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实时荧光定量PCR技术检测转基因大豆方法的建立 被引量:55
1
作者 陈颖 徐宝梁 +3 位作者 苏宁 王媛 王丙武 葛毅强 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期65-69,共5页
采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对大豆中的内源基因Lectin和转基因大豆中的外源基因EPSPS进行了定量检测 ,建立了Monsanto公司生产的商业化转基因大豆Roundup Ready○R的定量PCR检测方法。该方法的检测灵敏度 <... 采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对大豆中的内源基因Lectin和转基因大豆中的外源基因EPSPS进行了定量检测 ,建立了Monsanto公司生产的商业化转基因大豆Roundup Ready○R的定量PCR检测方法。该方法的检测灵敏度 <0 0 1% ,是国际上设定的转基因最低限量的 10 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR技术 检测 转基因大豆 内源基因Lectin 外源基因NEPSPS
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实时荧光定量PCR技术在转基因玉米检测中的应用研究 被引量:43
2
作者 陈颖 徐宝梁 +2 位作者 苏宁 葛毅强 王曙光 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期602-607,共6页
采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对玉米中的内源基因Invertase和转基因玉米Mon810、Event 176中的外源基因进行了定量检测 ,建立了商业化转基因玉米Mon 810 (YieldGard)和Event 176 (Maximizer)的定量PCR检测方法... 采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对玉米中的内源基因Invertase和转基因玉米Mon810、Event 176中的外源基因进行了定量检测 ,建立了商业化转基因玉米Mon 810 (YieldGard)和Event 176 (Maximizer)的定量PCR检测方法。该方法的检测灵敏度小于 0 .0 1% ,是国际上设定的转基因最低限量的 10 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR技术 转基因玉米 定量检测 食品安全
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食用大豆油中DNA的快速提取和转基因成分定性检测 被引量:15
3
作者 王澎 金丽晨 +1 位作者 耿志明 刘蔼民 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2008年第6期940-943,共4页
转基因生物(GMO)制品中转基因成分检测的难点在于深加工产品中DNA的提取。本试验以食用大豆油为研究对象,研究操作简单、费用低廉的大豆深加工产品DNA提取的新方法。利用大豆内源基因Lectin设计引物,对所获得的DNA进行PCR检测,结果证实... 转基因生物(GMO)制品中转基因成分检测的难点在于深加工产品中DNA的提取。本试验以食用大豆油为研究对象,研究操作简单、费用低廉的大豆深加工产品DNA提取的新方法。利用大豆内源基因Lectin设计引物,对所获得的DNA进行PCR检测,结果证实通过本方法提取的DNA纯度足以进行PCR反应。利用转基因大豆转化载体序列设计引物,进一步对其转基因成分进行检测,结果表明,用本方法从转基因大豆油中提取的DNA含有转基因成分。 展开更多
关键词 大豆深加工产品 大豆油 PCR gmo检测
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国内外转基因检测标准体系现状与启示 被引量:16
4
作者 兰青阔 李文龙 +4 位作者 孙卓婧 赵新 陈锐 王永 宋贵文 《农业科技管理》 2020年第3期27-32,共6页
