番荔枝GA20氧化酶基因的克隆与表达分析 被引量：11

1

作者 刘锴栋 袁长春 +4 位作者 黎海利 刘金祥 陈燕 莫亿伟 李华富 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1697-1705,共9页

本研究利用同源克隆和RACE-PCR的方法获得番荔枝GA20ox基因的全长c DNA序列,命名为As GA20ox,Gen Bank登录号为KR676623。序列分析表明,克隆获得的番荔枝As GA20ox基因编码区长为1 257 bp,编码418个氨基酸。序列比对显示与油棕和海枣等G... 本研究利用同源克隆和RACE-PCR的方法获得番荔枝GA20ox基因的全长c DNA序列,命名为As GA20ox,Gen Bank登录号为KR676623。序列分析表明,克隆获得的番荔枝As GA20ox基因编码区长为1 257 bp,编码418个氨基酸。序列比对显示与油棕和海枣等GA20ox的相似度分别为71%和70%。构建类似蛋白系统进化树显示,番荔枝As GA20ox与簇毛麦、香蕉等分子进化距离较近。预测As GA20ox蛋白定位在细胞外基质和过氧化物酶体中,不具备信号肽。蛋白质分子量为47.2k Da,等电点为6.21。实时定量RT-PCR结果表明,在不同的组织、不同的器官中,As GA20ox的表达量存在差异,其中在花蕾期I、未成熟的种子、结果枝的幼嫩茎段和雌蕊中的表达量相对较高。 展开更多

关键词 番荔枝 ga20ox 基因克隆 表达模式

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东方百合‘索邦’GA20ox的克隆及表达分析 被引量：8

2

作者 张旭红 孙美玉 +3 位作者 李靖锐 王頔 张金政 石雷 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期74-86,共13页

以东方百合‘索邦’为材料,利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得编码活性GAs合成过程中双加氧酶的基因GA20ox,对其进行生物信息学分析和表达分析。结果表明,GA20ox全长1 502bp,包括1个1167bp的开放阅读框(ORF),编码388个氨基酸。GA20ox... 以东方百合‘索邦’为材料,利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得编码活性GAs合成过程中双加氧酶的基因GA20ox,对其进行生物信息学分析和表达分析。结果表明,GA20ox全长1 502bp,包括1个1167bp的开放阅读框(ORF),编码388个氨基酸。GA20ox编码的蛋白存在多个糖基化位点、磷酸化位点和酰化位点。‘索邦’GA20ox和其他物种的GA20ox蛋白有很高的相似性,均含有保守的PLN02276结构域。‘索邦’GA20ox与姬蝴蝶兰、铁皮石斛、海枣、油棕和椰子等单子叶植物的GA20ox蛋白具有较高的同源性。实时荧光定量PCR分析表明,GA20ox具有时空表达特异性,在萌芽期之后的茎生根、现蕾期的茎、萌芽期和展叶期的叶片、萌芽期的顶芽等快速发育的组织中有较高的表达。在萌芽期对植株进行高浓度(200和400 mg·L^(-1))GA3处理对其生长的影响最大,其中200 mg·L^(-1) GA3处理最有利于株高的增加,400 mg·L^(-1) GA3处理最有利于地下部分干质量的增加。对萌芽期‘索邦’百合进行200 mg·L^(-1) GA3处理,显著抑制其GA20ox在除鳞片外其他部位的表达,表达量均在处理后12 h降至最低,其中在茎和基生根中降幅最大,分别下降了96.79%和94.65%。推测GA20ox的表达受活性GAs的反馈调节,在调控体内活性GAs稳态中发挥重要的作用。 展开更多

关键词 百合 ga20ox 基因克隆 基因表达 株高

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苹果矮化砧木GA20氧化酶基因的克隆及其表达分析 被引量：6

3

作者 郑伶杰 马宏 +3 位作者 张媛 张学英 李中勇 徐继忠 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第1期53-59,共7页

