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GM-CSF重组腺病毒扩增的骨髓树突状细胞体外经肿瘤抗原刺激后诱导抗肿瘤免疫应答 被引量：14
1
作者 章卫平 曹雪涛 +3 位作者 张明徽 黄欣 朱学军 叶天星 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期29-33,共5页
用ＧＭ－ＣＳＦ重组腺病毒感染小鼠骨髓细胞，观察扩增到的骨髓树突状细胞的生物学功能。结果表明，ＧＭ－ＣＳＦ重组腺病毒一次性感染骨髓细胞，１ｗ后能从一只小鼠股骨中扩增到２．４×１０６～３．３×１０６树突状细胞，扩... 用ＧＭ－ＣＳＦ重组腺病毒感染小鼠骨髓细胞，观察扩增到的骨髓树突状细胞的生物学功能。结果表明，ＧＭ－ＣＳＦ重组腺病毒一次性感染骨髓细胞，１ｗ后能从一只小鼠股骨中扩增到２．４×１０６～３．３×１０６树突状细胞，扩增到的骨髓树突状细胞表达ＭＨＣ－Ⅱ、ＭＨＣ－Ⅰ、Ｂ７－１、Ｂ７－２和Ｉ－ＣＡＭ－１等免疫分子，分泌一定水平的ＧＭ－ＣＳＦ，对同种异体Ｔ细胞具有很强的刺激活性，体外经Ｂ１６肿瘤瘤苗刺激后免疫同系小鼠，能诱导出抗原特异性的ＣＴＬ活性，使免疫动物产生更强的保护性免疫反应，抵抗Ｂ１６细胞的攻击。提示可用ＧＭ－ＣＳＦ重组腺病毒从骨髓中扩增足够数量的树突状细胞，用于肿瘤的免疫治疗和基因治疗。 展开更多
关键词 骨髓细胞 树突状细胞 gm-csf 肿瘤免疫学
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天灸调节环磷酰胺小鼠造血功能的研究 被引量：15
2
作者 孙德利 皇甫宏 +5 位作者 郑东升 解光尧 陈华德 方剑乔 陈海英 吴焕淦 《浙江中医学院学报》 2002年第3期55-57,共3页
目的 :探讨天灸抗化疗骨髓抑制的作用机理。方法 :利用环磷酰胺小鼠模型 ,通过斑蝥酊天灸“大椎”、“肾俞”、“足三里”等穴 ,观察其对小鼠白细胞、骨髓有核细胞、脾指数及粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子(GM CSF)的作用。结果 :环磷酰... 目的 :探讨天灸抗化疗骨髓抑制的作用机理。方法 :利用环磷酰胺小鼠模型 ,通过斑蝥酊天灸“大椎”、“肾俞”、“足三里”等穴 ,观察其对小鼠白细胞、骨髓有核细胞、脾指数及粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子(GM CSF)的作用。结果 :环磷酰胺化疗可以引起小鼠严重的骨髓抑制 ,可见骨髓有核细胞和白细胞计数明显减少 ,脾指数减低 ;使腹腔巨噬细胞(MΦ)产生GM CSF的能力显著降低。天灸“大椎”、“肾俞”、“足三里”穴 ,对化疗骨髓抑制有明显的改善作用 ,可以显著增加骨髓有核细胞和白细胞计数 ,增加脾指数 ;对腹腔巨噬细胞产生GM CSF的能力有显著的增强作用。结论 展开更多
关键词 造血功能 天灸 环磷酰胺 巨噬细胞 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 针灸 动物实验
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caspase3在细胞因子调节急性白血病细胞凋亡中的变化 被引量：10
3
作者 樊娟 徐功立 +2 位作者 徐健 王春霞 马兰英 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期305-308,共4页
目的　研究caspase 3在粒细胞集落刺激因子 (G CSF)和粒 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)调节白血病细胞系NB4细胞凋亡过程中的变化及其意义。方法　利用细胞形态学、流式细胞仪分析及DNA片段化比率测定 ,检测G CSF及GM CSF对NB4细胞凋... 目的　研究caspase 3在粒细胞集落刺激因子 (G CSF)和粒 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)调节白血病细胞系NB4细胞凋亡过程中的变化及其意义。方法　利用细胞形态学、流式细胞仪分析及DNA片段化比率测定 ,检测G CSF及GM CSF对NB4细胞凋亡的影响 ,应用荧光分光光度法检测caspase3活性变化 ,并利用AC DEVD CHO进行caspase 3抑制试验。结果　G CSF能诱导NB4细胞凋亡 ,而GM CSF则无此作用 ;G CSF诱导的细胞凋亡过程中caspase 3活性明显升高 ,而AC DEVD CHO能有效地阻断G CSF诱导的细胞凋亡。结论　G CSF及GM CSF对NB4细胞的凋亡有着不同的调节作用 ,G CSF通过激活caspase 3而诱导白血病细胞的凋亡 ,caspase 3在细胞凋亡中起重要作用。 展开更多
