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带有不同亚型HPVL_1基因片段的哺乳动物细胞克隆的建立
被引量：
1
1
作者
卓勤强
刘昕
+2 位作者
钱春荣
刘丽莎
高玉梅
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期469-471,共3页
目的构建携带HPV亚型L1基因片段的标准细胞株。方法根据HPV通用引物GP5+/GP6+,用重叠延伸PCR方法合成HPV亚型L1基因中约150bp片段;插入真核细胞表达载体EGFPN1,用脂质体转染SPC细胞,筛选以获得带有不同HPVL1基因片段细胞克隆,并用定量PC...
目的构建携带HPV亚型L1基因片段的标准细胞株。方法根据HPV通用引物GP5+/GP6+,用重叠延伸PCR方法合成HPV亚型L1基因中约150bp片段;插入真核细胞表达载体EGFPN1,用脂质体转染SPC细胞,筛选以获得带有不同HPVL1基因片段细胞克隆,并用定量PCR方法确认。结果重叠延伸PCR后得到约150bp的基因片段,测序结果经BLAST比对,分别与相应HPV亚型公开报告序列一致;将所获片段与EGFPN1载体连接后酶切及测序鉴定正确;经筛选获得了携带HPV6、11、16、18、31、35亚型L1基因片段的细胞株;并用定量PCR方法进行了确认。结论成功构建了带有不同HPV亚型L1基因片段的30个亚克隆和6个细胞株,为进一步的HPV分型检测研究提供了保证。
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关键词
HPV
重叠延伸
^
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gp
5
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定量PCR
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职称材料
巢式PCR检测人乳头状瘤病毒的方法学建立及临床应用
2
作者
王瑜敏
陈洁
+3 位作者
陶志华
陈占国
周武
何晶晶
《中华医院感染学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第7期1039-1041,共3页
目的建立巢式PCR(nPCR)检测人乳头状瘤病毒的方法学及作临床应用。方法以MY09/MY11为外引物,GP5+/GP6+为内引物建立nPCR,优化体系,评价其特异性和灵敏度,同时检测了54例HPV DNA阳性、4例弱阳性、42例阴性的标本,与基因导流杂交法作一致...
目的建立巢式PCR(nPCR)检测人乳头状瘤病毒的方法学及作临床应用。方法以MY09/MY11为外引物,GP5+/GP6+为内引物建立nPCR,优化体系,评价其特异性和灵敏度,同时检测了54例HPV DNA阳性、4例弱阳性、42例阴性的标本,与基因导流杂交法作一致比较。结果检测到单一目的片段;最低能检测到1∶16 384稀释的HPV18阳性对照品,明显高于MY09/MY11方法;nPCR法检测到60例HPV DNA阳性标本,40例HPV DNA阴性的标本,与基因导流杂交法具有较好的一致性(χ2=39.518,P<0.001;Kappa=0.628,P<0.001)。结论所建立的nPCR具有较好的特异性和灵敏度,与基因导流杂交法具有较好一致性。
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关键词
巢式PCR
基因导流杂交法
人乳头状瘤病毒
MY09/MY11
^
^
gp
5
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gp
6
^+
原文传递
题名
带有不同亚型HPVL_1基因片段的哺乳动物细胞克隆的建立
被引量：
1
1
作者
卓勤强
刘昕
钱春荣
刘丽莎
高玉梅
机构
第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期469-471,共3页
文摘
目的构建携带HPV亚型L1基因片段的标准细胞株。方法根据HPV通用引物GP5+/GP6+,用重叠延伸PCR方法合成HPV亚型L1基因中约150bp片段;插入真核细胞表达载体EGFPN1,用脂质体转染SPC细胞,筛选以获得带有不同HPVL1基因片段细胞克隆,并用定量PCR方法确认。结果重叠延伸PCR后得到约150bp的基因片段,测序结果经BLAST比对,分别与相应HPV亚型公开报告序列一致;将所获片段与EGFPN1载体连接后酶切及测序鉴定正确;经筛选获得了携带HPV6、11、16、18、31、35亚型L1基因片段的细胞株;并用定量PCR方法进行了确认。结论成功构建了带有不同HPV亚型L1基因片段的30个亚克隆和6个细胞株,为进一步的HPV分型检测研究提供了保证。
关键词
HPV
重叠延伸
^
^
gp
5
^+/
gp
6
^+
定量PCR
Keywords
HPV
overlap-extension
PCR
^
^
gp
5
^＋/
gp
6
^＋
quantitative
PCR
分类号
R394.33 [医药卫生—医学遗传学]
R394.2 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
巢式PCR检测人乳头状瘤病毒的方法学建立及临床应用
2
作者
王瑜敏
陈洁
陶志华
陈占国
周武
何晶晶
机构
温州医学院附属第一医院实验诊断中心
出处
《中华医院感染学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第7期1039-1041,共3页
文摘
目的建立巢式PCR(nPCR)检测人乳头状瘤病毒的方法学及作临床应用。方法以MY09/MY11为外引物,GP5+/GP6+为内引物建立nPCR,优化体系,评价其特异性和灵敏度,同时检测了54例HPV DNA阳性、4例弱阳性、42例阴性的标本,与基因导流杂交法作一致比较。结果检测到单一目的片段;最低能检测到1∶16 384稀释的HPV18阳性对照品,明显高于MY09/MY11方法;nPCR法检测到60例HPV DNA阳性标本,40例HPV DNA阴性的标本,与基因导流杂交法具有较好的一致性(χ2=39.518,P<0.001;Kappa=0.628,P<0.001)。结论所建立的nPCR具有较好的特异性和灵敏度,与基因导流杂交法具有较好一致性。
关键词
巢式PCR
基因导流杂交法
人乳头状瘤病毒
MY09/MY11
^
^
gp
5
^+/
gp
6
^+
Keywords
Nested
polymerase
chain
reaetion
Flow-through
hybridization
Human
papillomavirus
MY09/
MY11
^
^
gp
5
^＋/
gp
6
^＋
分类号
R373.9 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
带有不同亚型HPVL_1基因片段的哺乳动物细胞克隆的建立
卓勤强
刘昕
钱春荣
刘丽莎
高玉梅
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
1
下载PDF
职称材料
2
巢式PCR检测人乳头状瘤病毒的方法学建立及临床应用
王瑜敏
陈洁
陶志华
陈占国
周武
何晶晶
《中华医院感染学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
0
原文传递
已选择
0
条
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引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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