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A族链球菌表面新发现蛋白Fba真核表达质粒的构建及其诱导的免疫应答 被引量：6
1
作者 李彩虹 马翠卿 +1 位作者 王锦 魏林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期835-838,共4页
目的:构建新发现的A族链球菌(GAS)表面蛋白Fba的真核表达质粒,并将其以及Fba蛋白、M蛋白分别免疫小鼠,对它们诱导的体液免疫及细胞免疫应答进行评价分析。探讨Fba蛋白作为GAS候选疫苗的可能性。方法:以SSI-9菌株(GASM1血清型标准株)作... 目的:构建新发现的A族链球菌(GAS)表面蛋白Fba的真核表达质粒,并将其以及Fba蛋白、M蛋白分别免疫小鼠,对它们诱导的体液免疫及细胞免疫应答进行评价分析。探讨Fba蛋白作为GAS候选疫苗的可能性。方法:以SSI-9菌株(GASM1血清型标准株)作为模板,采用PCR方法扩增Fba基因,测序正确后克隆至真核表达质粒pcDNA3.1,构建真核表达质粒pcDNA3.1/fba;将雌性CD1小鼠随机分成6组,分别为Fba蛋白免疫组、M蛋白免疫组、pcDNA3.1/fba+Fba蛋白免疫组、pcDNA3.1/fba免疫组、pcDNA3.1空质粒对照及PBS对照组。ELISA检测各免疫组血清IgG的动态变化水平;脾细胞增殖试验检细胞增殖水平,并用流式细胞术检测小鼠体内CD4+、CD8+淋巴细胞的变化。试验结果经SPSS10.0统计处理。结果:成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1/fba;质粒或蛋白免疫后小鼠IgG产生水平以Fba蛋白免疫组增高最为明显,其次为Fba质粒蛋白混合免疫组及Fba质粒组。特异性抗原诱导后体外脾细胞增殖试验显示:pcDNA3.1/fba免疫组增殖水平明显高于其它组,流式细胞检测结果与此一致,并显示以CD4+T细胞水平升高为主,CD8+T细胞水平在各组别之间也有一定的差异。结论:(1)Fba蛋白与M蛋白一样均能有效地诱导机体产生抗体,提示Fba蛋白很有希望成为GAS的候选疫苗。(2)成功构建了Fba蛋白的真核表达质粒pcDNA3.1/fba,且该重组质粒能有效地诱导抗链球菌所需的抗体,并能增强CD4+T细胞、CD8+T细胞的增殖功能。 展开更多
关键词 A族链球菌(GAS) fba蛋白 真核表达质粒 免疫
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A族链球菌表面蛋白Fba单克隆抗体的制备及其对应表位的初步鉴定 被引量：3
2
作者 马翠卿 顾海燕 +3 位作者 郭奕阳 胡光磊 魏澎 魏林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1046-1048,1053,共4页
目的:制备抗A组溶血性链球菌(GAS)表面蛋白Fba(fibronectin-binding proteins a)的单克隆抗体(mAb),并对单抗的生物学功能及其相应表位进行了初步鉴定。方法:以重组Fba蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术及间接ELISA筛选出针对... 目的:制备抗A组溶血性链球菌(GAS)表面蛋白Fba(fibronectin-binding proteins a)的单克隆抗体(mAb),并对单抗的生物学功能及其相应表位进行了初步鉴定。方法:以重组Fba蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术及间接ELISA筛选出针对Fba的杂交瘤细胞株,以Western blot鉴定mAb的特异性,并将获得的mAb与Fba+GAS和Fba-GAS分别行全菌ELISA、与Fba的分段表达蛋白行Western blot,初步鉴定mAb针对的表位所在区域。结果:获得了稳定分泌抗Fba-mAb的杂交瘤细胞株,其中一株mAb能特异结合天然Fba+链球菌,且该单抗针对的表位包含了Fba蛋白的第104～108位氨基酸,该位点也是链球菌Fba蛋白结合补体调节蛋白FH的位点。结论:成功地制备了抗GAS表面Fba蛋白的mAb,其中一株mAb对应的表位为位于菌体表面的天然表位,并检测出了该mAb对应的表位所在区段,这为深入研究GAS的致病机制提供了有力工具。 展开更多