关键词 急性白血病 G-csf 细胞凋亡 CASPASE3 gm-csf
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人脐血来源的树突状细胞的体外培养扩增 被引量：6
4
作者 蔡大川 李用国 +2 位作者 任红 梁增伟 罗云萍 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第B06期26-29,共4页
目的　于体外从人脐血中培养扩增树突状细胞。方法　从剖腹产胎盘中抽取脐血 ,分离单个核细胞 ,按程序加入细胞因子组合 (SCF +GM CSF +IL 4 +TNF α)进行培养及相应的鉴定。结果　培养至 6～ 7d即出现较为典型的DC ,15d培养周期结束后 ... 目的　于体外从人脐血中培养扩增树突状细胞。方法　从剖腹产胎盘中抽取脐血 ,分离单个核细胞 ,按程序加入细胞因子组合 (SCF +GM CSF +IL 4 +TNF α)进行培养及相应的鉴定。结果　培养至 6～ 7d即出现较为典型的DC ,15d培养周期结束后 ,经流式细胞仪检测 ,所得的细胞中 ,CD1a的表达率为 18.5 3% ,并表达功能相关分子CD4 0、CD86、MHCⅡ DR ,能刺激同种T细增殖。结论　利用细胞因子组合可以从脐血单个核细胞中诱导出DC 。 展开更多
关键词 体外培养扩增 树突状细胞 脐血 单个核细胞 干细胞因子 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子
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乙型肝炎HBsAg和GM-CSF融合表达质粒的构建及表达 被引量：9
5
作者 卿玉玲 赵嘉将 任红 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期201-204,207,共5页
目的　构建乙型肝炎HBsAg和GM CSF的融合表达质粒 ,借助GM CSF的免疫佐剂作用 ,提高乙型肝炎DNA疫苗的免疫效果。方法　用PCR方法及分子克隆技术构建融合表达质粒pcDNA3.1 S GM CSF和pcDNA3.1 GM CSF S ,并以重组质粒转染真核细胞 ,... 目的　构建乙型肝炎HBsAg和GM CSF的融合表达质粒 ,借助GM CSF的免疫佐剂作用 ,提高乙型肝炎DNA疫苗的免疫效果。方法　用PCR方法及分子克隆技术构建融合表达质粒pcDNA3.1 S GM CSF和pcDNA3.1 GM CSF S ,并以重组质粒转染真核细胞 ,研究重组质粒体外表达。结果　经酶切鉴定及DNA序列证实重组质粒构建正确 ,细胞转染试验表明重组质粒能在COS 7及HepG 2内表达。结论　乙型肝炎HBsAg和GM CSF的融合表达质粒构建成功 。 展开更多
关键词 乙型肝炎 HBSAG gm-csf 融合表达质粒 构建 表达
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MTT比色法在检测重组人GM-CSF生物活性中的应用 被引量：6
6
作者 张冬梅 施晓青 +1 位作者 朱洁 秦浚川 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1997年第2期253-258,共6页
探索了ＭＴＴ比色法的一系列实验条件，并利用ＧＭ－ＣＳＦ依赖细胞株ＴＦ－１，测定了家蚕基因工程生产的重组人ＧＭ－ＣＳＦ（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ－ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ）的生... 探索了ＭＴＴ比色法的一系列实验条件，并利用ＧＭ－ＣＳＦ依赖细胞株ＴＦ－１，测定了家蚕基因工程生产的重组人ＧＭ－ＣＳＦ（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ－ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ）的生物活性，并与半固体培养集落刺激法进行了比较。 展开更多
关键词 MTT 生物活性 基因工程 光度法 重线人gm-csf