为了研究GA20氧化酶基因在苹果矮化砧木中的分子特征和表达特征,利用RT-PCR方法从苹果矮化砧木2号和36号c DNA中克隆了GA20氧化酶基因(GA20ox1),并对该基因及其编码氨基酸序列以及在不同时期砧木及嫁接品种中的表达分别进行了分析。结... 为了研究GA20氧化酶基因在苹果矮化砧木中的分子特征和表达特征,利用RT-PCR方法从苹果矮化砧木2号和36号c DNA中克隆了GA20氧化酶基因(GA20ox1),并对该基因及其编码氨基酸序列以及在不同时期砧木及嫁接品种中的表达分别进行了分析。结果表明,GA20ox1基因c DNA编码序列长1 179 bp,推导编码393个氨基酸(包括终止密码子),预测蛋白相对分子质量44.3 k Da,理论等电点5.89,编码的蛋白质包含GA20ox1基因家族所具有的特征保守结构域,系统进化分析表明该蛋白序列与苹果SH40的同源性达到96.9%。实时荧光定量PCR分析显示:36号砧木在6月份GA20ox1基因表达强度显著低于八棱海棠对照,而7-8月份的均显著高于对照,其上嫁接的品种7月份表达强度显著低于对照。在7-8月份2号砧木及嫁接品种GA20ox1基因的表达强度均显著低于对照。 展开更多

关键词 苹果矮化砧木 ga20氧化酶 克隆 表达分析

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蓖麻RcGA20ox1基因克隆及生物信息学分析 被引量：5

4

作者 丛安琪 李国瑞 +4 位作者 王月 李威 李晓晨 黄凤兰 陈永胜 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期3121-3126,共6页

GA20氧化酶是赤霉素生物合成途径中的重要氧化酶,我们尝试克隆该酶,发掘蓖麻中GA20ox家族候选基因,并推测其功能。根据NCBI上已知蓖麻GA20ox1基因(XM_002510827.2)序列设计引物,扩增得到GA20ox基因片段,连接pMD18-T载体,得到Rc GA20ox1 ... GA20氧化酶是赤霉素生物合成途径中的重要氧化酶,我们尝试克隆该酶,发掘蓖麻中GA20ox家族候选基因,并推测其功能。根据NCBI上已知蓖麻GA20ox1基因(XM_002510827.2)序列设计引物,扩增得到GA20ox基因片段,连接pMD18-T载体,得到Rc GA20ox1 cDNA完整的开放阅读框序列1 137 bp,并对其进行序列比对、转录物理化性质分析、疏水性、功能域分析及其三级结构预测。推测其可编码378个氨基酸,为亲水性稳定蛋白;基因隶属PcbC superfamily家族,为非分泌蛋白、细胞质蛋白、含有28个磷酸化位点;预测结构由8个α-螺旋和8个β-折叠构成;与大戟科巴西橡胶树、木薯和麻疯树高度同源。本研究为蓖麻GA生物合成乃至蓖麻矮化相关研究提供一定的理论与实践依据。 展开更多

关键词 蓖麻 ga20ox 基因克隆 生物信息学分析

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西洋参赤霉素20-氧化酶基因的克隆与序列分析 被引量：5

5

作者 孙同玉 祝娟 +3 位作者 孙鹏 廖登群 李先恩 祁建军 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1656-1660,共5页

目的对西洋参Panax quinquefolium种子休眠与萌发过程中赤霉素20-氧化酶(GA20ox)基因编码区进行克隆及生物信息学分析。方法根据西洋参种子转录组的注释信息,得到9条GA20ox相关序列,通过比对分析确定了GA20ox的转录本。采用q RT-PCR方... 目的对西洋参Panax quinquefolium种子休眠与萌发过程中赤霉素20-氧化酶(GA20ox)基因编码区进行克隆及生物信息学分析。方法根据西洋参种子转录组的注释信息,得到9条GA20ox相关序列,通过比对分析确定了GA20ox的转录本。采用q RT-PCR方法得到西洋参GA20ox(Pq GA20ox)的c DNA全长,并对其编码蛋白进行生物信息学分析。采用实时荧光定量PCR方法检测Pq GA20ox基因在根、茎、叶和种子休眠不同时期的表达水平。结果生物信息学分析表明,Pq GA20ox基因全长1 092 bp,编码363个氨基酸残基,Pq GA20ox编码蛋白不含跨膜区,不含信号肽。q RT-PCR实验结果显示Pq GA20ox基因在形态休眠起始期和生理休眠起始期表达量高于其他时期。结论首次获得Pq GA20ox基因的编码区序列,为进一步研究西洋参种子解除休眠的分子机制奠定基础。 展开更多

