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5HRE联合CEAp靶向调控RASSF1A基因对SGC7901胃癌细胞株抑制作用的研究 被引量：1
1
作者 周培华 孙学军 +8 位作者 郑见宝 王炜 王孝珑 陈南征 魏光兵 范渊 李孝彬 王训凯 禄韶英 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2015年第10期1201-1208,共8页
目的探讨人5拷贝低氧反应元件(5HRE)联合癌胚抗原启动子(CEAp)调控元件的靶向性及调控RAS相关区域家族1A(RASSF1A)抑癌基因的慢病毒载体对SGC7901胃癌细胞的抑制作用。方法 1分别采用实时定量RT-PCR(qRT-PCR)、免疫组织化学SP染色及West... 目的探讨人5拷贝低氧反应元件(5HRE)联合癌胚抗原启动子(CEAp)调控元件的靶向性及调控RAS相关区域家族1A(RASSF1A)抑癌基因的慢病毒载体对SGC7901胃癌细胞的抑制作用。方法 1分别采用实时定量RT-PCR(qRT-PCR)、免疫组织化学SP染色及Western blot法检测SGC7901、MKN28和MCF-10A细胞株中癌胚抗原(CEA)mRNA及其蛋白,以及RASSF1A蛋白的表达水平,以确定实验细胞和阴性对照细胞。2构建p GL4.20-5HRE-CEAp-Luc载体以转染SGC7901、MKN28和MCF-10A细胞株,将各细胞株分为2组,分别加入(缺氧组)或不加入CoCl2(常氧组),比较各细胞株中缺氧组和常氧组细胞的启动活性。3将重组慢病毒载体(p LV-5HRE-CEAp-RASSF1A)及相应空病毒载体包装成病毒颗粒LV-5HC-RASSF1A(感染组)和LV-NC(阴性对照组),感染SGC7901细胞。以未感染任何病毒的SGC7901细胞作为空白对照组,将该3组细胞再分为2个亚组,分别加入(缺氧组)或不加入CoCl2(常氧组),比较缺氧组和常氧组细胞中RASSF1A蛋白的表达水平和细胞增殖抑制率。结果 1 q RT-PCR结果显示:SGC7901细胞株中CEA m RNA的表达水平高于MKN28及MCF-10A细胞株(P<0.05);免疫组织化学染色结果显示:CEA的表达水平在SGC7901、MKN28及MCF-10A细胞株中依次递减,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);Western blot结果显示:在SGC7901及MKN28细胞株中未检测到RASSF1A蛋白的电泳条带,而在MCF-10A细胞株中可检测到。据此确定SGC7901细胞株为实验细胞,MKN28细胞株为阴性对照细胞。2转染p GL4.20-5HRE-CEAp-Luc载体后,在SGC7901及MKN28细胞株中,同种细胞株内与常氧组比较,缺氧组细胞的活性倍数均升高(P<0.01);而在MCF-10A细胞株中,常氧组和缺氧组细胞的活性倍数比较差异无统计学意义(P>0.05)。在不加入CoCl2条件和加入CoCl2条件下,同等条件下与SGC7901细胞株比较,MKN28及MCF-10A细胞株的活性倍数均较低(P<0.05);与MKN28细胞株比较,MCF-10A细胞株的活性倍数� 展开更多
关键词 5拷贝低氧反应元件 癌胚抗原启动子 RAS相关区域家族1A基因 胃癌 基因治疗
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