RNA干扰在猪内皮细胞抵御补体介导的细胞毒中的作用 被引量：4

1

作者 朱珉 夏振雄 +6 位作者 王树森 曹荣华 祁洪刚 陈栋 刘斌 张伟杰 陈实 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第16期1133-1136,共4页

目的　评价RNA干扰(RNAi)是否能有效抵御补体介导的对猪内皮细胞的细胞毒作用。方法　将小分子干扰RNA(SiRNA)转染猪内皮细胞系PED,检测PED转染前后α1,3 半乳糖转移酶(α1,3 GT)mRNA及α- 半乳糖糖链(αGal)抗原表位的表达,并评价RNAi... 目的　评价RNA干扰(RNAi)是否能有效抵御补体介导的对猪内皮细胞的细胞毒作用。方法　将小分子干扰RNA(SiRNA)转染猪内皮细胞系PED,检测PED转染前后α1,3 半乳糖转移酶(α1,3 GT)mRNA及α- 半乳糖糖链(αGal)抗原表位的表达,并评价RNAi对补体介导的细胞毒的影响。结果　SiRNA 1/PED的α1,3 GT基因异构体(isoform)表达量与空转组(Mock)相比减少了70%(isoform1,69%;isoform2,72%)(P<0 05),但SiRNA 2/PED的α1,3 GT表达量与错配组及空转组相比差异无统计学意义(P>0. 05),流式细胞学检查显示,SiRNA 1/PED的αGal平均荧光强度(52 9)明显小于错配组(493 9,P<0 01)及空转组(505 7,P<0. 01)。标准4h51Cr释放实验中SiRNA 1/PED的细胞溶解率较空转组分别减少了70%(20%正常人血清组)和60%(40%正常人血清组)(P<0. 05)。结论　PED在转染SiRNA- 1后发生了基因沉默,猪内皮细胞可以成为RNAi作用的靶细胞。本研究为更深层次探讨RNAi在异种移植中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 RNA干扰 补体介导 流式细胞学检查 猪 半乳糖转移酶 RNAi 平均荧光强度 PED 细胞毒作用 内皮细胞系 SiRNA 抗原表位 gt基因 释放实验 基因沉默 异种移植 表达量 人血清 转染 小分子 异构体 统计学 Gal 溶解率 靶细胞 相比

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非胰岛素依赖性糖尿病与GT基因多态性关系的初步探讨 被引量：2

2

作者 王华 陈家伟 +3 位作者 沈捷 叶岷伟 柴建华 顾杨洪 《南京医学院学报》 CSCD 1993年第1期12-15,共4页

利用XbaⅠ限制性内切酶、墨迹杂交对24例正常人及35例NIDDM患者的白细胞基因组DNAGT基因进行了分析。结果显示了X_1 5.4kb、X_2 5.0kb 两个多态性的片段。统计学处理表明X_1、X_2等位基因频率及基因型频率在正常人及NIDDM 患者之间的分... 利用XbaⅠ限制性内切酶、墨迹杂交对24例正常人及35例NIDDM患者的白细胞基因组DNAGT基因进行了分析。结果显示了X_1 5.4kb、X_2 5.0kb 两个多态性的片段。统计学处理表明X_1、X_2等位基因频率及基因型频率在正常人及NIDDM 患者之间的分布无显著性差异,因而此多态性尚不能作为NIDDM 患者的遗传标志,提示GT 基因和NIDDM 之间可能没有关联。 展开更多

关键词 糖尿病 gt基因 多态性

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黑粒青稞HvtUF3GT基因的克隆与表达分析 被引量：7

3

作者 苏乐平 姚晓华 +2 位作者 安立昆 吴昆仑 迟德钊 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1750-1757,共8页

