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猪雌激素受体α基因E区部分cDNA克隆与原核表达 被引量：3
1
作者 丁利军 吴井生 +1 位作者 王建武 丁家桐 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期635-639,共5页
采用逆转录PCR(RT-PCR)法从梅山猪子宫组织中扩增雌激素受体α(ERα)基因E区部分cDNA编码区546bp,并将其重组于谷胱甘肽转移酶(GST)融合表达质粒pGEX-6p-1中,经酶切、序列鉴定分析后,用该重组质粒转化大肠杆菌BL21,并经异丙基B-D-硫代... 采用逆转录PCR(RT-PCR)法从梅山猪子宫组织中扩增雌激素受体α(ERα)基因E区部分cDNA编码区546bp,并将其重组于谷胱甘肽转移酶(GST)融合表达质粒pGEX-6p-1中,经酶切、序列鉴定分析后,用该重组质粒转化大肠杆菌BL21,并经异丙基B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生GST-ERαE融合蛋白,分子量约为49 ku,净灰度扫描融合蛋白占重组菌蛋白32%,结果表明成功构建GST-ERαE融合蛋白表达载体,并获得高效表达,为下阶段深入开展ERα蛋白功能研究打下了良好的基础。 展开更多
关键词 猪ERα基因 gst-融合蛋白 克隆
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GST-Gankyrin融合蛋白的原核表达及抗体制备 被引量：2
2
作者 杨诏旭 窦科峰 +1 位作者 路凡 赵忠良 《第四军医大学学报》 北大核心 2005年第11期965-967,共3页
目的:为进一步研究在肝癌上过表达的癌相关基因Gankyrin的功能,进行GSTGankyrin融合蛋白表达载体的构建、原核表达、及抗体制备.方法:采用逆转录PCR(RTPCR)法从人肝癌细胞系hepG2中扩增GankyrincDNA编码区,并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶... 目的:为进一步研究在肝癌上过表达的癌相关基因Gankyrin的功能,进行GSTGankyrin融合蛋白表达载体的构建、原核表达、及抗体制备.方法:采用逆转录PCR(RTPCR)法从人肝癌细胞系hepG2中扩增GankyrincDNA编码区,并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX4T2中,经酶切、序列鉴定分析后,用该重组质粒转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导获得表达,并将Gankyrin蛋白免疫家兔,经过Westernblot检测抗Gankyrin抗体的产生.结果:成功构建了Gankyrin原核表达载体,并在大肠杆菌DH5α中获得表达,Westernblot检测证实获得了抗Gankyrin抗体.结论:成功表达了Gankyrin蛋白并制备了其特异性抗体. 展开更多
关键词 Gankyrin gst-融合蛋白 多克隆抗体
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GST/AEP融合蛋白原核表达载体的构建、表达及鉴定 被引量：1
3
作者 高碧峰 王宗仁 张德安 《现代生物医学进展》 CAS 2006年第8期1-3,共3页
目的:为进一步研究抗癫痫肽(Anti-epilepsy peptide,AEP)的抗痫机制及筛选其相关作用蛋白,进行GST/AEP融合蛋白原核表达载体的构建及融合蛋白的表达。方法:通过PCR基因扩增对AEP基因进行扩增,并将其克隆于谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合蛋... 目的:为进一步研究抗癫痫肽(Anti-epilepsy peptide,AEP)的抗痫机制及筛选其相关作用蛋白,进行GST/AEP融合蛋白原核表达载体的构建及融合蛋白的表达。方法:通过PCR基因扩增对AEP基因进行扩增,并将其克隆于谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-4T-1中,经酶切、序列鉴定分析后,用该重组质粒转化大肠杆菌Bl21(DE3),经IPTG诱导获得表达,并采用Western Blot进行检测。结果:成功构建了AEP原核表达载体,并在大肠杆菌Bl21中获得表达。结论:成功构建了GST/AEP原核表达载体,并表达了GST/AEP融合蛋白。 展开更多