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GM-CSF和TNF对人血树突状细胞抗肿瘤活性的影响 被引量：5
7
作者 张锦堃 陈海滨 +2 位作者 孙劲旅 周燕琼 曲耀君 《上海免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期35-37,共3页
-观察了新鲜分离和经体外培养 36h的人外周血树突状细胞DC 0和DC 36 ,在GM CSF或TNF作用下 ,辅助淋巴因子和PHA激活的杀伤细胞 (LPAK )体外杀伤人肝癌细胞株BEL 740 2的影响。实验在BEL 740 2、LPAK和DC (DC 0或DC 36 )相混合的基本条件... -观察了新鲜分离和经体外培养 36h的人外周血树突状细胞DC 0和DC 36 ,在GM CSF或TNF作用下 ,辅助淋巴因子和PHA激活的杀伤细胞 (LPAK )体外杀伤人肝癌细胞株BEL 740 2的影响。实验在BEL 740 2、LPAK和DC (DC 0或DC 36 )相混合的基本条件下 ,分别添加GM CSF (5 0 0u/ml,10 0u/ml)或TNF (5 0 0 0u/ml,5 0 0u/ml) ,温育 48h后用中性红比色法检测细胞毒活性。结果显示 ,加入GM CSF各组的细胞毒活性明显增高 (P <0 0 1) ,并在浓度为 10 0u/ml时达到最大效应。加入TNF各组的细胞毒活性也明显增高 (P <0 0 1) ,但存在着剂量依赖关系。DC 36各组与相应的DC 0组比较 ,细胞毒活性明显增高 (P <0 0 1)。表明新鲜分离的DC经 36h培养后 ,其辅助的抗肿瘤活性明显增强 ,与GM CSF和TNF也有更大的协同作用。 展开更多
关键词 树突状细胞 gm-csf TNF 抗肿瘤 细胞培养
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CD自杀基因联合GM-CSF基因治疗的抗肿瘤作用及免疫机理 被引量：6
8
作者 鞠佃文 曹雪涛 +4 位作者 王宝梅 银平章 万涛 陶群 章卫平 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期148-151,共4页
目的研究自杀基因与粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因联合治疗抗肿瘤作用及免疫机理。方法小鼠皮下接种黑色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞３天后，分别在肿瘤局部直接注射表达小鼠ＧＭ－ＣＳＦ的重组腺病毒ＡｄＧＭ－ＣＳＦ和... 目的研究自杀基因与粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因联合治疗抗肿瘤作用及免疫机理。方法小鼠皮下接种黑色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞３天后，分别在肿瘤局部直接注射表达小鼠ＧＭ－ＣＳＦ的重组腺病毒ＡｄＧＭ－ＣＳＦ和表达大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因的腺病毒Ａｄ－ＣＤ，然后连续１０天腹腔注射５氟胞嘧啶（５ＦＣ）（ＡｄＣＤ／５ＦＣ／ＡｄＧＭＣＳＦ组）、单用ＡｄＣＤ／５ＦＣ组、单用ＡｄＧＭ－ＣＳＦ组、注射对照病毒ＡｄｌａｃＺ／５ＦＣ组或ＰＢＳ组。结果与接受ＡｄＣＤ／５ＦＣ、ＡｄＧＭ－ＣＳＦ、ＡｄｌａｃＺ／５ＦＣ或ＰＢＳ治疗的荷瘤小鼠比较，经联合治疗后荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长明显受到抑制，荷瘤小鼠的存活期明显延长（Ｐ＜０．０１）。经ＡｄＣＤ／５ＦＣ／ＡｄＧＭＣＳＦ联合基因治疗后，肿瘤瘤体内或瘤周有大量树突状细胞、ＣＤ８＋Ｔ细胞浸润，黑色素瘤细胞表达ＭＨＣ－Ⅰ和Ｂ７－１分子明显增加，荷瘤小鼠脾细胞对Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤细胞特异性杀伤功能增强。结论联合应用自杀基因和ＧＭ－ＣＳＦ基因转移可以直接杀伤肿瘤细胞，又可提高机体对肿瘤的免疫应答。 展开更多
关键词 基因治疗 腺病毒载体 自杀基因 肿瘤 gm-csf
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墓头回诱导脐血基质细胞形成及分泌GM-CSF的实验研究 被引量：7
9