该研究以黑粒青稞品种‘黑老鸦’籽粒为材料,克隆了青稞类黄酮3-O-葡萄糖基转移酶基因(HvtUF3GT),获得1 449 bp序列。HvtUF3GT基因包含一个1 434 bp开放阅读框,编码478个氨基酸,理论等电点为5.45,预测蛋白分子量为52 912.58 Da。蛋白质... 该研究以黑粒青稞品种‘黑老鸦’籽粒为材料,克隆了青稞类黄酮3-O-葡萄糖基转移酶基因(HvtUF3GT),获得1 449 bp序列。HvtUF3GT基因包含一个1 434 bp开放阅读框,编码478个氨基酸,理论等电点为5.45,预测蛋白分子量为52 912.58 Da。蛋白质序列分析表明,HvtUF3GT为亲水性的不稳定酸性蛋白,且在C-末端具有一段典型的44个氨基酸PSPG box,在空间结构中含有β-α-β-α-βRossmann折叠结构,属于UDP糖基转移酶基因GT-B型超家族成员。进化树分析表明,HvtUF3GT与小麦族的大麦、乌拉尔图小麦、山羊草和二穗短柄草的糖基转移酶聚为一个分支,且与大麦的亲缘关系最近,与稻族的籼稻和短花稻的亲缘关系较远。半定量和定量PCR结果表明,在‘INB0N-7’蓝粒青稞和‘昆仑12号’白粒青稞的籽粒灌浆后期HvtUF3GT基因不表达,而在黑粒青稞和紫粒青稞中的表达强弱依次为‘黑老鸦’(黑粒)>‘昆仑17号’(黑粒)>‘达章紫’(紫粒)>‘涅如姆扎’(紫粒)。研究推测,HvtUF3GT基因在青稞灌浆后期籽粒着色过程中发挥着重要作用。 展开更多

关键词 青稞 花青素 HvtUF3gt基因 基因表达

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中国沙棘Hr3GT基因的扩增及生物信息学分析

4

作者 刘瑞 赵浪 马玉花 《青海农林科技》 2023年第1期93-96,共4页

本研究将中国沙棘Hr3GT基因进行扩增、测序和生物信息学处理,并与不同植物同功能基因序列比对分析。结果表明:Hr3GT基因ORF长度为1395bp,编码464个氨基酸,二级结构与三级结构预测一致,编码蛋白为亲水性非分泌蛋白,定位于细胞质内,有一... 本研究将中国沙棘Hr3GT基因进行扩增、测序和生物信息学处理,并与不同植物同功能基因序列比对分析。结果表明:Hr3GT基因ORF长度为1395bp,编码464个氨基酸,二级结构与三级结构预测一致,编码蛋白为亲水性非分泌蛋白,定位于细胞质内,有一个跨膜区,具有植物糖基转移酶家族(GTB型)的结构域,与鼠李科酸枣亲缘关系最近。 展开更多

关键词 中国沙棘 Hr3gt基因 生物信息学 序列分析

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稳定表达猪α1,3-半乳糖苷基转移酶基因的人肺腺癌细胞系的建立和鉴定 被引量：2

5

作者 秦凤 朱圣明 +6 位作者 郑鸿 王竹 王宇 左莹 陈娟 孙蔚亮 王艳萍 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期194-198,207,共6页

目的建立稳定表达中国近交系版纳微型猪(BMI)α1,3-半乳糖苷基转移酶基因(α1,3-GT)和α-半乳糖基(Gala1-3Galb1-4GlcNAc-R,α-gal)的人肺癌细胞株,为进一步研究人体血清经补体依赖的细胞毒性作用杀伤表达异种移植抗原的肿瘤细胞提供细... 目的建立稳定表达中国近交系版纳微型猪(BMI)α1,3-半乳糖苷基转移酶基因(α1,3-GT)和α-半乳糖基(Gala1-3Galb1-4GlcNAc-R,α-gal)的人肺癌细胞株,为进一步研究人体血清经补体依赖的细胞毒性作用杀伤表达异种移植抗原的肿瘤细胞提供细胞模型。方法将含有版纳微型猪α1,3-GT基因的pEGFP-CMV-GT质粒经脂质体法体外转染人肺腺癌细胞A549,G418筛选稳定表达的细胞克隆并扩增,命名为A549-GT。用RT-PCR检测A549-GT中α1,3-GT基因的mRNA表达,荧光显微镜和流式细胞仪检测α1,3-GT在细胞膜表面合成α-gal表位的能力以及A549-GT与人血清中Ig M和补体C3结合情况。检测转染细胞形态学、生长增殖能力以及裸鼠成瘤性等生物学特征。结果经G418反复筛选获得了稳定转染α1,3-GT基因的A549-GT的细胞系,该细胞中检测到α1,3-GTmRNA和α-gal表达。A549-GT传代至今已2年,α-gal表达的阳性细胞达80.1%±3.2%。A549-GT细胞能与人血清中的Ig M结合并有补体C3沉积。其生物学特性与亲代A549细胞相比未发生变化。结论成功获得持续稳定表达猪α1,3-GT和α-gal的细胞系A549-GT,为该基因在后续肿瘤免疫治疗中的研究提供有用的细胞研究模型。 展开更多

