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FRET技术及其在蛋白质-蛋白质分子相互作用研究中的应用 被引量:21
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作者 王进军 陈小川 邢达 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第6期980-984,共5页
简要综述了FRET方法在活细胞生理条件下研究蛋白质 蛋白质间相互作用方面的最新进展 .蛋白质 蛋白质间相互作用在整个细胞生命过程中占有重要地位 ,由于细胞内各种组分极其复杂 ,因此一些传统研究蛋白质 蛋白质间相互作用的方法 ,例... 简要综述了FRET方法在活细胞生理条件下研究蛋白质 蛋白质间相互作用方面的最新进展 .蛋白质 蛋白质间相互作用在整个细胞生命过程中占有重要地位 ,由于细胞内各种组分极其复杂 ,因此一些传统研究蛋白质 蛋白质间相互作用的方法 ,例如酵母双杂交、免疫沉淀等可能会丢失某些重要的信息 ,无法正确地反映在当时活细胞生理条件下蛋白质 蛋白质间相互作用的动态变化过程 .荧光共振能量转移 (fluorescenceresonanceenergytransfer ,FRET)是近来发展的一项新技术 ,此项技术的应用 ,为在活细胞生理条件下对蛋白质 蛋白质间相互作用进行实时的动态研究 。 展开更多
关键词 荧光共振能量转移 fret 蛋白质 相互作用 活细胞 荧光成像技术
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新型碳纳米材料——石墨烯及其衍生物在生物传感器中的应用 被引量:25
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作者 李晶 杨晓英 《化学进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第2期380-396,共17页
纳米生物检测是目前纳米科学、生物化学及诊断技术相结合的新的重要研究方向。石墨烯由于具有优良的电子、光学、热学、化学和机械性质,使其具有构筑探针分子和信号传递并放大的三重作用,成为应用于超灵敏生物传感器的理想材料。快速的... 纳米生物检测是目前纳米科学、生物化学及诊断技术相结合的新的重要研究方向。石墨烯由于具有优良的电子、光学、热学、化学和机械性质,使其具有构筑探针分子和信号传递并放大的三重作用,成为应用于超灵敏生物传感器的理想材料。快速的电子传递和可多重修饰的化学性质使其能够实现准确而高选择性的生物分子检测。石墨烯及其复合材料越来越多地被应用到生物传感器的制备中。本文综述了近几年石墨烯及其衍生物在生物传感器研究中的进展,包括修饰石墨烯的各种材料、多种生物活性物质在石墨烯表面的直接电子转移和石墨烯在酶传感器、免疫传感器、基因传感器以及一些生物小分子的检测等方面的研究。 展开更多
关键词 石墨烯 功能化 生物传感器 电化学 荧光共振能转移
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金属离子响应型荧光传感分子的设计原理及研究进展 被引量:21
3
作者 张鹏 张有明 +2 位作者 林奇 姚虹 魏太保 《有机化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1300-1321,共22页
荧光传感凭借其高灵敏度、可实现远程监测和实时性等优越性而广受关注,在离子识别中常被用于离子识别信号的输出.随着主客体化学的迅速发展,许多具有良好性能的离子响应型荧光探针相继被报道,从分子内电荷转移(ICT)、光诱导的电子转移(P... 荧光传感凭借其高灵敏度、可实现远程监测和实时性等优越性而广受关注,在离子识别中常被用于离子识别信号的输出.随着主客体化学的迅速发展,许多具有良好性能的离子响应型荧光探针相继被报道,从分子内电荷转移(ICT)、光诱导的电子转移(PET)、荧光共振能量转移(FRET)、激发态分子内质子转移(ESIPT)、激基缔合物的生成/消失、螯合作用导致的荧光增强(CHEF)等不同机理对荧光传感型离子识别受体的设计思路进行了理论阐释,归纳总结了近5年来相关文献报道,阐述了其研究现状和研究进展,并展望了该领域的研究方向. 展开更多
关键词 荧光传感 离子识别 分子内电荷转移(ICT) 光诱导的电子转移(PET) 荧光共振能量转移(fret) 激发态分 子内质子转移(ESIPT) 激基缔合物 荧光增强(CHEF)
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基于密码子优化策略的新型冠状病毒主蛋白酶在大肠杆菌中的表达条件优化与活性鉴定 被引量:21
4
作者 陈云雨 付正豪 +2 位作者 闫干干 林媛 刘晓平 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期1334-1345,共12页