作者 赵丽 李兴玉 马海珍 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期56-58,共3页
目的　应用细胞培养技术检测了墓头回水提物对人脐血基质细胞生成及其分泌粒系造血刺激因子的实验研究。方法　将不同浓度的墓头回水提物与脐血共同培养 14d,检测基质细胞上清液中的 GM- CSF活性。结果　墓头回水提物对人脐血基质细胞... 目的　应用细胞培养技术检测了墓头回水提物对人脐血基质细胞生成及其分泌粒系造血刺激因子的实验研究。方法　将不同浓度的墓头回水提物与脐血共同培养 14d,检测基质细胞上清液中的 GM- CSF活性。结果　墓头回水提物对人脐血基质细胞具有促进形成的作用 ,最高峰为 0 .0 1μg/ m L,为了检测基质细胞上清液中的 GM-CSF活性 ,进行了 GM- CFU实验 ,结果表明 ,实验各组数据与对照组比较 ,具有非常显著性差异 (P<0 .0 1)。结论　墓头回水提物不仅是一种强烈的抗癌药物 。 展开更多
关键词 墓头回 基质细胞 gm-csf 脐血 动物实验
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辐射诱导性启动子调控GM-CSF基因的表达 被引量：7
10
作者 杜楠 裴雪涛 +3 位作者 罗成基 冯凯 李梁 白慈贤 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期336-338,共3页
构建携带早期生长反应基因 (Egr 1)启动子的GM CSF和增强绿色荧光蛋白 (EGFP)双顺反子基因表达载体 (Egr EG)。通过脂质体转染骨髓基质细胞系HFCL(称为HFCL/EG) ,采用FACS分析EGFP表达的阳性细胞 ,用RT PCR、ELISA及集落增殖法分析GM CS... 构建携带早期生长反应基因 (Egr 1)启动子的GM CSF和增强绿色荧光蛋白 (EGFP)双顺反子基因表达载体 (Egr EG)。通过脂质体转染骨髓基质细胞系HFCL(称为HFCL/EG) ,采用FACS分析EGFP表达的阳性细胞 ,用RT PCR、ELISA及集落增殖法分析GM CSFmRNA、GM CSF含量的表达及对CFU GM的增殖作用。结果显示 :HFCL/EG细胞证实有外源性基因EGFP和GM CSF的整合和表达及对CFU GM的增殖作用。提示Egr 1调控序列启动的GM CSF基因修饰的基质细胞经辐射造血因子表达明显增高 ,并对造血细胞具有一定的保护作用。 展开更多
关键词 辐射效应 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 基因表达 基因调控 造血细胞 gm-csf
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huIL-6-GM-CSF(9-127)融合蛋白的表达及活性测定 被引量：4
11
作者 孙强明 戴长柏 +4 位作者 李洪钊 丁云菲 马雁冰 刘红岩 徐维明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期253-257,共5页
目的　构建及表达具有huIL 6和huGM CSF双重生物学活性的huIL 6 GM CSF(9- 12 7)融合蛋白分子。方法　应用PCR技术对huIL 6和huGM CSF的基因分别加以改造 ,同时在二者之间加上连接肽序列 (G G S G S) 3 ,克隆PCR产物 ,并构建成pBV2 2 0... 目的　构建及表达具有huIL 6和huGM CSF双重生物学活性的huIL 6 GM CSF(9- 12 7)融合蛋白分子。方法　应用PCR技术对huIL 6和huGM CSF的基因分别加以改造 ,同时在二者之间加上连接肽序列 (G G S G S) 3 ,克隆PCR产物 ,并构建成pBV2 2 0 IL 6 GM CSF(9- 12 7)表达质粒 ,将表达质粒导入E .coliDH5α中 ,诱导表达融合蛋白。通过QSepharoseH .P .离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白。使用MTT法测量其huIL 6和huGM CSF生物学活性。结果　pUC18 IL 6 GM CSF(9- 12 7)的序列与理论设计完全一致 ,表达质粒在E .coliDH5α中得到高效表达 ,表达的融合蛋白占总蛋白含量的 30 %以上 ,表达产物以包涵体的形式存在。通过QSepharoseH .P .离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化及复性后获得目的蛋白 ,其纯度达到 96 %以上。融合蛋白具有huIL 6和huGM CSF的双重生物学活性 ,其促进huIL 6依赖细胞株B9和huGM CSF依赖细胞株TF 1增殖的比活性分别为 2 .86× 10 7U/mg和 3.33× 10 8U/mg。结论　获得了具有较高纯度和双重生物学活性的huIL 6 GM CSF(9- 12 7) 展开更多
