免疫性血小板减少症治疗进展 被引量：7

1

作者 吴冰 韦艳 张茜 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期1212-1215,共4页

免疫性血小板减少症(Immune thrombocytopenia,ITP)是由于血小板自身抗体和T细胞功能障碍所致,血小板及其前体巨核细胞均受到攻击导致血小板破坏和生成不足。激素、利妥昔单抗、脾切除术及TPO受体激动剂不能逆转其疾病进程,且因感染、... 免疫性血小板减少症(Immune thrombocytopenia,ITP)是由于血小板自身抗体和T细胞功能障碍所致,血小板及其前体巨核细胞均受到攻击导致血小板破坏和生成不足。激素、利妥昔单抗、脾切除术及TPO受体激动剂不能逆转其疾病进程,且因感染、血栓形成等副作用限制了临床应用。新型治疗药物包括:CD154抗体、抑制性FCγ受体、Syk抑制剂等可以靶向疾病进程的关键步骤,有望限制全身副作用并降低ITP的发病率和患者死亡率。本文就ITP当前治疗策略、新型治疗药物及进一步研究方向进行综述。 展开更多

关键词 免疫性血小板减少症 T细胞 巨核细胞 CD154抗体 fcγriib SYK

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激活鼠FcγRⅡb对天然免疫因子产生的影响

2

作者 赵睿杰 孙杨杨 +5 位作者 李梦娟 张晓晓 张梦停 张宜娜 陈静 夏平安 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期10-19,共10页

目的:了解FcγRIIb对小鼠巨噬细胞天然免疫及抗病毒免疫作用的影响。方法:构建鼠源FcγRIIb原核表达质粒pET28a-FcγRIIb,将其转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中进行诱导表达,采用镍柱亲和层析法对重组蛋白进行纯化。以纯化后的重组蛋白... 目的:了解FcγRIIb对小鼠巨噬细胞天然免疫及抗病毒免疫作用的影响。方法:构建鼠源FcγRIIb原核表达质粒pET28a-FcγRIIb,将其转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中进行诱导表达,采用镍柱亲和层析法对重组蛋白进行纯化。以纯化后的重组蛋白作为抗原,免疫兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA法检测血清效价,利用Western blotting技术鉴定抗体特异性,高免血清经饱和硫酸铵溶液粗纯和ProteinG Sapharose精纯获得兔抗鼠FcγRIIb多克隆抗体。以该抗体激活小鼠腹腔巨噬细胞表面的FcγRIIb,利用荧光定量PCR技术检测MHV感染上述细胞后相关细胞因子的mRNA转录水平。结果:单独激活FcγRIIb 12~48 h时巨噬细胞中TLR3、IRF3、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、TNF-α和IL-1β的mRNA转录水平上调,免疫抑制因子TGF-β的mRNA转录水平下调。此外,在MHV感染小鼠腹腔巨噬细胞12~48 h时,与未激活组相比,FcγRIIb激活后可上调细胞中TLR3、IRF3、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、TNF-α和IL-1β的mRNA转录水平,下调TGF-β的mRNA转录水平,且其病毒拷贝数及病毒滴度低于未激活组。结论:研究证明FcγRIIb的活化能促进小鼠腹腔巨噬细胞天然免疫因子产生,同时具有一定抗病毒作用,为进一步探究FcγRIIb在MHV感染过程中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 fcγRⅡb 多克隆抗体 小鼠肝炎病毒 细胞因子 天然免疫

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抑制性IgG受体(FcγRIIB)的免疫调节作用及意义 被引量：5