全球转基因作物产业化已经23年,种植面积增长了113倍,我国转基因技术已跻身国际先进行列,转基因作物产业化也有所突破。转基因检测标准体系是转基因生物安全管理必不可少的技术支撑。本研究对国内外主流的转基因检测标准体系进行检索,... 全球转基因作物产业化已经23年,种植面积增长了113倍,我国转基因技术已跻身国际先进行列,转基因作物产业化也有所突破。转基因检测标准体系是转基因生物安全管理必不可少的技术支撑。本研究对国内外主流的转基因检测标准体系进行检索,分析其转化体覆盖度、技术先进性等特点,并从定量检测方法、新型转基因产品检测方法、检测标准国际化等方面提出建议,以期为我国转基因检测标准体系进一步发展提供思路。 展开更多
关键词 转基因检测 方法标准 标准体系 研究进展
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转基因农产品标识管理和检测技术研究进展 被引量:12
5
作者 金红 《天津农业科学》 CAS 2002年第4期48-53,共6页
对国内外转基因植物和转基因农产品及其加工食品的释放情况进行综述,并介绍了世界主要国家和地区对转基因食品的安全管理法规,重点概述了转基因农产品及其加工食品检测技术的进展情况,对各种检测方法及其应用范围做了比较,提出了今后我... 对国内外转基因植物和转基因农产品及其加工食品的释放情况进行综述,并介绍了世界主要国家和地区对转基因食品的安全管理法规,重点概述了转基因农产品及其加工食品检测技术的进展情况,对各种检测方法及其应用范围做了比较,提出了今后我国在转基因检测技术方面的研究领域和发展趋势。 展开更多
关键词 转基因 农产品 标识管理 检测技术
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深加工转基因产品检测技术的研究进展 被引量:14
6
作者 金红 王永 程奕 《天津农业科学》 CAS 2003年第4期32-35,共4页
对国内外深加工产品转基因成分的检测技术进行了综述,重点介绍了目前各类转基因检测方法的发展情况,特别是深加工产品转基因检测技术的研究现状和发展趋势、制约因素、需要解决的关键技术。提出了今后在深加工产品转基因检测技术上的重... 对国内外深加工产品转基因成分的检测技术进行了综述,重点介绍了目前各类转基因检测方法的发展情况,特别是深加工产品转基因检测技术的研究现状和发展趋势、制约因素、需要解决的关键技术。提出了今后在深加工产品转基因检测技术上的重点研究方向。 展开更多
关键词 深加工转基因产品 检测技术 研究进展 发展趋势 转基因成分 DNA提取技术 PCR法 转基因食品 食品安全
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国内外转基因检测能力验证概述 被引量:11
7
作者 李夏莹 宋贵文 +5 位作者 刘鹏程 梁晋刚 王顥潜 张旭冬 李文龙 张秀杰 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期51-56,共6页
转基因检测以外源DNA、蛋白质等为检测对象,以定性和定量PCR技术、酶联免疫吸附技术为主要检测手段,最终判断样品中转基因成分组成及其含量。进行转基因检测的机构是转基因生物安全监管的重要技术支撑,应当确保检测结果可靠、准确。能... 转基因检测以外源DNA、蛋白质等为检测对象,以定性和定量PCR技术、酶联免疫吸附技术为主要检测手段,最终判断样品中转基因成分组成及其含量。进行转基因检测的机构是转基因生物安全监管的重要技术支撑,应当确保检测结果可靠、准确。能力验证是实验室内部和外部质量控制的有效手段,监管机构借此来确定检测实验室的能力和水平。当前,中国转基因检测能力验证的组织水平与国外相比还有较大差距。介绍了国外一些机构如Fapas、GIPSA、ISTA组织转基因能力验证工作的流程,其共同点都是盲样检测,对阳性成分进行定值,并以离散度来判定结果。同时,介绍了中国农业部和质检系统组织能力验证的通常做法,以期提出进一步加强我国转基因检测能力验证工作的对策和建议。 展开更多
关键词 国内外 转基因检测 能力验证
原文传递
大米和米制品Bt63转基因检测PCR方法的灵敏度研究 被引量:11
8
作者 吴志毅 张明哲 陈曦 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第6期549-554,共6页
