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重组人肿瘤坏死因子TNF-α的克隆与原核表达 被引量：3
1
作者 刘钦松 李娜 +3 位作者 李小刚 董岩岩 张程 孙玉科 《中国农学通报》 CSCD 2012年第9期180-184,共5页
为了构建人肿瘤坏死因子TNF-α与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的融合基因表达载体,并进行原核表达。以人肿瘤坏死因子TNF-α全长转录本为模板,设计特异性引物,经PCR扩增目的基因将其定向克隆到pMD-l8T simple vector中,构建重组质粒pMD-18T-... 为了构建人肿瘤坏死因子TNF-α与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的融合基因表达载体,并进行原核表达。以人肿瘤坏死因子TNF-α全长转录本为模板,设计特异性引物,经PCR扩增目的基因将其定向克隆到pMD-l8T simple vector中,构建重组质粒pMD-18T-TNFα。然后通过亚克隆将测序正确的TNF-α基因插入表达载体pGEX-4T-1中,筛选出阳性质粒转化宿主菌株BL21(DE3),通过温度、时间等不同条件诱导表达重组蛋白。结果表明,成功克隆到大小为702 bp的TNF-α全长cDNA序列,通过限制性酶切、PCR扩增证实pMD-18T-TNFα和pGEX-4T-1-TNFα载体已构建成功。诱导表达得到约51 kDa重组蛋白GST-TNFα。说明重组蛋白GST-TNFα的表达成功,为进一步获得纯化TNF-α,研究其生物功能、作用机理,制备抗TNF-α单克隆抗体奠定基础。 展开更多
关键词 人肿瘤坏死因子 原核表达 gst-tnfα
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HSB、GSTs和TNF-α联合检测诊断肝癌的比较分析 被引量：3
2
作者 董志珍 姚登福 +2 位作者 吴玮 邱历伟 孟宪镛 《中国综合临床》 2000年第5期394-395,共2页
目的探讨血清肝癌特异性γ－谷氨酸转移酶（GGT）浓度在肝癌诊断与鉴别中的临床价值。方法定量检测了肝癌、慢性肝病和肝外肿瘤患者血清中肝癌特异性GGT区带（HSB）活性，并同时检测谷胱苷肽－S－转换酶（GSTs）和肿瘤坏死因子－α（TN... 目的探讨血清肝癌特异性γ－谷氨酸转移酶（GGT）浓度在肝癌诊断与鉴别中的临床价值。方法定量检测了肝癌、慢性肝病和肝外肿瘤患者血清中肝癌特异性GGT区带（HSB）活性，并同时检测谷胱苷肽－S－转换酶（GSTs）和肿瘤坏死因子－α（TNF－α）浓度，以比较分析它们在肝癌诊断与鉴别中的临床意义。结果肝癌组HSB和GSTs浓度均明显高于慢性肝病和肝外肿瘤组（P＜0.001）。TNF－α浓度肝癌组明显高于慢性肝病组（P＜0．001），但与肝外肿瘤组间无明显差异；肝癌组HSB、GSTs和TNF－α的阳性率分别为88.6％、78．1％和74．3％。结论资料说明HSB定量优于GSTs和TNF－α检测，多项指标联合分析有助于肝癌的诊断与鉴别。 展开更多
关键词 肝癌特异性区带 肝肿瘤 tnfα gstS
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