3

作者 姚忻 闻玉梅 《生命科学》 CSCD 北大核心 2009年第1期49-52,共4页

FcγRIIB作为低亲和力IgG受体介导对多种免疫细胞功能的负反馈调节。它的两种主要分子异构体IIB1、IIB2分布于不同的细胞表面并发挥不同的抑制效应。FcγRIIB可以通过依赖和不依赖于其胞浆区ITIM结构域的方式抑制细胞的激活效应。FcγR... FcγRIIB作为低亲和力IgG受体介导对多种免疫细胞功能的负反馈调节。它的两种主要分子异构体IIB1、IIB2分布于不同的细胞表面并发挥不同的抑制效应。FcγRIIB可以通过依赖和不依赖于其胞浆区ITIM结构域的方式抑制细胞的激活效应。FcγRIIB在与BCR交联后,抑制BCR与脂筏形成稳定结构,并阻止B细胞的免疫突触形成。FcγRIIB的表达失衡将导致自身免疫病、肿瘤和感染性疾病的发生发展。进一步研究阐明影响FcγRIIB受体表达或其信号传导机制的因素,将有助于人们找到治疗和控制这些疾病的新方法。 展开更多

关键词 抑制性IgG受体 fcγriib 免疫调节

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免疫性不孕症患者血清抗体及可溶性FcγRIIB功能检测及相关机制的初步研究 被引量：4

4

作者 佳莉娟 曹秀琴 王琦 《河南科技大学学报（医学版）》 2017年第1期18-21,共4页

目的通过检测免疫性不孕症患者及正常人群血清免疫性抗体及可溶性FcγRIIB功能,探讨分析FcγRIIB在免疫性不孕症中的相关作用机制。方法选取免疫性不孕症患者30例为观察组,同期体检健康女性30例为对照组。ELISA法检测所有受试者血清中... 目的通过检测免疫性不孕症患者及正常人群血清免疫性抗体及可溶性FcγRIIB功能,探讨分析FcγRIIB在免疫性不孕症中的相关作用机制。方法选取免疫性不孕症患者30例为观察组,同期体检健康女性30例为对照组。ELISA法检测所有受试者血清中可溶型FcγRIIB含量、与免疫复合物结合力以及抗精子抗体(As Ab)、抗心磷脂抗体(Ac Ab)、抗子宫内膜抗体(Em Ab)等免疫性抗体。结果观察组血清中可溶性FcγRIIB浓度低于对照组(t=-9.528,P<0.0001),差异有统计学意义。相同DNA孵育浓度下,观察组血清可溶性FcγRIIB与IC结合力高于对照组。观察组As Ab、Ac Ab等抗体阳性率高于对照组(P<0.05),差异有统计学意义。结论FcγRIIB表达水平下降可能与免疫性不孕的发生发展有一定关系。 展开更多

关键词 不孕症 免疫性因素 fcγriib 发病机制

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猪IgGⅡB类Fc受体剪接异构体胞外区及结构域的原核表达与抗体制备 被引量：3

5

作者 刘肖萍 张志远 +6 位作者 刘玉松 赵琳 范旭 徐红运 张凤华 夏平安 崔保安 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期307-312,共6页

根据GenBank中猪IgGⅡB类Fc受体剪切异构体基因序列(FJ608551),利用Prim er 5.0软件设计合成3对特异性引物,从质粒pTG19-T-swFcγRIIB1中用PCR方法扩增编码胞外区、EC1及EC2结构域蛋白分子基因片段,PCR产物经KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切后将其... 根据GenBank中猪IgGⅡB类Fc受体剪切异构体基因序列(FJ608551),利用Prim er 5.0软件设计合成3对特异性引物,从质粒pTG19-T-swFcγRIIB1中用PCR方法扩增编码胞外区、EC1及EC2结构域蛋白分子基因片段,PCR产物经KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切后将其插入到原核表达载体pET-32 a中,构建了3种猪FcγRIIB剪接异构体原核表达载体pET-EY,pET-AY,pET-BY,转化大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下成功表达了相对分子质量约为36,29,27 kD融合蛋白表达,纯化后的融合蛋白分别免疫小鼠制备鼠源血清.ELISA结果显示抗体效价为1∶5 120,1∶5 120,1∶10 240.免疫印迹结果显示制备的多克隆抗体可以与融合蛋白特异性结合. 展开更多

