抗Ig融合蛋白Fc段单克隆抗体的制备、鉴定与应用研究 被引量：16

1

作者 户义 刘雪松 +4 位作者 朱勇 刘莹 许晓光 薛江楠 金伯泉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期170-171,175,共3页

目的 :制备并鉴定抗Ig融合蛋白Fc段的单克隆抗体 (mAb) ,建立用于检测Ig融合蛋白的夹心ELISA法和纯化Fc融合蛋白的亲和层析法。方法 :以hBCMA Ig融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠 ,通过细胞融合制备抗Fc段mAb ,用ELISA等方法鉴定mAb的Ig亚... 目的 :制备并鉴定抗Ig融合蛋白Fc段的单克隆抗体 (mAb) ,建立用于检测Ig融合蛋白的夹心ELISA法和纯化Fc融合蛋白的亲和层析法。方法 :以hBCMA Ig融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠 ,通过细胞融合制备抗Fc段mAb ,用ELISA等方法鉴定mAb的Ig亚类、表位以及种属特异性 ,建立用于检测Ig融合蛋白的夹心ELISA法 ;Westernblot检测mAb对变性Ig融合蛋白的反应性。将mAb与Sepharose4B交联 ,制备亲和层析柱 ,对LAIR1 Ig融合蛋白进行纯化。 结果 :获得 7株稳定分泌抗Fc段mAb的杂交瘤 (FMUFc1～FMUFc7)。利用FMUFc4作为包被mAb ,FMUFc5作为酶标记mAb ,成功地建立了检测Ig融合蛋白的ELISA法 ,敏感度达到 2 μg/L ;在 7株mAb中 ,FMUFc6可用于Ig融合蛋白的Westernblot检测。用FMUFc6mAb制备的亲和层析柱 ,可有效地纯化LAIR1 Ig融合蛋白。结论 :成功地制备了抗Ig融合蛋白Fc段的mAb ,建立了可用于Ig融合蛋白检测和纯化的方法 。 展开更多

关键词 IG融合蛋白 fc段 单克隆抗体 夹心ELISA法 亲和层析法

下载PDF 职称材料

采用多种抗原测定静注人免疫球蛋白(pH4)中抗体Fc段生物学活性的初探 被引量：5

2

作者 席亮 钱秋娟 +3 位作者 张继鹏 赵一欢 刘晓 何彦林 《微生物学免疫学进展》 2012年第6期25-29,共5页

目的初步探讨采用多种抗原测定静注人免疫球蛋白(IVIG)(pH4)中抗体的Fc段生物学活性,了解IVIG中抗体的Fc段生物学活性。方法采用补体活化的经典途径中免疫复合物激活补体的方法,将不同浓度的麻疹病毒、风疹病毒、乙肝表面抗原(HBsAg)、... 目的初步探讨采用多种抗原测定静注人免疫球蛋白(IVIG)(pH4)中抗体的Fc段生物学活性,了解IVIG中抗体的Fc段生物学活性。方法采用补体活化的经典途径中免疫复合物激活补体的方法,将不同浓度的麻疹病毒、风疹病毒、乙肝表面抗原(HBsAg)、破伤风类毒素、脑膜炎球菌P64k外膜蛋白和白喉类毒素6种抗原分别致敏人O型血红细胞形成红细胞-抗原结合物;然后,6种致敏红细胞分别与IVIG孵育,与特异性抗体形成红细胞-抗原-抗体复合物;最后,此复合物与补体反应,在541 nm波长处读取吸光值,并绘制溶血反应动力学曲线,分别计算IVIG中针对上述6种抗原IgG的Fc段生物学活性。采用此方法,用6种抗原致敏的红细胞测定IVIG的Fc段生物学活性10次,验证此方法的重复性。结果麻疹病毒、风疹病毒、HBsAg、破伤风类毒素和脑膜炎球菌P64k外膜蛋白致敏的红细胞分别与供试品和补体反应后,测定的溶血反应动力学曲线较平缓,而白喉类毒素致敏的红细胞与供试品和补体反应后,测定的溶血反应动力学曲线下降明显,呈典型的"S"型曲线。计算结果显示,IVIG中针对此六种抗原的抗体Fc段生物学活性相对于参考品均大于80%。Fc段生物学检测方法重复性较好。结论采用多种抗原分别致敏红细胞,可以用来检测IVIG中多种抗体的Fc段生物学活性,为深入了解IVIG制品中的多种抗体的Fc段生物学活性奠定了基础。 展开更多