新型冠状病毒主蛋白酶(Main protease,Mpro)在调控新冠病毒RNA复制中具有重要的生物学功能,且Mpro在冠状病毒中的进化高度保守并不易突变,已成为新型广谱抗冠状病毒药物开发的理想靶标之一。为了制备高纯度、高活性的Mpro,根据密码子偏... 新型冠状病毒主蛋白酶(Main protease,Mpro)在调控新冠病毒RNA复制中具有重要的生物学功能,且Mpro在冠状病毒中的进化高度保守并不易突变,已成为新型广谱抗冠状病毒药物开发的理想靶标之一。为了制备高纯度、高活性的Mpro,根据密码子偏爱性原则,将优化的Mpro基因分别连接到pET-21a与pET-28a表达载体中构建重组质粒。将重组质粒转化到大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)感受态细胞中,分别进行原核表达条件优化,所表达的重组蛋白质命名为Mpro与Mpro-28。Mpro与Mpro-28经HisTrapTM亲和层析法分离纯化后,以荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer,FRET)实验进行生物学活性鉴定。FRET实验结果表明,纯化的Mpro具有良好的水解活性,Km值为11.68μmol/L,kcat值为0.037/s,比活力不低于25000 U/mg,约为Mpro-28的25倍,说明天然的氨基端对Mpro的生物学功能是必需的,羧基端残留的多聚组氨酸标签对其水解活性影响较小。文中基于密码子优化策略,成功地进行了新冠病毒Mpro在大肠杆菌中的表达条件优化与活性鉴定,为靶向Mpro广谱抗冠状病毒药物高通量筛选模型的建立奠定了实验基础。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 主蛋白酶 密码子优化 原核表达 荧光共振能量转移
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消癌平诱导人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞内caspase-3活化的荧光光谱分析 被引量:12
5
作者 陈同生 王小平 +3 位作者 王治平 王龙祥 王会营 邢达 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1327-1331,共5页
采用CCK-8技术检测发现传统中药消癌平(XAP)对人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞的增殖活性具有显著的抑制作用。利用共聚焦扫描荧光显微成像、荧光共振能量转移(FRET)及其受体光漂白技术证实了基于FRET技术构建的SCAT3质粒在ASTC-a-1细胞中的稳... 采用CCK-8技术检测发现传统中药消癌平(XAP)对人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞的增殖活性具有显著的抑制作用。利用共聚焦扫描荧光显微成像、荧光共振能量转移(FRET)及其受体光漂白技术证实了基于FRET技术构建的SCAT3质粒在ASTC-a-1细胞中的稳定表达。将消癌平加入细胞培养液中培育细胞,并在不同的时间检测活细胞内SCAT3的荧光发射光谱,从而监测细胞中caspase-3的活化状态。实验结果表明:(1)消癌平可以有效抑制人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞的增殖活性并诱导细胞的死亡,消癌平对细胞的抑制作用具有剂量依赖性。(2)消癌平处理细胞72 h后,细胞内大量的SCAT3被切割,表明细胞内caspase-3的活化水平明显升高。(3)将含消癌平的细胞培养液与细胞共同培养24 h,然后采用没有消癌平的细胞培养液培养细胞48和72 h后,细胞内SCAT3的光谱没有明显改变,表明消癌平作用细胞24 h内没有显著激活细胞内的caspase-3。 展开更多
关键词 消癌平 荧光光谱 caspae-3 荧光共振能量转移(fret) 激光共聚焦荧光显微镜
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实时荧光定量PCR技术及其在昆虫学研究中的应用 被引量:10
6
作者 王光华 赵伟春 程家安 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1293-1303,共11页
实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)是一种利用荧光信号实时监测体外DNA分子PCR复制过程中每个循环的扩增产物,从而实现对DNA模板进行定量分析的技术,具有准确、快速、灵敏、特异... 实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)是一种利用荧光信号实时监测体外DNA分子PCR复制过程中每个循环的扩增产物,从而实现对DNA模板进行定量分析的技术,具有准确、快速、灵敏、特异等优点,在动植物基因工程、动植物检疫、微生物鉴定与分类、食品安全检测和医学等领域中得到广泛应用。本文对实时荧光定量PCR技术的原理、优缺点及近年来新的荧光探针的原理、类型进行了评述,并对实时荧光定量PCR技术在昆虫学研究中的应用进行了综述。 展开更多
关键词 DNA 实时荧光定量PCR 荧光共振能量转移 探针 昆虫学
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Caspase-3参与调控蟾酥诱导人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞的凋亡 被引量:11
7
作者 陈同生 王小平 +2 位作者 孙磊 王会营 王龙祥 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第1期85-90,共6页