关键词 抗癫痫肽 gst-融合蛋白 原核表达 基因扩增
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人IL-17F融合蛋白在E.coli中表达及其生物学活性研究 被引量：2
4
作者 谢宇锋 盛伟华 +1 位作者 缪竞诚 杨吉成 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1086-1091,共6页
目的:构建重组原核表达载体pGEX-5X-3/hIL-17F,使其在大肠杆菌中表达,获得GST-hIL-17F融合蛋白,并研究其生物学活性。方法:利用PCR法从自行构建的含hIL-17F基因的pUCm-T/hIL-17F载体中扩增其成熟肽基因序列,亚克隆于pGEX-5X-3中,构建原... 目的:构建重组原核表达载体pGEX-5X-3/hIL-17F,使其在大肠杆菌中表达,获得GST-hIL-17F融合蛋白,并研究其生物学活性。方法:利用PCR法从自行构建的含hIL-17F基因的pUCm-T/hIL-17F载体中扩增其成熟肽基因序列,亚克隆于pGEX-5X-3中,构建原核表达载体pGEX-5X-3/hIL-17F,并在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达包涵体融合蛋白,经纯化后进行Westernblot鉴定。MTT法分析GST-hIL-17F纯品蛋白对人脐静脉内皮细胞ECV304的生长抑制作用,ELISA法检测对ECV304内皮细胞表达IL-6、IFN-γ和TNF-α的生物学作用,并采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)法分析其对血管形成的影响结果:GST-hIL-17F融合蛋白在大肠杆菌BL21中获得了高效表达,约占菌体总蛋白的55%,能产生约41kD的融合蛋白,且Westernblot证实确为GST-hIL-17F目的蛋白。GST-hIL-17F具有明显抑制ECV304内皮细胞增殖和上调表达IL-6的生物学效应,并具有显著的抗血管形成活性。结论:hIL-17F重组原核表达和血管形成抑制效应的初步研究已获成功,为进一步研究rhIL-17F的抗血管形成机制和临床应用奠定了基础。 展开更多
关键词 白细胞介素17F gst-融合蛋白 生长抑制 血管形成
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pGEX-4T-1/Tα1-TP5原核表达载体的构建及表达 被引量：1
5
作者 谢琦 林军 王凤山 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期176-180,共5页
旨在构建胸腺融合肽Tα1-TP5原核表达载体,并在大肠杆菌中表达。化学合成Tα1-TP5基因,与原核表达载体pGEX-4T-1融合并转化至E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,用SDS-PAGE电泳和A lphaEase凝胶电泳图像分析系统对工程菌表达的蛋白进行分析... 旨在构建胸腺融合肽Tα1-TP5原核表达载体,并在大肠杆菌中表达。化学合成Tα1-TP5基因,与原核表达载体pGEX-4T-1融合并转化至E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,用SDS-PAGE电泳和A lphaEase凝胶电泳图像分析系统对工程菌表达的蛋白进行分析鉴定。表达的GST融合蛋白经GST琼脂糖凝胶亲和层析和重组肠激酶切割后,电喷雾质谱(ESI-MS)鉴定胸腺融合肽Tα1-TP5。结果显示,成功构建pGEX-4T-1/Tα1-TP5原核表达载体,工程菌表达的GST融合蛋白占全菌总蛋白的27.8%,且主要以可溶形式表达。经ESI-MS鉴定,胸腺融合肽Tα1-TP5的分子量与理论值相符。胸腺融合肽Tα1-TP5在大肠杆菌中得到了高效表达。 展开更多