关键词 α1 3-gt基因 α-半乳糖基 A549细胞 基因转染

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异种移植抗原α-gal介导人血清杀伤A549细胞的实验研究

6

作者 朱圣明 谢玲 +4 位作者 郑鸿 秦凤 刘美 骆志国 王艳萍 《中国肺癌杂志》 CAS 北大核心 2012年第11期630-637,共8页

背景与目的人体α-1,3半乳糖基转移酶(α-1,3Galactosy ltransferase,α-1,3GT)基因功能失活而不表达α-半乳糖基(α-galactosyl,α-gal)表位,但天然存在着大量抗α-gal抗体,异种器官移植研究结果提示,在人肿瘤细胞上重新表达异种移植... 背景与目的人体α-1,3半乳糖基转移酶(α-1,3Galactosy ltransferase,α-1,3GT)基因功能失活而不表达α-半乳糖基(α-galactosyl,α-gal)表位,但天然存在着大量抗α-gal抗体,异种器官移植研究结果提示,在人肿瘤细胞上重新表达异种移植抗原α-gal,可能诱发类似于宿主抗移植物超急性排斥反应的抗肿瘤效应。本研究通过基因导入手段,建立稳定表达异种移植抗原α-gal的转基因人肺癌细胞系,探讨α-gal介导的人血清抗肿瘤的可能性及其机制。方法将前期成功构建的α-1,3GT基因真核表达质粒pEGFP-N1-GT瞬时转染人肺腺癌细胞A549,筛选并建立稳定的转基因细胞系A549-GT。MTT增殖实验和显微镜观察转基因细胞生物学特性变化;RT-PCR检测A549-GT中α-1,3GT基因mRNA表达;荧光素标记的凝集素(FITC-BS-IB4lectin)染色检测α-1,3GT在肿瘤细胞表面合成α-gal的能力;A549-GT细胞及其培养基分别与正常人细胞共培养,检验α-1,3GT基因的稳定性和酶活性的稳定性;人血清结合实验检测A549-GT与IgM和补体C3结合情况。结果RT-PCR检测到转基因细胞系A549-GT中有α-1,3GTmRNA表达。荧光显微镜和流式细胞术检测结果显示:A549-GT能够长期稳定表达异种移植抗原α-gal表位;A549-GT与其亲本细胞在生长形态及增殖速度上无明显差异;A549-GT细胞及其培养基分别与正常人胚肺成纤维细胞MRC-5共培养均不能使MRC-5获得α-gal合成能力;经人血清处理后,荧光免疫实验观察到转基因细胞系A549-GT能与血清抗体IgM结合并诱导补体C3结合。结论异种移植抗原α-gal在肿瘤细胞上的重新表达,可能通过补体依赖的细胞毒机制,介导类似于异种器官移植排斥反应的抗肿瘤效应。 展开更多

关键词 α1 3-gt基因 α-半乳糖基 异种抗原 A549细胞

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‘赤霞珠’葡萄Vv5GT3基因启动子的克隆及其对光照的响应 被引量：9