关键词 抗原 静注人免疫球蛋白 fc段 生物学活性

下载PDF 职称材料

静注人免疫球蛋白(pH4)Fc段生物学活性检测条件的优化 被引量：5

3

作者 何彦林 张璘 +4 位作者 张继鹏 张齐明 刘晓 杨晓东 张安山 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第8期1183-1185,1189,共4页

目的优化静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulins,IVIG)Fc段生物学活性检测条件,并验证该方法的重复性。方法基于《中国药典》三部(2010版)人免疫球蛋白Fc段激活补体的试验方法,优化致敏红细胞的抗原(白喉类毒素)效价(25、50、10... 目的优化静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulins,IVIG)Fc段生物学活性检测条件,并验证该方法的重复性。方法基于《中国药典》三部(2010版)人免疫球蛋白Fc段激活补体的试验方法,优化致敏红细胞的抗原(白喉类毒素)效价(25、50、100、150、200和250 Lf/ml)、IVIG浓度(5、10、20、30、40和50 mg/ml)和补体效价(15、50、75、100和150 CH50/ml)3个试验条件;采用优化的试验条件,对1批IVIG制品重复测定10次,计算变异系数(CV),验证该方法的重复性。结果在致敏红细胞的抗原(白喉类毒素)效价100～200 Lf/ml、IVIG浓度50 mg/ml和补体效价≥75 CH50/ml的条件下,补体介导的溶血反应动力学曲线呈典型的"S"型,可准确计算出IVIG Fc段激活补体的指数(IFc)。采用优化的试验条件,对1批IVIG制品重复测定10次,溶血反应动力学曲线几乎重合为一条,10次测定的IFc值的CV=8.91%。结论优化了IVIG Fc段生物学活性检测条件,优化后的检测方法重复性较好。 展开更多

关键词 静注人免疫球蛋白 fc段 生物学活性 检测 优化

原文传递

静注丙球激活补体活性测定方法的建立 被引量：5

4

作者 王箐舟 程雅琴 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期104-105,107,共3页

目的　建立静注丙球 (IVIG)激活补体活性的测定方法 ,并对国内不同工艺生产的IVIG制品Fc段的生物学功能进行分析。方法　采用补体经典激活途径激活补体的方法。结果　应用该方法检测不同工艺生产的制品活性均有差别。该方法操作简便 ,... 目的　建立静注丙球 (IVIG)激活补体活性的测定方法 ,并对国内不同工艺生产的IVIG制品Fc段的生物学功能进行分析。方法　采用补体经典激活途径激活补体的方法。结果　应用该方法检测不同工艺生产的制品活性均有差别。该方法操作简便 ,重复性好。 展开更多

关键词 静注丙球 激活补体 活性 测定方法 fc段

下载PDF 职称材料

多靶向VEGF-EGFR的Fc融合蛋白EVP1的构建及其结合特性 被引量：4

5

作者 左明辉 金华君 +3 位作者 黎江 易中梅 叶真龙 钱其军 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期239-246,共8页