关键词 gm-csf 融合蛋白 基因表达 基因克隆 白细胞介素-6 生物活性蛋白
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B7.1、GM-CSF基因修饰的EL-4细胞激发小鼠抗淋巴瘤免疫反应 被引量：5
12
作者 杨旭伟 陈元仲 +3 位作者 林振兴 陈英玉 兰小鹏 林景娟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期359-362,共4页
目的　研究B7.1、GM CSF基因修饰的淋巴瘤瘤苗进行恶性淋巴瘤免疫基因治疗的有效性。方法　用逆转录病毒载体分别将B7.1和GM CSF基因导入小鼠淋巴瘤细胞EL 4中 ,得到EL 4 /B7和EL 4 /GM转基因瘤苗细胞。观察EL 4 /B7和EL 4 /GM瘤苗细胞... 目的　研究B7.1、GM CSF基因修饰的淋巴瘤瘤苗进行恶性淋巴瘤免疫基因治疗的有效性。方法　用逆转录病毒载体分别将B7.1和GM CSF基因导入小鼠淋巴瘤细胞EL 4中 ,得到EL 4 /B7和EL 4 /GM转基因瘤苗细胞。观察EL 4 /B7和EL 4 /GM瘤苗细胞对荷淋巴瘤小鼠的免疫治疗作用 ,以及预先接种过EL 4 /B7或 /和EL 4 /GM瘤苗的小鼠 ,对野生型EL 4细胞致瘤性作用的影响 ,并检测接种EL 4 /B7或 /和EL 4 /GM瘤苗的小鼠血浆IL 2及TNF α的水平 ,及其脾淋巴细胞对野生型EL 4的细胞毒效应。另外 ,检测经EL 4 /B7、EL 4 /GM刺激后的小鼠脾淋巴细胞的增殖程度。结果　①经EL 4 /B7、EL 4 /GM细胞注射后 ,荷瘤小鼠的淋巴瘤生长速度变慢、生存时间延长 ,淋巴瘤组织中出现大量的炎症细胞 ;②接种一定数量的EL 4 /B7、EL 4 /GM细胞的小鼠 ,能抵抗野生型EL 4细胞的攻击 ;③接种瘤苗的小鼠血浆IL 2的水平明显升高 ,而TNF α的水平无明显变化 ;④接种瘤苗的小鼠脾淋巴细胞 ,对野生型EL 4细胞有明显的细胞毒效应 ;EL 4 /B7、EL 4 /GM细胞能刺激小鼠脾淋巴细胞明显增殖。结论　B7.1、GM CSF基因修饰的EL 4细胞 ,能有效地激发C5 7BL/ 6小鼠的抗淋巴瘤免疫反应 ,且B7.1基因与GM 展开更多
关键词 B7.1 gm-csf 免疫基因治疗 淋巴瘤
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地高辛标记的cDNA探针检测GM-CSFm RNA表达 被引量：7
13
作者 王亚平 王勇 +2 位作者 郑敏 姜蓉 李静 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期266-269,共4页
采用随机引物法对人ＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ 探针进行地高辛标记，核酸分子原位杂交技术对人胸腺细胞、骨髓基质细胞、白血病细胞株（ＨＬ－６０，Ｋ５６２）、脐血细胞和胎肝组织的ＧＭ－ＣＳＦｍ ＲＮＡ的表达水平进行检测。结果表明：... 采用随机引物法对人ＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ 探针进行地高辛标记，核酸分子原位杂交技术对人胸腺细胞、骨髓基质细胞、白血病细胞株（ＨＬ－６０，Ｋ５６２）、脐血细胞和胎肝组织的ＧＭ－ＣＳＦｍ ＲＮＡ的表达水平进行检测。结果表明：地高辛标记的ＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ 探针使用简便、灵敏度高、特异性强、杂交结果直观，探针可较长时间保存和无放射性污染等优点。 展开更多
关键词 CM-csf CDNA探针 基因表达
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阳离子脂质体介导hGM-CSF真核表达载体在骨髓基质细胞系中的表达 被引量：4
14