7

作者 邢冉冉 潘秋红 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期3128-3134,共7页

本研究利用PCR技术从’赤霞珠’葡萄(Vitis vinifera L.cv Cabernet Sauvignon)基因组DNA中扩增得到与花色素3,5-O-双葡萄糖苷合成相关的Vv5GT3基因的启动子。对启动子序列的顺式作用元件进行预测分析发现,Vv5GT3基因的启动子序列除了... 本研究利用PCR技术从’赤霞珠’葡萄(Vitis vinifera L.cv Cabernet Sauvignon)基因组DNA中扩增得到与花色素3,5-O-双葡萄糖苷合成相关的Vv5GT3基因的启动子。对启动子序列的顺式作用元件进行预测分析发现,Vv5GT3基因的启动子序列除了含有植物启动子的基本结构元件外,还有多个与胁迫和激素诱导相关的顺势调控元件。以荧光素酶基因(Luc)作为为报告基因,构建了Vv5GT3基因启动子的植物表达载体p CAMBIA1300-Vv5GT3 promoter。以根癌农杆菌GV3101感受态细胞为受体,转化植物融合表达载体进行瞬时表达,并对启动子进行了功能活性分析,结果表明该启动子能够驱动Luc报告基因在烟草叶片组织中表达。用不同的光照条件处理被农杆菌侵染的烟草叶片,结果显示长时间光照有利于启动子的激活,而遮光减弱了Vv5GT3启动子的活性。 展开更多

关键词 '赤霞珠’葡萄 Vv5gt3基因 启动子 瞬时表达 光照处理

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拟南芥GT47基因家族鉴定及不同胁迫下的表达特征

8

作者 全汝青 吴慧敏 +1 位作者 时羽杰 曾为 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期332-344,共13页

【目的】筛选拟南芥糖基转移酶GT47基因家族,进一步了解GT47基因家族的生物信息学特征,为其功能及抗逆性研究提供参考。【方法】利用生物信息学方法在拟南芥GT47基因家族中挖掘并鉴定出39个基因,并对这些基因进行系列分析。【结果】家... 【目的】筛选拟南芥糖基转移酶GT47基因家族,进一步了解GT47基因家族的生物信息学特征,为其功能及抗逆性研究提供参考。【方法】利用生物信息学方法在拟南芥GT47基因家族中挖掘并鉴定出39个基因,并对这些基因进行系列分析。【结果】家族蛋白为亲水性蛋白质,大部分蛋白稳定性较差,亚细胞定位预测显示,大部分基因定位于高尔基体。蛋白质结构预测表明,α-螺旋和无规则卷曲是二级结构的主要组成部分,三级结构具有相似性。基因结构和保守基序分析发现,各亚族成员间具有相似的保守基序和进化的保守性。系统发育树分析显示,该基因家族可分为6个亚家族,基因在不同物种间具有一定保守性。启动子顺式作用元件分析表明,拟南芥GT47家族基因具有多种激素响应元件及非生物胁迫响应元件。表达模式分析表明,拟南芥GT47基因家族在不同组织中广泛表达,对6 h的热胁迫表现明显的响应,尤其是AT1G63450在冷、干旱、盐及2 h热胁迫下发生了下调,但是在6 h热胁迫下发生了上调。【结论】糖基转移酶基因在不同组织中的表达具有显著差异,能响应ABA激素信号传导并参与植物调控胁迫应激过程,对植物生长发育有重要意义。 展开更多

关键词 拟南芥 gt47基因家族 生物信息学 表达分析

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水稻胚乳特异性启动子Gt1的克隆及其在玉米中的功能验证 被引量：1