目的:构建能同时靶向表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)的Fc融合蛋白EVP1... 目的:构建能同时靶向表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)的Fc融合蛋白EVP1,并分析其多靶向结合功能,为后续的抗肿瘤研究奠定基础。方法:利用PCR方法扩增Herin基因和Flt-1基因Ig样第二结构域(Flt-1D2)编码序列,全序列合成带有点突变的人IgG1的Fc段编码序列,利用重组PCR方法将Herin、Flt-1D2和Fc基因依次连接,构成Herin-Flt-1D2-Fc基因(命名为EVP1基因)。再将EVP1编码基因插入质粒pDC659,构建携带EVP1基因的腺病毒穿梭质粒pDC659-EVP1。将质粒pDC659-EVP1与腺病毒骨架载体pPE3-F35共转染至293细胞,包装获得表达EVP1融合蛋白的非增殖型腺病毒Ad5/35-EVP1,经PCR鉴定,扩增、纯化病毒,采用50%组织培养感染剂量(TCID50)法测定病毒滴度。用MOI=11的腺病毒Ad5/35-EVP1感染293细胞,4 d后收集细胞培养上清液。采用硫酸铵盐析法和Protein G亲和层析对融合蛋白EVP1进行纯化。Western blotting检测细胞培养上清液中融合蛋白EVP1的表达,ELISA法检测细胞培养上清液中融合蛋白EVP1的含量。采用间接免疫荧光实验和Octet Red 96生物分子相互作用分析仪对融合蛋白EVP1的靶向结合特性进行定性和定量检测。结果:成功包装出腺病毒Ad5/35-EVP1,滴度为5.4×109PFU/ml。腺病毒Ad5/35-EVP1-293细胞系统能有效表达融合蛋白EVP1;MOI=11时,融合蛋白EVP1的表达量为(1 613.94±24.65)ng/ml。蛋白EVP1与高表达EGFR的A431细胞和高表达HER2的人卵巢癌SK-OV-3细胞有良好的结合能力,与抗原EGFR、HER2、VEGF结合的亲和力常数Kd分别为4.55、18.70和0.63 nmol/L。结论:成功制备多靶向融合蛋白EVP1,它能高效结合VEGF、EGFR受体家族成员,具有良好的抗肿瘤临床应用价值。 展开更多

关键词 肿瘤 靶向治疗 融合蛋白 血管内皮生长因子 表皮生长因子受体 fc段 亲和力

下载PDF 职称材料

激活补体试验检测静注人免疫球蛋白Fc段生物学活性的优化 被引量：4

6

作者 刘晓 李青 +3 位作者 潘孟娇 张璘 包正琦 何彦林 《微生物学免疫学进展》 2014年第4期29-33,共5页

优化激活补体试验的条件,完善静注人免疫球蛋白Fc段生物学活性的检测方法。方法采用补体活化经典途径的原理,分别探讨致敏红细胞密度和贮存时间对人免疫球蛋白Fc段生物学活性检测结果的影响;比较手工法和微孔板分光光度法检测Fc段生物... 优化激活补体试验的条件,完善静注人免疫球蛋白Fc段生物学活性的检测方法。方法采用补体活化经典途径的原理,分别探讨致敏红细胞密度和贮存时间对人免疫球蛋白Fc段生物学活性检测结果的影响;比较手工法和微孔板分光光度法检测Fc段生物学活性的检测结果。结果在致敏红细胞A541 nm=1.3和致敏红细胞贮存5 d时,检测结果较稳定。微孔板分光光度法检测优于手工法。结论完善了人免疫球蛋白Fc段生物学活性的检测方法,检测结果准确、重复性好。 展开更多

关键词 激活补体试验 静注人免疫球蛋白 fc段 生物学活性

下载PDF 职称材料

CD80-IgG1Fc段融合蛋白真核表达载体的构建及表达 被引量：3

7

作者 李和军 李频 +1 位作者 周小玲 郑祥雄 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期40-42,46,共4页

目的构建人CD80-IgG1Fc段融合蛋白的真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcDNA3.1(+),并在CHO细胞中进行表达。方法应用T-A克隆技术和亚克隆技术,构建人CD80膜外段-IgG1Fc段融合蛋白的真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcDNA3.1(+),并将其转染入CHO细胞株... 目的构建人CD80-IgG1Fc段融合蛋白的真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcDNA3.1(+),并在CHO细胞中进行表达。方法应用T-A克隆技术和亚克隆技术,构建人CD80膜外段-IgG1Fc段融合蛋白的真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcDNA3.1(+),并将其转染入CHO细胞株并筛选,进行稳定表达。通过Western blot及ELISA法,检测融合蛋白的表达。结果成功地构建了真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcD-NA3.1(+),并建立CHO细胞稳定表达株。Western blot及ELISA法检测到细胞培养上清中有融合蛋白的表达。结论成功地构建了人CD80膜外段-IgG1Fc段融合蛋白的真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcDNA3.1(+),并在CHO细胞中稳定表达,为下一步抗肿瘤的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 CD80 IGG1 fc段 融合蛋白 基因克隆 真核表达