关键词 猪 fcγriib 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体

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抑制性受体FcγRIIB的研究进展 被引量：3

6

作者 秦三利 杨志伟 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期256-259,共4页

FcγRIIB作为一种抑制性受体,可介导对多种免疫细胞的负反馈调节反应,其可通过依赖或不依赖胞浆区免疫受体酪氨酸抑制基序ITIM的方式起到抑制细胞激活的作用。FcγRIIB在多种细胞上的异常表达可引发各种疾病,如自身免疫疾病、感染性疾... FcγRIIB作为一种抑制性受体,可介导对多种免疫细胞的负反馈调节反应,其可通过依赖或不依赖胞浆区免疫受体酪氨酸抑制基序ITIM的方式起到抑制细胞激活的作用。FcγRIIB在多种细胞上的异常表达可引发各种疾病,如自身免疫疾病、感染性疾病和肿瘤等。阐明FcγRIIB的生物学功能及与疾病间的联系,将有助于人们在治疗这些疾病方面找到新的靶点,进而提供一种有效的治疗方法。 展开更多

关键词 fcγriib 生物学功能 疾病

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敲除IgG受体FcγRIIB加重小鼠全身及脂肪组织炎性反应 被引量：3

7

作者 张唯 舒婷 +2 位作者 宋小敏 李博伦 王婧 《基础医学与临床》 CSCD 2018年第7期938-943,共6页

目的探讨敲除IgG受体基因(FcγRIIB)在高脂饮食(HFD)诱导下,对小鼠全身及脂肪组织炎性反应以及脂肪组织脂代谢的影响。方法选取FcγRIIB+/+雄鼠和IgG受体FcγRIIB敲除(FcγRIIB-/-)雄鼠各10只,均给予HFD诱导,17周末处死小鼠,称取小鼠体... 目的探讨敲除IgG受体基因(FcγRIIB)在高脂饮食(HFD)诱导下,对小鼠全身及脂肪组织炎性反应以及脂肪组织脂代谢的影响。方法选取FcγRIIB+/+雄鼠和IgG受体FcγRIIB敲除(FcγRIIB-/-)雄鼠各10只,均给予HFD诱导,17周末处死小鼠,称取小鼠体质量,采集血和脂肪组织。用ELISA、流式细胞计量术和实时定量PCR检测炎性反应及脂代谢相关指标。结果 FcγRIIB-/-小鼠与FcγRIIB+/+小鼠相比,血清中炎性因子IL-6、TNF-α和IFN-γ水平明显升高(P<0.05);脂肪组织巨噬细胞浸润显著增加(P<0.05);M1型极化基因MCP-1、TNF-α增加(P<0.05);M2型极化基因ARG和IL-10没有明显差异;体质量、脂肪细胞大小、脂代谢相关基因PPARG、CEBPα、FASn、HSL、ATGL、UCP-1和GLUT4的表达没有差异。结论 HFD诱导下,敲除IgG受体FcγRIIB加重小鼠全身及脂肪组织的炎性反应,但不影响脂肪组织的脂代谢以及体质量。 展开更多

关键词 IGG fcγriib 炎性反应 脂肪组织 脂代谢

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人可溶型FcγRIIb的制备及其功能初步研究 被引量：3

