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中国人肠道产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因的分离、克隆和鉴定
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作者 孔德波 叶章群 +5 位作者 陈志强 杨为民 姚林方 郭辉 刘冠琳 曾令启 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期314-317,共4页
目的克隆产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因(frc),检测其在真核细胞中的表达。方法用聚合酶链式反应技术从产甲酸草酸杆菌基因组DNA中扩增frc基因片段并插入真核表达载体获取重组质粒pEGFP-frc,通过限制性内切酶酶切电泳和测序鉴定重... 目的克隆产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因(frc),检测其在真核细胞中的表达。方法用聚合酶链式反应技术从产甲酸草酸杆菌基因组DNA中扩增frc基因片段并插入真核表达载体获取重组质粒pEGFP-frc,通过限制性内切酶酶切电泳和测序鉴定重组质粒。重组质粒转染人胚肾293细胞,检测frc基因在mRNA和蛋白水平上的表达。被转染细胞在含草酸培养液中培养,检测0～72h培养液中草酸浓度的变化。结果frc基因的真核表达载体构建成功。转染293细胞后24～72h,可观察到明亮的绿色荧光,在mRNA和蛋白水平上可检测到frc基因在真核细胞中的表达。转染pEGFP-frc细胞12～72h培养液中草酸浓度明显低于转染空载体的细胞(P<0.05)。结论中国人肠道产甲酸草酸杆菌中可分离出frc基因;frc基因可在真核细胞293细胞中表达并使293细胞获得代谢草酸的能力。 展开更多
关键词 高草酸尿 基因治疗 产甲酸草酸杆菌 甲酰辅酶A转移酶
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中国人肠道产甲酸草酸杆菌frc基因的分离及其在真核细胞中的表达
2
作者 叶章群 孔德波 +5 位作者 陈志强 杨为民 姚林方 郭辉 刘冠琳 曾令启 《临床泌尿外科杂志》 2007年第2期148-150,共3页
目的：探讨中国人肠道产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因（frc）的分离、克隆和鉴定。方法：提取中国人肠道产甲酸草酸杆菌的基因组DNA，利用PCR技术扩增frc基因片段并克隆入真核表达载体pEGFP—C1，重组质粒命名为pEGFP—frc，通过限... 目的：探讨中国人肠道产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因（frc）的分离、克隆和鉴定。方法：提取中国人肠道产甲酸草酸杆菌的基因组DNA，利用PCR技术扩增frc基因片段并克隆入真核表达载体pEGFP—C1，重组质粒命名为pEGFP—frc，通过限制性内切酶酶切电泳和测序鉴定插入片段。将pEGFP—frc通过脂质体转染293细胞，通过逆转录PCR（RT—PCR）和蛋白印迹（Western blot）分别从mRNA和蛋白水平检测frc基因在真核细胞中的表达。结果：中国人肠道产甲酸草酸杆菌fre基因全长1287bp，存在53个碱基和4个氨基酸残基的变异，与GenBank中的frc基因的碱基序列的同源性为95．88％，氨基酸残基序列的同源性为99．07％。转染293细胞后24-72h，可观察到明亮的绿色荧光，RT—PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平上检测到frc基因在真核细胞中的表达。结论：中国人肠道产甲酸草酸杆菌中可以分离出frc基因；中国人肠道产甲酸草酸杆菌frc基因存在一定的变异；frc基因可在真核细胞293细胞中表达。 展开更多
关键词 草酸杆菌 甲酰辅酶A转移酶 泌尿系结石 基因克隆
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