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一种快速检测乙型脑炎病毒滴度的荧光灶试验方法的建立、验证及应用 被引量：1
1
作者 罗娜 乔建 +4 位作者 姜志军 杨禅堂 张仲锴 吴杰 徐葛林 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期224-233,共10页
目的:建立快速荧光灶试验(fluorescence focus assay,FFA)滴定乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)的方法,验证该法替代病毒蚀斑法测定乙型脑炎减毒活疫苗(简称乙脑减毒活疫苗)滴度的可行性并将该法作初步应用。方法:利用... 目的:建立快速荧光灶试验(fluorescence focus assay,FFA)滴定乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)的方法,验证该法替代病毒蚀斑法测定乙型脑炎减毒活疫苗(简称乙脑减毒活疫苗)滴度的可行性并将该法作初步应用。方法:利用原核表达方式构建JEV非结构蛋白1(non-structural protein 1,NS1)重组体系,以纯化所得的JEV-NS1蛋白免疫家兔制备抗NS1蛋白多克隆抗体,建立快速FFA测定JEV滴度的方法。通过与病毒蚀斑法作比对分析,对其专属性、准确度、精密度、线性、范围和耐用性进行验证。用经验证后的FFA检测28批乙脑减毒活疫苗,分析其应用于生产的可行性。结果:所制备的多克隆抗体与JEV可产生特异性荧光灶反应,与其他病毒(森林脑炎病毒、黄热病毒、人柯萨奇病毒A2型和A4型)无交叉反应;FFA方法学验证结果均符合乙脑减毒活疫苗的质控要求;与蚀斑法比较,FFA检测结果更趋一致。结论:本研究建立的FFA通过方法学验证,可应用于乙脑减毒活疫苗成品的滴度测定。 展开更多
关键词 乙型脑炎减毒活疫苗 多克隆抗体 荧光抗体技术 病毒蚀斑法 验证
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荧光灶试验和TCID_(50)-ELISA方法在Ⅲ价轮状病毒重配疫苗感染滴度测定中的对比研究 被引量：2
2
作者 王名强 余黎 +5 位作者 安红 崔焰 韩平 包红 寇桂英 周旭 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1166-1169,共4页
目的:对比荧光灶试验和TCID50-ELISA方法测定III价轮状病毒基因重配疫苗感染滴度的精确性,重复性和可行性。方法:同时采用TCID50-ELISA方法和荧光灶试验方法测定Ⅲ价轮状病毒基因重配疫苗的感染滴度,对测定结果进行比较分析。结果与结论... 目的:对比荧光灶试验和TCID50-ELISA方法测定III价轮状病毒基因重配疫苗感染滴度的精确性,重复性和可行性。方法:同时采用TCID50-ELISA方法和荧光灶试验方法测定Ⅲ价轮状病毒基因重配疫苗的感染滴度,对测定结果进行比较分析。结果与结论:在Ⅲ价轮状病毒基因重配疫苗的感染滴度测定中,荧光灶试验方法和TCID50-ELISA方法各有其特点,荧光灶试验方法更加精确和快速,相对于TCID50-ELISA方法,具有更低的变异性,即其重复性较高;而TCID50-ELISA方法受主观因素的影响较低。 展开更多
关键词 TCID50-ELISA 荧光灶试验 III价轮状病毒基因重配疫苗 感染滴度
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检测轮状病毒滴度的荧光灶法的改进 被引量：5
3
作者 梁婧 徐葛林 +5 位作者 黄晓媛 王继麟 孙文 夏飞 Kapikian AZ 杨晓明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第7期620-622,共3页
目的对检测轮状病毒滴度的荧光灶试验(FFA)方法进行改进。方法以FFA法检测轮状病毒滴度,并观察残留血清、病毒吸附量、甲基纤维素、离心以及Ca2+等因素对检测结果的影响,并验证改进后FFA的重复性。结果残留血清、病毒接种量、吸附后不... 目的对检测轮状病毒滴度的荧光灶试验(FFA)方法进行改进。方法以FFA法检测轮状病毒滴度,并观察残留血清、病毒吸附量、甲基纤维素、离心以及Ca2+等因素对检测结果的影响,并验证改进后FFA的重复性。结果残留血清、病毒接种量、吸附后不洗涤、PBST洗板对FFA检测结果均无影响。而接种病毒后离心及不加甲基纤维素覆盖与对照组比较,差异有显著意义。用改进后方法对同批病毒进行18次试验,CV值为1.7%。结论改进后的方法具有操作简便、结果稳定、重复性好等优点。 展开更多
关键词 轮状病毒 荧光灶试验 定量 滴度
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轮状病毒不同毒株感染宿主细胞的感染效力研究 被引量：3
4
作者 何海洋 李晋涛 +6 位作者 费蕾 姜曼 牟芝蓉 付晓兰 唐艳 段召军 吴玉章 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期255-259,共5页
目的比较轮状病毒Wa株和SA11株对MA104细胞的感染及复制能力,研究不同毒株对宿主细胞的感染效力。方法差速离心浓缩病毒颗粒,FFA法检测病毒滴度,流式细胞术检测病毒对MA104细胞的感染效率,ELISA检测不同病毒颗粒浓度,并比较2毒株间异同... 目的比较轮状病毒Wa株和SA11株对MA104细胞的感染及复制能力,研究不同毒株对宿主细胞的感染效力。方法差速离心浓缩病毒颗粒,FFA法检测病毒滴度,流式细胞术检测病毒对MA104细胞的感染效率,ELISA检测不同病毒颗粒浓度,并比较2毒株间异同。结果Wa株感染效率随病毒量的变化明显快于SA11株,极限感染效率也较SA11高;2毒株病毒产量均随感染病毒用量增加而明显升高,而感染了SA11细胞的平均病毒生成能力显著高于感染Wa株的细胞。结论轮状病毒Wa株与SA11株感染细胞效力差异显著(P<0.05),为进一步研究轮状病毒感染宿主细胞及与之相互作用特点提供了实验依据。 展开更多
关键词 轮状病毒 病毒感染率 病毒复制能力 流式细胞术 荧光集落分析法
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