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鼠疫快速诊断技术及其应用研究 被引量：14
1
作者 于国林 王鹏 +8 位作者 尹家祥 杜春红 石丽媛 郭英 陈平 吴明寿 黄鹏 钟佑宏 董珊珊 《地方病通报》 2006年第3期1-10,94,F0003,共12页
目的寻找和确定引起特异性不足的因素,实施科学的对策加以解决,真正实现鼠疫的快速诊断技术并以此为基础构建新一代的检测技术。方法(1)研制高质量的鼠疫F1抗原的单克隆抗体,考虑到位点问题要求尽可能多的、针对不同位点的高效价瘤株,... 目的寻找和确定引起特异性不足的因素,实施科学的对策加以解决,真正实现鼠疫的快速诊断技术并以此为基础构建新一代的检测技术。方法(1)研制高质量的鼠疫F1抗原的单克隆抗体,考虑到位点问题要求尽可能多的、针对不同位点的高效价瘤株,构建稳定的“抗体源;”(2)利用获得的高效瘤株通过纯系小鼠生产抗体或用无蛋白细胞培基生产抗体;(3)对抗体进行纯化并使其达到“免疫纯水平”并建立提取、纯化工艺,最终建立稳定的低成本的无交叉“抗体源;”(4)纯化抗原至“免疫纯水平”或“电泳纯水平”,建立提取、纯化工艺,最终建立稳定低成本的无交叉“抗原源;”(5)对新一代快速检测技术进行实验室和现场评价,对特异性即实验的准确性做出评价。结果(1)确定了影响鼠疫免疫学诊断技术特别是间接红细胞凝集试验(IHA及R IHA)特异性不足的两大因素:a.技术落后,试验中采用的载体不适导致了相当数量的假性凝集;b.技术方法中使用的抗原、抗体严重不纯,尤其是制备抗体时免疫动物“自身抗体”的掺入是造成交叉反应更重要的因素;(2)研制并开发出分泌抗鼠疫F1单克隆抗体(F1-M cAb)的杂交瘤株164株,并从其中筛选出针对不同位点的高效瘤株6株,经活性鉴定及配对试验形成了4个组合,具高效价和高活性;(3)使用制备电泳技术将鼠疫F1抗原提纯至电泳纯水平;(4)将鼠疫F1-M cAb提纯至免疫纯水平;(5)引进、消化了具有先进水平的胶体金标免疫层析技术;(6)使用电泳纯的鼠疫F1抗原及免疫纯的鼠疫F1-M cAb构建了能自人和动物血液中直接检测鼠疫特异抗体的金标免疫层析技术(G ICA)和能自人和动物脏器或穿剌物中直接检测鼠疫F1抗原或鼠疫病原的反向金标免疫层析技术(RG ICA);(7)由于采用了纯化的抗原、抗体,提高了标记效果,其敏感性超过IHA和R IHA,阳性检出率在排除了假� 展开更多
关键词 鼠疫 鼠疫f1抗原(f1-Ag) 鼠疫f1单克隆抗体(f1-mcab) 杂交瘤株 纯化 电泳纯 免疫纯 胶体金标记免疫层析技术(GICA/RGICA) 敏感性 特异性 交叉反应
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金标法进行鼠疫F1McAb亚类的鉴定 被引量：3
2
作者 杜春红 陈平 +2 位作者 钟佑宏 尹家祥 于国林 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2007年第3期493-493,496,共2页
[目的]对实验室融合成功的6株杂交瘤株分泌的鼠疫F1单克隆抗体进行Ig亚类鉴定,为后面的抗体纯化工作作出准备。[方法]采用胶体金标记法鼠单抗亚型测定试剂盒进行检测。[结果]6株杂交瘤株的亚型分别为IgM、IgG2a、IgG2b、IgG3和两株IgG1... [目的]对实验室融合成功的6株杂交瘤株分泌的鼠疫F1单克隆抗体进行Ig亚类鉴定,为后面的抗体纯化工作作出准备。[方法]采用胶体金标记法鼠单抗亚型测定试剂盒进行检测。[结果]6株杂交瘤株的亚型分别为IgM、IgG2a、IgG2b、IgG3和两株IgG1,轻链全为к链。[结论]采用金标法进行鼠单抗亚类鉴定,操作简便,结果清晰、稳定,不需特殊设备,值得采用。 展开更多
关键词 金标法 f1mcab 亚类
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鼠疫F1McAb酶免疫染色法快速检验鼠疫菌 被引量：6
3
作者 热娜.吐尔地 徐秉臣 +2 位作者 阿扎提.热合木 孙石 雷刚 《地方病通报》 2003年第1期1-3,95,共4页