8

作者 张雷 曹秀琴 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期952-955,共4页

目的:检测正常人和SLE患者血清中可溶型FcγRIIb(husFcγRIIb)含量,诱导表达并纯化人可溶性FcγRIIb,检测其与血清中免疫复合物结合力及对B细胞抗体分泌功能的影响。方法:ELISA法检测人血清中可溶型FcγRIIb含量,IPTG诱导含有pET-sFcγR... 目的:检测正常人和SLE患者血清中可溶型FcγRIIb(husFcγRIIb)含量,诱导表达并纯化人可溶性FcγRIIb,检测其与血清中免疫复合物结合力及对B细胞抗体分泌功能的影响。方法:ELISA法检测人血清中可溶型FcγRIIb含量,IPTG诱导含有pET-sFcγRIIb的大肠杆菌BL21,镍琼脂糖磁珠纯化目的蛋白,可溶型FcγRIIb包被ELISA板,ELISA方法检测其与血清中免疫复合物结合能力,免疫磁珠法分选B细胞,分组刺激培养,ELISA检测培养物上清中IgM含量。结果:SLE患者血清中可溶型FcγRIIb浓度低于正常人(P<0.05);诱导表达并纯化获得相对分子质量(Mr)为41 500的重组蛋白;重组可溶型FcγRIIb可以与血清中免疫复合物结合,二者孵育后吸光度(A)值随血清中免疫复合物浓度逐渐增高,至受体结合度饱和时达最大;不同刺激条件下B细胞培养10 d,各实验组抗体浓度均高于细胞对照组(P<0.01),SPA组、SPA+husFcγRIIb组抗体浓度无显著差异(P﹥0.05),SPA+IgG型抗人IgM组抗体滴度明显高于SPA组(P<0.01),SPA+husFcγRIIb+IgG型抗人IgM组抗体滴度明显低于SPA+IgG型抗人IgM组(P<0.01)、SPA组(P<0.01)和SPA+husFcγRIIb组(P<0.01)。结论:SLE患者血清中可溶性FcγRIIb含量低于正常人,重组人可溶性FcγRIIb可以与血清中免疫复合物结合,抑制免疫复合物对B淋巴细胞的激活,减少IgM型抗体的分泌。 展开更多

关键词 fcγriib 可溶性 结合力 抗体分泌

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FcγRIIB下调在肾虚型类风湿关节炎B细胞活化中的作用 被引量：2

9

作者 刘茜 彭珊琴 +5 位作者 赵连宇 师晓毅 李美林 徐燕萍 陈炜坚 陈光星 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1697-1702,共6页

目的:通过对肾虚型类风湿关节炎患者B细胞活化情况与FcγRIIB表达分析,揭示FcγRIIB在肾虚型类风湿关节炎B细胞活化中的作用机制。方法:纳入RA患者共57例,记录一般情况、临床资料(疾病活动情况,自身抗体水平),收集外周血单核细胞(PBMC),... 目的:通过对肾虚型类风湿关节炎患者B细胞活化情况与FcγRIIB表达分析,揭示FcγRIIB在肾虚型类风湿关节炎B细胞活化中的作用机制。方法:纳入RA患者共57例,记录一般情况、临床资料(疾病活动情况,自身抗体水平),收集外周血单核细胞(PBMC),Ig M刺激培养48 h后流式细胞法检测CD86与FcγRIIB表达情况。结果:肾虚型RA患者幼稚B细胞的CD86表达率明显较非肾虚型患者高,同时FcγRIIB的MFI较非肾虚型患者低;肾虚型RA患者记忆B细胞的FcγRIIB表达率明显较幼稚B细胞低,且肾虚型RA患者ACPA水平越高其记忆B细胞的FcγRIIB表达率越低。结论:肾虚型RA患者存在FcγRIIB水平的下调,其能够促进B细胞过度活化和自身抗体水平升高。 展开更多

