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题名云南省大理州片形吸虫的分子鉴定
被引量：4
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作者
唐梦婷
周岩
刘榆华
程娜
张剑平
许学年
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机构
中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所
大理州血吸虫病防治研究所
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出处
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2019年第5期525-529,共5页
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基金
国家寄生虫种质资源共享服务平台项目(No.TDRC-22)
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文摘
目的基于核糖体第一内转录间隔区(ITS1)、线粒体细胞色素c氧化酶亚基(COX1)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚基1(NAD1)序列初步鉴定云南省大理州地区片形吸虫的种类。方法于大理州下关农贸市场采集4头感染片形吸虫牛的肝脏,分离片形吸虫成虫,并孵育以获得其虫卵。分别提取片形吸虫成虫及虫卵的基因组DNA,PCR扩增核糖体ITS1,线粒体COX1和NAD1序列并测序,所得序列经BLAST在线工具进行比对,鉴定虫种;采用BioEdit软件进行多序列比对,分析片形吸虫亲代及子一代的遗传变异情况。结果共获得64条片形吸虫成虫,核糖体DNA的ITS1序列扩增产物长422 bp,出现5个变异位点。64条片形吸虫成虫中有5条(7.81%)与GenBank中肝片形吸虫的ITS1序列(登录号:AM709612)相似度为100%,其余59条(92.19%)均同时携带肝片形吸虫和巨片形吸虫的序列特征,为Fg/Fh杂合型片形吸虫;测序图谱中5个变异位点均出现双峰,个体间双峰比值存在明显差异,从Fg∶Fh≥10∶1到Fg∶Fh≤1∶10不等。线粒体DNA的NAD1和COX1序列扩增产物长度分别为535 bp和438 bp,变异位点分别为47个和41个。其中1条成虫(1.56%)与GenBank中肝片形吸虫的NAD1序列(登录号:GQ175363)、COX1序列(登录号:GQ398051)相似度为100%,另63条(98.44%)与巨片形吸虫的NAD1序列(登录号:AB207168)、COX1序列(登录号:AB207177)相似度为99.81~100%。虫卵线粒体COX1、NAD1序列与母本完全一致;ITS1序列分型与母体完全一致,但其杂合程度存在分化现象。结论云南省大理地区片形吸虫种群以"杂合型"片形吸虫为主,同时存在极少量纯种肝片形吸虫。
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关键词
片形吸虫
虫种鉴定
ITS1
NAD1
COX1
杂合
大理
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Keywords
fasciola flukes
fluke species identification
ITS1
NAD1
COX1
heterozygous
Dali
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分类号
R383.22
[医药卫生—医学寄生虫学]
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题名广西南宁地区片形吸虫的分子鉴定及遗传多态性分析
被引量：2
- 2
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作者
何婷
周岩
程娜
石云良
唐梦婷
许学年
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机构
中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所
广西壮族自治区疾病预防控制中心
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出处
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2021年第5期557-563,共7页
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基金
国家寄生虫资源库项目(No.2019-194-30)。
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文摘
目的基于核糖体内转录间隔区(ITS+,包括ITS1、5.8S和ITS2及其侧翼序列)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚基Ⅰ(NADⅠ)、线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ(COXⅠ)序列和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶基因(pepck)多重PCR初步鉴定广西南宁地区采集的片形吸虫的种类。方法于南宁市某屠宰场采集11头感染片形吸虫的牛肝脏,分离片形吸虫成虫,并孵育获得虫卵。提取片形吸虫成虫的基因组DNA,PCR扩增ITS+、NADⅠ和COXⅠ序列并测序,所得序列经BLAST在线工具进行比对,并结合pepck基因多重PCR鉴定虫种;提取部分片形吸虫的虫卵基因组DNA,PCR扩增ITS+序列并测序;采用BioEdit软件进行多序列比对,分析片形吸虫亲代及子一代的遗传变异情况。结果共获得151条片形吸虫成虫,ITS+序列扩增产物长964bp,仅NN20-2为Fh型,与GenBank中瑞士肝片形吸虫(登录号:MK321602)的同源性为100%;NN17-11、NN20-9和NN20-14携带巨片形吸虫和肝片形吸虫的双重序列特征,属于Fg/Fh杂合型,序列图谱上特定变异位点出现双峰,个体间双峰比值存在明显差异,NN17-11为Fg∶Fh=1∶1,NN20-9和NN20-14为Fg∶Fh=1∶5;其余147个样本是Fg型,可细分为19个亚型,其中NN4-1等100个虫体与GenBank中越南巨片形吸虫(登录号:MN970009)的同源性为100%,其余虫体中共出现14个变异位点,多为双峰。线粒体基因NADⅠ和COXⅠ序列扩增产物长度分别为535bp和438bp,分别有34、22个变异位点,细分为28、21种单倍型,所有虫体的NADⅠ和COXⅠ均属于巨片形吸虫类群。pepck PCR产物电泳显示NN17-11、NN20-2、NN20-9和NN20-14等4个虫体出现巨片形吸虫和肝片形吸虫的双重条带,其它样本只有巨片形吸虫的单条带。虫卵的ITS+序列结果显示,ITS-Fh型片形吸虫NN20-2成虫有1个虫卵(1/30)转变为Fg/Fh型;巨片形吸虫NN20-3成虫有5个虫卵(5/30)呈现Fg/Fh型,其余虫卵与母体基本一致。结论广西南宁地区片形吸虫种群以纯种�
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关键词
片形吸虫
虫种鉴定
ITS+
NADⅠ
COXⅠ
PEPCK
杂合
南宁
广西
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Keywords
fasciola flukes
identification of fluke species
ITS+
NADⅠ
COXⅠ
pepck
heterozygosis
Nanning,Guangxi
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分类号
R383.2
[医药卫生—医学寄生虫学]
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