关键词 胸腺融合肽Tα1-TP5 gst-融合蛋白 PGEX-4T-1 大肠杆菌 原核表达
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亚洲璃眼蜱唾液腺一新基因(GP_(29))的原核表达及产物鉴定
6
作者 程天印 周金林 +2 位作者 周勇志 施启顺 林矫矫 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1194-1197,共4页
将吸血诱导的亚洲璃眼蜱唾液腺差异表达基因GP29的开放性阅读框插入pGEX-4T-1,转化BL21,表达出一相对质量为53 ku的蛋白,其大小与预计结果一致。蛋白质的肽质量图谱和“1381.7511”肽段序列两方面的结果证明,SDS-PAGE胶板上相对质量为53... 将吸血诱导的亚洲璃眼蜱唾液腺差异表达基因GP29的开放性阅读框插入pGEX-4T-1,转化BL21,表达出一相对质量为53 ku的蛋白,其大小与预计结果一致。蛋白质的肽质量图谱和“1381.7511”肽段序列两方面的结果证明,SDS-PAGE胶板上相对质量为53 ku的蛋白就是由目的基因表达的GST融合蛋白。该蛋白与SwissPROT库中的任何蛋白均有较大差别,可能是一个新功能分子。 展开更多
关键词 亚洲璃眼蜱 GP29基因 gst-融合蛋白 肽质量 肽序列
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重组大鼠14-3-3γ蛋白在大肠杆菌中的融合表达与分离纯化
7
作者 彭少君 何明 周复辉 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第1期58-60,共3页
目的:利用分子克隆技术在原核细胞中研究14-3-3γ融合蛋白的表达及分离纯化。方法:采用RT-PCR法从大鼠心肌组织中扩增14-3-3γcDNA编码区,并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-KG中,免疫印迹法检测表达产物。结果:... 目的:利用分子克隆技术在原核细胞中研究14-3-3γ融合蛋白的表达及分离纯化。方法:采用RT-PCR法从大鼠心肌组织中扩增14-3-3γcDNA编码区,并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-KG中,免疫印迹法检测表达产物。结果:经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导表达,表达产物的蛋白量约为菌体总蛋白的27.08%,相对分子质量为56000左右。能与抗鼠14-3-3γ多克隆抗体特异性结合。结论:表明成功构建了GST-14-3-3γ融合蛋白载体,在大肠杆菌中有高效表达,并具有良好的免疫反应性。 展开更多
关键词 重组14—3—3γ蛋白 原核表达 gst-融合蛋白 分离纯化 多克隆抗体 大鼠
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A30Pα-synuclein原核表达载体的构建及表达
8
作者 周英泽 王桂芬 +2 位作者 刘江月 张代娟 刘同美 《济宁医学院学报》 2012年第2期97-99,共3页
目的构建A30Pα-synuclein基因的原核表达载体,分析其在大肠杆菌中的表达。方法酶切质粒pcDNA3.0-A30Pα-synuclein,获得A30Pα-synuclein基因的目的片段,克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,转化大肠杆菌BL21。IPTG诱导后,经考马斯亮蓝染色... 目的构建A30Pα-synuclein基因的原核表达载体,分析其在大肠杆菌中的表达。方法酶切质粒pcDNA3.0-A30Pα-synuclein,获得A30Pα-synuclein基因的目的片段,克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,转化大肠杆菌BL21。IPTG诱导后,经考马斯亮蓝染色和Western-blot分析目的蛋白的表达。结果 A30Pα-synuclein基因克隆至pGEX-6P-1载体中,考马斯亮蓝染色及Western-blot检测到A30Pα-synuclein蛋白在BL21中的表达。结论成功构建A30Pα-synuclein的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达了A30Pα-synuclein融合蛋白,为进一步研究A30Pα-synuclein在帕金森病中的作用奠定了良好基础。 展开更多