为缩短检验鼠疫菌的时间 ,建立了酶免疫染色法检验鼠疫菌的方法 ,被检涂片标本用含过氧化物酶底物的固定液 ,固定标本同时 ,内源性过氧化物酶被消耗 ,辣根过氧化物酶标记鼠疫 F1单克隆抗体和鼠疫菌菌体表面的特异性 F1抗原结合 ,底物被... 为缩短检验鼠疫菌的时间 ,建立了酶免疫染色法检验鼠疫菌的方法 ,被检涂片标本用含过氧化物酶底物的固定液 ,固定标本同时 ,内源性过氧化物酶被消耗 ,辣根过氧化物酶标记鼠疫 F1单克隆抗体和鼠疫菌菌体表面的特异性 F1抗原结合 ,底物被酶催化生成有色沉淀物使鼠疫菌着色 ,用普通光学显微镜观察结果 ,常温 1h出结果 ,Kaplow法鼠疫菌被蓝色晶体覆盖 ,DAB法鼠疫菌呈棕黄色 ,不含 F1抗原的 8株细菌均为阴性 ,酶免疫染色法具有特异、快速、简便的特点 。 展开更多
关键词 鼠疫f1mcab 酶免疫染色法
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酶标鼠疫F1 McAb在酶免疫染色法快速鉴定鼠疫菌中的应用 被引量：3
4
作者 热娜.吐尔地 孙石 +3 位作者 徐秉臣 阿扎提.热合木 布仁明德 雷刚 《地方病通报》 2004年第4期14-16,共3页
目的观察酶标鼠疫F1McAb在酶免疫染色法快速鉴定鼠疫菌中的应用效果。方法实验感染鼠疫强毒菌的病死小鼠和处死健康小鼠尸体 ,2 0℃以上室温放置 ,用鼠疫F1McAb酶免疫染色法检测 ,同时用细菌学检验方法分离鼠疫菌和反向血凝试验 (RIHA)... 目的观察酶标鼠疫F1McAb在酶免疫染色法快速鉴定鼠疫菌中的应用效果。方法实验感染鼠疫强毒菌的病死小鼠和处死健康小鼠尸体 ,2 0℃以上室温放置 ,用鼠疫F1McAb酶免疫染色法检测 ,同时用细菌学检验方法分离鼠疫菌和反向血凝试验 (RIHA)检测鼠疫F1抗原。结果直接培养仅从 5d内的鼠尸分离检出鼠疫菌 ,阳性率为 5 3 .3 % ;动物实验检出鼠疫菌的最长时间为 8d ,阳性率为 71.6%。存放 13d内 ,酶免疫染色阳性率为 99.1% ,RIHA阳性率98. 2 % ,用酶免疫染色法和RIHA检测健康动物腐败脏器全部阴性。以上方法检查鼠疫疫区自毙动物标本 12份 ,酶免疫染色法阳性 7份 ,RIHA阳性 6份 ,动物实验阳性 5份 ,直接培养未获得阳性结果。结论酶免疫染色法检查动物腐败脏器中的鼠疫菌具有较高的敏感性和特异性。 展开更多
关键词 鼠疫f1mcab 酶免疫染色法 鼠疫菌
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HRP-F1McAb酶免疫染色技术检测小鼠脏器鼠疫F1抗原应用效果评价 被引量：1
5
作者 白雪薇 刘合智 +5 位作者 周松 王海峰 牛艳芬 陈凯乐 史献明 杜国义 《国外医学（医学地理分册）》 CAS 2016年第1期70-72,共3页
目的评价辣根过氧化酶标记鼠疫F1单克隆抗体(HRP-F1McAb)酶免疫染色技术检测小鼠脏器鼠疫F1抗原的应用效果。方法通过HRP-F1McAb酶免疫染色法检测鼠疫菌EV株感染小鼠脏器标本和对照小鼠脏器标本,同时用细菌学、RIHA和ELISA做平行检测。... 目的评价辣根过氧化酶标记鼠疫F1单克隆抗体(HRP-F1McAb)酶免疫染色技术检测小鼠脏器鼠疫F1抗原的应用效果。方法通过HRP-F1McAb酶免疫染色法检测鼠疫菌EV株感染小鼠脏器标本和对照小鼠脏器标本,同时用细菌学、RIHA和ELISA做平行检测。结果 HRP-F1McAb酶免疫染色法与细菌学一致率为96.36%,阳性检出率差异无统计学意义(χ^(2=0),P>0.05);HRP-F1McAb酶免疫染色法和RIHA一致率为98.18%,阳性检出率差异无统计学意义(χ^(2=0),P>0.05);HRP-F1McAb酶免疫染色法和ELISA一致率为96.36%,阳性检出率差异无统计学意义(χ^(2=0),P>0.05)。结论酶免疫染色法检测小鼠脏器鼠疫F1抗原特异敏感、简单快速。 展开更多
关键词 HRP-f1mcab酶免疫染色技术 鼠疫耶尔森菌 f1抗原