采用基因质粒转染技术、荧光发射谱检测分析以及荧光共振能量转移(FRET)受体光漂白技术,首次在活细胞中实时检测中药蟾酥(Chan-Su,CS或bufonis venenum)诱导人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞凋亡过程中caspase-3的活化特性.采用CCK-8(Cell Counei... 采用基因质粒转染技术、荧光发射谱检测分析以及荧光共振能量转移(FRET)受体光漂白技术,首次在活细胞中实时检测中药蟾酥(Chan-Su,CS或bufonis venenum)诱导人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞凋亡过程中caspase-3的活化特性.采用CCK-8(Cell Couneing Kit-8)技术检测发现,蟾酥对细胞的活性具有显著的抑制作用;蟾酥处理稳定表达FRET质粒SCAT3的人肺腺癌细胞后,在不同的时间检测活细胞中SCAT3的荧光光谱;利用共聚焦扫描荧光显微成像技术检测蟾酥处理后细胞的形态,从而进一步证实蟾酥诱导细胞凋亡.实验结果表明:a.蟾酥可以有效抑制人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞的增殖活性并诱导细胞的死亡.蟾酥对细胞的抑制作用具有剂量依赖性;b.蟾酥处理细胞6h后能检测到明显的细胞凋亡小体,连续作用24h后细胞全部皱褶,并有部分细胞破碎;c.蟾酥作用细胞2h就能明显切割细胞内的SCAT3,细胞内SCAT3的切割程度随着蟾酥作用时间的延长而增加,24h内细胞内的SCAT3完全被切割.受体光漂白实验也证实了该结论,表明caspase-3参与调控了蟾酥诱导的细胞凋亡过程. 展开更多
关键词 蟾酥 荧光光谱 caspae-3 荧光共振能量转移(fret) 激光共聚焦荧光显微成像
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Spectroscopic analysis on the binding interaction of biologically active pyrimidine derivative with bovine serum albumin 被引量:8
8
作者 Vishwas D. Suryawansht Laxman S. Walekar +2 位作者 Anil H. Gore Prashant V. Anbhule Govind B. Kolekar 《Journal of Pharmaceutical Analysis》 SCIE CAS 2016年第1期56-63,共8页
A biologically active antibacterial reagent, 2-amino-6-hydroxy-4-(4-N, N-dimethylaminophenyl)-pyr- imidine-5-carbonitrile (AHDMAPPC), was synthesized. It was employed to investigate the binding in- teraction with ... A biologically active antibacterial reagent, 2-amino-6-hydroxy-4-(4-N, N-dimethylaminophenyl)-pyr- imidine-5-carbonitrile (AHDMAPPC), was synthesized. It was employed to investigate the binding in- teraction with the bovine serum albumin (BSA) in detail using different spectroscopic methods. It ex- hibited antibacterial activity against Escherichia cali and Staphylococcus aureus which are common food poisoning bacteria. The experimental results showed that the fluorescence quenching of model carrier protein BSA by AHDMAPPC was due to static quenching. The site binding constants and number of binding sites (n ≈ 1) were determined at three different temperatures based on fluorescence quenching results. The thermodynamic parameters, enthalpy change (AH), free energy (AG) and entropy change (AS) for the reaction were calculated to be 15.15 kJ/mol, -36.11 kJ/mol and 51.26J/mol K according to van't Hoff equation, respectively. The results indicated that the reaction was an endothermic and spontaneous process, and hydrophobic interactions played a major role in the binding between drug and BSA. The distance between donor and acceptor is 2.79 nm according to Forster's theory. The alterations of the BSA secondary structure in the presence of AHDMAPPC were confirmed by UV-visible, synchronous fluorescence, circular dichroism (CD) and three-dimensional fluorescence spectra. All these results in- dicated that AHDMAPPC can bind to BSA and be effectively transported and eliminated in the body. It can be a useful guideline for further drug design. 展开更多