关键词 A30Pα-synuclein 帕金森病 gst-融合蛋白
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GST-talin1融合蛋白的原核表达及纯化
9
作者 吴爽 耿建国 《生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期33-35,共3页
应用PCR方法扩增talin1的cDNA,并将其重组入谷胱甘肽转硫酶融合基因表达载体pGEX-4T-1中,获取人源的GST-talin1融合蛋白,为下阶段深入的研究talin1的结构、功能、及其与之相互作用的蛋白打下基础。经酶切、序列鉴定,选择正确重组子,将... 应用PCR方法扩增talin1的cDNA,并将其重组入谷胱甘肽转硫酶融合基因表达载体pGEX-4T-1中,获取人源的GST-talin1融合蛋白,为下阶段深入的研究talin1的结构、功能、及其与之相互作用的蛋白打下基础。经酶切、序列鉴定,选择正确重组子,将其质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用G lutath ione Sepharose 4B柱纯化,western b lot鉴定。克隆得到了一个2400bp的talin1的cDNA片断,重组质粒目的DNA测序正确,纯化出分子量约为121.6kD的融合蛋白。用基因工程方法使GST-talin1重组质粒在原核细胞表达并成功纯化出GST-talin1融合蛋白。 展开更多
关键词 TALIN P-选凝素 gst-融合蛋白 亲和层析
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结核分枝杆菌PPE60的GST融合蛋白在大肠杆菌中的表达和鉴定
10
作者 熊志红 朱琰 +2 位作者 李仁德 庄玉辉 程小星 《实用预防医学》 CAS 2012年第5期647-650,共4页
目的构建结核分枝杆菌PPE60的GST融合蛋白表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白。方法以结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组DNA为模板,经PCR技术扩增目的基因,将目的基因克隆到pGEX-4T-1载体中,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆。进行质... 目的构建结核分枝杆菌PPE60的GST融合蛋白表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白。方法以结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组DNA为模板,经PCR技术扩增目的基因,将目的基因克隆到pGEX-4T-1载体中,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆。进行质粒的酶切鉴定和序列分析;对重组的大肠杆菌进行诱导表达,SDS-PAGE分析菌体蛋白,凝胶密度扫描分析目的蛋白的表达情况,Western-blot鉴定融合蛋白。结果正确构建了pGEX-PPE60融合表达载体,载体能在大肠杆菌中表达分子量约为70 kDa的重组蛋白,占菌体总蛋白的50%。该融合蛋白能与GST抗体产生阳性反应。结论成功构建了GST-PPE60融合蛋白的表达载体,并能在大肠杆菌中高效表达,为PPE60蛋白的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 PPE60 gst-融合蛋白 表达与鉴定
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细胞凋亡过程中核糖体蛋白质S3a水平变化的研究(三)──检测细胞凋亡过程中RPS3a水平的变化 被引量：4