下载PDF 职称材料

cEGFR-rFc融合DNA疫苗抗小鼠黑素移植瘤的效果 被引量：3

8

作者 武建毅 刘岽 +3 位作者 唐亮 谈立松 张尚权 周彩存 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2008年第4期342-346,共5页

目的:构建cEGFR-rFc融合DNA疫苗,观察其对小鼠黑素移植瘤的抑制作用。方法:以异种同源鸡EGFR(chicken EGFR,cEGFR)膜外部分与兔疫球蛋白IgG的Fc段(rabbit IgG Fc,rFc)为基础构建真核表达载体pVAX1/cEGFR-rFc,脂质体法转染黑素瘤B16细胞... 目的:构建cEGFR-rFc融合DNA疫苗,观察其对小鼠黑素移植瘤的抑制作用。方法:以异种同源鸡EGFR(chicken EGFR,cEGFR)膜外部分与兔疫球蛋白IgG的Fc段(rabbit IgG Fc,rFc)为基础构建真核表达载体pVAX1/cEGFR-rFc,脂质体法转染黑素瘤B16细胞,免疫荧光法检测融合蛋白在B16细胞中的表达;以融合DNA疫苗免疫C57BL/6J小鼠,Western blotting法检测融合蛋白在小鼠体内的稳定表达。疫苗免疫小鼠接种B16黑素瘤细胞,14d后处死部分小鼠,取出瘤体称重,计算抑瘤率;同时观察小鼠荷瘤后的生存率;ELASIA法检测DNA疫苗免疫小鼠血清抗EGFR抗体滴度,流式细胞仪测定小鼠脾细胞淋巴细胞亚群。结果:成功构建融合DNA疫苗pVAX1/cEGFR-rFc,重组载体转染B16细胞后能检测到融合蛋白显著表达,疫苗免疫小鼠后能检测融合蛋白体内稳定表达。融合DNA疫苗能够延缓小鼠黑素移植瘤的生长,抑瘤率为54%(P<0.01);能延长荷瘤小鼠的生存期(疫苗组小鼠接种瘤细胞后30d的生存率为40%);融合DNA疫苗诱发小鼠产生高滴度抗EGFR抗体(效价1∶1000)和T细胞免疫(疫苗组小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞数目显著增加,P<0.01)。结论:cEGFR-rFc融合DNA疫苗能产生有效对抗黑素瘤B16细胞的免疫效应。 展开更多

关键词 黑素瘤细胞 DNA疫苗 表皮生长因子受体 IgG fc段 体液免疫 细胞免疫

下载PDF 职称材料

静注人免疫球蛋白抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用测定方法的建立 被引量：2

9

作者 朱丽媛 刘卿 +1 位作者 马莉 李长清 《中国输血杂志》 CAS 2023年第2期121-125,共5页

目的利用转录报告基因细胞,建立静注人免疫球蛋白(pH4)(human Immunoglobulin(pH4)for Intravenous Injection,IVIG)抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)生物学活性测定方法。方法以Ju... 目的利用转录报告基因细胞,建立静注人免疫球蛋白(pH4)(human Immunoglobulin(pH4)for Intravenous Injection,IVIG)抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)生物学活性测定方法。方法以Jurkat-NFAT-Luc-CD16细胞作为效应细胞,PLC/PRF/5细胞作为靶细胞,将效应细胞、靶细胞和IVIG孵育后,通过检测IVIG Fc段结合效应细胞后活化T细胞核因子释放的荧光素酶,建立IVIG ADCC生物学活性检测方法,同时对试验条件进行优化,以及对该方法进行方法学验证。结果IVIG在该方法中存在量效关系,符合四参数方程。经过试验条件优化,最终确定将PLC/PRF/5细胞作为靶细胞,抗体起始稀释浓度为20 mg/mL,梯度稀释倍数为1∶2,效靶比为1∶3,效应细胞、靶细胞和IVIG共同孵育时间为24 h。三次独立检测的日内和日间起始工作浓度荧光素酶相对光单位(relative light unit,RLU)及半最大效应浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC50)的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均<11%,2个不同稀释组回收率样本相对效价分别(23.50±1.69)%,(49.30±2.97)%,对应的回收率分别为(93.50±6.30)%,(96.24±5.43)%,RSD均<11%。结论本研究利用转录报告基因细胞成功建立IVIG ADCC生物学活性检测方法,该方法具有专属性强、重复性好、准确性高等优点,可作为IVIG ADCC生物学活性检测方法。 展开更多