关键词 肾虚 类风湿关节炎 fcγriib CD86

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FcγRIIb基因真核表达质粒的构建与表达

10

作者 秦三利 黄菱 杨志伟 《宁夏医科大学学报》 2011年第3期219-223,F0002,共6页

目的构建FcγRIIb基因的真核表达重组质粒pEGFP-FcγRIIb,并观察其在真核细胞中的表达。方法以U937细胞的RNA为模板,通过RT-PCR扩增FcγRIIb基因,并将其定向插入绿色荧光蛋白质粒pEGFP-C1中,构建真核表达重组质粒pEGFP-FcγRIIb。经PCR... 目的构建FcγRIIb基因的真核表达重组质粒pEGFP-FcγRIIb,并观察其在真核细胞中的表达。方法以U937细胞的RNA为模板,通过RT-PCR扩增FcγRIIb基因,并将其定向插入绿色荧光蛋白质粒pEGFP-C1中,构建真核表达重组质粒pEGFP-FcγRIIb。经PCR、限制性核酸内切酶HindⅢ和Sma I的酶切鉴定及DNA序列分析后,用脂质体法将pEGFP-FcγRIIb转染NIH3T3细胞,用荧光显微镜观察pEGFP-FcγRIIb的表达。结果扩增出了963bp的FcγRIIb基因,成功构建了真核表达重组质粒pEGFP-FcγRIIb。在细胞膜与细胞内观察到较强的绿色荧光,表明pEGFP-FcγRIIb成功转入NIH3T3细胞,并在NIH3T3细胞中得到了表达。结论构建的真核重组表达质粒pEGFP-FcγRIIb能够表达FcγRIIb蛋白,为进一步研究FcγRIIb的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 fcγriib pEGFP-fcγriib 蛋白表达

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真核重组质粒pEGFP-Fcγ RIIb在NIH3T3细胞及BALB/c小鼠体内的表达

11

作者 秦三利 杨志伟 《宁夏医科大学学报》 2012年第1期4-6,F0002,共4页

目的观察真核重组质粒pEGFP-FcγRIIb在真核细胞NIH3T3及BALB/c小鼠体内的表达,为后续的体内研究奠定基础。方法采用脂质体法将重组质粒pEGFP-FcγRIIb转染到NIH3T3中,G418筛选3周后,采用Western blot方法鉴定稳定表达的产物。进一步将... 目的观察真核重组质粒pEGFP-FcγRIIb在真核细胞NIH3T3及BALB/c小鼠体内的表达,为后续的体内研究奠定基础。方法采用脂质体法将重组质粒pEGFP-FcγRIIb转染到NIH3T3中,G418筛选3周后,采用Western blot方法鉴定稳定表达的产物。进一步将重组质粒注射入BALB/c小鼠肌肉中,用Western blot及免疫组织化学法检测人FcγRIIB的表达情况。结果转染重组质粒pEGFP-FcγRIIb的NIH3T3细胞及注射重组质粒的小鼠肌肉中表达了人的FcγRIIB蛋白,分子量约为37kDa。结论成功获得了真核重组质粒pEGFP-FcγRIIb在NIH3T3及BALB/c小鼠体内的表达,为进一步研究FcγRIIB的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 fcγriib pEGFP-fcγriib BALB/C小鼠

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FcγRIIb抑制B细胞内TLR4介导的CD40和CD80表达 被引量：2

12

作者 钱莉 王少卿 +4 位作者 刘阳 陈文艳 龚卫娟 田芳 李国才 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2016年第3期15-19,共5页

利用磁珠法分选野生型和FcγRIIb缺陷小鼠脾脏CD19+B细胞,体外用LPS和/或FcγRIIb配体(IC)刺激24h后,流式细胞术(FCM)检测细胞表面共刺激分子的表达。用蛋白质印迹法检测IC刺激后B细胞内相关蛋白激酶的磷酸化情况。用Lyn抑制剂作用后,FC... 利用磁珠法分选野生型和FcγRIIb缺陷小鼠脾脏CD19+B细胞,体外用LPS和/或FcγRIIb配体(IC)刺激24h后,流式细胞术(FCM)检测细胞表面共刺激分子的表达。用蛋白质印迹法检测IC刺激后B细胞内相关蛋白激酶的磷酸化情况。用Lyn抑制剂作用后,FCM检测LPS活化B细胞表面共刺激分子表达探讨B细胞内FcγRIIb对TLR4激动剂(LPS)诱导共刺激分子表达的影响。结果表明:IC抑制LPS活化B细胞表面CD40和CD80的表达,而在FcγRIIb缺陷小鼠B细胞内这一抑制作用消失。IC诱导B细胞内蛋白激酶Lyn的磷酸化,但不能诱导FcγRIIb缺陷小鼠B细胞内Lyn磷酸化。使用Lyn抑制剂后LPS活化B细胞表面CD40的表达上调。说明B细胞内FcγRIIb通过活化Lyn抑制TLR4激动剂诱导的CD40表达。 展开更多

