目的观察FBXL20(F-box and leucine rich repeat protein 20)对人非小细胞肺癌A549细胞生长的影响并初步探究其机制。方法采用慢病毒感染A549细胞,构建对照组(FBXL20-vector组)及干扰组(FBXL20-RNAi组),通过Western blot验证慢病毒敲减...目的观察FBXL20(F-box and leucine rich repeat protein 20)对人非小细胞肺癌A549细胞生长的影响并初步探究其机制。方法采用慢病毒感染A549细胞,构建对照组(FBXL20-vector组)及干扰组(FBXL20-RNAi组),通过Western blot验证慢病毒敲减效率。利用CCK-8及集落形成实验观察FBXL20的下调对A549细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞周期的变化,Western blot分析周期蛋白的改变,基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)探究FBXL20可能参与的生物学过程。结果干扰组FBXL20的蛋白表达(0.36±0.02)显著低于对照组(0.58±0.01)(P<0.01)。与对照组相比,干扰组的增殖能力增强(P<0.05),形成的集落数目也显著增加(100±20 vs 53±6)(P<0.05),且停留在G_2/M期的细胞比例明显降低(5.65±1.35 vs 9.94±1.44)(P<0.05)。Western blot结果显示Cyclin D1、ERK1/2蛋白表达无明显变化(P>0.05),CDK2、Cyclin E、CDK1、Cyclin A、Cyclin B1蛋白表达显著增加,而p-ERK1/2则显著降低(P<0.05)。GSEA结果显示FBXL20的低表达与G_2/M检查点呈正相关(P<0.01)。结论下调FBXL20可以加快A549细胞G_2/M期的进程,提高其生长能力。其机制可能是通过抑制p-ERK的激活,使得其下游周期蛋白CDK1、Cyclin A、Cyclin B1表达增加而实现的。展开更多
F-box富含亮氨酸重复蛋白3基因(F-box and leucine rich repeat protein 3,FBXL3)能编码含F-box结构域的蛋白,属于F-box蛋白家族成员,在细胞核中发挥功能。F-box富含亮氨酸重复蛋白21基因(F-box and leucine rich repeat protein 21,FBX...F-box富含亮氨酸重复蛋白3基因(F-box and leucine rich repeat protein 3,FBXL3)能编码含F-box结构域的蛋白,属于F-box蛋白家族成员,在细胞核中发挥功能。F-box富含亮氨酸重复蛋白21基因(F-box and leucine rich repeat protein 21,FBXL21)位于细胞质中,其功能与FBXL3基因功能存在拮抗作用。FBXL3与FBXL21蛋白在哺乳动物体内产生分子昼夜节律的负反馈循环中均都起重要作用。FBXL3通过形成SCF(SKP1-CUL1-F-box)复合物行使E3泛素连接酶功能,并通过泛素化促进隐花色素(Cryptochrome,CRY)蛋白的降解参与生物钟调控,FBXL21通过泛素化使CRY蛋白积累参与生物钟调控,两者对于CRY蛋白的拮抗作用能够稳定哺乳动物生物钟。本文首先介绍了生物节律以及生物钟分子的组成,然后综述了FBXL家族基因在昼夜节律循环中的调控作用及其突变后对季节性发情性状的影响,有助于后续探索FBXL家族基因突变后影响绵羊季节性发情性状的具体分子机制,为利用现代生物技术改变绵羊发情的季节性提供新思路。展开更多
文摘目的观察FBXL20(F-box and leucine rich repeat protein 20)对人非小细胞肺癌A549细胞生长的影响并初步探究其机制。方法采用慢病毒感染A549细胞,构建对照组(FBXL20-vector组)及干扰组(FBXL20-RNAi组),通过Western blot验证慢病毒敲减效率。利用CCK-8及集落形成实验观察FBXL20的下调对A549细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞周期的变化,Western blot分析周期蛋白的改变,基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)探究FBXL20可能参与的生物学过程。结果干扰组FBXL20的蛋白表达(0.36±0.02)显著低于对照组(0.58±0.01)(P<0.01)。与对照组相比,干扰组的增殖能力增强(P<0.05),形成的集落数目也显著增加(100±20 vs 53±6)(P<0.05),且停留在G_2/M期的细胞比例明显降低(5.65±1.35 vs 9.94±1.44)(P<0.05)。Western blot结果显示Cyclin D1、ERK1/2蛋白表达无明显变化(P>0.05),CDK2、Cyclin E、CDK1、Cyclin A、Cyclin B1蛋白表达显著增加,而p-ERK1/2则显著降低(P<0.05)。GSEA结果显示FBXL20的低表达与G_2/M检查点呈正相关(P<0.01)。结论下调FBXL20可以加快A549细胞G_2/M期的进程,提高其生长能力。其机制可能是通过抑制p-ERK的激活,使得其下游周期蛋白CDK1、Cyclin A、Cyclin B1表达增加而实现的。
文摘F-box富含亮氨酸重复蛋白3基因(F-box and leucine rich repeat protein 3,FBXL3)能编码含F-box结构域的蛋白,属于F-box蛋白家族成员,在细胞核中发挥功能。F-box富含亮氨酸重复蛋白21基因(F-box and leucine rich repeat protein 21,FBXL21)位于细胞质中,其功能与FBXL3基因功能存在拮抗作用。FBXL3与FBXL21蛋白在哺乳动物体内产生分子昼夜节律的负反馈循环中均都起重要作用。FBXL3通过形成SCF(SKP1-CUL1-F-box)复合物行使E3泛素连接酶功能,并通过泛素化促进隐花色素(Cryptochrome,CRY)蛋白的降解参与生物钟调控,FBXL21通过泛素化使CRY蛋白积累参与生物钟调控,两者对于CRY蛋白的拮抗作用能够稳定哺乳动物生物钟。本文首先介绍了生物节律以及生物钟分子的组成,然后综述了FBXL家族基因在昼夜节律循环中的调控作用及其突变后对季节性发情性状的影响,有助于后续探索FBXL家族基因突变后影响绵羊季节性发情性状的具体分子机制,为利用现代生物技术改变绵羊发情的季节性提供新思路。