断和分子流行病学调查,具有很高的临床应用价值。 展开更多

关键词 gexp多基因表达分析系统 多重PCR 高通量 鸡免疫抑制病病毒

下载PDF 职称材料

肉及肉制品中6种致病菌的GeXP多重PCR检测 被引量：8

20

作者 杨梦婕 徐玲丽 +1 位作者 马学军 武桂珍 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2021年第13期168-173,共6页

利用多重基因表达(GenomeLabTM eXpress Profiling,GeXP)遗传分析系统建立一种可单管一次同时检测大肠杆菌O157∶H7、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特菌和沙门氏菌6种肉及肉制品中致病菌的多重聚合酶链式反... 利用多重基因表达(GenomeLabTM eXpress Profiling,GeXP)遗传分析系统建立一种可单管一次同时检测大肠杆菌O157∶H7、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特菌和沙门氏菌6种肉及肉制品中致病菌的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。评价此方法特异性和灵敏性,并初步应用于市场随机购买的肉类样品的检测。结果显示,该方法可在短时间内实现同时对上述6种致病菌进行检测,且检测灵敏度低至103 CFU/mL,为食源性致病菌高通量快速有效检测提供新的方法技术支持,具有较强的实际应用价值。 展开更多

关键词 食品安全 肉及肉制品 gexp多重聚合酶链式反应 致病菌 快速检测

下载PDF 职称材料