关键词 静注人免疫球蛋白 fc段 抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用 生物学活性

下载PDF 职称材料

免疫球蛋白G的Fc段受体ⅡB在自身免疫病中的研究进展 被引量：3

10

作者 朱准 聂英坤 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期135-137,共3页

在人类和小鼠中，免疫球蛋白（Ig）G的Fc段受体ⅡB（FcγRⅡB）广泛表达于髓系的大部分细胞，是IgG恒定部分中较低亲和力的FcR，并且它是唯一起抑制作用的FcγR。

关键词 免疫球蛋白G 受体Ⅱ fc段 自身免疫病 fcγR 低亲和力 抑制作用 fcR

原文传递

应用A蛋白分离纯化细胞培养上清中的鼠源性抗肥大细胞FcεRIα的单克隆抗体 被引量：1

11

作者 徐银海 李莉 张玲珍 《徐州医学院学报》 CAS 2004年第6期517-519,共3页

目的 分离纯化鼠源性抗肥大细胞FcεRIα(高亲和力的IgE的Fc段受体)的单克隆抗体。方法 先培养ER-E5.3细胞,获得大量的含抗肥大细胞FcεRIα的单克隆抗体的培养上清。然后应用A蛋白-Sphrose CL-4B制备亲和层析柱,分离纯化细胞培养上清... 目的 分离纯化鼠源性抗肥大细胞FcεRIα(高亲和力的IgE的Fc段受体)的单克隆抗体。方法 先培养ER-E5.3细胞,获得大量的含抗肥大细胞FcεRIα的单克隆抗体的培养上清。然后应用A蛋白-Sphrose CL-4B制备亲和层析柱,分离纯化细胞培养上清中的单克隆抗体。结果分离纯化的单克隆抗体纯度高,活性强。结论应用A蛋白可以很好分离纯化细胞培养上清中的鼠源性抗肥大细胞FcεRIα的单克隆抗体。 展开更多

关键词 单克隆抗体 肥大细胞 细胞培养 蛋白分离 分离纯化 fc段 培养上清 ER

下载PDF 职称材料

乙脑病毒prME蛋白与BALB／c鼠IgG Fc段编码基因联合构建DNA免疫研究 被引量：2

12

作者 李喜梅 周言 +2 位作者 翟永贞 马力 冯国和 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期634-638,共5页

目的研究IgG Fc编码基因对流行性乙型脑炎（Japanese encephalitis，JE）DNA疫苗免疫增强效应的影响。方法巢式RT-PCR法从BALB／c鼠脾组织获取IgG Fc段编码基因，用限制性内切酶从含流行性乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，... 目的研究IgG Fc编码基因对流行性乙型脑炎（Japanese encephalitis，JE）DNA疫苗免疫增强效应的影响。方法巢式RT-PCR法从BALB／c鼠脾组织获取IgG Fc段编码基因，用限制性内切酶从含流行性乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）prME蛋白基因重组子获取prME蛋白基因，分别插入同一真核表达载体pcDNA3．1（＋）不同酶切位点，构建重组子pJME／IgG Fc并经酶切及DNA测序分析。脂质体法将pJME／IgG Fc转染CHO细胞。免疫荧光、Western blot法检测转染的CHO细胞中融合蛋白分布与表达。将pJME／IgG Fc肌注免疫BALB／c鼠，检测小鼠脾特异性细胞毒T细胞（CTL）杀伤活性和中和抗体滴度。结果pJME／IgGFc经BamHI／EcoRI和BamHI／NotI酶切释出的插入子大小（2001 bp、2730 bp）分别与预期结果相符合。所编码的融合蛋白相对分子质量（Mr）为101×10^3，主要分布于胞浆，少量分布于胞膜，pJME／IgG Fc转染CHO细胞经32次传代仍可表达融合蛋白。pJME／IgG Fc免疫组中和抗体滴度与CTL活性较pJME及灭活疫苗组均升高（P〈0．05）。结论pJME／IgG Fc成功构建，转染的CHO细胞可稳定表达融合蛋白，IgG Fc段编码基因能够增强JEV DNA疫苗的细胞和体液免疫应答。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 DNA疫苗 免疫球蛋白G fc段 CHO细胞 中和试验

