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骆驼FGF21蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定
1
作者 杨宇轩 袁红 +8 位作者 焦云娟 王涛 高洁 李坤 李平花 孙普 卢曾军 白兴文 郜原 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1079-1086,共8页
本研究旨在为深入研究骆驼成纤维细胞生长因子21(FGF21)调节糖脂代谢的作用机制提供蛋白和抗体材料。在NCBI数据库中检索骆驼FGF21基因序列(XM_010996368.2),删除信号肽区段后合成携带His标签的FGF21全长基因,通过Eco RⅠ和XhoⅠ双酶切... 本研究旨在为深入研究骆驼成纤维细胞生长因子21(FGF21)调节糖脂代谢的作用机制提供蛋白和抗体材料。在NCBI数据库中检索骆驼FGF21基因序列(XM_010996368.2),删除信号肽区段后合成携带His标签的FGF21全长基因,通过Eco RⅠ和XhoⅠ双酶切位点嵌入p ET-28a(+)表达载体,获得重组表达质粒p ET-28a(+)-FGF21-His,转入大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行重组蛋白FGF21的表达,通过镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白,利用SDS-PAGE和Western-blot鉴定纯化的重组蛋白。将重组蛋白FGF21与弗氏佐剂混合乳化后免疫新西兰大白兔,制备家兔源多克隆抗血清,利用protein A亲和层析纯化柱纯化多克隆抗体,利用SDS-PAGE技术分析纯化多克隆抗体的纯度,利用Western-blot和间接ELSIA方法验证纯化多克隆抗体的反应性。结果表明,成功表达并纯化出骆驼重组蛋白FGF21,以其免疫家兔后制备并纯化出抗FGF21的特异性多克隆抗体。本研究为建立ELISA方法检测骆驼FGF21蛋白提供了材料,为阐明FGF21在骆驼糖脂代谢中的功能机制奠定了基础。 展开更多
关键词 fgf21 骆驼 原核表达 多克隆抗体
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番茄红素通过激活FGF21信号通路减轻神经炎症和氧化应激改善D-半乳糖诱导的小鼠学习记忆能力下降的研究 被引量：1
2
作者 李梦玲 沈钰淇 +4 位作者 李婷 石东星 路上云 王佳 邱服斌 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期588-595,共8页
目的 探究番茄红素是否可以改善D-半乳糖诱导的衰老模型小鼠学习记忆功能损伤及其具体分子机制。方法 45只雌性CD-1小鼠(2月龄)适应性喂养1w后,随机分为3组:对照组(control):腹腔注射生理盐水+标准饲料;D-半乳糖组(D-gal):腹腔注射150mg... 目的 探究番茄红素是否可以改善D-半乳糖诱导的衰老模型小鼠学习记忆功能损伤及其具体分子机制。方法 45只雌性CD-1小鼠(2月龄)适应性喂养1w后,随机分为3组:对照组(control):腹腔注射生理盐水+标准饲料;D-半乳糖组(D-gal):腹腔注射150mg/(kg·d)D-半乳糖+标准饲料;番茄红素干预组(D-gal+LYC):腹腔注射150mg/(kg·d)D-半乳糖+番茄红素饲料(0.03%番茄红素,均匀混在标准饲料中),共8w。利用T迷宫检测各组小鼠的空间学习记忆能力;采用H&E染色、Westernblots以及免疫荧光分析番茄红素对D-半乳糖处理小鼠海马组织神经元形态、脑部神经营养因子以及突触功能蛋白PSD-95表达的影响。通过IBA-1免疫组化及Western blots检测小鼠脑部小胶质细胞激活、促炎因子TNFα、抗氧化物酶HO-1及NQO-1表达情况,分析番茄红素对D-半乳糖诱导的小鼠脑部神经炎症及氧化应激的改善作用。通过免疫组化以及Western blots方法分析番茄红素对小鼠脑部FGF21蛋白表达的影响,以探究FGF21是否对神经起保护作用。结果 T迷宫结果表明,番茄红素可以减轻D-半乳糖诱导的小鼠认知损伤,番茄红素减少了海马组织中核固缩及坏死的神经元细胞数量,促进了神经营养因子NT3/NGF以及突触功能蛋白PSD-95表达,减轻了D-半乳糖诱导的突触功能损伤。番茄红素通过增加抗氧化物酶HO-1、NQO-1表达,减轻了小鼠脑部氧化应激;通过抑制小胶质细胞过度激活以及下调脑部促炎因子TNFα表达,减轻了神经炎症。更重要的,番茄红素也促进了小鼠脑部FGF21的蛋白表达。结论 番茄红素可以通过减轻突触功能损伤,促进FGF21表达,改善脑部氧化应激以及神经炎症,减轻D-半乳糖诱导的小鼠认知功能损伤。 展开更多
关键词 fgf21 认知损伤 突触功能 番茄红素 D-半乳糖
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FGF21(L^(59)R)突变体基因工程菌发酵表达条件的优化 被引量：1
3
作者 陈秋池 王会岩 +3 位作者 朱文赫 董媛 王宁宁 李艳 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期2398-2403,共6页
本研究对影响FGF21(L^(59)R)突变体基因工程菌发酵条件的因素进行了优化。采用正交试验确定FGF21(L^(59)R)突变体基因工程菌的最佳LB培养基配方,利用SDS-PAGE电泳检测不同发酵条件对FGF21(L^(59)R)突变体蛋白表达情况。LB培养基最佳配比... 本研究对影响FGF21(L^(59)R)突变体基因工程菌发酵条件的因素进行了优化。采用正交试验确定FGF21(L^(59)R)突变体基因工程菌的最佳LB培养基配方,利用SDS-PAGE电泳检测不同发酵条件对FGF21(L^(59)R)突变体蛋白表达情况。LB培养基最佳配比(g/L):蛋白胨11,酵母粉6,氯化钠10,葡萄糖1;在此基础上优化基因工程菌发酵条件,确定LB培养基p H 6.5~7.2,装液量(溶解氧)20%,菌体密度(A_(600))1.0,IPTG浓度0.6 mmol/L,37℃条件下诱导5 h,突变体蛋白的表达量由优化前的12%提高至35%。结果表明,培养基配方、p H、装液量(溶解氧)、菌体密度(A_(600))、IPTG浓度、温度、诱导时间均对FGF21(L^(59)R)突变体基因工程菌表达量有影响。 展开更多
关键词 fgf21(l^(59)R)突变体 基因工程菌 发酵 表达
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