关键词 fcγriib TLR4 B细胞

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抑制性受体FcγRIIB在肝细胞癌中的表达

13

作者 秦娣 杨雪 秦学林 《昆明理工大学学报（自然科学版）》 北大核心 2022年第5期153-159,171,共8页

研究了抑制性受体FcγRIIB在肝细胞癌(HCC)中的表达,为探讨肝脏炎癌转化的调控机制提供理论基础.利用肿瘤基因组图谱(TCGA)、基因表达综合数据库(GEO)和肿瘤数据库(Oncomine)分析肝癌中FcγRIIBmRNA的表达,采用实时定量PCR(qRT-PCR)验... 研究了抑制性受体FcγRIIB在肝细胞癌(HCC)中的表达,为探讨肝脏炎癌转化的调控机制提供理论基础.利用肿瘤基因组图谱(TCGA)、基因表达综合数据库(GEO)和肿瘤数据库(Oncomine)分析肝癌中FcγRIIBmRNA的表达,采用实时定量PCR(qRT-PCR)验证FcγRIIB在临床HCC患者肿瘤样本中的表达,通过单次注射N-亚硝基二乙胺(DEN)诱导小鼠HCC并检测FcγRIIB的表达.生物信息学分析显示FcγRIIB在HCC中低表达;qRT-PCR结果显示,临床HCC患者肿瘤样本和DEN诱导小鼠肝癌模型中FcγRIIB的表达均降低.生物信息学、临床样本和小鼠模型三方面得出一致结论,即FcγRIIB在HCC中低表达,提示FcγRIIB可能成为肝癌诊断或预后新的生物标志物,并在肝脏炎癌转化中发挥重要作用. 展开更多

关键词 肝细胞癌 fcγriib 炎症 肿瘤基因组图谱 基因表达综合数据库 肿瘤数据库

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B细胞抑制性受体FcγRIIB与CD45分子相互关系的研究

14

作者 赵荣青 《中国卫生检验杂志》 CAS 2022年第16期1954-1957,共4页

目的 研究B细胞抑制性受体FcγRIIB与CD45分子之间的相互关系。方法 设计FcγRIIB-shRNA连接到反转录病毒载体上,通过反转录病毒将其导入A20细胞检测FcγRIIB-shRNA的敲低效率。然后将FcγRIIB-shRNA通过反转录病毒导入CD45.1小鼠脾脏B... 目的 研究B细胞抑制性受体FcγRIIB与CD45分子之间的相互关系。方法 设计FcγRIIB-shRNA连接到反转录病毒载体上,通过反转录病毒将其导入A20细胞检测FcγRIIB-shRNA的敲低效率。然后将FcγRIIB-shRNA通过反转录病毒导入CD45.1小鼠脾脏B细胞,利用流式细胞术检测B细胞表面CD45.1分子的表达。通过流式细胞术检测FcγRIIB敲除小鼠的脾脏B细胞表面CD45.2分子的表达,研究B细胞表面抑制性受体FcγRIIB与CD45分子之间的关系。结果 与对照组相比,通过shRNA敲低FcγRIIB的表达会导致小鼠B细胞表面CD45.1分子的表达水平显著降低,并且FcγRIIB敲除小鼠B细胞表面CD45.2分子的表达也显著低于野生小鼠。结论 B细胞的抑制性Fc受体FcγRIIB影响其表面CD45分子的表达,表明FcγRIIB与CD45分子之间存在免疫调节网络,对于深入研究自身免疫性疾病的发生发展有着重要的意义。 展开更多