关键词 西洋参 种子休眠与萌发 赤霉素20-氧化酶 克隆 实时荧光定量PCR

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簇毛麦(Dasypyrum villosum)GA20ox基因的分离和鉴定 被引量：2

6

作者 刘英华 赵桃 +3 位作者 龙海 邓光兵 潘志芬 余懋群 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期479-482,共4页

通过RT-PCR技术克隆了簇毛麦(Dasypyrum villosum)赤霉素生物合成关键酶GA20ox基因的全长序列,命名为DvGA20ox,GenBank登录号为EU142949.该基因全长1080bp,推测编码359个氨基酸的蛋白质,具有植物GA20ox基因的典型保守结构域LPWKET和NYYP... 通过RT-PCR技术克隆了簇毛麦(Dasypyrum villosum)赤霉素生物合成关键酶GA20ox基因的全长序列,命名为DvGA20ox,GenBank登录号为EU142949.该基因全长1080bp,推测编码359个氨基酸的蛋白质,具有植物GA20ox基因的典型保守结构域LPWKET和NYYPXCQKP.该基因推导编码蛋白质与小麦、大麦和黑麦草GA20ox蛋白的同源性分别为98%、97%和91%.该序列重组到原核表达载体pET-32a(+)获得的重组子pET-32a(+)-DvGA20ox转化大肠杆菌BL21pLysS后,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表明,DvGA20ox基因在大肠杆菌中获得了高效表达,融合蛋白相对分子质量为55×103,与理论值相符.结果为深入研究DvGA20ox蛋白的结构与功能以及该基因与株高发育的关系奠定了基础. 展开更多

关键词 簇毛麦 赤霉素 ga20ox RT-PCR 原核表达

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香蕉MaGA20ox4和MaGA20ox5基因克隆、表达及亚细胞定位分析 被引量：1

7

作者 段雅婕 陈经烨 陈晶晶 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2021年第7期1805-1816,共12页

以威廉斯香蕉(Musa spp.AAA group)‘8818’及其突变体‘8818-1’的假茎为试材,同源克隆MaGA20ox4和MaGA20ox5基因的gDNA及启动子序列,比较它们在基因组测序品种以及‘8818’和‘8818-1’中的序列差异。序列比对结果表明:MaGA20ox4和MaG... 以威廉斯香蕉(Musa spp.AAA group)‘8818’及其突变体‘8818-1’的假茎为试材,同源克隆MaGA20ox4和MaGA20ox5基因的gDNA及启动子序列,比较它们在基因组测序品种以及‘8818’和‘8818-1’中的序列差异。序列比对结果表明:MaGA20ox4和MaGA20ox5基因的gDNA相似性达93.82%,而二者的启动子序列相似性仅有40%,威廉斯品种与基因组测序品种间MaGA20ox4和MaGA20ox5基因无论gDNA还是启动子序列均存在较大差异,特别是启动子序列。威廉斯‘8818’和‘8818-1’间MaGA20ox4基因gDNA也存在一定的碱基序列差异,但启动子序列基本相同,MaGA20ox5结果同MaGA20ox4类似。启动子分析推测2个基因的启动子属于诱导性启动子,存在较多光响应和激素响应元件。进一步构建了MaGA20ox4和MaGA20ox5的亚细胞定位表达载体,定位结果显示,MaGA20ox4和MaGA20ox5蛋白均定位于细胞核上,可能定位于细胞质或细胞膜。在不同品种香蕉果实的不同发育时期qRT-PCR结果表明,MaGA20ox4和MaGA20ox5具有品种特异性,在威廉斯香蕉品种果实中可能不是主要的赤霉素合成调控基因。 展开更多