11
作者 孙阿萍 马洪星 +3 位作者 郑寒松 曹秀华 刘敏 吕学诜 《黑龙江医药科学》 2002年第1期1-2,共2页
目的：检测细胞凋亡过程中ＲＰＳ３ａ水平的变化，探讨ＲＰＳ３ａ在细胞凋亡中的作用。方法：用放射菌素Ｄ（Ａｃｔ　Ｄ）诱导ＨＬ－６０细胞发生凋亡，应用Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｂｌｏｔ法检测细胞凋亡过程中ＲＰＳ３ａ水平的变化。结果：... 目的：检测细胞凋亡过程中ＲＰＳ３ａ水平的变化，探讨ＲＰＳ３ａ在细胞凋亡中的作用。方法：用放射菌素Ｄ（Ａｃｔ　Ｄ）诱导ＨＬ－６０细胞发生凋亡，应用Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｂｌｏｔ法检测细胞凋亡过程中ＲＰＳ３ａ水平的变化。结果：ＨＬ－６０细胞在诱发凋亡１小时后，ＲＰＳ３ａ的水平与对照组比较显著升高，之后迅速降低，在诱导２ｈ时其水平已低于正常对照组的水平，并随时间推移逐渐降低，在细胞凋亡的晚期，即诱导６ｈ时，ＲＰＳ３ａ已降至不可检测的水平。结论：ＲＰＳ３ａ水平出现的一过性增高随后迅速降低，这可能是发挥其核糖体外的功能，作为信号诱导细胞凋亡；在细胞凋亡的早期ＲＰＳ３ａ的不可逆性降解致使核糖体的完整性丧失，从而抑制蛋白质的合成，最终导致细胞凋亡。 展开更多
关键词 核糖体蛋白质S3a 细胞凋亡 gst基因融合蛋白系统 放射菌素D
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细胞凋亡过程中核糖体蛋白质S3a水平变化的研究(二)——制备和纯化抗GST/S3a多克隆抗体 被引量：3
12
作者 孙阿萍 吕佳宏 +1 位作者 赵丽娜 吕学诜 《黑龙江医药科学》 2001年第5期1-2,共2页
目的:制备和纯化抗GST/S3a多克隆抗体。方法:盐析法粗提抗体,用蛋白A-琼脂糖柱纯化IgG,ELISA法检测多克隆抗体水平。结果:ELISA法测定制备和纯化抗GST/S3a多克隆抗体的活性正常,产生了抗原-抗体反应复合物。结论:制备和纯化的抗体血清... 目的:制备和纯化抗GST/S3a多克隆抗体。方法:盐析法粗提抗体,用蛋白A-琼脂糖柱纯化IgG,ELISA法检测多克隆抗体水平。结果:ELISA法测定制备和纯化抗GST/S3a多克隆抗体的活性正常,产生了抗原-抗体反应复合物。结论:制备和纯化的抗体血清可以与GST/S3a融合蛋白相结合,产生抗原-抗体反应复合物,说明具有抗GST/S3a融合蛋白的活性。为下一步实验奠定基础。 展开更多
关键词 核糖体蛋白质S3a 细胞凋亡 gst基因融合蛋白系统 多克隆抗体 制备 纯化
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细胞凋亡过程中核糖体蛋白质S3a水平变化的研究(一)──应用GST基因融合蛋白系统制备核糖体蛋白质S3a(RPS3a) 被引量：2
13
作者 孙阿萍 吕晓平 +1 位作者 张秋迟 吕学诜 《黑龙江医药科学》 2001年第3期1-2,4,共3页
目的：应用GST基因融合蛋白系统制备核糖体蛋白质S3a(RPS3a)。方法：将S3a cDNA序列插入到pGEX-4T-2质粒中，制备GST/S3a融合蛋白及其抗体。结果：S3a cDNA序列在Xho I位点上插入到pGEX-4T-2质粒中，形成重组的pGEX-4T-2/S3a质粒。结论... 目的：应用GST基因融合蛋白系统制备核糖体蛋白质S3a(RPS3a)。方法：将S3a cDNA序列插入到pGEX-4T-2质粒中，制备GST/S3a融合蛋白及其抗体。结果：S3a cDNA序列在Xho I位点上插入到pGEX-4T-2质粒中，形成重组的pGEX-4T-2/S3a质粒。结论：pGEX-4T-2质粒编码GST蛋白基因，在IPTG的诱导下可以表达GST/S3a融合蛋白。为下一步实验奠定了基础。 展开更多
关键词 核糖体蛋白质S3a 细胞凋亡 gst基因融合蛋白系统 制备
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拟南芥CARK4与RCAR12相互作用的研究
14
作者 陈静波 李小意 +3 位作者 李晶祥 黄琪 李旭锋 杨毅 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期375-380,共6页