关键词 fcγ受体IIB 白细胞分化抗原45 B细胞 短发卡RNA 自身免疫

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大鼠Fcγ RⅡb基因慢病毒的制备及其在BMDC细胞中的表达检测

15

作者 张武 丁洋 +1 位作者 李立强 李明皓 《宁夏医科大学学报》 2019年第2期138-142,151,共6页

目的构建大鼠FcγRⅡb慢病毒诱导表达载体,表达病毒与调节病毒共同感染大鼠骨髓来源树突状细胞(BMDCs)并检测FcγRⅡb的表达。方法提取大鼠肝脏mRNA,并以其为模板通过逆转录及PCR获得FcγRⅡb基因片段,利用酶切重连技术构建慢病毒表达载... 目的构建大鼠FcγRⅡb慢病毒诱导表达载体,表达病毒与调节病毒共同感染大鼠骨髓来源树突状细胞(BMDCs)并检测FcγRⅡb的表达。方法提取大鼠肝脏mRNA,并以其为模板通过逆转录及PCR获得FcγRⅡb基因片段,利用酶切重连技术构建慢病毒表达载体TRE与FcγRⅡb重组慢病毒载体。使用HEK293T细胞分别包装TRE-FcγRⅡb表达病毒与TET-on调节病毒,并检测其病毒滴度;离体诱导培养大鼠骨髓来源未成熟树突状细胞并鉴定。采用OX-62免疫磁珠分选大鼠骨髓来源未成熟树突状细胞(i DC),用表达病毒和可诱导病毒共感染i DC。经一定梯度的强力霉素(DOX)诱导,分别用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印记法(WB)检测BMDC中FcγRⅡb mRNA水平及FcγRⅡb蛋白表达水平;免疫荧光检测树突状细胞中FcγRⅡb的表达;电镜对分离培养的BMDC进行形态学观察和鉴定。结果成功构建TRE-FcγRⅡb重组慢病毒载体,经酶切、PCR电泳条带鉴定成功,基因序列测定结果与GenBank比对同源性100%。体外诱导培养BMDC,5d左右观察到明显的树突样凸起。成功用慢病毒感染BMDC后,FcγRⅡb mRNA和FcγRⅡb蛋白水平均较未感染BMDC有明显的增高。结论成功制备了含大鼠FcγRⅡb基因慢病毒,用其感染未成熟树突状细胞并经DOX诱导可实现FcγRⅡb的高表达。 展开更多

关键词 fcγriib 慢病毒表达载体和可诱导载体 诱导表达

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FcγRIIb基因修饰树突状细胞对大鼠原位肝移植排斥反应的影响

16

作者 李立强 张武 +3 位作者 李志文 闫文涛 焦龙杏 李明皓 《中华普通外科杂志》 CSCD 北大核心 2021年第2期132-136,共5页

目的研究FcγRIIb基因修饰树突状细胞对大鼠原位肝移植术后肝功能及病理排斥反应的影响。方法利用基因克隆技术构建含Lewis大鼠FcγRIIb基因的重组慢病毒表达载体TRE-FcγRIIb。分别包装TRE-FcγRIIb表达病毒与TET-on可诱导病毒,用其共... 目的研究FcγRIIb基因修饰树突状细胞对大鼠原位肝移植术后肝功能及病理排斥反应的影响。方法利用基因克隆技术构建含Lewis大鼠FcγRIIb基因的重组慢病毒表达载体TRE-FcγRIIb。分别包装TRE-FcγRIIb表达病毒与TET-on可诱导病毒,用其共感染DA大鼠骨髓来源未成熟树突状细胞并检测FcγRIIb的表达。将供体DA大鼠与受体Lewis大鼠按照体重进行配对后随机分为三组,三组均行DA-Lewis的大鼠原位肝移植术。对照组(A组)不给予任何预处理。环孢素A组(B组)术后第2天开始给予环孢素A处理。FcγRIIb基因修饰未成熟树突状细胞组(C组)术前1d供体大鼠静脉注射FcγRIIb修饰的DA大鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞(1×10^(6)细胞)。术后第7天分别取血和肝脏检测肝功能和肝脏病理变化。结果C组术后第7天肝功能异常明显低于对照组(P<0.05);C组术后第7天肝脏病理排斥反应明显低于对照组(P<0.05)。对照组中的大鼠平均存活天数为12.8d;B组的大鼠平均存活天数为65.3d;C组的大鼠平均存活天数为58.5d。结论FcγRIIb基因修饰未成熟树突状细胞可以降低大鼠原位肝移植术后肝功能异常,减轻术后大鼠肝脏急性排斥反应。 展开更多

