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耐热碱性磷酸酯酶的基因克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：8
1
作者 袁有忠 盛小禹 +2 位作者 吕鸿雁 佟石 毛裕民 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1998年第4期375-380,共6页
以pUC118质粒为载体,以E.coil TGl为受体,构建了产耐热碱性磷酸酯酶(FD-TAP)的菌株Thermus sp.FD3041的染色体基因文库。在包含1.2万个转化子的文库中,90％的转化子插入有3～10kb的外源DNA片段。用菌落原位碱性磷酸酯酶显色法从文库中... 以pUC118质粒为载体,以E.coil TGl为受体,构建了产耐热碱性磷酸酯酶(FD-TAP)的菌株Thermus sp.FD3041的染色体基因文库。在包含1.2万个转化子的文库中,90％的转化子插入有3～10kb的外源DNA片段。用菌落原位碱性磷酸酯酶显色法从文库中筛选到5个阳性克隆。对其中的1个克隆(pTAP362)所产的TAP进行了研究,发现克隆的TAP与出发菌株所产的TAP的热稳定性、最适反应温度和最适pH等性质都相同。通过做物理图谱和测定部分缺失的质粒的TAP活性,将TAP基因定位于2kb的BamHⅠ-HindⅢ DNA片段上。模拟PCR实验表明该酶可用于PCR扩增产物的检出。 展开更多
关键词 基因克隆 表达 大肠杆菌 fd-tap
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耐热性碱性磷酸酯酶作为非放射性标记物的研究 被引量：2
2
作者 朱运良 盛小禹 +2 位作者 董海 周宗祥 毛裕民 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第6期805-807,共3页
通过生物素与亲和素－酶复合物系统或地高辛与抗地高辛－酶复合物系统可把酶间接标记到探针上．Ｒｅｎｚ等通过不同的化学方法直接把酶标记到探针上［１～３］．耐热性碱性磷酸酯酶ＦＤ－ＴＡＰ（ｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｌｅａｌｋａｌｉ... 通过生物素与亲和素－酶复合物系统或地高辛与抗地高辛－酶复合物系统可把酶间接标记到探针上．Ｒｅｎｚ等通过不同的化学方法直接把酶标记到探针上［１～３］．耐热性碱性磷酸酯酶ＦＤ－ＴＡＰ（ｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｌｅａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）具有耐... 展开更多
关键词 碱性磷酸酯酶 fd-tap 非放射性标记物 耐热性
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耐热碱性磷酸酯酶基因的亚克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：2
3
作者 袁有忠 佟石 +3 位作者 吕鸿雁 周宗祥 盛小禹 毛裕民 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期146-150,共5页
根据耐热碱性磷酸酯酶（ＦＤ－ＴＡＰ）基因的酶切图谱和ＤＮＡ序列，分别在基因的起始密码子和终止密码子处设计了２个突变引物．引物的５’端分别带有Ｎｄｅ　Ｉ和ＢａｍＨＩ酶切位点．通过ＰＣＲ从质粒ｐＴＡＰ１１８Ｂ中扩增获得了... 根据耐热碱性磷酸酯酶（ＦＤ－ＴＡＰ）基因的酶切图谱和ＤＮＡ序列，分别在基因的起始密码子和终止密码子处设计了２个突变引物．引物的５’端分别带有Ｎｄｅ　Ｉ和ＢａｍＨＩ酶切位点．通过ＰＣＲ从质粒ｐＴＡＰ１１８Ｂ中扩增获得了ＦＤ－ＴＡＰ基因的全序列．经过酶切将基因亚克隆于高表达载体ｐＪＬＡ５０３．重组质粒ｐＴＡＰ５０３Ｆ的ＦＤ－ＴＡＰ在大肠杆菌Ｍｐｈ４４中的表达量比ｐＴＡＰ１１８Ｂ提高了约１０倍．重组酶和原始菌株所产的天然酶耐热性无明显差异． 展开更多
关键词 碱性磷酸酯酶 亚克隆 基因表达 fd-tap基因
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