关键词 Bovine serum albumin fluorescence spectroscopy Pyrimidine derivative Binding interaction fluorescence resonance energy transferfret
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聚合酶链式反应(PCR)荧光检测研究 被引量:8
9
作者 吴坚 曹文祺 《计量学报》 CSCD 北大核心 2002年第2期151-156,共6页
本文研究了荧光能量传递技术 (fluorescenceresonanceenergytransfer,FRET) ,建立了一套基于该理论在聚合酶链式反应 (PCR)中用于荧光检测和溯源性研究的实验装置 。
关键词 聚合酶链式反应 荧光能量传递技术 荧光检测 溯源性 实验装置 DNA 人工合成
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生物大分子相互作用检测技术新进展——三色荧光级联荧光共振能量转移技术 被引量:6
10
作者 刘春春 杭海英 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第3期292-296,共5页
荧光共振能量转移(fluorescenceresonanceenergytransfer,FRET),是指能量从一种受激发的荧光基团(fluorophore)以非辐射的方式转移到另一种荧光基团的物理现象.FRET的能量转移效率是两个荧光基团间距离的函数,并对此距离十分敏感,它的... 荧光共振能量转移(fluorescenceresonanceenergytransfer,FRET),是指能量从一种受激发的荧光基团(fluorophore)以非辐射的方式转移到另一种荧光基团的物理现象.FRET的能量转移效率是两个荧光基团间距离的函数,并对此距离十分敏感,它的有效响应距离一般在1~10nm之间,因而可被用于测定原子间及分子间的距离.这一特点使FRET技术在大分子构象变化、大分子之间相互作用、细胞信号通路等研究中发挥重要作用,成为生物医学研究中的重要方法.但细胞内的生物学过程常常涉及多于两个的大分子间相互作用,二色荧光基团的FRET技术不能满足这种生物学研究的需求.最近,两个研究小组在这方面取得突破,建立了分别基于共聚焦显微镜和流式细胞仪的三色荧光级联FRET技术.这一技术的出现将会极大地促进生物学及相关研究领域的发展. 展开更多
关键词 荧光共振能量转移(fret) 共聚显微镜 流式细胞仪
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JNK/Bim/Bax途径在TNF-α诱导分化PC12细胞凋亡过程中的作用机制 被引量:9
11
作者 张岚 邢达 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第4期370-380,共11页
阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)是一种神经系统退行性疾病,近年来许多研究发现AD与细胞凋亡关系密切,有研究证明肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的合成过量会造成神经细胞的凋亡从而导致AD等神经退行性疾病的发... 阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)是一种神经系统退行性疾病,近年来许多研究发现AD与细胞凋亡关系密切,有研究证明肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的合成过量会造成神经细胞的凋亡从而导致AD等神经退行性疾病的发生,然而人们对TNF-α造成神经细胞凋亡的分子机制并不了解.采用激光共聚焦扫描成像技术和荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术在活细胞中实时对TNF-α诱导分化PC12细胞凋亡的信号通路进行了细致的研究.实验结果证明,TNF-α诱导的分化PC12细胞凋亡会经过线粒体和非线粒体途径,并通过激活核转录因子(NF-κB)上调Bcl-xL的表达来抑制经过线粒体的凋亡途径.进一步的研究证明,BimL会在线粒体上替换原来被Bcl-xL抑制的Bax,从而让Bax寡聚化,进而引发细胞凋亡,而c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125可以抑制Bax寡聚化.此外,在未分化PC12细胞中共表达GFP-BimL和YFP-Bax质粒,发现BimL可以促进Bax发生聚集,并且它们二者之间不是直接发生相互作用.上述结果证明,BimL在TNF-α诱导神经细胞凋亡过程中起到了重要作用,BimL在TNF-α诱导分化PC12细胞凋亡的过程中间接激活了Bax. 展开更多
关键词 阿尔茨海默病(AD) 肿瘤坏死因子(TNF-α) 荧光共振能量转移(fret) BAX BimL 分化PC12细胞
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CdS量子点与CdSe量子点间荧光共振能量转移研究 被引量:6
12
作者 杨同辉 田宝丽 +2 位作者 蒋晓红 李林松 杜祖亮 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1188-1192,共5页