关键词 香蕉 赤霉素20氧化酶 基因克隆 亚细胞定位

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Bt-BADH-GA20ox-rolB多基因在转化烟草中的表达分析 被引量：8

8

作者 孙立洋 李静 +3 位作者 袁虎威 姚景涵 李伟 陈晓阳 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期86-90,共5页

为探讨Bt-BADH-GA20ox-rolB多基因转化烟草中外源基因的表达情况及对转化植株的影响,对转多基因烟草及对照植株进行了生理生化试验,包括内源激素含量测定、耐盐性试验、Bt毒蛋白测定、移栽后植株生长的观测。结果表明:转基因植株生根能... 为探讨Bt-BADH-GA20ox-rolB多基因转化烟草中外源基因的表达情况及对转化植株的影响,对转多基因烟草及对照植株进行了生理生化试验,包括内源激素含量测定、耐盐性试验、Bt毒蛋白测定、移栽后植株生长的观测。结果表明:转基因植株生根能力强,根、茎、叶各部位内源激素(IAA、GA3)与对照差异明显;在低浓度NaCl下,转基因和对照植株生长差异不明显,当NaCl浓度达到300mmol/L时,对照生长受到抑制,转基因植株生长正常;在转基因植株的茎、叶中均检测到高浓度的Bt毒蛋白,以叶片饲喂斜纹夜蛾幼虫明显抑制其发育。移栽后的转基因植株高生长更加明显,苗高和地茎分别为对照的1.61和1.37倍。 展开更多

关键词 Bt-BADH-ga20ox-rolB多基因 内源激素 耐盐性 BT毒蛋白

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不同矮化砧木对苹果树体生长及矮化相关基因表达的影响 被引量：6

9

作者 郑伶杰 李方方 +1 位作者 杨利粉 徐继忠 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期64-69,共6页

以砧木Y系和SH40实生后代及嫁接的红富士苹果为试材,探讨了不同砧木对树体生长及矮化相关基因表达的影响,以期为深入研究苹果砧木致矮机理提供理论依据。结果表明:Y-1和2号砧木上品种树高分别为乔化对照的51%和65.5%。Y-1砧木在6-8月份... 以砧木Y系和SH40实生后代及嫁接的红富士苹果为试材,探讨了不同砧木对树体生长及矮化相关基因表达的影响,以期为深入研究苹果砧木致矮机理提供理论依据。结果表明:Y-1和2号砧木上品种树高分别为乔化对照的51%和65.5%。Y-1砧木在6-8月份的GA20ox1基因表达强度均显著低于对照,其上嫁接的品种8月份表达强度显著低于对照。NCED1基因在6月份的表达强度显著高于对照,7-8月份的显著低于对照;其上嫁接的品种7月份的表达强度显著高于对照,而8月份的显著低于对照。在7-8月份2号砧木及嫁接品种GA20ox1基因和NCED1基因的表达强度均显著低于对照。 展开更多

关键词 苹果 矮化砧木 赤霉素20氧化酶 9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶 基因表达

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一种优良半矮秆水稻品种的分离与分子鉴定 被引量：4

10

作者 林建中 杨远柱 +4 位作者 赵小英 唐冬英 周波 杜长青 刘选明 《湖南大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第8期66-73,共8页

株1S是中国南方稻区杂交水稻育种广泛应用的优良籼型温敏雄性核不育系.为了改良其农艺性状,我们采用体细胞无性系诱变方法筛选半矮秆突变体.本文报道了2个体细胞无性系突变体SV1S和SV14S的表型和初步分子鉴定结果.与亲本株1S相比,突变... 株1S是中国南方稻区杂交水稻育种广泛应用的优良籼型温敏雄性核不育系.为了改良其农艺性状,我们采用体细胞无性系诱变方法筛选半矮秆突变体.本文报道了2个体细胞无性系突变体SV1S和SV14S的表型和初步分子鉴定结果.与亲本株1S相比,突变体的高度降低,基部节间长度缩短,节间壁显著增厚,但是上部的节间变化不明显.更重要的是,我们发现赤霉素生物合成途径中的关键酶基因GA20ox-2出现了约200bp的缺失突变,导致该基因在半矮秆突变体中的转录水平降低.研究结果表明,突变体SV1S和SV14S很可能是由于同一缺失突变导致赤霉素合成受阻,从而部分导致了半矮秆性状的出现.然而,2个突变体苗期的高度相同,以及糊粉层细胞!-淀粉酶活性和赤霉素敏感性降低等性状与以前报道的sd-1突变体有所不同.因此,我们推测在SV突变体中可能还存在第二个突变位点.该结果也进一步证实了体细胞无性系诱变在水稻育种中具有良好的应用前景. 展开更多