作者 马俐君 王冠军 +3 位作者 李梁 冯凯 白慈贤 裴雪涛 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第12期624-627,共4页
目的　构建人粒 巨噬细胞集落刺激因子 (hGM CSF)真核表达载体pIRES1neo hGM CSF ,并观察其在人骨髓基质细胞系HFCL中的表达。方法　用DNA重组技术 ,将hGM CSFcDNA插入到真核表达载体pIRES1neo的多克隆位点中 ,获得阳性重组载体pIRES1ne... 目的　构建人粒 巨噬细胞集落刺激因子 (hGM CSF)真核表达载体pIRES1neo hGM CSF ,并观察其在人骨髓基质细胞系HFCL中的表达。方法　用DNA重组技术 ,将hGM CSFcDNA插入到真核表达载体pIRES1neo的多克隆位点中 ,获得阳性重组载体pIRES1neo hGM CSF。以脂质体介导法转染人骨髓基质细胞系HFCL细胞 ,筛选获得的阳性细胞用Southernblot和Northernblot方法分别检测其基因组DNA整合和mRNA转录 ,用ELISA及依赖株 (TF 1)法检测其蛋白表达量和活性。结果　酶切鉴定表明成功地构建了重组真核表达载体pIRES1neo hGM CSF ;hGM CSF基因已整合到HFCL细胞基因组DNA中 ,在mRNA和蛋白质水平上均可检测到其表达 ;hGM CSF的表达量为 (5 6 .9± 0 .7)ng 10 6细胞 ,分泌量在细胞传代 30次后仍保持稳定 ,活性为 (6 .5 6± 0 .16 )× 10 3 U 10 6 细胞。结论　所构建的hGM CSF真核表达载体在人骨髓基质细胞系HFCL细胞中获得持续稳定表达 ,并具有良好的生物学活性 ,为细胞因子基因治疗的体内实验研究提供了实验依据。 展开更多
关键词 Hgm-csf 阳离子脂质体 基因表达 骨髓基质细胞系
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G-CSF和GM-CSF对系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞TNF-α mRNA和CD69表达及IgG分泌的影响 被引量：2
15
作者 陆春 李娟 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第6期531-534,共4页
为了解造血干细胞动员剂G CSF和GM CSF对系统性红斑狼疮 (SLE)患者狼疮活动性的影响 ,用RT PCR法测定不同浓度G CSF和GM CSF对SLE患者外周血单个核细胞 (PBMNC)的TNF αmRNA表达的作用 ,用流式细胞术测定CD69表达和用酶联免疫吸附法测定... 为了解造血干细胞动员剂G CSF和GM CSF对系统性红斑狼疮 (SLE)患者狼疮活动性的影响 ,用RT PCR法测定不同浓度G CSF和GM CSF对SLE患者外周血单个核细胞 (PBMNC)的TNF αmRNA表达的作用 ,用流式细胞术测定CD69表达和用酶联免疫吸附法测定 1 0 μg/ml的G CSF和GM CSF对PBMNC分泌IgG的影响。结果发现 :0 .1 - 2 0 μg/ml的G CSF对活动期和静止期SLE患者的PBMNC的TNF αmRNA的表达均无影响。0 1 - 1 6μg/ml或 0 1 - 2 0 μg/ml的GM CSF不影响活动期或静止期SLE患者PBMNC的TNF αmRNA的表达 ,2 μg/ml的GM CSF可增加活动期SLE患者PBMNC的TNF αmRNA的表达。 0 1 - 2 0 μg/ml的G CSF和GM CSF对静止期SLE患者PBMNC的CD69表达均无影响 ,浓度在 0 1 - 2 0 μg/ml的G CSF和 0 1 - 0 4μg/ml的GM CSF对静止期和活动期SLE患者的CD69表达无影响 ,但GM CSF的浓度达到或超过 0 8μg/ml时可增加活动期SLE患者单个核细胞CD69的表达。 1 0 μg/ml的G CSF对活动期和静止期SLE患者PBMNC的IgG分泌无明显影响 ,而相同浓度的GM CSF对活动期SLE患者PBMNC的IgG分泌有促进作用。结论 :用G CSF作自体干细胞移植的动员剂对于SLE患者可能是安全的 ,但GM CSF可增强与狼疮活动有关的三项指标 ,因此可能对活动期SLE患者产? 展开更多
关键词 G-csf gm-csf 系统性红斑狼疮 外周血 单个核细胞 TNF-Α MRNA CD69 IgG
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GM-CSF及B7-1基因修饰的肿瘤细胞疫苗抗肿瘤的研究 被引量：2