关键词 A族链球菌 fba蛋白 单克隆抗体 表位
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A族链球菌表面蛋白FbaA单克隆抗体FbaAmAb2的免疫功能研究 被引量：2
3
作者 范秀华 刘海楠 +6 位作者 郑艳 张玲 姚智燕 李文建 邢艳超 宋小天 马翠卿 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期399-402,共4页
目的通过侵袭抑制及攻毒试验检测A族链球菌表面蛋白FbaA的单克隆抗体FbaAmAb2的免疫功能，为进一步探索A族链球菌的致病机制和感染后的治疗策略奠定基础。方法通过亚克隆、全菌ELISA方法筛选稳定分泌高效价FbaAmAb2的杂交瘤细胞，并将... 目的通过侵袭抑制及攻毒试验检测A族链球菌表面蛋白FbaA的单克隆抗体FbaAmAb2的免疫功能，为进一步探索A族链球菌的致病机制和感染后的治疗策略奠定基础。方法通过亚克隆、全菌ELISA方法筛选稳定分泌高效价FbaAmAb2的杂交瘤细胞，并将其接种于小鼠腹腔制备腹水。通过侵袭试验对FbaAmAb2能否阻止H因子与A族链球菌的结合进行研究。而后将获得的腹水倍比稀释为1：1、1：2、1：4、1：8、1：16行试管凝集试验，选定合适的稀释度被动免疫动物后用致死量A族链球菌（FbaA’）标准菌株（7．5×10’个）攻击，连续观察15d计算保护率。结果侵袭试验中FbaAmAb2能够竞争性抑制H因子与A族链球菌表面蛋白FbaA的结合，减少了H因子介导的A族链球菌侵入上皮细胞的数量。与全菌结合的ELISA效价为1：1600，试管凝集效价为1：8。在单抗被动免疫试验中，腹水原液、1：2稀释组的动物保护率高达66．67％，1：4稀释组保护率为50％，经SPSSl0．0统计软件分析各实验组与PBS组保护率差异有统计学意义（P〈0．05）。结论FbaAmAb2有望用于紧急预防及治疗A族链球菌感染，并为深入研究A族链球菌的致病机制、治疗策略及疫苗预防方面提供新的靶标。 展开更多
关键词 A族链球菌 fba蛋白 单克隆抗体 补体调节蛋白 H因子
原文传递
A族链球菌(GAS)Fba蛋白单克隆抗体对应表位核心氨基酸的确定 被引量：1
4
作者 郭奕阳 马翠卿 +4 位作者 魏澎 王秀荣 冯惠东 阎婉依 魏林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1059-1062,1066,共5页
目的：对A族链球菌Fba蛋白McAb2所对应的表位进行定位。方法：以初步定位的表位区段为线索合成三段重叠多肽,dot-ELISA检测McAb2与合成肽的亲合力,并以McAb2为靶分子,利用噬菌体随机七肽库进行亲和筛选,用竞争ELISA鉴定阳性克隆。结果：... 目的：对A族链球菌Fba蛋白McAb2所对应的表位进行定位。方法：以初步定位的表位区段为线索合成三段重叠多肽,dot-ELISA检测McAb2与合成肽的亲合力,并以McAb2为靶分子,利用噬菌体随机七肽库进行亲和筛选,用竞争ELISA鉴定阳性克隆。结果：dot-ELISA检测结果表明Fba100-112肽段与McAb2的结合能力最强。经过3轮亲和筛选后,随机挑选20个噬菌体克隆,竞争ELISA对其与McAb2的亲和力做检测,其中12个克隆显示较强的阳性结果。阳性克隆DNA测序,与Fba基因第100位氨基酸至110位氨基酸中ITPDL同源性较高。结论：通过dot-ELISA将A族链球菌Fba蛋白McAb2对应的表位定位于100~112位氨基酸,结果同噬菌体随机肽库筛选的核心氨基酸位置吻合。为进一步研制表位肽疫苗、研究Fba蛋白及其单克隆抗体的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 A族链球菌 fba蛋白 单克隆抗体 表位 噬菌体肽库
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