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柑橘黄龙病病菌FabD蛋白酶的基因克隆与表达
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作者 王俏玲 何军 +3 位作者 李攀 朱温平 刘翔 李永东 《赣南师范学院学报》 2016年第6期66-68,共3页
柑橘黄龙病病菌(Candidatus Liberibacter)是黄龙病的致病菌.脂肪酸是细胞生物膜的重要组成成分,脂肪酸的生物合成对于病原细菌的生存至关重要.干扰病原菌生物膜的合成将抑制病原菌的生长和繁殖.本研究克隆了柑橘黄龙病病菌脂肪酸合成... 柑橘黄龙病病菌(Candidatus Liberibacter)是黄龙病的致病菌.脂肪酸是细胞生物膜的重要组成成分,脂肪酸的生物合成对于病原细菌的生存至关重要.干扰病原菌生物膜的合成将抑制病原菌的生长和繁殖.本研究克隆了柑橘黄龙病病菌脂肪酸合成通路中的关键蛋白酶-丙二酸单酰CoA:ACP转酰基酶(FabD,Malonyl CoA:ACP transacylase)基因,构建了该基因在大肠杆菌系统中的表达载体p ET28a-FabD,成功实现了该基因在大肠杆菌系统中的重组表达.结果表明,该蛋白酶在大肠杆菌内为包涵体表达,复性后最终制备得到浓度为0.38 mg/m L的可溶性FabD蛋白酶. 展开更多
关键词 柑橘黄龙病病菌 克隆 蛋白表达 fabd
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肝片吸虫疫苗研究进展 被引量:1
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作者 吴军 《国外医学(寄生虫病分册)》 2000年第3期114-118,共5页
反刍动物的片吸虫感染不断引起全球性的巨大经济损失。近期的一些实验研究表明,特定的片吸虫抗原对动物感染有明显的保护作用。部分疫苗在降低虫荷的同时可减少寄生虫产卵量。尽管依然存在很大的困难,发展具有商业价值的疫苗仍是现实可... 反刍动物的片吸虫感染不断引起全球性的巨大经济损失。近期的一些实验研究表明,特定的片吸虫抗原对动物感染有明显的保护作用。部分疫苗在降低虫荷的同时可减少寄生虫产卵量。尽管依然存在很大的困难,发展具有商业价值的疫苗仍是现实可行的。本文综述了近期肝片吸虫疫苗的研究情况,并对其发展前景进行了探讨。 展开更多
关键词 肝片吸虫 疫苗 研究进展 fabd GST CatL
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探讨FABD结构域对Bcr/Abl蛋白定位及功能的影响 被引量:1
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作者 王腾 黄峥兰 +3 位作者 高淼 李会 周芳竹 冯文莉 《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第11期1477-1483,共7页
目的:构建F-actin结合结构域(F-actin binding domain,FABD)缺失腺病毒载体Ad-Bcr/Abl-ΔFABD和野生型Bcr/Abl腺病毒载体Ad-Bcr/Abl,探讨FABD结构域对Bcr/Abl蛋白定位及功能的影响。方法:PCR扩增bcr/abl和bcr/abl-ΔFABD片段,双酶切后... 目的:构建F-actin结合结构域(F-actin binding domain,FABD)缺失腺病毒载体Ad-Bcr/Abl-ΔFABD和野生型Bcr/Abl腺病毒载体Ad-Bcr/Abl,探讨FABD结构域对Bcr/Abl蛋白定位及功能的影响。方法:PCR扩增bcr/abl和bcr/abl-ΔFABD片段,双酶切后克隆至穿梭质粒p Ad Track-CMV,经Ad Easy构建系统获得腺病毒Ad-Bcr/Abl-ΔFABD和Ad-Bcr/Abl,并在HEK293细胞中进行包装。将细胞分为3组,Ad-GFP组、Ad-Bcr/Abl组以及Ad-Bcr/Abl-ΔFABD组,分别加入对应的腺病毒。Western blot验证Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD在293T细胞中的表达水平,间接免疫荧光法检测Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD在293T细胞中的定位。流式细胞术、MTT法分别检测Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD对293T细胞凋亡、增殖的影响。结果:双酶切以及测序验证穿梭质粒构建正确;PacⅠ酶切验证重组腺病毒质粒重组成功;绿色荧光显示重组腺病毒包装成功;Western blot验证Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD可在293T细胞中表达;间接免疫荧光发现Bcr-Abl蛋白在细胞内的分布依赖于F-actin;FABD缺失后虽然不能使Bcr/Abl入核,但使其在细胞内的分布方式由均匀变为点状或块状聚集;FABD缺失后,Bcr/Abl在细胞内呈块状聚集的方式与IM处理后的结果相似。流式细胞术和MTT结果显示,与Bcr/Abl相比,Bcr/Abl-ΔFABD组293T细胞的凋亡比例增加(P<0.05),增殖能力降低(P<0.05)。结论:成功构建Ad-Bcr/Abl和Ad-Bcr/Abl-ΔFABD重组腺病毒,FABD缺失后使Bcr/Abl蛋白在细胞质中的分布方式发生改变,并能抑制Bcr/Abl的抗凋亡能力和促增殖能力。 展开更多
关键词 Bcr/Ab1 fabd 细胞定位 来普霉素 伊马替尼
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GFP-FABD2和GFP-MBD标记蛋白对拟南芥悬浮细胞培养及应激响应能力的影响
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作者 时兰春 王伯初 +2 位作者 杨兴艳 张运刚 王益川 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期931-939,共9页
以转GFP-FABD2和GFP-MBD基因的拟南芥为材料,研究了GFP-FABD2和GFP-MBD这两种细胞骨架标记蛋白对拟南芥愈伤组织诱导、悬浮细胞培养及应激响应能力的影响.结果表明:(1)GFP-MBD标记蛋白延长愈伤的出愈时间,改变愈伤形态,使转基因拟南芥... 以转GFP-FABD2和GFP-MBD基因的拟南芥为材料,研究了GFP-FABD2和GFP-MBD这两种细胞骨架标记蛋白对拟南芥愈伤组织诱导、悬浮细胞培养及应激响应能力的影响.结果表明:(1)GFP-MBD标记蛋白延长愈伤的出愈时间,改变愈伤形态,使转基因拟南芥种子的出愈量减少为野生型的59%、悬浮细胞的长短轴比缩小为1.20±0.21、第7天细胞活力下降为0.66±0.09,影响细胞的生长曲线.(2)GFP-FABD标记蛋白虽对愈伤生长影响不大,但却使悬浮细胞的长短轴比显著增加为2.49±1.18、第7天细胞的活力下降为0.87±0.06,造成悬浮细胞生长曲线的改变.(3)通过调整培养条件的激素水平,以上两种细胞骨架标记蛋白对悬浮细胞生长的影响可以得到修复.(4)检测优化条件下培养的GFP-FABD2或GFP-MBD悬浮细胞对温度、渗透压、机械应力等环境改变的应激响应能力,结果未发现与野生型有明显区别. 展开更多
关键词 GFP-fabd2 GFP-MBD 拟南芥 悬浮细胞 应激响应