原文传递

大鼠IgECH2-3-FasL融合蛋白真核表达质粒的构建 被引量：2

13

作者 杨丹榕 修清玉 +3 位作者 韩焕兴 王桂芳 张玲珍 谭晓明 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期931-932,共2页

关键词 肥大细胞 fc段 过敏反应 凋亡 大鼠 真核表达质粒 融合蛋白 高亲和力受体 表面表达 人类

下载PDF 职称材料

基于表面等离子共振法的人免疫球蛋白Fc段活性检测方法的初步建立与验证 被引量：1

14

作者 董方玉 周久越 +9 位作者 陈晨 周安 宋佃卫 高建锋 陈曦 李晓 吴嘉伟 杜加诚 周波 菅长永 《中国输血杂志》 CAS 2022年第4期396-399,共4页

目的建立1种基于表面等离子共振技术的用于检测人免疫球蛋白Fc段活性的方法。方法利用FcγRI可以与IgG的Fc段发生结合的特性,通过表面等离子共振技术检测样品亲和力常数,其Fc段活性为样品KD与标准品KD比值。方法进行特异性/专属性、精... 目的建立1种基于表面等离子共振技术的用于检测人免疫球蛋白Fc段活性的方法。方法利用FcγRI可以与IgG的Fc段发生结合的特性,通过表面等离子共振技术检测样品亲和力常数,其Fc段活性为样品KD与标准品KD比值。方法进行特异性/专属性、精密度、耐用性验证。采用该方法与药典方法共同检测30份人免疫球蛋白Fc段活性,检测结果进行相关性和一致性分析。结果方法学验证结果显示,本方法的特异性/专属性强(t值分别为0.15、0.22,均为P>0.05),精密度好(CV值为5.37%~10.69%),耐用性好(CV值为10.06%),本方法与药典方法检测结果的相关性(r=0.96,P<0.05)和一致性高(偏差值为-2.060,95%置信区间为-5.628~1.508)。结论成功建立了1种基于表面等离子共振技术的用于检测人免疫球蛋白Fc段活性的方法。 展开更多

关键词 免疫球蛋白 表面等离子共振法 fc段 分子相互作用分析仪

下载PDF 职称材料

IgG Fc基因增强乙型脑炎DNA疫苗细胞免疫效应的分析 被引量：1

15

作者 翟永贞 冯国和 《中国热带医学》 CAS 2015年第10期1161-1164,共4页

目的评价IgG Fc段编码基因不同构建方式对乙型脑炎(JE)DNA疫苗细胞免疫应答的影响。方法以套式RT-PCR法获取BALB/c鼠IgG Fc编码基因,构建含乙型脑炎病毒(JEV)pr ME蛋白与IgG Fc编码基因以及单纯IgG Fc编码基因重组质粒,分别命名pJME/IgG... 目的评价IgG Fc段编码基因不同构建方式对乙型脑炎(JE)DNA疫苗细胞免疫应答的影响。方法以套式RT-PCR法获取BALB/c鼠IgG Fc编码基因,构建含乙型脑炎病毒(JEV)pr ME蛋白与IgG Fc编码基因以及单纯IgG Fc编码基因重组质粒,分别命名pJME/IgG Fc和pIgG Fc,以不同免疫原肌注免疫BALB/c小鼠,经流式细胞仪检测不同免疫原免疫鼠后脾T淋巴细胞亚群及Th细胞内细胞因子(IFN-γ、IL-4)变化,乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)法测定细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocytes,CTL)活性。数据进行单因素方差分析。结果 pJME/IgG Fc组CD4+T淋巴细胞比例为(66.64±5.84)%,明显高于pJME+pIgG Fc、pJME、JE灭活疫苗和pc DNA3.1(+)组(P<0.05),pJME+pIgG Fc组CD4+T淋巴细胞比例(60.55±2.09)%,高于pJME组(52.86±1.92)%,也高于JE灭活疫苗组(55.77±1.62)%(P<0.05),pc DNA3.1(+)组CD4+T淋巴细胞比例为(37.82±4.93)%,明显低于其他组(P<0.05);pJME/IgG Fc与pJME+pIgG Fc免疫组CD8+T细胞比例较空载体pc DNA3.1(+)及灭活疫苗组升高(P<0.05)。pJME/IgG Fc免疫组CTL活性为(46.92±1.97)%,明显高于其它组(P<0.05)。pJME/IgG Fc、pJME+pIgG Fc免疫组IFN-γ+CD4+T淋巴细胞比例分别为(37.90±4.79)%、(21.53±4.61)%,明显高于其它组(P<0.05)。结论相对于pJME+pIgG Fc联合免疫组,pJME/IgG Fc融合质粒免疫组能够诱导更强的细胞免疫反应。 展开更多