采用普通PCR法和荧光定量PCR法对Bt63转基因大米的检测灵敏度进行对比研究。根据大米内源蔗糖磷酸合成酶基因SPS和结构特异性基因Btc的基因序列,选用特异性的引物和探针进行研究,经验证试验表明具有专一性,能用于品系鉴定。在灵敏度试验... 采用普通PCR法和荧光定量PCR法对Bt63转基因大米的检测灵敏度进行对比研究。根据大米内源蔗糖磷酸合成酶基因SPS和结构特异性基因Btc的基因序列,选用特异性的引物和探针进行研究,经验证试验表明具有专一性,能用于品系鉴定。在灵敏度试验中,阳性转基因大米按照不同质量百分比进行梯度稀释,提取DNA进行PCR扩增。结果表明,普通PCR检测的灵敏度在0.1%左右,而荧光定量PCR检测的灵敏度为0.01%,是普通PCR检测的10倍以上。应用两种方法对实际样品进行检测,都得到了较明显的内源SPS基因的扩增,而Btc基因都是阴性。荧光定量PCR方法避免了电泳检测的步骤,具有更高的安全性和简便性,因此日常检测中,利用荧光定量PCR技术检测Bt63转基因大米及其产品是一种快速、灵敏和准确的检测手段。 展开更多
关键词 转基因检测 普通PCR 荧光定量PCR Bt63大米
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转基因油菜筛查检测策略研究 被引量:10
9
作者 张丽 武玉花 +3 位作者 吴刚 曹应龙 李均 卢长明 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期74-81,共8页
根据收集到的国内外已商业化转基因油菜品种的基因元件信息,构建了油菜转基因检测分子特征矩阵,在分析基因元件使用频率的基础上,建立了转基因油菜的筛查检测策略。研究发现,利用P-CaMV35S、P-FMV35S和bar这三个元件组合,对现有转基因... 根据收集到的国内外已商业化转基因油菜品种的基因元件信息,构建了油菜转基因检测分子特征矩阵,在分析基因元件使用频率的基础上,建立了转基因油菜的筛查检测策略。研究发现,利用P-CaMV35S、P-FMV35S和bar这三个元件组合,对现有转基因油菜品种的筛查检出率可达100%。将P-CaMV35S、P-FMV35S、bar、CP4-EPSPS、PAT和T-NOS组合,每个转化事件可检出至少两次,增加了检测的可靠性。同时,分析了不同转化事件中同名基因元件的序列差异,进一步验证了分子特征矩阵筛查方法的可行性。 展开更多
关键词 转基因油菜 转基因检测 筛查方法 矩阵分析 PCR
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转基因作物筛查用阳性质粒分子的构建及应用研究 被引量:9
10
作者 胡尚杰 吴刚 +2 位作者 武玉花 曹应龙 卢长明 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期173-179,共7页
通过分析全球商业化种植的转基因作物分子特征,选取常用的调控元件启动子CaMV35S、FMV35S和nos,终止子NOS、T-35S、g73′和E93′,标记基因bar、NPTII、hptII、pmi作为筛查靶标序列,通过重组PCR技术将这些元件克隆到双元载体pBI121上,构... 通过分析全球商业化种植的转基因作物分子特征,选取常用的调控元件启动子CaMV35S、FMV35S和nos,终止子NOS、T-35S、g73′和E93′,标记基因bar、NPTII、hptII、pmi作为筛查靶标序列,通过重组PCR技术将这些元件克隆到双元载体pBI121上,构建成包含11个转基因元件的通用阳性质粒分子pBI121-ELEMENTS。质粒序列信息已提交至GenBank并获得序列号HM047294。该质粒分子对目前国内外批准的5类主要转基因作物(大豆、油菜、玉米、棉花和水稻)理论筛查覆盖率达到91.5%,对我国批准进口的27种转基因作物的理论筛查覆盖率达100%。以pBI121-ELEMENTS为阳性对照,筛查7个转基因品系,结果显示该分子能够有效用于转基因作物定性筛查。 展开更多
关键词 转基因植物 筛查检测 阳性对照质粒 重组PCR
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转基因产品检测标准物质量值一致性研究进展 被引量:9
11
作者 王颢潜 李夏莹 +7 位作者 张丽 赵新 陈锐 陈笑芸 高芳瑞 兰青阔 王永 张秀杰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期2-8,共7页
