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人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2基因反义RNA表达质粒的构建及克隆鉴定 被引量：1
1
作者 金美芳 刘可人 +3 位作者 周嘉梁 郭向红 潘浩 吴士良 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2005年第2期100-103,106,共5页
目的:研究反义封闭ppGalNAc-T2基因表达对胃癌细胞GC7901细胞增殖以及肿瘤细胞生物学行为的影响,构建反义表达载体并转染胃癌细胞GC7901。方法:在对几种肿瘤细胞的ppGalNAc-T2基因的表达水平分析后,以高表达ppGalNAc-T2的人胃癌细胞GC7... 目的:研究反义封闭ppGalNAc-T2基因表达对胃癌细胞GC7901细胞增殖以及肿瘤细胞生物学行为的影响,构建反义表达载体并转染胃癌细胞GC7901。方法:在对几种肿瘤细胞的ppGalNAc-T2基因的表达水平分析后,以高表达ppGalNAc-T2的人胃癌细胞GC7901的总RNA为模板,利用RTPCR方法扩增两段不同长度ppGalNAc-T2基因片段,构建反义表达载体并转染胃癌细胞GC7901,通过G418筛选,建立一系列旨在封闭胃癌细胞GC7901细胞ppGalNAc-T2基因表达的亚细胞克隆。通过荧光显微镜、RT-PCR技术手段检测封闭反义ppGalNAc-T2基因RNA表达。结果:ppGalNAc-T2反义表达质粒载体pEGFP-FDT2和pEGFPFX-T2经限制性酶切及部分序列分析证明基因已正确插入载体中,荧光显微镜及RTPCR显示转染成功。结论:成功构建了ppGalNAc-T2反义表达质粒载体,反义封闭ppGalNAc-T2基因表达后,胃癌细胞GC7901ppGalNAc-T2的含量明显降低,为进一步研究ppGalNAc-T2奠定了基础。 展开更多
关键词 反义RNA表达质粒 ppGalNAc-T2 半乳糖转移酶 克隆鉴定 乙酰氨基 肿瘤细胞生物学行为 RT-PCR方法 反义表达载体 荧光显微镜 多肽 基因表达 质粒载体 人胃癌细胞 限制性酶切 细胞增殖 总RNA 基因片段 细胞克隆 技术手段 序列分析
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高表达Klotho基因对胃癌细胞株GC-7901生长的影响 被引量：1
2
作者 宋胜江 李博 《中华全科医学》 2018年第1期44-46,共3页
目的观察高表达Klotho基因对胃癌细胞株GC-7901生长的影响。方法构建Klotho载体,胃癌GC-7901细胞分为Klotho组(GC-7901细胞转染p Zs Green1-C1-Klotho载体)、阴性对照组(GC-7901细胞转染空病毒载体)、空白对照组(GC-7901细胞未转染载体)... 目的观察高表达Klotho基因对胃癌细胞株GC-7901生长的影响。方法构建Klotho载体,胃癌GC-7901细胞分为Klotho组(GC-7901细胞转染p Zs Green1-C1-Klotho载体)、阴性对照组(GC-7901细胞转染空病毒载体)、空白对照组(GC-7901细胞未转染载体)。Western blot检测细胞中Klotho蛋白表达,CCK-8法测定细胞增殖,流式细胞仪测定细胞凋亡和细胞周期。结果胃癌细胞株GC-7901细胞中Klotho蛋白表达量(0.19±0.01)低于正常胃细胞株GES-1细胞(0.62±0.04),P<0.05;Klotho组胃癌细胞中Klotho蛋白的表达量(0.81±0.12)明显高于阴性对照组(0.24±0.06)和空白对照组(0.22±0.04),P<0.05;Klotho组胃癌细胞增殖率[(62.26±13.24)%]明显低于阴性对照组[(99.14±21.53)%]和空白对照组[(100.00±1.03)%],P<0.05;Klotho组胃癌细胞凋亡率[(23.31±2.54)%]明显高于阴性对照组[(4.76±0.15)%]和空白对照组[(4.67±0.13)%],P<0.05;Klotho组胃癌细胞G0/G1期比例[(25.26±2.63)%]明显高于阴性对照组[(4.91±0.17)%]和空白对照组[(4.83±0.16)%],P<0.05。结论胃癌细胞中Klotho蛋白呈低表达,Klotho基因的高表达能够降低胃癌细胞增殖,促进胃癌细胞凋亡,抑制细胞周期。 展开更多
关键词 KLOTHO基因 胃癌 gc-7901细胞 凋亡 增殖
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