关键词 日本脑炎病毒 DNA疫苗 IGG fc段 树突状细胞

原文传递

sLAG-3-Ig的克隆、表达及其生物活性的实验研究 被引量：1

16

作者 新宇 吴昌归 +4 位作者 刘颖格 史皆然 陈卫强 赵峰 戴艳丽 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期893-895,共3页

目的:制备一种以sLAG-3为佐剂的过敏原疫苗,并对该蛋白进行生物学活性测定,为建立一种高效安全的过敏原特异性免疫治疗奠定基础。方法:将sLAG-3和Fc段基因片段克隆入pcDNA3.1真核表达载体,电穿孔转染细胞,Western blotting检测生物活性... 目的:制备一种以sLAG-3为佐剂的过敏原疫苗,并对该蛋白进行生物学活性测定,为建立一种高效安全的过敏原特异性免疫治疗奠定基础。方法:将sLAG-3和Fc段基因片段克隆入pcDNA3.1真核表达载体,电穿孔转染细胞,Western blotting检测生物活性。结果:成功构建可高度表达sLAG-3-Ig的真核表达载体,该蛋白可以明显抑制B细胞合成IgE的能力。结论:制备了一种以sLAG-3为佐剂的过敏原疫苗,该蛋白具有淋巴细胞抑制活性,从而可能建立一种高效安全的过敏原特异性免疫治疗手段。 展开更多

关键词 sLAG-3 fc段 疫苗 哮喘

下载PDF 职称材料

IVIG中IgG片段对巨噬细胞吞噬致敏红细胞功能的影响 被引量：1

17

作者 朱丽媛 张巍 +4 位作者 侯明霞 刘卿 覃余燕 马莉 李长清 《中国输血杂志》 CAS 2022年第12期1199-1203,共5页

目的 研究静注人免疫球蛋白(pH4)(human immunoglobulin for intravenous injection, IVIG)中主要成分免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG) Fab段、以及F(ab′)2段及Fc段对THP-1来源的巨噬细胞吞噬致敏红细胞吞噬功能的影响。方法 首先... 目的 研究静注人免疫球蛋白(pH4)(human immunoglobulin for intravenous injection, IVIG)中主要成分免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG) Fab段、以及F(ab′)2段及Fc段对THP-1来源的巨噬细胞吞噬致敏红细胞吞噬功能的影响。方法 首先利用蛋白酶切技术和分离纯化技术,从IVIG中制备IgG Fc段、Fab段以及F(ab′)2段,并采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)进行鉴定;其次,使用佛波酯诱导THP-1细胞分化为M0型巨噬细胞;使荧光染料羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂标记致敏红细胞,采用流式细胞术检测上述各组分对M0型巨噬细胞吞噬致敏红细胞的吞噬能力的影响。结果 SDS-PAGE结果显示,所制备的IgG各片段均满足后续试验要求。流式结果表明,已成功建立M0型巨噬细胞吞噬致敏红细胞的吞噬模型。将IVIG中IgG各片段分别作用于M0型巨噬细胞吞噬致敏红细胞,当IgG Fc段蛋白浓度从0.1μg/mL增加至10μg/mL时,其对M0型巨噬细胞吞噬致敏红细胞的吞噬率从(24.21±0.58)%降至(12.27±0.19)%;当IVIG蛋白浓度从0.1μg/mL增加至10μg/mL,其吞噬率从(20.57±0.39)%下降至(0.20±0.03)%。当蛋白浓度相同时(10μg/mL),IgG Fc段对吞噬作用的抑制作用仅为IVIG的一半。此外,IgG Fab片段、F(ab′)2以及人血清白蛋白均不能抑制M0型巨噬细胞的吞噬作用。结论 IVIG可以有效地抑制THP-1来源的M0型巨噬细胞的吞噬作用,这种抑制作用主要依赖于IgG Fc段,而与IgG Fab段和F(ab′)2无关。 展开更多

