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知柏地黄汤通过调节ARE信号通路激活细胞抗氧化反应治疗阴虚火旺证的机制研究 被引量:9
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作者 吴平平 叶丽 +5 位作者 邵雅婕 赖亚辉 季巾君 丁滨 范永升 徐莉 《浙江中医药大学学报》 CAS 2020年第4期316-323,共8页
[目的]通过研究知柏地黄汤对细胞抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)信号通路的调节及其对大鼠血清代谢物的干预作用,探讨其治疗阴虚火旺证的可能机制。[方法]将人肝癌细胞系HepG2细胞分为对照组、知柏地黄汤低、中、高... [目的]通过研究知柏地黄汤对细胞抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)信号通路的调节及其对大鼠血清代谢物的干预作用,探讨其治疗阴虚火旺证的可能机制。[方法]将人肝癌细胞系HepG2细胞分为对照组、知柏地黄汤低、中、高浓度组,分别以0、1、20和100mg·mL-1的知柏地黄汤干预24h,通过双萤光素酶报告基因实验筛选知柏地黄汤显著调控的信号通路;荧光定量PCR检测所筛选通路相关基因的表达,并利用磷钼酸比色法及氧化酶法检测细胞内三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量、细胞耗氧率(oxygen consumption rate,OCR)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性的变化。45只SD大鼠随机分成3组,空白组以0.9%氯化钠溶液灌胃21d,干姜组先以10g·kg^-1干姜附子肉桂汤灌胃14d、再以0.9%氯化钠溶液灌胃7d,干知组先以10g·kg^-1干姜附子肉桂汤灌胃14d、再以知柏地黄汤灌胃7d,灌胃体积为10mL/(kg·d),以液相色谱-质谱联用(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)技术检测血清中代谢物的改变。[结果]双萤光素酶报告基因实验显示,知柏地黄汤对ARE元件调控最为显著,荧光定量PCR结果显示知柏地黄汤可以促进核因子红细胞2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)、小肌腱膜纤维肉瘤(musculoaponeurotic fibrosarcoma,Maf)的转录(P<0.001,P<0.05),同时抑制Kelch样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein1,Keap1)的转录(P<0.001)。与对照组比较,知柏地黄汤组细胞ATP含量(P<0.05)、OCR(P<0.001)及SOD活性(P<0.05)均升高。动物实验证实,知柏地黄汤灌胃治疗可以改善阴虚火旺模型大鼠胆碱、甘胆酸及棕榈酰左旋肉碱(palmitoyl-L-carnitine,PALC)的紊乱,其中胆碱及PALC含量差异有统计学意义(P<0.001)。[结论]知柏地黄汤能够通过ARE信号通路,抑制机体的氧化应激反应,进而改善阴虚火旺引起的代谢紊乱,这可能是知柏地黄汤治� 展开更多
关键词 知柏地黄汤 干姜附子肉桂汤 氧化应激 阴虚火旺证 ARE通路 代谢组学
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干姜附子肉桂汤诱导口腔溃疡的机制研究 被引量:6
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作者 季巾君 焦一凤 +4 位作者 陈仙英 吴平平 谢冠群 范永升 徐莉 《浙江中医药大学学报》 CAS 2018年第10期775-781,共7页
[目的]通过研究干姜附子肉桂汤诱导的大鼠口腔溃疡的机制,探讨热性药诱发上火的病理生理机制。[方法]将20只健康SD大鼠随机分为两组,分别为对照组和模型组,每组10只,其中对照组用0.9%氯化钠溶液0.1mL/(10g·d)灌胃,模型组用干姜附... [目的]通过研究干姜附子肉桂汤诱导的大鼠口腔溃疡的机制,探讨热性药诱发上火的病理生理机制。[方法]将20只健康SD大鼠随机分为两组,分别为对照组和模型组,每组10只,其中对照组用0.9%氯化钠溶液0.1mL/(10g·d)灌胃,模型组用干姜附子肉桂水煎剂0.1mL/(10g·d)灌胃,均为1次/d,连续给药21d后,腹腔主动脉取血行血常规检测,取两组大鼠的口腔黏膜组织,以HE染色检测口腔组织病理变化,免疫组化检测IgG和IgA表达差异,基因芯片技术检测相关基因表达的差异。[结果]血常规结果显示模型组大鼠的白细胞(white blood cell,WBC)总数、中性粒细胞(neutrophil,NEUT)、单核细胞(mononuclear cells,MONO)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophils-lymphocyte ratio,NLR)均升高,对照组无明显变化;HE染色结果显示与对照组比较,模型组大鼠口腔黏膜组织出现表皮脱落、炎性浸润,表明模型组的口腔黏膜损伤,造模成功;免疫组化显示模型组的口腔黏膜组织的IgG和IgA表达升高,提示口腔黏膜组织炎性反应增强。基因芯片结果显示,对照组与模型组相比,差异表达两倍以上的基因有463个,其中上调表达基因299个,参与主要通路有脂肪的消化与吸收、类固醇的生物合成,涉及的主要基因为二酯酰甘油酰基转移酶2(acyl CoA:diacylgycerol acyltransferase 2,DGAT2)、鞘磷脂沉积病C1样蛋白1(Niemann-Pick C1-like 1,NPC1L1)、脂肪酸羟化酶结构域蛋白2(fatty acid hydroxylase domain-containing protein 2,FAXDC2)、类固醇脱氢酶样蛋白(NAD/NADP dependent steroid dehydrogenase like protein,NSDHL)等;下降表达基因164个,参与主要通路为细胞外基质(extracellular matrix,ECM)受体相互作用和黏着斑通路,涉及的主要基因有软骨素(chondroadherin,CHAD)、Ⅺ型胶原α2(collagen typeⅪalpha-2,COL11A2)、肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor,TNR)、促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)、干扰素alpha 2(interferon 展开更多
关键词 干姜附子肉桂汤 口腔溃疡 上火 血常规 HE染色 免疫组化 基因芯片
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