9

作者 乔光明 李忠诚 +3 位作者 陈正华 王兰岚 陈凌娜 张明浩 《激光生物学报》 CAS CSCD 2006年第6期602-607,共6页

以水稻基因组DNA为模板,用PCR方法克隆了水稻谷蛋白基因G t1的启动子序列,并将其构建到带有绿色荧光蛋白基因(gfp)的植物表达载体上,用微束激光穿刺法转化玉米的受体组织,通过外源基因瞬时表达的方法验证了该启动子的功能,结果表明在胚... 以水稻基因组DNA为模板,用PCR方法克隆了水稻谷蛋白基因G t1的启动子序列,并将其构建到带有绿色荧光蛋白基因(gfp)的植物表达载体上,用微束激光穿刺法转化玉米的受体组织,通过外源基因瞬时表达的方法验证了该启动子的功能,结果表明在胚乳中有较强的表达,而在其它组织中表达很弱;证明了水稻谷蛋白基因G t1的启动子在不同物种玉米中同样具有胚乳特异表达的功能。为这一胚乳特异启动子的广泛利用提供了理论依据。 展开更多

关键词 gt1基因 启动子 微束激光 转基因

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番茄GT-1基因组织表达模式及非生物胁迫、植物生长调节剂响应分析

10

作者 崔宝禄 陈忠平 +4 位作者 孙婷婷 龙俊霖 王先霞 曾思进 石怡然 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期144-150,共7页

[目的]完善番茄GT-1亚家族基因的相关功能信息,为进一步研究Trihelix转录因子调控植物生长发育过程、提高植物非生物胁迫的抗性能力提供参考。[方法]利用生物信息学方法对GT-1基因进行生物进化分析,利用RT-PCR技术鉴定GT-1基因对非生物... [目的]完善番茄GT-1亚家族基因的相关功能信息,为进一步研究Trihelix转录因子调控植物生长发育过程、提高植物非生物胁迫的抗性能力提供参考。[方法]利用生物信息学方法对GT-1基因进行生物进化分析,利用RT-PCR技术鉴定GT-1基因对非生物胁迫和植物生长调节剂的响应。[结果](1)番茄中包含3个GT-1基因,即SlGT-21、SlGT-24和SlGT-35,进化分析表明番茄GT-1基因存在功能分化。(2)表达模式分析发现,3个基因于番茄所有组织中均表达,特别是果实发育阶段,推测SlGT-21、SlGT-35有部分类似功能。(3)3个GT-1基因受干旱抑制,但SlGT-24受抑制更明显;3个基因均响应盐胁迫,SlGT-21、SlGT-35基因被较明显抑制。(4)3个基因受植物生长调节剂GA(赤霉素)、 EBR(表油菜素内酯)、 MeJA(茉莉酸甲酯)抑制,但SlGT-24、 SlGT-35受ABA(脱落酸)诱导,而SlGT-24还受ACC(1-氨基环丙烷羧酸)诱导。[结论]番茄GT-1亚家族3个基因受盐、干旱的调控,且对植物生长调节剂的响应明显。该研究为深入探究GT-1亚家族成员的生物功能提供了重要参考。 展开更多

关键词 番茄 gt-1基因 表达模式 非生物胁迫 植物生长调节剂诱导

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日本蛇根草Oj5GT1的克隆与表达分析

11

作者 张永兰 韩翠萍 +2 位作者 包国霞 肖松 张宇斌 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2023年第15期4941-4947,共7页

类黄酮5-O-糖基转移酶在增加类黄酮水溶性与稳定性方面发挥重要作用。本研究基于转录组测序结果,利用RT-PCR方法从日本蛇根草中克隆获得Oj5GT1基因,对其序列进行生物信息学分析,并通过Real-time PCR分析Oj5GT1在根、茎、叶、花瓣、花葶... 类黄酮5-O-糖基转移酶在增加类黄酮水溶性与稳定性方面发挥重要作用。本研究基于转录组测序结果,利用RT-PCR方法从日本蛇根草中克隆获得Oj5GT1基因,对其序列进行生物信息学分析,并通过Real-time PCR分析Oj5GT1在根、茎、叶、花瓣、花葶、萼片及花朵4个不同发育时期的表达情况。结果显示,Oj5GT1开放阅读框长1416 bp,编码471个氨基酸;蛋白理论等电点为5.14,为亲水性蛋白,不含信号肽,具有2个糖基化位点;系统进化分析表明,Oj5GT1与类黄酮5-O糖基转移酶归为一类。表达分析显示,Oj5GT1在日本蛇根草花葶和花瓣的表达量显著高于根和叶,且伴随花朵发育过程表达量呈先降低后升高趋势。本研究为解析Oj5GT1基因的生物学功能及其调控日本蛇根草花色素苷的生物合成研究提供了坚实的理论支撑。 展开更多