转基因产品检测标准物质是转基因生物安全管理的物质基础,是检测结果可比性、有效性和溯源性的保障。当前国际上转基因产品检测标准物质研发机构主要有欧盟联合研究中心、美国油脂化学家学会等。我国近年也研发了一系列转基因成分检测... 转基因产品检测标准物质是转基因生物安全管理的物质基础,是检测结果可比性、有效性和溯源性的保障。当前国际上转基因产品检测标准物质研发机构主要有欧盟联合研究中心、美国油脂化学家学会等。我国近年也研发了一系列转基因成分检测标准物质。对各机构研发的标准物质种类、数量、量值表述方式以及量值转换进行汇总、统计、分析,挖掘异同点,并在国内外交流合作、新型标准物质研发以及标准物质应用方面提出合理化建议,以期为我国转基因产品检测标准物质研发和应用提供支撑。 展开更多
关键词 转基因检测 标准物质 量值
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转基因大豆及其制品的安全性和检测研究现状 被引量:6
12
作者 陈继承 周瑞宝 《粮食加工》 2005年第3期58-62,共5页
转基因大豆及其制品日益增多,已经直接或间接地成为人类消费的食品,进入人们的食物链。转基因大豆及其制品对人体健康及生态环境的影响越来越引起人们关注,阐述了转基因大豆及其制品的安全性,并对其检测现状进行了概述。
关键词 转基因大豆 安全性 检测 gmo PCR
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油料作物内标准基因研究与应用 被引量:5
13
作者 张丽 吴刚 +4 位作者 曹应龙 肖玲 胡亚平 陈桂敏 卢长明 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期544-550,559,共8页
内标准基因(Endogenous reference gene)是指具有植物物种专一性且拷贝数恒定、不显示等位基因变化的保守DNA序列。可用于对基因组中某一目的基因进行定量分析和验证PCR反应体系中是否存在抑制物质。基于其物种特异性,内标准基因还能用... 内标准基因(Endogenous reference gene)是指具有植物物种专一性且拷贝数恒定、不显示等位基因变化的保守DNA序列。可用于对基因组中某一目的基因进行定量分析和验证PCR反应体系中是否存在抑制物质。基于其物种特异性,内标准基因还能用于食品搀假使杂的判定。油料作物涉及我们日常生活的方方面面,油料制品的鉴别和转基因油料作物的检测急需使用内标准基因,目前,油料作物内标准基因的研究与应用取得了长足进展,但是还没有对它们进行综合比较和分析的报道。本文根据国内外有关油料作物内标准基因的研究,阐述了各物种已开发的内标准基因,并对这些基因从引物位置、扩增片段的大小、拷贝数等特征进行比较和分析。本文综述了油料作物内源特异参照基因的研究概况和存在问题,有助于对油料作物及其它作物内源特异参照基因的进一步开发和深入研究。 展开更多
关键词 内标准基因 油料作物 成分鉴定 转基因检测
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玉米转基因成分筛查策略 被引量:6
14
作者 温洪涛 李夏莹 +4 位作者 杨洋 陈子言 丁一佳 张秀杰 张瑞英 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期39-47,共9页
本研究通过查阅相关数据库中转基因玉米品系中的常用遗传转化载体中含有的调控元件和标记基因,并结合目前国内外现有转基因检测标准方法,建立了基于P-CaMV 35S、T-NOS、Bar基因、Pat基因、Cp4-epsps基因、NPTⅡ基因、cry1A基因、P-Rice ... 本研究通过查阅相关数据库中转基因玉米品系中的常用遗传转化载体中含有的调控元件和标记基因,并结合目前国内外现有转基因检测标准方法,建立了基于P-CaMV 35S、T-NOS、Bar基因、Pat基因、Cp4-epsps基因、NPTⅡ基因、cry1A基因、P-Rice actin、phy结构特异性片段等9种元件/基因实时荧光PCR方法的玉米转基因筛查策略,并对32种转基因玉米进行筛查实验测试,结果表明本筛查策略可覆盖30种独立性状转化体。同时还构建了包含玉米内标基因及9种目标元件/基因序列的质粒分子,经过验证该质粒分子具有良好的可替代性,可作为阳性对照与本检测方法配套使用。 展开更多
关键词 转基因玉米 筛查 转化体 鉴定