本研究采用酵母双杂交(Y2H)、GST-融合蛋白沉降技术(GST-pull-down)及双分子荧光互补实验(BiFC)实验方法研究蛋白质激酶CARK4与脱落酸受体RCAR12之间的相互作用.酵母双杂交(Y2H)试验显示,缺失氮端的CARK4(CARK4ΔN)与RCAR12具有明显的... 本研究采用酵母双杂交(Y2H)、GST-融合蛋白沉降技术(GST-pull-down)及双分子荧光互补实验(BiFC)实验方法研究蛋白质激酶CARK4与脱落酸受体RCAR12之间的相互作用.酵母双杂交(Y2H)试验显示,缺失氮端的CARK4(CARK4ΔN)与RCAR12具有明显的相互作用.体外GST-融合蛋白沉降技术试验进一步得出CARK4能拉下RCAR12,而不能结合负对照GST,这证明CARK4可以直接与RCAR12相互作用.为了确定CARK4与RCAR12在植物体内是否也存在相互作用,利用农杆菌介导的烟草叶片瞬时表达来进行BiFC实验,结果表明在烟草中共注射CARK4与RCAR12能发激发荧光,而负对照却没有,这说明CARK4与RCAR12在植物体内存在相互作用.研究结果表明,CARK4与RCAR12在植物体内、体外均具有相互作用. 展开更多
关键词 酵母双杂交 gst-融合蛋白沉降技术 双分子莹光互补 脱落酸受体 蛋白激酶
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重组GST-HD融合蛋白用于血吸虫病诊断和疗效考核的研究 被引量：17
15
作者 余传信 朱荫昌 +2 位作者 殷旭仁 何伟 华万全 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2001年第2期82-85,共4页
目的　探讨重组 GST- HD融合蛋白用于血吸虫病免疫诊断的价值。方法　用 IPTG诱导表达日本血吸虫中国大陆株 2 3k Da分子 (Sj C2 3)的大亲水片段的融合蛋白 (GST- HD) ,再经 Glu-tathione Sepharose 4B凝胶进行亲和纯化。建立应用纯化的... 目的　探讨重组 GST- HD融合蛋白用于血吸虫病免疫诊断的价值。方法　用 IPTG诱导表达日本血吸虫中国大陆株 2 3k Da分子 (Sj C2 3)的大亲水片段的融合蛋白 (GST- HD) ,再经 Glu-tathione Sepharose 4B凝胶进行亲和纯化。建立应用纯化的 GST- HD融合蛋白检测抗 Sj C2 3抗体的EL ISA血吸虫病诊断方法 (GST- H D EL ISA) ,用该方法和常规的 SEA- EL ISA平行检测血吸虫病人 ,肝吸虫病人及健康人血清 ,同时检测 32份同一病人治疗前、治疗后半年的配对血清 ,比较两种方法诊断血吸虫病的效能和疗效考核价值。结果　 GST- HD EL ISA和 SEA- EL ISA检测 90份病人血清的阳性率分别为 95 .5 5 %和 93.33% ,检测 2 9份肝吸虫病人血清 ,交叉反应率分别为 0和 3.44 % ,检测 40份健康人血清假阳性率分别为 0和 2 .5 %。融合蛋白中的 GST分子对实验结果没有影响。检测 32份治疗前、治疗后配对病人血清 ,治疗后 6个月 GST- HD抗体的阴转率达 75 .0 % ,而 SEA抗体的阴转率仅为 12 .5 %。结论　重组表达的 GST- H D融合蛋白分子是一种新的血吸虫病基因工程免疫诊断抗原 。 展开更多
关键词 日本血吸虫病 gst-HD融合蛋白 免疫诊断 治疗
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小鼠Nanog基因原核表达载体的构建及表达 被引量：11
16
作者 李军 吕长荣 +1 位作者 窦琳 窦忠英 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期373-378,共6页