关键词 诱变 ga20ox-2 赤霉素 限制性片段长度多态性(RFLP) 水稻(Oryza SATIVA L.) 半矮秆

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GA20ox基因过表达木材品质性状及其转基因纳米纤维素改良纸浆性能研究

11

作者 彭霄鹏 王堃 《中国基础科学》 2023年第3期54-60,66,共8页

赤霉素通过促进细胞分裂调控树木生长发育,但有关赤霉素对于木材品质性状影响的研究报道较少。利用木质部特异表达的糖基转移酶8D1(GT8D1)启动子驱动GA20ox基因的表达,可以改良木材品质性状和纸张性能。实验构建GT8D1启动子驱动GA20ox... 赤霉素通过促进细胞分裂调控树木生长发育,但有关赤霉素对于木材品质性状影响的研究报道较少。利用木质部特异表达的糖基转移酶8D1(GT8D1)启动子驱动GA20ox基因的表达,可以改良木材品质性状和纸张性能。实验构建GT8D1启动子驱动GA20ox基因在杨树中过表达获得转基因杨树,并在温室中扦插后得到转基因株系供试。取两年生转基因植株,分析木质素、纤维素等组分含量及其木材结构变化。结果表明,在GT8D1启动子驱动下,GA20ox基因的过表达加速了杨树转基因植株赤霉素的合成,刺激了形成层细胞分裂和树木的生长,有利于转基因植株的木材物质积累。转基因株系的木质素中紫丁香基单体(S)与愈创木基单体(G)的比值显著提高。通过TEMPO氧化法制备纳米纤维素,发现转基因杨树样本的纳米纤维素直径显著增加。以漂白松木浆为基础,分别添加5%浓度的转基因和非转基因材料制备的纳米纤维素进行纸张性能测试。分析显示,与对照组相比,转基因纳米纤维素(GM-nanocellulose)纸样纸张抗拉强度和耐破强度提升显著增多。研究结论为利用现代遗传工程技术改良制浆造纸原料物理性质和化学组分,优化制浆造纸新工艺,发展绿色、低碳和环保的新轻工业态开拓了新思路、提供了新途径。 展开更多

关键词 特异启动子 ga20ox基因 材性改良 木质素结构 纳米纤维素 纸浆 纸张性能

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转基因枳橙中GA20ox1与rol基因互作关系的研究 被引量：3

12

作者 袁飞荣 李芳 +3 位作者 蒋巧巧 Alessandra Gentile 严佳文 邓子牛 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第19期214-221,共8页

为分析转rolABC基因枳橙GA20ox1基因与rol基因表达的互作关系,进一步阐释其矮化性状形成的分子机制。以转rol基因枳橙实生苗为试验材料,研究其对赤霉素的敏感反应,用荧光定量RT-PCR分析GA20ox1基因和rol基因的表达,并检测幼芽中过氧化... 为分析转rolABC基因枳橙GA20ox1基因与rol基因表达的互作关系,进一步阐释其矮化性状形成的分子机制。以转rol基因枳橙实生苗为试验材料,研究其对赤霉素的敏感反应,用荧光定量RT-PCR分析GA20ox1基因和rol基因的表达,并检测幼芽中过氧化物酶活性和植物内源激素含量的变化。结果表明转rol基因枳橙既不属于GA缺陷型,也不属于GA不敏感型,喷施GA3能促进其茎伸长生长,但恢复不到野生型水平,幼芽中IAA(P<0.01)、GA1和GA4(P<0.05)显著降低,POD酶活性显著提高(P<0.01)。转rol基因枳橙幼芽中GA20ox1基因mRNA水平相比对照显著下调(P<0.01)。B、D系与野生型嫩茎中无明显差异,B、D系老叶中明显降低,E系中嫩茎和老叶中均明显增加。B、D和E系嫩叶中GA20ox1基因转录表达均较野生型高。在幼芽、嫩茎中,rolC基因与GA20ox1表达负相关。rol基因通过在幼芽中的高表达下调了GA20ox1基因转录表达,进而抑制了活性GAs在幼芽中的合成,顶端分生组织较低量的活性GAs限制植物茎伸长,在转rolABC基因枳橙矮化性状建成中发挥重要作用。 展开更多