16
作者 张清媛 李殿俊 +1 位作者 王志华 张春艳 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2000年第3期203-205,共3页
目的 :研究GM CSF及B7 1基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗的有效性。方法 :我们将小鼠GM CSF及CD80基因通过逆转录病毒载体分别导入EL 4淋巴瘤细胞中 ,进而研究了EL 4/GM CSF及EL 4/B7 1在同系C5 7BL/ 6小鼠中的成瘤性及其诱导抗肿瘤免疫的... 目的 :研究GM CSF及B7 1基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗的有效性。方法 :我们将小鼠GM CSF及CD80基因通过逆转录病毒载体分别导入EL 4淋巴瘤细胞中 ,进而研究了EL 4/GM CSF及EL 4/B7 1在同系C5 7BL/ 6小鼠中的成瘤性及其诱导抗肿瘤免疫的效果。结果 :转B7 1基因的肿瘤细胞诱发了CD80的高表达。转基因的肿瘤细胞在同源小鼠中的成瘤性下降 ,免疫原性增强。在肿瘤生长的早期对实验性荷瘤小鼠进行治疗 ,基因修饰的瘤苗作用明显增强 ,而在肿瘤生长的晚期未能显示出明显的治疗作用。射线灭活的EL 4/GM CSF瘤苗能有效地保护野生型肿瘤细胞的攻击 ,而射线灭活的EL 4/B7 1瘤苗作用减弱。将EL 4/GM CSF和EL 4/B7 1瘤苗联合应用具有协同抗肿瘤效果。结论 :GM CSF及B7 1基因修饰的肿瘤疫苗可诱导抗肿瘤免疫反应 ,导致肿瘤的部分根除 。 展开更多
关键词 gm-csf 肿瘤疫苗 基因治疗 B7-1基因修饰
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基因枪介导重组hGM-CSF转移系统的建立及其在人肿瘤细胞中的稳定表达 被引量：2
17
作者 郑天荣 郑秋红 +2 位作者 林贤东 谢云青 龚福生 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2002年第3期203-206,共4页
目的 :建立基因枪介导的基因转移系统 ,为基因修饰的肿瘤细胞疫苗研究奠定实验基础。方法 :采用基因枪转导的方法 ,将真核表达质粒 (pcDNA3 .1GM CSF)转导入人胃癌细胞株 (SGC) ,经G418筛选获得阳性克隆 (SGC GM CSF) ,通过RT PCR方法鉴... 目的 :建立基因枪介导的基因转移系统 ,为基因修饰的肿瘤细胞疫苗研究奠定实验基础。方法 :采用基因枪转导的方法 ,将真核表达质粒 (pcDNA3 .1GM CSF)转导入人胃癌细胞株 (SGC) ,经G418筛选获得阳性克隆 (SGC GM CSF) ,通过RT PCR方法鉴定 ,重组载体已整合到胃癌细胞的基因组中。结果 :SDS PAGE和Westernblot分析的SGC GM CSF上清液结果显示rhGM CSF主带在 3 0kD左右 ,SGC GM CSF在体外长期培养中保持稳定分泌 ,分泌量达到 2 4h平均 2 47ng 10 6 cell。结论 :建立的基因枪介导的基因转移系统安全、有效 。 展开更多
关键词 重组hgm-csf转移系统 基因枪 肿瘤疫苗 基因治疗 胃癌
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重组人GM-CSF逆转录病毒基因转移系统的建立及其在人肿瘤细胞中的稳定表达 被引量：3
18
作者 赵明 毛宁 +2 位作者 巴德年 张明伟 杜德林 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期42-44,共3页
目的　建立逆转录病毒介导的 GM- CSF基因转移系统 ,为 GM- CSF基因修饰的肿瘤细胞疫苗研究奠定实验基础。方法　应用基因重组技术将 GM- CSF c DNA克隆于逆转录病毒载体p DORneo,获得重组载体 p DORGM。经脂质体介导将其转染于病毒包... 目的　建立逆转录病毒介导的 GM- CSF基因转移系统 ,为 GM- CSF基因修饰的肿瘤细胞疫苗研究奠定实验基础。方法　应用基因重组技术将 GM- CSF c DNA克隆于逆转录病毒载体p DORneo,获得重组载体 p DORGM。经脂质体介导将其转染于病毒包装细胞系 PA317细胞 ,经NIH3T3细胞检测病毒滴度 ,NIH3T3放大实验检测辅助病毒 ,并用高滴度病毒感染人乳腺癌细胞系MCF- 7。结果　GM- CSF基因克隆入逆转录病毒载体 ,经 PA317细胞包装产生病毒 ,最高的病毒滴度为 1× 10 6CFU/ ml,且没有发现辅助病毒存在。重组病毒感染的人乳腺癌 MCF- 7细胞在体外长期培养中保持稳定分泌 GM- CSF,活性在 50 0～ 80 0 U/ 10 6细胞 / 2 4小时。结论　建立的逆转录病毒介导的GM- CSF基因转移系统安全、有效 ,为 GM- CSF应用于肿瘤基因治疗提供了实验基础。 展开更多