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9种转基因玉米外源基因核酸质谱检测方法研究
15
作者 卢小雨 张郁 +4 位作者 吕文刚 郭惠民 向才玉 郭悠然 章桂明 《玉米科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期40-45,共6页
针对目前转基因玉米高通量快速筛查技术缺乏,首次利用飞行时间核酸质谱技术,建立pCaMV35S、pFMV35S、tNOS、NPTII、BAR、PAT、CP4-EPSPS、CTP2-CP4-EPSPS和CryIA(b)9种转基因玉米常见外源基因及玉米内源基因ZEIN一次性快速筛查检测方法... 针对目前转基因玉米高通量快速筛查技术缺乏,首次利用飞行时间核酸质谱技术,建立pCaMV35S、pFMV35S、tNOS、NPTII、BAR、PAT、CP4-EPSPS、CTP2-CP4-EPSPS和CryIA(b)9种转基因玉米常见外源基因及玉米内源基因ZEIN一次性快速筛查检测方法,靶基因检测限最低为20拷贝。研究建立的方法特异性强、稳定性好、灵敏度高,可用于进口玉米及其产品中转基因成分的快速筛查,为缩短检测周期和提高商品通关速度提供便利。 展开更多
关键词 玉米 外源基因 质谱分析 转基因检测
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转基因玉米Bt11品系特异性荧光RPA检测 被引量:6
16
作者 李凯 金芜军 +3 位作者 李亮 苗朝华 刘卫晓 宛煜嵩 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期4741-4745,共5页
重组酶聚合酶介导的等温扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)作为一种新型等温扩增技术,具有反应时间短、灵敏度高、特异性强等特点,在转基因检测领域得到了广泛关注。本研究针对转基因玉米Bt11外源插入链接区域设计筛选了... 重组酶聚合酶介导的等温扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)作为一种新型等温扩增技术,具有反应时间短、灵敏度高、特异性强等特点,在转基因检测领域得到了广泛关注。本研究针对转基因玉米Bt11外源插入链接区域设计筛选了特异性引物和探针,建立了快速准确的荧光RPA检测方法,在39℃条件下,20 min内完成扩增并且能够实时监测,可以准确有效地检测到50个拷贝的靶标片段。而且,对于背景复杂的植物基因组DNA能够得到准确的扩增曲线。本研究不仅可以满足常规实验室检测,通过RPA便携式仪器,还可以满足转基因植物现场检测,具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 等温扩增 实时荧光RPA 转基因检测 Bt11
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植酸酶基因定性PCR检测方法及阳性质粒分子的构建 被引量:5
17
作者 李俊 刘信 +5 位作者 曹应龙 武玉花 厉建萌 吴刚 张丽 卢长明 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期639-647,共9页
植酸酶基因在农业生产中具有很高的应用价值,正被广泛用于农作物的基因工程研究。为了满足转植酸酶基因作物安全监管的需要,通过优化PCR检测条件,建立了植酸酶基因特异性定性PCR检测方法。该方法具有良好的扩增特异性和检测灵敏度,可以... 植酸酶基因在农业生产中具有很高的应用价值,正被广泛用于农作物的基因工程研究。为了满足转植酸酶基因作物安全监管的需要,通过优化PCR检测条件,建立了植酸酶基因特异性定性PCR检测方法。该方法具有良好的扩增特异性和检测灵敏度,可以满足我国植酸酶转基因作物监管需要。此外,我们将6种主要农作物(小麦、水稻、棉花、大豆、玉米和油菜)的内标准基因和植酸酶基因克隆到同一载体上,构建成了阳性质粒分子pBS Endogenous-phytase。该质粒分子适用于这6种作物中植酸酶基因的筛查检测。本研究为转植酸酶基因作物的安全监管提供了阳性材料和检测方法。 展开更多
关键词 转基因检测 植酸酶基因 定性PCR 阳性质粒分子
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应用多重PCR-DHPLC方法快速检测转基因马铃薯及EH92-527-1品系鉴定 被引量:5