关键词 静注人免疫球蛋白 fc段 THP-1细胞 吞噬

下载PDF 职称材料

静注人免疫球蛋白中IgG二聚体含量对IgG Fc段与THP-1细胞表面受体结合能力的影响

18

作者 雷婷婷 张巍 +3 位作者 李长清 叶生亮 杜晞 马莉 《中国输血杂志》 CAS 2023年第2期125-129,共5页

目的研究静注人免疫球蛋白(Intravenous immunoglobulin,IVIG)中免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)二聚体含量对IgG Fc段与THP-1细胞表面受体结合能力的影响。方法利用蛋白纯化技术和高效液相色谱(HPLC)技术,制备不同浓度的IgG二聚体,... 目的研究静注人免疫球蛋白(Intravenous immunoglobulin,IVIG)中免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)二聚体含量对IgG Fc段与THP-1细胞表面受体结合能力的影响。方法利用蛋白纯化技术和高效液相色谱(HPLC)技术,制备不同浓度的IgG二聚体,然后采用直接添加的方式,制备得到含有不同浓度IgG二聚体的IVIG。最后利用本实验室已建立的IgG Fc段与THP-1细胞表面Fc段受体结合能力的检测方法,考察IgG二聚体含量对IgG Fc段与细胞表面受体结合能力的影响。结果当IVIG中IgG二聚体含量为1.11%~10.30%时,其与THP-1细胞表面Fc段受体的结合能力为97.67%~135.33%,且这种结合能力与IgG二聚体的含量呈正相关。当IgG二聚体含量超过13.22%时,IgG Fc段与THP-1细胞表面受体的结合能力与IgG二聚体含量则没有相关性。结论一定浓度的IgG二聚体对IVIG中IgG Fc段与THP-1细胞表面受体的结合能力具有促进作用,但尚需动物实验和临床数据进一步验证。 展开更多

关键词 静注人免疫球蛋白(IVIG) IgG二聚体 IgG fc段 THP-1细胞 受体结合能力

下载PDF 职称材料

hsRAGE-IgG Fc融合蛋白的表达及其生物学活性

19

作者 张璟 莫桂玲 +4 位作者 张庆友 苏志坚 许华 黄亚东 郑青 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期44-47,共4页

将编码人可溶性晚期糖基化终产物受体-免疫球蛋白G Fc段(hsRAGE-IgG Fc)融合蛋白的DNA片段克隆到大肠杆菌表达载体pET-20b中,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)并表达。SDS-PAGE分析表明其表达形式为包涵体,相对分子质量约为66... 将编码人可溶性晚期糖基化终产物受体-免疫球蛋白G Fc段(hsRAGE-IgG Fc)融合蛋白的DNA片段克隆到大肠杆菌表达载体pET-20b中,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)并表达。SDS-PAGE分析表明其表达形式为包涵体,相对分子质量约为66kDa,表达量占菌体总蛋白的38.4%。经复性后,获得纯度为96.6%的融合蛋白,得率约为29.5mg/L。经Western印迹法鉴定,该融合蛋白可与sRAGE抗体产生阳性反应。同时,hsRAGE-IgG Fc融合蛋白可以显著抑制晚期糖基化终产物(AGE)引起的ECV-304细胞NF-κB p65表达的上调,其活性与hsRAGE相似。 展开更多

关键词 可溶性晚期糖基化终产物受体 免疫球蛋白G fc段 融合蛋白 表达

原文传递

类风湿因子浓度与抗核抗体滴度分析 被引量：1

20

作者 曾少冰 宾利 《中国实验诊断学》 2004年第5期532-533,共2页

关键词 ANA 滴度 抗核抗体 类风湿因子 RF 临床 fc段 细胞核 动物 分子

下载PDF 职称材料