关键词 枳橙 rolABC基因 ga20ox1基因 基因表达 植物激素 矮化机理

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转基因枳橙中GA20ox1与rol ABC基因互作关系的研究

13

作者 袁飞荣 李芳 +3 位作者 蒋巧巧 Alessandra Gentile 严佳文 邓子牛 《武汉生物工程学院学报》 2011年第3期157-162,共6页

以转rol基因枳橙实生苗为试验材料,研究其对赤霉素的敏感反应,用荧光定量RT-PCR分析GA20ox1基因和rol基因的表达,并检测幼芽中POD酶活性和植物内源激素含量的变化。结果表明转rol ABC基因枳橙既不属于GA缺陷型,也不属于GA不敏感型,幼芽... 以转rol基因枳橙实生苗为试验材料,研究其对赤霉素的敏感反应,用荧光定量RT-PCR分析GA20ox1基因和rol基因的表达,并检测幼芽中POD酶活性和植物内源激素含量的变化。结果表明转rol ABC基因枳橙既不属于GA缺陷型,也不属于GA不敏感型,幼芽中GAS、GAS(P【0.05)和IAA显著降低(P【0.01),POD酶活性显著提高(P【0.01)。转rol基因枳橙幼芽中GA20ox1基因mRNA水平相比对照显著下调(P【0.01)。在幼芽、嫩茎中,rol C基因与GA20ox1表达负相关。rol基因通过在幼芽中的高表达下调了GA20ox1基因转录表达,进而抑制了活性GAs在幼芽中的合成,顶端分生组织较低量的活性GAs限制植物茎伸长,在转rol ABC基因枳橙矮化性状建成中发挥重要作用。 展开更多

关键词 枳橙 ROL ABC基因 ga20ox1基因 基因表达 植物激素 矮化机理

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板栗GA20-氧化酶基因的克隆及序列分析 被引量：9

14

作者 鲍晓兰 杨凯 +1 位作者 冯永庆 秦岭 《北京农学院学报》 2009年第2期5-8,共4页

GA20-氧化酶(GA20-ox)是赤霉素生物合成中的限速酶,它能够催化从GA12到GA9及GA53到GA20过程中的3步氧化反应。笔者以板栗(Castanea mollissimaBlume)为材料,应用基因组步移技术克隆GA20-ox基因,获得长度为2 315 bp DNA序列,其中含有一个... GA20-氧化酶(GA20-ox)是赤霉素生物合成中的限速酶,它能够催化从GA12到GA9及GA53到GA20过程中的3步氧化反应。笔者以板栗(Castanea mollissimaBlume)为材料,应用基因组步移技术克隆GA20-ox基因,获得长度为2 315 bp DNA序列,其中含有一个GA20-ox基因的全长编码区序列,命名为CmGA20ox1。Cm-GA20ox1长度为1 140 bp,且编码区内存在2个内含子,其推定蛋白CmGA20ox1序列长度为379个氨基酸,氨基酸序列比对分析显示CmGA20ox1与山毛榉坚果的FsGA20ox1(AJ420192)相似性为91.03%,系统发育树分析显示CmGA20ox1与山毛榉坚果FsGA20ox1(AJ420192)遗传距离最近。 展开更多

关键词 板栗 PCR 克隆 ga20-氧化酶

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