【目的】构建小鼠Nanog基因原核表达载体并进行表达,以期得到大量GST融合蛋白。【方法】根据Gene Bank中的Nanog序列及pGEX-KG中的多克隆位点设计引物,以含有Nanog基因片段的pNA992重组质粒为模板,经PCR扩增出918 bp的DNA片段。将所得... 【目的】构建小鼠Nanog基因原核表达载体并进行表达,以期得到大量GST融合蛋白。【方法】根据Gene Bank中的Nanog序列及pGEX-KG中的多克隆位点设计引物,以含有Nanog基因片段的pNA992重组质粒为模板,经PCR扩增出918 bp的DNA片段。将所得片段与pGEX-KG载体连接,转化TGⅠ大肠杆菌,筛选阳性克隆,其扩增片段测序结果与原序列一致,表明原核表达载体pGEX-KG-Nanog已构建成功。提取pGEX-KG-Nanog质粒转化到BL21(DE3)表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE电泳鉴定,并优化其表达条件。【结果】在大肠杆菌中获得Nanog基因融合表达,主要以包涵体形式存在;融合蛋白的分子量为63 kD;以IPTG终浓度为0.8 mmol.L-1,诱导5 h后融合蛋白产量最高。【结论】小鼠Nanog基因在大肠杆菌中获得了高效表达,为今后Nanog蛋白的多克隆抗体制备奠定基础。 展开更多
关键词 NANOG基因 原核表达 gst融合蛋白 小鼠
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重组GST-HD融合蛋白的血吸虫病早期诊断价值 被引量：10
17
作者 余传信 殷旭仁 +2 位作者 许永良 杨小红 朱荫昌 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2005年第3期172-175,共4页
目的研究重组日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白大亲水性肽段与谷胱苷肽的融合表达蛋白(GST-HD)用于血吸虫病早期诊断的价值。方法用日本血吸虫尾蚴感染家兔,收集感染前及感染后不同时间的家兔血清。用酶联免疫方法检测家兔感染血吸虫后... 目的研究重组日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白大亲水性肽段与谷胱苷肽的融合表达蛋白(GST-HD)用于血吸虫病早期诊断的价值。方法用日本血吸虫尾蚴感染家兔,收集感染前及感染后不同时间的家兔血清。用酶联免疫方法检测家兔感染血吸虫后不同时间的血清中抗GST-HD融合蛋白及可溶性虫卵抗原(SEA)抗体IgG水平,观察不同感染时间点家兔对GST-HD、SEA的反应状况。用GST-HD检测90份急性血吸虫病人血清及30份健康人血清,评估其对血吸虫急性感染诊断的价值。结果在感染后的第17、21、24天,抗GST-HD的阳性率分别是42.85%、92.80%和100.00%,而抗SEA的阳性率分别为14.28%、50.00%和84.60%,GST-HD融合蛋白检测血吸虫早期感染的敏感性明显高于SEA。GST-HD融合蛋白检测急性血吸虫病人的阳性预告值及阴性预告值分别为98.89%和96.67%,诊断效率为98.33%。结论日本血吸虫23kDa膜蛋白分子的大亲水肽段融合蛋白具较好的血吸虫病早期诊断潜能。 展开更多
关键词 血吸虫病 早期诊断 gst-HD融合蛋白
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蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制剂高通量筛选模型建立和应用 被引量：10
18
作者 罗弟祥 何耀 +1 位作者 高小平 张义正 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2005年第5期606-609,共4页
本文以蛋白酪氨酸磷酸酶1B(protein tyrosine phosphatase,PTP1B)作为靶点,采用分子克隆GST融合蛋白的方法,重组表达获得PTP1B,结合自动化操作技术和比色分析,建立了一种PTP1B抑制剂的高通量筛选模型。经在96孔板优化各种反应条件并对17... 本文以蛋白酪氨酸磷酸酶1B(protein tyrosine phosphatase,PTP1B)作为靶点,采用分子克隆GST融合蛋白的方法,重组表达获得PTP1B,结合自动化操作技术和比色分析,建立了一种PTP1B抑制剂的高通量筛选模型。经在96孔板优化各种反应条件并对17940个样品的筛选结果表明,靶向PTP1B建立的高通量筛选模型具有微量、快速、特异、灵敏等特点,平均日筛选量可达15000样次以上,为寻找新的抗糖尿病药物和先导化合物提供了一种先进的手段。 展开更多
