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家蚕丝素重链启动子克隆片段在家蚕体内和昆虫培养细胞内的渗漏表达 被引量：10
1
作者 汪生鹏 陆长德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期491-496,共6页
为了探讨家蚕丝素重链基因的调控机制,应用重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)为基因转移载体,以绿色荧光蛋白基因为报告基因,研究了丝素重链基因启动子克隆片段在家蚕丝腺的不同部位,以及脂肪体细胞和Sf9培养细胞中的表达渗漏。... 为了探讨家蚕丝素重链基因的调控机制,应用重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)为基因转移载体,以绿色荧光蛋白基因为报告基因,研究了丝素重链基因启动子克隆片段在家蚕丝腺的不同部位,以及脂肪体细胞和Sf9培养细胞中的表达渗漏。结果发现,丝素重链启动子克隆片段在家蚕中部丝腺存在表达渗漏,并且在中部丝腺前部的表达活性要强于中部丝腺的中部和后部；克隆片段在脂肪体组织存在表达渗漏,通过荧光解剖显微镜可以在体表观察到绿色荧光；克隆片段在Sf9培养细胞中也存在表达渗漏。上述结果说明目前已知的有关家蚕丝素重链基因的调控元件仍不充分,家蚕基因组中可能还有其他调控丝素重链基因表达组织和时相的特异性元件存在。 展开更多
关键词 家蚕 丝素重链基因 渗漏表达 重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒
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不同截短的丝素重链基因启动子驱动报告基因在家蚕组织中的表达 被引量：1
2
作者 高志宏 刘春 +3 位作者 任静波 刘品彦 魏丽婉 夏庆友 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期391-399,共9页
应用重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)为基因转移载体,以绿色荧光蛋白基因(EGFP)为报告基因,研究不同截短的丝素重链基因启动子(-2127/+23、-925/+23和-238/+23)驱动报告基因在家蚕5龄幼虫组织中的表达情况。结果发现,通过病毒... 应用重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)为基因转移载体,以绿色荧光蛋白基因(EGFP)为报告基因,研究不同截短的丝素重链基因启动子(-2127/+23、-925/+23和-238/+23)驱动报告基因在家蚕5龄幼虫组织中的表达情况。结果发现,通过病毒感染介导,3种长度丝素重链基因启动子驱动的报告基因在脂肪体和血细胞中存在异位表达,从个体体表可直接观察到明显的绿色荧光;3种长度的启动子都能在后部丝腺中高效起始EGFP的转录,产生绿色荧光;长度为0.9kb和0.2kb的启动子0.9KH、0.2KH在中部丝腺能起始EGFP转录产生绿色荧光,而2.1kb的启动子(2.1KH)能起始EGFP转录,但未能检测到绿色荧光;3种长度的启动子也能在Sf9培养细胞中起始EGFP基因表达。上述结果表明,丝素重链基因启动子没有严格的组织特异性。 展开更多
关键词 丝素重链基因 启动子 绿色荧光蛋白基因 组织特异性表达 苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒
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靶向家蚕丝素重链基因的锌指蛋白结构域的人工构建
3
作者 刘婷婷 梁梓强 +3 位作者 梁安文 郭技星 李广宏 王方海 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期1-4,共4页
将多个可特异识别并结合DNA的锌指单体串联在一起即可构成锌指蛋白结构域,若将其与不同的功能域因子融合,则会构建出有很多用途的人工蛋白分子,从而实现对基因组的各种定点修饰或调控。以家蚕丝素重链基因为研究对象,首先利用Zinc Finge... 将多个可特异识别并结合DNA的锌指单体串联在一起即可构成锌指蛋白结构域,若将其与不同的功能域因子融合,则会构建出有很多用途的人工蛋白分子,从而实现对基因组的各种定点修饰或调控。以家蚕丝素重链基因为研究对象,首先利用Zinc Finger Tools软件筛选到了一个合适的靶标位点,再采用模块组装技术,通过酶切、片段回收、连接、转化等步骤成功将多个锌指单体串联在一起,构建出一对靶向家蚕丝素重链基因特定位点的由4个锌指单体组成的锌指蛋白结构域,这为将来定点修饰或改造家蚕丝素基因,进一步提高蚕丝质量和产量,以及大幅度提升家蚕生物反应器对外源蛋白的表达能力打下了良好的基础。 展开更多
关键词 家蚕 丝素重链基因 锌指蛋白
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添食不同含氮物质对家蚕产丝量及丝素蛋白基因表达的影响 被引量：3
4
作者 朱巧莹 李敏杰 +2 位作者 陈燕冰 冯启理 邓惠敏 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期658-662,共5页
给家蚕5龄幼虫分别添食大豆蛋白、NH4Cl和尿素后,调查家蚕产丝量的变化,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测蚕体丝腺组织中丝素重链基因(fib H)的表达变化,探究适合用于提高家蚕产丝量的含氮物质。5龄起蚕连续6 d按照0.45 mg/(头&#... 给家蚕5龄幼虫分别添食大豆蛋白、NH4Cl和尿素后,调查家蚕产丝量的变化,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测蚕体丝腺组织中丝素重链基因(fib H)的表达变化,探究适合用于提高家蚕产丝量的含氮物质。5龄起蚕连续6 d按照0.45 mg/(头·d)的剂量添食尿素后,茧层率比对照组增加15.7%,且幼虫的体质量及丝腺体积都比对照组有所增加;5龄幼虫添食大豆蛋白和NH4Cl后茧层率无明显增加。qRT-PCR检测5龄起蚕按照上述剂量添食尿素120 h后,后部丝腺中fib H的表达量比对照组增加了1.5倍。上述结果再次证实了家蚕5龄幼虫添食尿素后可以增加产丝量,并且表明尿素可以促进蚕体后部丝腺中fib H基因的表达。 展开更多
关键词 家蚕 营养添食 尿素 产丝量 丝素重链基因 实时荧光定量PCR
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柳蚕丝素重链基因(Fib-H)cDNA 5′端片段的克隆与表达分析 被引量：1
5
作者 曹甲 刘朝良 +3 位作者 朱保建 魏国清 王在贵 钱岑 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期66-70,共5页
柳蚕(Actias selene Hübner)是鳞翅目大蚕蛾科的一种珍稀野生绢丝昆虫。利用RT-PCR方法克隆了柳蚕丝素重链基因(Fib-H)cDNA 5′端的一个片段,该片段序列长819 bp,编码273个氨基酸,含有4个保守多聚丙氨酸结构域。序列比对分析表明,... 柳蚕(Actias selene Hübner)是鳞翅目大蚕蛾科的一种珍稀野生绢丝昆虫。利用RT-PCR方法克隆了柳蚕丝素重链基因(Fib-H)cDNA 5′端的一个片段,该片段序列长819 bp,编码273个氨基酸,含有4个保守多聚丙氨酸结构域。序列比对分析表明,该片段序列与樟蚕(Saturnia japonica)、天蚕(Antheraea yamamai)、柞蚕(Antheraea pernyi)、印度柞蚕(Antheraea mylit-ta)和家蚕(Bombyxmori)的Fib-H基因cDNA 5′端同源序列的相似性分别为72.5%、65.8%、65.1%、65.1%、47.1%。半定量PCR分析显示柳蚕Fib-H基因cDNA 5′端片段序列在5龄幼虫第1-12天的表达量呈现逐渐上升的趋势。 展开更多
关键词 柳蚕 丝素重链基因 序列 表达
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