关键词 肝移植 移植物排斥 fcγriib 未成熟树突状细胞

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大鼠sFcγRIIb基因原核表达及活性鉴定

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作者 张艳芬 刘利鹏 +4 位作者 陈瑶 崔哲 毕克维 王南南 刘中成 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期165-171,共7页

旨在克隆大鼠FcγRIIb基因,构建s FcγRIIb原核表达体系,制备重组大鼠s FcγRIIb蛋白。采用RT-PCR技术从RBL-2H3细胞中克隆FcγRIIb胞外区基因,构建重组表达质粒转化大肠杆菌诱导表达,镍柱亲和层析纯化重组蛋白,复性后利用Western blott... 旨在克隆大鼠FcγRIIb基因,构建s FcγRIIb原核表达体系,制备重组大鼠s FcγRIIb蛋白。采用RT-PCR技术从RBL-2H3细胞中克隆FcγRIIb胞外区基因,构建重组表达质粒转化大肠杆菌诱导表达,镍柱亲和层析纯化重组蛋白,复性后利用Western blotting、ELISA进行鉴定。结果显示,成功克隆大鼠s FcγRIIb基因,构建原核表达载体s FcγRIIb-p ET17b,转化大肠杆菌BL21(DE3)。通过对表达体系进行优化,确定IPTG浓度为1.0 mmol/L,诱导时间为4 h时蛋白表达效率最高,重组蛋白主要以包涵体形式存在。包涵体经8 mol/L尿素溶解,利用Ni-NTA柱亲和层析获得了较高纯度的重组蛋白。采用梯度透析复性法对s FcγRIIb进行复性后,经Western blotting、ELISA与竞争性ELISA鉴定,重组蛋白s FcγRIIb可被特异性抗体所识别且与Ig G具有结合能力。成功建立了大鼠FcγRIIb基因原核表达体系,制备了具有生物学功能的重组蛋白。 展开更多

关键词 抑制性受体 fcγriib基因 原核表达 重组蛋白

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抑制性受体对淋巴细胞活化的调节作用 被引量：2

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作者 舒小莉 曹雪涛 《国际免疫学杂志》 CAS 2006年第4期205-209,共5页

淋巴细胞在接受正向活化信号的同时也接受各种抑制性信号的调节,以维持机体正常的稳态,避免免疫应答过度对机体的病理损坏。调节淋巴细胞活化的抑制性受体主要包括3类:识别MHC分子的抑制性受体、抑制性Fc受体及与B7家族成员结合的抑制... 淋巴细胞在接受正向活化信号的同时也接受各种抑制性信号的调节,以维持机体正常的稳态,避免免疫应答过度对机体的病理损坏。调节淋巴细胞活化的抑制性受体主要包括3类:识别MHC分子的抑制性受体、抑制性Fc受体及与B7家族成员结合的抑制性受体,系统地了解其种类、配体、作用机制、与疾病的关系等将为人们进一步深入了解免疫应答的调控机制提供参考。 展开更多

关键词 杀伤细胞Ig样受体(KIR) fcγ/RⅡB CTLA-4 PD-1 BTLA

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