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Dynamics and roles of phragmoplast microfilaments in cell plate formation during cytokinesis of tobacco BY-2 cells 被引量:2
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作者 ZHANG Yan ZHANG WenJie +2 位作者 BALUSKA Frantisek MENZEL Diedrik REN HaiYuni 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2009年第12期2051-2061,共11页
The phragmoplast is a special apparatus that functions in establishing a cell plate in dividing plant cells. It is known that microfilaments (MFs) are involved in constituting phragmoplast structure, but the dynamic d... The phragmoplast is a special apparatus that functions in establishing a cell plate in dividing plant cells. It is known that microfilaments (MFs) are involved in constituting phragmoplast structure, but the dynamic distribution and role of phragmoplast MFs are far from being understood. In this study, the precise structure and dynamics of MFs during the initiation and the late lateral expansion of the phragmoplast were observed by using a tobacco BY-2 cell line stably expressing the microfilament reporter construct GFP-fABD2. Three-dimensional imaging showed that the phragmoplast MFs were initiated by two populations of MFs emerging between the reconstituting daughter nuclei at anaphase, which migrated to the mid-zone and gave rise to two layers of microfilament arrays. FM4-64 stained vesicles accumulated and fused with the cell plate between the two populations of MFs. The two layers of microfilament arrays of phragmoplast with ends overlapped always surrounded the centrifugally expanding cell plate. Partial disruption of MFs at metaphase by low concentration of latrunculin B resulted in the inhibition of the cell plate consolidation and the blockage of cell plate lateral expansion, whereas high concentration of latrunculin B restrained the progression of the cell cycle. Treating the cell after the initiation of phragmoplast led to the cease of the expansion of the cell plate. Our observations provide new insights into the precise structure and dynamics of phragmoplast MFs during cytokinesis and suggest that dynamic phragmoplast MFs are important in cell plate formation. 展开更多
关键词 植物细胞 板形 微丝 烟草 胞质 成膜结构 绿色荧光蛋白 MFS
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FABD结构域缺失削弱293T细胞BCR/ABL癌蛋白抗凋亡能力
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作者 周芳竹 黄峥兰 +2 位作者 骆贞红 王腾 冯文莉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第17期1548-1553,共6页
目的通过转染野生型p Ad-Bcr/Abl及缺失突变型p Ad-BCR/ABL-ΔFABD于293T细胞中,探讨FABD结构域对Bcr/Abl癌蛋白抗凋亡能力的影响及相关机制。方法 293T细胞分别转染野生型p Ad-Bcr/Abl及缺失突变型p Ad-Bcr/Abl-ΔFABD质粒,并设置Blan... 目的通过转染野生型p Ad-Bcr/Abl及缺失突变型p Ad-BCR/ABL-ΔFABD于293T细胞中,探讨FABD结构域对Bcr/Abl癌蛋白抗凋亡能力的影响及相关机制。方法 293T细胞分别转染野生型p Ad-Bcr/Abl及缺失突变型p Ad-Bcr/Abl-ΔFABD质粒,并设置Blank组和Adtrack组作为对照,分别培养24、48、72 h后,采用流式细胞术(FCM)检测转染荧光强度并筛选最佳转染条件,Western blot验证蛋白表达。采用WST-1(水溶性四唑盐)实验及FCM检测FABD结构域对BCR/ABL癌蛋白促增殖抗凋亡能力的影响;DAPI染色观察细胞核形态变化;Western blot分别检测p-bcr/abl、p-AKT、p-ERK表达及凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP蛋白活化情况。结果 FCM检测结果显示质粒转染效率呈时间依赖性增加,并选择48 h为最佳转染时间。Western blot结果证实已经成功构建野生型p Ad-Bcr/Abl及缺失突变型p Ad-Bcr/Abl-ΔFABD质粒。WST-1实验及FCM检测结果显示,FABD结构域缺失可显著抑制细胞增殖并促进凋亡,在处理48 h后细胞凋亡数达到29.0%(P<0.05);在FABD结构域缺失后,p-AKT、p-ERK表达显著下调;凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP均在48 h明显活化。结论 FABD结构域缺失可显著削弱BCR/ABL癌蛋白促增殖抗凋亡能力,其可能与下调AKT、ERK信号通路并激活线粒体凋亡途径有关。 展开更多
关键词 fabd结构域 BCR/ABL AKT、ERK信号通路 凋亡
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