关键词 蛋白酪氨酸磷酸酶 gst融合蛋白 高通量药物筛选 植物提取物
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GST融合蛋白在杆状病毒系统中表达的可溶性研究 被引量：4
19
作者 杨林 李国清 +3 位作者 黄葆英 王全忠 龙綮新 王珣章 《中国病毒学》 CAS CSCD 2000年第2期143-148,共6页
将构建好的可表达GST融合蛋白的重组病毒AcMNPV OCC- GST 6xHis Etp2 8感染Sf9细胞 ,一定时间后取感染了病毒的细胞裂解物上清液进行SDS PAGE分析 ,结果显示 5 3kDa的融合蛋白 (GST 6xHis Etp2 8)呈不溶状态。在原有裂解液的基础上 ,加... 将构建好的可表达GST融合蛋白的重组病毒AcMNPV OCC- GST 6xHis Etp2 8感染Sf9细胞 ,一定时间后取感染了病毒的细胞裂解物上清液进行SDS PAGE分析 ,结果显示 5 3kDa的融合蛋白 (GST 6xHis Etp2 8)呈不溶状态。在原有裂解液的基础上 ,加固体十二烷基肌氨酸钠至终浓度 1.5 % ,并将TritonX 10 0的比例由 1%提高到 2 %。SDS PAGE结果显示至少有 1/ 3的GST 6xHis Etp2 8处于溶解状态 ,可溶性GST 6xHis Etp2 8经亲合层析 ,5 展开更多
关键词 gst融合蛋白 杆状病毒表达系统 可溶性分析
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重组阳离子抗肿瘤肽AIK的原核表达、纯化及活性测定 被引量：5
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作者 范芳芳 孙慧莹 +8 位作者 徐晖 刘佳玮 张海员 李亦兰 宁雪莲 孙悦 白静 傅松滨 周春水 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1753-1763,共11页
利用Gateway克隆技术构建重组抗瘤肽AIK的原核表达体系,建立表达及纯化重组AIK的最优条件,为深入研究和利用AIK奠定基础。首先,设计含AttB重组位点的引物,通过重叠PCR技术扩增出Att B-TEV-FLAG-AIK序列,利用BP重组反应将目的序列TEV-FLA... 利用Gateway克隆技术构建重组抗瘤肽AIK的原核表达体系,建立表达及纯化重组AIK的最优条件,为深入研究和利用AIK奠定基础。首先,设计含AttB重组位点的引物,通过重叠PCR技术扩增出Att B-TEV-FLAG-AIK序列,利用BP重组反应将目的序列TEV-FLAG-AIK克隆到供体载体pDONR223中,构建入门载体,再通过LR重组反应,将目的序列转移到目的载体pDEST15中,构建GST-AIK融合蛋白原核表达质粒。随后,在BL21(DE3)工程菌中优化诱导融合蛋白表达的条件。以谷胱甘肽磁珠纯化GST-AIK融合蛋白,再以rTEV酶切除GST,获得FLAG-AIK重组蛋白。最后以MTS法检测FLAG-AIK对白血病细胞HL-60的细胞毒性。菌液PCR验证和测序分析表明成功构建了重组抗瘤肽AIK的入门质粒和原核表达质粒。在BL21(DE3)工程菌中实现了GST-AIK融合蛋白的高效可溶性表达。并测得在37℃下以0.1 mmol/L IPTG诱导工程菌(OD600=1.0)4 h,重组蛋白表达量占菌体总蛋白的30%以上。经GST亲和层析、rTEV酶切除GST标签及二次GST亲和层析获得纯度高于95%的FLAG-AIK蛋白。MTS法测得所制备的FLAG-AIK蛋白抑瘤活性与化学合成的AIK相当。总之,本课题应用Gateway克隆系统成功构建了抗瘤肽AIK的原核表达质粒,实现了GST-AIK融合蛋白的高效可溶性表达,经亲和层析获得了有生物活性的重组AIK多肽,为后续深入研究和大规模制备奠定了基础。 展开更多
关键词 阳离子多肽 位点特异性重组 gst融合蛋白 诱导表达 亲和层析 抑瘤活性
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