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酶免疫染色技术快速检测鼠疫耶尔森菌 被引量：1
6
作者 白雪薇 刘合智 +6 位作者 史献明 周松 王海峰 杨顺林 杨晓燕 张懿辉 牛艳芬 《中国地方病防治》 CAS 北大核心 2016年第1期20-21,共2页
目的研究酶免疫染色技术检测鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)的敏感性及特异性,建立鼠疫免疫快速检测技术。方法用酶免疫染色技术对细菌标本和动物标本检测鼠疫菌,动物标本同时用细菌学、RIHA、RGICA和ELISA法平行检测鼠疫菌。结果细菌标本酶免疫... 目的研究酶免疫染色技术检测鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)的敏感性及特异性,建立鼠疫免疫快速检测技术。方法用酶免疫染色技术对细菌标本和动物标本检测鼠疫菌,动物标本同时用细菌学、RIHA、RGICA和ELISA法平行检测鼠疫菌。结果细菌标本酶免疫染色法检测结果与实际相符,酶免疫染色技术检测鼠疫菌的灵敏性为1 000个/ml;动物标本酶免疫染色法检测鼠疫菌结果和细菌学、RIHA、RGICA和ELISA一致。结论酶免疫染色技术检测鼠疫菌敏感、特异、简便、快速,可用于鼠疫检测工作。 展开更多
关键词 鼠疫f1mcab 酶免疫染色技术 鼠疫耶尔森菌
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鼠疫反向间接血凝技术在国境卫生检疫工作中的应用研究
7
作者 邢金相 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 1989年第2期132-133,共2页
采用鼠疫F1单克隆抗体(F1 McAb)致敏红细胞用于反向间接血凝试验(RIHA),检测鼠疫菌及其F1抗原的技术,首次对50,000张进口蒙古旱獭皮进行抽样检验。结果从抽取的501份样品中发现6份阳性皮张,为国境口岸的检疫消毒提供了科学依据。试验证... 采用鼠疫F1单克隆抗体(F1 McAb)致敏红细胞用于反向间接血凝试验(RIHA),检测鼠疫菌及其F1抗原的技术,首次对50,000张进口蒙古旱獭皮进行抽样检验。结果从抽取的501份样品中发现6份阳性皮张,为国境口岸的检疫消毒提供了科学依据。试验证明,此方法操作简便,敏感性高,可在国境卫生检疫工作中用于进口皮张等的鼠疫快速检测。 展开更多
关键词 旱獭皮 鼠疫f1mcab 反向间接血凝试验(RIHA) 鼠疫f1抗原
原文传递
反向血凝抑制试验(RIHI)检测鼠疫F1抗体在疫情监测和疫源地调查中的应用
8
作者 王信惠 徐秉臣 +3 位作者 雷刚 阿扎提 热娜 杨林 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 1990年第6期353-355,共3页
在鼠疫疫情监测和疫源地调查工作中,将鼠疫 Fl 单克隆抗体致敏红细胞 (FlM_cAb-RBC) 用于反向间接血凝抑制试验 (RIHI),以间接血凝试验为对照,检测鼠疫 Fl 抗体,检测结果用 ELISA 和 SPRIA 验证,非鼠疫疫区6种动物血清1375份,RIHI 全部... 在鼠疫疫情监测和疫源地调查工作中,将鼠疫 Fl 单克隆抗体致敏红细胞 (FlM_cAb-RBC) 用于反向间接血凝抑制试验 (RIHI),以间接血凝试验为对照,检测鼠疫 Fl 抗体,检测结果用 ELISA 和 SPRIA 验证,非鼠疫疫区6种动物血清1375份,RIHI 全部阴性,IHA 出现假阳性反应89份。鼠疫疫区3种动物血清713份,RIHI 检出 Fl 抗体阳性反应72份,未出现假阳性反应,IHA 检出 F1 抗体阳性反应44份,出现假阳性反应21份,几何平均滴度 RlHl 比 IHA 高2^(1.45)。RIHI 的特异性和敏感性均高于 IHA ,且简便、稳定、快速,是取代 IHA 检测鼠疫 Fl 抗体的理想方法。 展开更多
关键词 鼠疫 单克隆抗体 RIHI 鼠疫f1抗体
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