18
作者 白月 栾凤侠 高宏伟 《中国马铃薯》 2011年第3期129-134,共6页
以EH92-527-1转基因马铃薯为试材,应用多重PCR技术同时扩增马铃薯的内源基因(UGPase)和外源基因(NOS终止子、NPTII结构基因和EH92-527-1品系特异基因),将扩增产物在DHPLC非变性条件下分离,分析几个基因扩增的结果;将模板进行稀释,确定... 以EH92-527-1转基因马铃薯为试材,应用多重PCR技术同时扩增马铃薯的内源基因(UGPase)和外源基因(NOS终止子、NPTII结构基因和EH92-527-1品系特异基因),将扩增产物在DHPLC非变性条件下分离,分析几个基因扩增的结果;将模板进行稀释,确定了方法的检测灵敏度,并与凝胶电泳结果相比较,建立了马铃薯转基因成分筛选检测及品系鉴定的多重PCR-变性高效液相色谱(DHPLC)方法。试验结果表明,该方法能够同时筛选检测转基因马铃薯的四个内、外源基因,且与凝胶成像相比,有更好的检测灵敏度,可达到1 ng/μL。本文首次建立的马铃薯多重PCR-DHPLC检测方法,能够高通量快速准确的检测马铃薯中的转基因成分及对品系进行鉴定。 展开更多
关键词 转基因马铃薯 多重PCR 变性高效液相色谱 筛选检测 品系鉴定
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转基因产品中bar和pat基因的SYBR Green I-PCR检测方法研究(英文) 被引量:4
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作者 许文涛 黄昆仑 罗云波 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第3期202-206,共5页
SYBRGreenI是一种在实时定量PCR检测中广泛使用的DNA结合染料。PCR结果可以通过溶解曲线分析来鉴定而不再需要使用传统的琼脂糖凝胶电泳来鉴定,因为PCR特定扩增产物的溶解温度的特异性是类似于琼脂糖凝胶电泳中的扩增条带的特异性。建... SYBRGreenI是一种在实时定量PCR检测中广泛使用的DNA结合染料。PCR结果可以通过溶解曲线分析来鉴定而不再需要使用传统的琼脂糖凝胶电泳来鉴定,因为PCR特定扩增产物的溶解温度的特异性是类似于琼脂糖凝胶电泳中的扩增条带的特异性。建立了基于扩增产物溶解曲线分析的二重实时定量PCR对转bar和pat基因的作物进行检测的方法。获得了bar和pat基因的特异性扩增产物和他们的特定溶解温度,并且通过几组不同的二重PCR对他们的扩增产物进行了溶解曲线鉴定。还对影响溶解曲线分析的一些因素进行了研究和讨论。结果表明基于扩增产物的溶解温度建立的二重PCR检测方法是可行的,该方法对转bar和pat基因的作物可达到0.9%的检测限。 展开更多
关键词 转基因产品 检测 SYBR Green I BAR PAT
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多重PCR-DHPLC法检测转基因棉花品系 被引量:4
20
作者 向才玉 凌杏园 +6 位作者 潘广 康林 陈冬美 李秋枫 刘新娇 欧阳辉 章桂明 《植物检疫》 北大核心 2015年第1期37-41,共5页
根据3种转基因棉花品系的边界序列设计品系检测引物,建立了一种特异性检测转基因棉花品系MON531、MON1445和MON15985的多重PCR-DHPLC方法。以20种不同的转基因及非转基因作物DNA验证该方法的特异性,结果只有MON531、MON15985和MON1445... 根据3种转基因棉花品系的边界序列设计品系检测引物,建立了一种特异性检测转基因棉花品系MON531、MON1445和MON15985的多重PCR-DHPLC方法。以20种不同的转基因及非转基因作物DNA验证该方法的特异性,结果只有MON531、MON15985和MON1445有特异的品系扩增片段峰,而其他转基因和非转基因作物无品系扩增片段峰,表明该方法特异性强。灵敏度实验结果表明3种转基因棉花的检测下限均为1 ng,灵敏度高。建立的方法可用于转基因棉花MON531、MON1445和MON15985品系及含有其成分产品的筛查或定性检测。 展开更多
关键词 转基因棉花 多重PCR DHPLC 检测
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