在有机相中合成了不同尺寸的CdS和CdSe量子点,并利用Langmuir-Blodgett(LB)技术将相同尺寸的CdS和CdSe量子点组装成多层复合纳米有序结构.采用荧光光谱研究了CdS和CdSe量子点在混合体系和多层复合纳米有序结构状态下的荧光共振能量转移(... 在有机相中合成了不同尺寸的CdS和CdSe量子点,并利用Langmuir-Blodgett(LB)技术将相同尺寸的CdS和CdSe量子点组装成多层复合纳米有序结构.采用荧光光谱研究了CdS和CdSe量子点在混合体系和多层复合纳米有序结构状态下的荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer,FRET).我们观察到CdS和CdSe量子点混合溶液与当溶剂挥发形成固态膜中,CdS量子点的荧光强度较溶液状态下强烈猝灭,表明当颗粒间距离减小时CdS和CdSe量子点间产生较高效率的荧光共振能量转移.在多层复合纳米有序结构中,随着给体CdS量子点层数的增加,单层受体CdSe量子点的荧光逐步增强,这表明层间纵向能量转移率随给体层数的增加而提高. 展开更多
关键词 CDS量子点 CDSE量子点 Langmuir-Blodgett(LB)技术 荧光共振能量转移
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新冠病毒主蛋白酶小分子抑制剂荧光共振能量转移高通量筛选模型的优化与应用 被引量:9
13
作者 闫干干 李东升 +4 位作者 戚海燕 付正豪 刘晓平 张晶 陈云雨 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期2236-2249,共14页
基于荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)原理,以新冠病毒主蛋白酶(main protease, Mpro)为靶标,建立并应用Mpro小分子抑制剂FRET高通量筛选模型,以期快速筛选新型Mpro小分子抑制剂。利用大肠杆菌原核表达... 基于荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)原理,以新冠病毒主蛋白酶(main protease, Mpro)为靶标,建立并应用Mpro小分子抑制剂FRET高通量筛选模型,以期快速筛选新型Mpro小分子抑制剂。利用大肠杆菌原核表达与分离纯化高活性的Mpro,再以FRET法进行比活力测定。基于FRET原理,以7-甲氧基香豆素-4-乙酸(7-methoxycoumarin-4-acetic acid, MCA)与2,4-二硝基苯酚(2,4-dinitropheno, Dnp)标记的多肽作为Mpro水解底物,通过优化反应缓冲液、Mpro反应浓度、反应温度与时间及DMSO耐受浓度,建立并应用Mpro小分子抑制剂FRET高通量筛选模型进行苗头化合物的筛选。利用大肠杆菌实现了高活性Mpro的原核表达与分离纯化,且比活力不低于40 000 U/mg。通过一系列优化实验,使用0.4μmol/L Mpro与5μmol/L底物建立了Z′因子值为0.79的Mpro小分子抑制剂FRET高通量筛选模型,且反应体系中含有的二硫苏糖醇(1,4-dithiothreitol,DTT)是影响FRET筛选模型可靠性的重要因素。通过对天然产物化合物库进行高通量筛选,发现白花丹素与银杏酸在体外对Mpro酶活性具有良好的抑制作用。本研究建立了基于FRET原理的Mpro小分子抑制剂高通量筛选模型,初步证实了白花丹素与银杏酸是一类新型苗头化合物,为抗新型冠状病毒药物先导化合物的筛选与发现奠定了基础。 展开更多
关键词 新冠病毒 主蛋白酶抑制剂 荧光共振能量转移 高通量筛选 白花丹素 银杏酸
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半导体纳米粒子与金纳米粒子间荧光共振能量转移研究 被引量:6
14
作者 张纪梅 代昭 +3 位作者 郭宁 许世超 董全喜 孙波 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第2期254-257,共4页
采用水相法合成的CdTe半导体纳米粒子作为能量给体,通过Sch iff碱反应将单链DNA连接到表面.采用柠檬酸钠还原氯金酸法制取的Au纳米粒子作为能量受体,通过Au—S键将单链DNA连接到表面.通过DNA链间的杂交,构建了荧光共振能量转移体系(FRE... 采用水相法合成的CdTe半导体纳米粒子作为能量给体,通过Sch iff碱反应将单链DNA连接到表面.采用柠檬酸钠还原氯金酸法制取的Au纳米粒子作为能量受体,通过Au—S键将单链DNA连接到表面.通过DNA链间的杂交,构建了荧光共振能量转移体系(FRET).测定了CdTe-DNA、探针体系和探针体系+目标DNA的荧光强度.结果表明,探针体系的荧光强度最弱,加入目标DNA后,体系荧光增强,表明该体系的构建是成功的. 展开更多
关键词 金纳米粒子 CdTe纳米粒子 荧光共振能量转移 荧光猝灭
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紫杉醇诱导不依赖于Caspase-3细胞类似Paraptosis的荧光光谱分析 被引量:6
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作者 陈同生 王小平 +2 位作者 孙磊 王会营 王龙祥 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第11期2623-2627,共5页