关键词 日本蛇根草 糖基转移酶 Oj5gt1基因 表达分析

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总蛋白含量不同的水稻品种谷蛋白含量分析及Gt1启动子序列比较 被引量：2

12

作者 米东 李海权 +1 位作者 李建粤 陈立琼 《上海师范大学学报（自然科学版）》 2005年第1期64-69,共6页

选取3种总蛋白含量差异较大的水稻为材料,在分析其谷蛋白含量的基础上,克隆它们的Gt1启动子,并采用vectorNTI软件对这3个Gt1启动子序列进行比较.结果显示,在不同总蛋白和谷蛋白含量的水稻品种中,Gt1谷蛋白基因启动子是有差异的.

关键词 水稻 谷蛋白含量 gt1基因启动子 克隆 序列分析

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“中花11”水稻谷蛋白Gt1基因克隆及蜡质基因启动子引导Gt1基因表达载体的构建

13

作者 许昱 王幻予 +1 位作者 张伟 李建粤 《上海师范大学学报（自然科学版）》 2010年第2期204-209,共6页

谷蛋白含量及分布对水稻营养品质起着至关重要的作用.利用PCR技术从"中花11"水稻基因组成功克隆到谷蛋白Gt1基因,再分别以PCR技术和限制酶酶切从p13W4载体上获得水稻蜡质基因(Waxy)启动子、第一内含子和NOS终止子,并以pCAMBIA... 谷蛋白含量及分布对水稻营养品质起着至关重要的作用.利用PCR技术从"中花11"水稻基因组成功克隆到谷蛋白Gt1基因,再分别以PCR技术和限制酶酶切从p13W4载体上获得水稻蜡质基因(Waxy)启动子、第一内含子和NOS终止子,并以pCAMBIA1301双元载体为骨架,成功构建了由Waxy启动子引导的水稻Gt1基因表达载体,为今后利用转基因技术改良水稻稻米营养品质奠定了基础. 展开更多

关键词 水稻 Waxy启动子 gt1基因 基因克隆 表达载体构建

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水稻5.3 kb Gt1启动子克隆以及Gt1启动子引导优质大豆球蛋白Gy7基因表达载体构建

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作者 徐申中 顾婷玉 +1 位作者 于洋 李建粤 《现代农业科学》 2008年第11期14-17,共4页

以越光水稻基因组为模板,在成功克隆5.3 kb谷蛋白Gt1基因5’上游和信号肽序列基础上,将其定向插入到pCAMBIA1300质粒中,构建了中间载体p1300-5.3 kb Gt1;再将富含赖氨酸的优质大豆球蛋白Gy7全基因序列及cDNA编码序列分别定向插入p1300-5... 以越光水稻基因组为模板,在成功克隆5.3 kb谷蛋白Gt1基因5’上游和信号肽序列基础上,将其定向插入到pCAMBIA1300质粒中,构建了中间载体p1300-5.3 kb Gt1;再将富含赖氨酸的优质大豆球蛋白Gy7全基因序列及cDNA编码序列分别定向插入p1300-5.3 kb Gt1质粒上Gt1基因信号肽下游,再在2个载体Gy7全基因序列及cDNA编码序列下游都正向插入Gt1 3’UTR,完成由5.3 kb谷蛋白Gt1基因启动子及信号肽引导的大豆球蛋白Gy7基因2种表达载体的构建。此试验为利用转基因技术改良水稻稻米营养品质以及将水稻种子作为生物反应器等方面研究奠定了基础。 展开更多

关键词 5.3kb gt1基因启动子克隆 大豆球蛋白Gy7基因 大豆球蛋白Gy7cDNA gt1基因3’UTR 表达载体构建

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