关键词 gm-csf 基因表达 乳腺肿瘤 基因转移
原文传递
结核杆菌Ag85A/GM-CSF嵌合表达质粒的构建及表达 被引量：2
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作者 谢勇恩 鲍朗 +1 位作者 张会东 陈玮 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期146-149,共4页
目的　探索对结核病DNA疫苗进行基因修饰的新方法。方法　以结核杆菌H3 7Rv 株基因组DNA为模板 ,通过PCR扩增获得结核杆菌Ag85A抗原蛋白基因的成熟肽编码区 ,以经PHA诱导后的小鼠脾组织总RNA为模板 ,通过RT PCR获得小鼠粒细胞 巨噬细... 目的　探索对结核病DNA疫苗进行基因修饰的新方法。方法　以结核杆菌H3 7Rv 株基因组DNA为模板 ,通过PCR扩增获得结核杆菌Ag85A抗原蛋白基因的成熟肽编码区 ,以经PHA诱导后的小鼠脾组织总RNA为模板 ,通过RT PCR获得小鼠粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子的cDNA ,将二者定向克隆入质粒pBK CMV中构建含嵌合目的基因的重组质粒 ,转染培养的COS7细胞后检测嵌合目的基因的表达。结果　成功构建了小鼠粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子cDNA与结核杆菌Ag85A抗原基因的真核嵌合表达质粒 ,重组质粒能在COS7细胞中进行稳定表达。结论　本研究首次将细胞因子基因与结核杆菌免疫保护性抗原基因嵌合构建嵌合DNA疫苗 。 展开更多
关键词 结核杆菌 AG85A gm-csf 嵌合表达 结核病 基因修饰 DNA疫苗
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以减毒沙门氏菌为载体的GM-CSF与生长抑素DNA疫苗的安全性和稳定性 被引量：2
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作者 舒邓群 陈荣达 +2 位作者 茆达干 吴志敏 杨利国 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期825-829,共5页
将含GM-CSF基因与生长抑素（SS）的融合真核表达质粒pGM—CSF／SS转入减毒沙门氏菌株CS022。选择40只22～24g的雌性小鼠，随机分成4组，其中1组为对照组，口服生理盐水；2～4组为试验组，分别用上述重组减毒沙门氏菌株CS022以10^8、10^9... 将含GM-CSF基因与生长抑素（SS）的融合真核表达质粒pGM—CSF／SS转入减毒沙门氏菌株CS022。选择40只22～24g的雌性小鼠，随机分成4组，其中1组为对照组，口服生理盐水；2～4组为试验组，分别用上述重组减毒沙门氏菌株CS022以10^8、10^9、10^10CFU的剂量口服免疫小鼠，2周后以相同的剂量加强免疫，研究pGM-CSF／SS真核表达质粒在体内的稳定性和减毒沙门氏菌对小鼠的安全性。同时通过体外传代，研究该真核表达质粒在体外的稳定性。结果表明：10^8、10^9CFU剂量口服小鼠，成活率达100％，而10^10CFU剂量口服小鼠成活率降低至90％，腹泻率达50％。体外传10代和口服免疫4周后从小鼠肝脏和脾脏分离的减毒菌用琼脂糖凝胶电泳和酶切鉴定法证实，减毒菌中的重组质粒在体外和侵入小鼠体内过程中具有较好的稳定性。质粒DNA在传10代以后，虽然每代的质粒DNA含量有些变化，但总体趋势基本是恒定的，第10代时，质粒DNA的含量与第1代的含量差异不显著。上述结果提示，利用该减毒沙门菌作为载体传递pGM—CSF／SSDNA疫苗免疫小鼠具有相对安全性和稳定性，为进一步有效激发机体的免疫应答提供了前提。 展开更多
关键词 减毒沙门氏菌 gm csf 生长抑素(SS) 安全性 稳定性
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