研究了紫杉醇(Taxol)诱导人肺腺癌细胞(ASTC-a-1)类似Paraptosis的特征和机理。采用CCK-8技术检测了抑制细胞活性的特性,结果表明大于70μmol.L-1浓度的紫杉醇可以显著抑制细胞活性;采用激光共聚焦扫描荧光成像从形态上检测了紫杉醇诱... 研究了紫杉醇(Taxol)诱导人肺腺癌细胞(ASTC-a-1)类似Paraptosis的特征和机理。采用CCK-8技术检测了抑制细胞活性的特性,结果表明大于70μmol.L-1浓度的紫杉醇可以显著抑制细胞活性;采用激光共聚焦扫描荧光成像从形态上检测了紫杉醇诱导细胞死亡的形态特征,表明紫杉醇诱导了类似副凋亡(Paraptosis)特征的细胞肿胀和细胞质空泡化,而且没有细胞膜皱褶、细胞核浓缩等细胞凋亡的特征;通过基因质粒转染在细胞转染稳定表达基于荧光共振能量转移(FRET)质粒SCAT3,并利用FRET受体光漂白技术和荧光光谱检测分析技术研究了紫杉醇诱导细胞类似Paraptosis过程中Caspase-3的活化特性,结果表明在紫杉醇诱导细胞质肿胀和细胞死亡的过程中Caspase-3没有被活化。以上研究结果表明紫杉醇可以通过类似Paraptosis的方式明显诱导细胞程序性死亡,该过程不依赖于Caspase-3的活性。 展开更多
关键词 紫杉醇(Taxol) Paraptosis 荧光光谱 Caspae-3 荧光共振能量转移(fret) 激光共聚焦荧光显微镜
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利用FRET技术在活细胞内观察EGF对PKA作用的时空成像 被引量:4
16
作者 王进军 陈小川 邢达 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期109-113,共5页
cAMP依赖的蛋白激酶(protein kinase A, PKA)在细胞生长与分化过程中扮演重要角色,特别是在调节Ras信号通路引起的细胞增殖效应中起着重要作用。为了在活细胞内动态观察表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)对PKA的作用,采用一... cAMP依赖的蛋白激酶(protein kinase A, PKA)在细胞生长与分化过程中扮演重要角色,特别是在调节Ras信号通路引起的细胞增殖效应中起着重要作用。为了在活细胞内动态观察表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)对PKA的作用,采用一种可以检测PKA酶活性的报告蛋白(A-kinase activity reporter, AKAR)——这种报告蛋白是利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)原理设计的,使其在人类肺癌细胞(ASTC-a-1)中稳定表达。加入EGF刺激因子后,随时间变化的成像分析显示出在活细胞生理条件下被EGF作用的PKA酶活性变化的时空信息。这些资料为EGF作用PKA提供了直接的实时证据。 展开更多
关键词 荧光共振能量转移 fret 表皮生长因子 EGF 蛋白激酶A PKA 活细胞 荧光共振能量转移
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基于量子点的荧光共振能量转移的应用 被引量:3
17
作者 吴峰 蔡继业 《化学与生物工程》 CAS 2007年第1期58-61,共4页
介绍了基于量子点(QDs)的FRET原理,综述了基于QDs的FRET在生物传感器、蛋白质相互作用、生物分子构像变化和癌症治疗的光敏剂研究中的应用。
关键词 量子点 荧光共振能量转移(fret) 供体 受体
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Preparation of multi-color quantum dots and its application to immunohistochemical analysis 被引量:6
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作者 ZHANG BingBo LIU XuHui +3 位作者 LI DeNa TIAN Hui MA GuiPing CHANG Jin 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2008年第13期2077-2083,共7页
Quantum dots (QDs) have the potential to be used in the multiplexed bioanalysis for their unique property:multi-color QDs can be excited at the same single wavelength light. In this work,high quan-tum yield multi-colo... Quantum dots (QDs) have the potential to be used in the multiplexed bioanalysis for their unique property:multi-color QDs can be excited at the same single wavelength light. In this work,high quan-tum yield multi-color core/shell QDs were prepared. After being water-solubilized by amphiphilic polymer based on self-assembling,the QDs would be labeled by two different IgGs and used in the multiplexed biodetection. Fluorescence resonance energy transfer (FRET) should be avoided in the multiplexed biodetection. In this work,spectral analysis showed that no FRET appeared in water-soluble QDs modified by amphiphilic polymer. The immunofluorescence in vitro indicated that the QDs-IgGs bioconjugates had excellent species-specific detection ability with nearly non-specific binding. The setting of this model will help to support the application of multi-color QDs in the multiplexed bioanalysis communities. 展开更多
关键词 彩色量子 动态海洋跟踪系统 生物分析法 荧光共振
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一种荧光DNA生物传感器用于食品中非洲猪瘟病毒的检测 被引量:6
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作者 乐莉 张亚青 +1 位作者 宋尔群 陶晓奇 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期268-274,共7页
非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染家猪和野猪引起的一种急性出血性严重传染病。ASF的持续传播不仅影响到居民的肉类供应,也影响到全球肉类供应的安全,因此,建立灵敏特异的ASFV... 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染家猪和野猪引起的一种急性出血性严重传染病。ASF的持续传播不仅影响到居民的肉类供应,也影响到全球肉类供应的安全,因此,建立灵敏特异的ASFV检测方法已经成为一个食品安全重要热点。利用量子点(quantum dots,QDs)和纳米金(Au nanoparticles,AuNPs)构建了一种基于荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)的DNA传感器,基于单链DNA互补配对原则用于ASFV特异性基因检测。在靶DNA缺失的情况下,ss-DNA-QDs(探针1)将与ss′-DNA-AuNPs(探针2)杂交,供体QDs与受体AuNPs距离变近,引发FRET效应,QDs的荧光被AuNPs淬灭。然而,靶DNA存在的情况下,靶DNA与探针2竞争结合探针1,导致FRET被破坏,QDs的荧光恢复。该生物传感器可在1.25 h内快速检测ASFV靶DNA,检出限为0.72μmol/L,在猪肉、火腿肠和猪肉饺子等食品中的回收率为82.00%~108.00%,变异系数为0.02%~0.15%。该研究提出了一种简单、快速的检测食品中ASFV基因片段的方法。在以后的研究中,可以通过优化条件来提高灵敏度。此外,这种策略可以扩展到其他DNA、病毒或蛋白质的传感应用。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 非洲猪瘟病毒 荧光共振能量转移 DNA检测 食品安全
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利用受体漂白荧光共振能量转移技术研究β-分泌酶在活细胞内的二聚化 被引量:5
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作者 陆锦玲 储军 +3 位作者 杨杰 曾绍群 骆清铭 张智红 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第3期268-273,共6页
β淀粉样肽(Aβ)在阿尔茨海默病(AD)患者脑内的产生、聚集和沉积是AD的一个固有病理特征,也被普遍认为是AD的重要发病机理之一.β-分泌酶(BACE)对淀粉样前体蛋白(APP)的裂解是Aβ产生的关键步骤,β-分泌酶抑制剂是AD药物治疗的一个重要... β淀粉样肽(Aβ)在阿尔茨海默病(AD)患者脑内的产生、聚集和沉积是AD的一个固有病理特征,也被普遍认为是AD的重要发病机理之一.β-分泌酶(BACE)对淀粉样前体蛋白(APP)的裂解是Aβ产生的关键步骤,β-分泌酶抑制剂是AD药物治疗的一个重要发展方向,因此对BACE结构的了解具有重要意义.利用受体漂白荧光共振能量转移(FRET)技术首次在活细胞内研究BACE的二聚化结构.通过基因工程技术分别构建了青色荧光蛋白(CFP)和黄色荧光蛋白(YFP)标记的全长BACE(BACE-FL)和BACE活性部分(BACE-NT),应用共聚焦荧光显微镜和受体漂白FRET技术研究了BACE-FL和BACE-NT在细胞中的表达和定位,以及它们在活细胞内的存在形式.实验结果表明:a.BACE-FL在内质网至细胞膜均有表达,主要分布在高尔基体、细胞膜和内体等细胞器中,而BACE-NT则被滞留在内质网里.b.BACE-NT是单体结构,而BACE-FL在活细胞内则以二聚体的形式存在.证明,BACE的跨膜序列和C端对BACE的转运和定位具有重要作用,其二聚体结构由这些序列决定,而不由其活性位点决定. 展开更多
关键词 Β-分泌酶 二聚化 阿尔茨海默病 荧光共振能量转移 受体漂白
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